gram染色一般细菌涂片检查

革兰氏染色技术关键操作步骤革兰氏染色技术（Gram staining）是微生物学中常用的染色方法，利用这种方法可以将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两类。

它是由丹麦细菌学家Christian Gram于1884年发明的，被广泛应用于细菌的鉴定和分类。

革兰氏染色技术的关键操作步骤包括以下几个方面：一、准备细菌培养物在进行革兰氏染色之前，首先需要准备细菌培养物。

通常使用处于对数生长期的细菌培养物，用无菌技术从培养物中取一小滴液体，均匀涂抹在玻璃片上，制备细菌涂片。

二、固定细菌涂片细菌涂片需要进行固定，以保持细菌的形态特征。

常用的固定剂是甲醇或乙醇，将涂片逐渐浸入固定剂中，浸泡数分钟至数十分钟，然后取出晾干。

三、染色1. 注碘液处理在固定的细菌涂片上滴加碘液，覆盖整个涂片。

碘液可以使细菌细胞内的格拉氏阳性菌染成紫色。

2. 酒精洗涤用酒精溶液冲洗细菌涂片，直至涂片上的紫色不再出现，一般持续几秒至十几秒钟。

这一步是关键的洗涤步骤，通过酒精的洗涤，可以去除革兰氏阴性菌的多余染色。

3. 闪碱洗涤用闪碱洗涤涂片，一般可以持续几秒至十几秒钟。

闪碱的作用是去除细菌涂片上的酒精和碘溶液，同时使革兰氏阳性菌继续保持紫色。

4. 洗涤与干燥最后用清水冲洗细菌涂片，使其干燥。

四、观察与解读完成染色步骤后，可以使用显微镜观察细菌涂片。

革兰氏阳性菌在染色后呈紫色，革兰氏阴性菌在染色后呈红色。

观察细菌的形态、大小、排列方式等特征，进一步判断和鉴定细菌。

总结与回顾：革兰氏染色技术是微生物学中常用的染色方法，它可以通过染色结果将细菌分为两大类：革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。

革兰氏染色的关键操作步骤包括准备细菌培养物、固定细菌涂片、染色、观察与解读。

其中，注碘液处理、酒精洗涤和闪碱洗涤是整个染色过程中的核心步骤，通过这些步骤的操作，可以使革兰氏阳性菌保持紫色，革兰氏阴性菌去除多余染色。

对于细菌的鉴定和分类来说，革兰氏染色技术是一个简单、快速且有效的方法。

emsa实验原理
Gram-Methlyene酸（Gram-Methylene Blue）染色法实验，即Gram-Mesma实验，是区分细菌为是否为革兰氏阳性细菌最常用的实验方法。

它是1884年由丹麦科学家Hans Carl Johannes Gram提出的一种染色法，用于区分细菌的三大类：革兰氏阳性细菌、革兰氏阴
性细菌和其他细菌。

Gram-Mesma实验的步骤主要有以下几步：
首先，将样品涂在切片上，用95%乙醇吹干，以达到研究要求和操作程序。

其次，用Gram培养液将切片表面涂抹染料。

该染料由简单的有机物组成，具有促进染色
的作用。

第三，用硫酸银液暂时抑制有细菌自身酶的活性，并将染色后的细菌进行污染。

最后，用抗菌素去除污染，当革兰氏阳性细菌敏感素抗物时，细菌会随着抗生素的消除而
被漂白。

Gram-Mesma实验可以用来区分细菌，这是由于不同类型的细菌具有不同的胞壁结构，从
而对染剂的选择也不尽相同，而Gram培养液中的染剂则可以根据不同细菌胞壁结构的特
征来染色，从而有效的识别革兰氏阳性细菌。

由于Gram-Mesma实验简单、方便及快捷，因此而得到了较多的应用。

细菌涂片和革兰染色法是常用的微生物学实验技术，用于观察和鉴定细菌。

细菌涂片是一种简单而常见的方法，用于制备细菌样品的薄层。

它通常包括以下步骤：
1.取少量细菌样品：从培养基或临床标本中取少量细菌，并使用吸管或接种环在玻璃
片上均匀涂抹。

2.干燥：将涂片放置在室温下使其自然干燥，以确保细菌固定在玻璃片上。

3.固定：通过加热或使用特定化学药剂（如甲醇）进行固定，以保持细菌在涂片上的
形态结构。

4.染色：涂片可以使用不同的染色方法进行染色，例如格拉姆染色、苏木精染色等，
以区分不同类型的细菌。

5.观察：准备好的细菌涂片可在显微镜下观察。

通过观察细菌的形态、大小、排列方
式等特征，可以初步判断细菌的类型和特性。

革兰染色法是最常用的细菌染色方法之一，用于区分细菌的革兰氏阳性（G+）和革兰氏阴性（G-）两类。

它包括以下步骤：
1.取少量细菌样品：从培养基或临床标本中取少量细菌，并涂抹在玻璃片上。

2.固定：对细菌进行固定，通常使用加热的方法使其附着在玻璃片上。

3.染色：首先将细菌涂片涂上紫色的革兰染色试剂（如紫晶染剂），然后用碘溶液形
成复合物。

接下来，使用酒精溶液洗去多余染料，并进行脱色。

最后，用蓝色的对
照染剂（如苏木精）进行染色。

4.观察：通过显微镜下观察细菌涂片。

革兰阳性细菌会呈现紫色或深紫色，而革兰阴
性细菌则呈现粉红色。

革兰染色法的结果可以提供有关细菌类型及其细胞壁结构的信息，这对于细菌分类和鉴定非常重要。

它是微生物学中常用的一种初步鉴定方法。

作细菌染色检查，首先要制备细菌涂片。

制备细菌涂片一般包括涂片、干燥、固定三步。

1．涂片：取洁净玻片一张，按以下步骤操作肉汤培养物涂片：①右手拿接种环的黑色胶柄部分，左手托持试管。

②接种环以15°角置于酒精灯的外焰中烧灼灭菌，直至金属丝烧红(图1-3)，然后将金属柄部也回旋通过火焰烧灼灭菌。

③用右手小指和手掌小鱼肌侧拔掉左手所持试管的棉塞，并立即火焰烧灼试管口灭菌。

④用已灭菌冷却的接种环伸入试管中取出菌液(图1-4)。

注意勿使沾有菌液的接种环触及试管壁及试管口。

⑤再次灭菌试管口，将棉塞在火焰上略加烧灼（时间要短，以免点燃棉塞），塞好棉塞，放回原处。

⑥将接种环上之菌液涂于载玻片上，制成的菌膜直径约1cm左右。

然后将接种环用火焰烧灼灭菌。

为防止细菌溅散污染环境，接种环灭菌前，须先将接种环靠近火焰或放内焰中烤干，然后再在外焰中烧红灭菌，杀死残留的细菌。

液体标本（如脓液、痰液等）均可照此法涂片斜面培养物涂片：用细菌斜面（或平板）培养物涂片，需预先取一接种环无菌生理盐水置于载玻片上，然后再按上述无菌操作法从斜面培养物上取少量菌苔，放入生理盐水内轻轻研匀，制成直径lcm左右的菌膜。

如有多个标本行同一方法染色时，可用蜡笔在玻片上划出数格，做好标记再分别进行涂片，以免混淆。

2、干燥：涂片最好在室温中自然干燥，如需加速干燥，可将标本向上小心地放置离火焰半尺高处，略烘促使干燥，切不可在火焰上烧干。

3、固定：常用加热固定法。

涂片干燥后，让玻片有菌膜的面向上，在火焰的最热部分迅速通过三次。

固定之目的是使细菌蛋白变性，菌体牢固黏附于玻片上，还可杀死细菌，改变菌体对染料的通透性。

以上步骤完成后，便可进行各种染色。

（二）革兰（Gram）染色法革兰染色是细菌学中使用最广泛的一种染色方法，籍此染色法，可将所有细菌区分为两大类。

【材料】金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和大肠杆菌(Escherichia coli，E．coli)24h 斜面培养物、革兰染色液、生理盐水、载玻片、接种环等。

细菌染色和涂片观察的方法细菌的染色和涂片观察是微生物学中非常重要的实验方法，可以帮助我们识别和研究细菌的形态、结构和特征。

下面将详细介绍细菌染色和涂片观察的方法。

一、细菌染色方法：1.革兰氏染色法：革兰氏染色法是细菌染色中最常用的方法之一、通过该方法，细菌可以被分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。

步骤：(1)取一块玻璃片，将细菌涂布于玻璃片上。

(2)用火炬预热玻璃片，使玻璃片夹持菌液返燃。

(3)在火焰中反复将菌液加热，使其彻底干燥。

(4)将干燥的玻片放在青霉素醛固定液中，固定细菌片。

(5)用生理盐水将玻璃片在微生物操作台上反复冲洗，去除青霉素醛固定液。

(6)将玻璃片放在碘酒液中浸泡3-5分钟，使菌液变成深度蓝黑色。

(7)洗净玻片，以去除碘酒液。

(8)将玻片放入95%乙醇中，进行除膜操作，1-2秒钟后取出。

(9)玻片反复在试管中加乙醇，直至洗涤液基本为无色，然后将玻片放入流动水中漂洗。

(10)用草绿素溶液染色，将玻片浸泡5分钟。

(11)用水漂洗片面，直至玻片颜色基本不变。

(12)用纤维纸轻轻拍去多余的水分，放在显微镜载物玻片上中间，覆盖一层玻璃标本纸，压平，尽量避免产生气泡。

(13)利用显微镜观察染色结果，革兰氏阳性菌为紫色或紫蓝色，革兰氏阴性菌为粉红色。

2.肥湖水染色法：肥湖水染色法也是常用的细菌染色法之一，可以用来观察鞭毛、纤毛等细菌结构。

步骤：(1)取一块玻璃片，将细菌涂布于玻璃片上。

(2)用火焰热熔玻璃片，使其保持与菌液接触状态，避免菌液干燥。

(3)将玻璃片放在肥湖水溶液中浸泡2-3分钟。

(4)用生理盐水将玻璃片反复冲洗，去除肥湖水溶液。

(5)用希森润湿法将玻璃片上覆盖一层希森润湿剂。

(6)利用显微镜观察染色结果，鞭毛呈现鲜绿色，纤毛呈现暗蓝色。

二、涂片观察方法：1.涂片制备：涂片制备是观察细菌形态和结构最常用的方法之一、涂片制备的步骤如下：(1)在无菌条件下，将细菌涂布于玻璃片上。

(2)用火焰或紫外线灭菌，使其迅速晾干。

血培养涂片染色技巧-概述说明以及解释1.引言1.1 概述血培养涂片染色技巧是一种常用的实验方法，用于检测细菌和真菌是否存在于人体血液中。

这种技术可以帮助医生快速诊断出血液感染，并确定感染的类型和严重程度。

血液感染是一种严重的医疗问题，它可能导致严重的并发症甚至危及生命。

因此，快速准确地诊断出血液感染对于治疗和预后至关重要。

血培养涂片染色技巧的使用可以提高感染的诊断效率和准确性，从而帮助医生及时决策和采取治疗措施。

在血培养涂片染色技巧中，我们需要准备一份涂片样本，将患者的血液与培养基混合，然后通过染色方法，将细菌和真菌从背景中区分出来。

常用的染色剂有格拉姆染色和墨子染色，它们可以帮助我们识别出不同类型的微生物。

血培养涂片染色技巧的关键在于操作的细致和准确。

在准备涂片样本时，我们需要掌握正确的取血量和培养基比例，以确保培养的细菌和真菌数量足够多。

在染色过程中，我们需要注意染色剂的使用量和作用时间，以免过度染色或染色不均。

除了操作的技巧外，血培养涂片染色技巧还需要依赖于实验室设备和培养基的选择。

实验室应该配备高质量的显微镜和染色设备，以确保观察结果的准确性。

同时，不同类型的微生物可能需要不同的培养基和条件，医生和实验人员需要根据具体情况选择合适的培养基和处理方法。

总之，血培养涂片染色技巧是一项重要且常用的实验方法，可用于快速诊断血液感染。

正确使用这种技术需要掌握操作的细节和注意事项，并且需要依赖于高质量的实验设备和合适的培养基。

通过不断的实践和学习，我们可以提高血培养涂片染色技巧的应用水平，为临床诊断和治疗提供更可靠的支持。

1.2 文章结构文章结构是指整篇文章的组织架构和内容安排方式。

在本篇长文中，文章结构主要分为引言、正文和结论三个部分。

首先是引言部分，用来引入文章的主题和背景。

概述部分可以简要介绍血培养涂片染色技巧的重要性和应用领域，在此可以强调血培养涂片染色技巧在临床诊断中的重要作用。

接着，文章结构部分需要明确说明本篇长文的结构安排，即正文和结论部分的内容分布。

革兰染色涂片检查及结果影响因素浅析革兰染色是一种用于细菌分类的常规染色方法，由丹麦细菌学家Christian Gram于1884年发明。

革兰染色涂片检查是临床诊断中常用的细菌检查方法之一，通过革兰染色可以将细菌分成革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两大类，这对于临床诊断和治疗具有重要意义。

革兰染色涂片检查结果受到多种因素的影响，了解这些因素对于准确诊断和治疗具有重要意义。

本文将就革兰染色涂片检查及结果影响因素进行浅析。

一、革兰染色原理及操作步骤革兰染色是将细菌染色成紫色后，用碘液处理使细菌呈现出固定的颜色，然后用酒精做脱色处理，最后用碱性染料红素进行染色。

这样，革兰氏阳性细菌会呈现紫色，而革兰氏阴性细菌则呈现红色。

操作步骤分为涂片制备、革兰染色、洗净和显微镜观察等环节。

1. 革兰氏阳性细菌革兰氏阳性细菌是一类细胞壁含有较多乙醇胺胡麻酸和潜肽聚糖的细菌，细菌细胞壁较厚，染色后呈紫色，这些细菌多数是球菌和芽孢杆菌等。

革兰染色检查阳性结果可能受到的影响因素包括：细菌培养时间、细菌种属、染色液的配制、染色时间等。

3. 其他影响因素除了上述的细菌培养时间、细菌种属、染色液的配制、染色时间外，革兰染色检查结果还可能受到其他因素的影响，如实验人员操作技能、显微镜的质量、细菌样本的保存和处理等。

在进行革兰染色涂片检查时，需要仔细操作，并且尽量排除各种可能的影响因素，以获得准确的检查结果。

三、革兰染色涂片检查在临床的应用革兰染色涂片检查是临床上常用的细菌检查方法之一，通过对患者样本进行革兰染色涂片检查，可以迅速了解患者可能感染的细菌类型，对于感染性疾病的诊断和治疗具有重要意义。

在临床工作中，医务人员可以根据革兰染色涂片检查结果，及时调整治疗方案，有助于提高治疗效果和患者生存率。

软下疳的几种检查方法1.涂片染色检查可从溃疡边缘深部或基底部取材，先用生理盐水洗净患部，取其渗出物，如为淋巴结穿刺取材，应从健康皮肤处进针，以免形成瘘管，涂片时应从玻片的一端推向另一端，以保持细菌的特征形态，涂片固定后可用Gram，Wright，Giemsa或Pappenheim Saathof染色，约50%可查见长约1～2cm末端钝圆的二极染色的短小杆菌，Gram染色阴性，单个或沿黏液丝方向呈团状或平行排列小群聚集，溃疡处常有与Ducrey嗜血杆菌相似的短小杆菌污染，但污染菌无“鱼群样”特征。

2.病原菌培养可从横痃或溃疡损害处取材，常用培养基为淋球菌胎牛血清培养基，Mueller-Hinton巧克力培养基等，2h内接种，置于5%～10%二氧化碳和饱和湿度环境中，于33～34℃至少培养48h，Ducrey嗜血杆菌的菌落直径为2mm，呈光滑的半球形，黏性极强。

3.鉴定试验对已分离出的Ducrey杆菌，应进行生化试验进行鉴定，有氧化酶试验和硝酸盐还原试验等。

4.免疫学检查间接免疫荧光试验以与Ducrey杆菌外膜成分起反应的单克隆抗体检测生殖器溃疡分泌物涂片，酶免疫试验在培养阳性的本病患者中检出率为93%，可用于大规模人群的筛选检查。

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革兰氏染色实验革兰氏染色(Gram Staining)是用来鉴别细菌的一种方法：这种染色法利用细菌细胞壁上的生物化学性质不同,可将细菌分成两类,即革兰氏阳性(Gram Positive)与革兰氏阴性(Gram Negative).(这种染色法是由一位丹麦医生汉斯•克里斯蒂安•革兰于1884年所创造).未经染色之细菌,由于其与周围环境折光率差异甚小,故在显微镜下极难观察.染色后细菌与环境形成鲜明比照,可以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结构特征,而用以分类鉴定.革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌:革兰氏阳性菌：葡萄球菌属(主要是金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌等)、链球菌属(肺炎链球菌、草绿色链球菌、肠球菌等)、白喉杆菌、炭疽杆菌、破伤风杆菌、蜡样芽抱杆菌等,其中,金黄色葡萄球菌、肠球菌等为临床重要的病原菌.革兰氏阴性菌：埃希氏菌属、枸檬酸菌属、假单胞菌属〔绿脓杆菌等〕、莫拉菌属〔卡他莫拉菌等〕、奈瑟菌属〔淋球菌、脑膜炎双球菌等〕、不动杆菌属〔鲍曼不动杆菌、罗菲不动杆菌等〕、克雷伯菌属〔主要是肺炎克雷伯杆菌〕、沙门氏菌属、志贺氏菌属〔痢疾杆菌等〕、黄杆菌属、变形杆菌属、军团菌属、耶尔森菌属、嗜血杆菌属〔杜克雷嗜血杆菌、流感嗜血杆菌等〕、产气杆菌属、霍乱弧菌、阴沟肠杆菌等.革兰氏阴性菌在院内感染中的细菌感染中占了大约65%,且大多菌株容易对抗菌药物耐药,产生“新德里金属酶" 〔NDM-1〕的绝大多数细菌都是革兰氏阴性菌〔主要是大肠杆菌、鲍曼不动杆菌和肺炎克雷伯杆菌〕.革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌是利用革兰氏染色法来鉴别的两大类细菌.大多数化脓性球菌都属于革兰氏阳性菌,它们能产生外毒素使人致病,而大多数肠道菌多属于革兰氏阴性菌,它们产生内毒素, 靠内毒素使人致病.细胞形态和结构细胞的根本结构包括细胞壁和原生质体两局部.原生质体位于细胞壁内,包括细胞膜〔细胞质膜〕、细胞质、核质和内含物.另外细胞还含有有些特殊结构,主要有荚膜、芽抱、鞭毛和菌毛等4种.1 .细胞壁革兰氏染色的机理主要是抓住了革兰氏阳性细菌与阴性细菌在细胞壁的结构与组成上的不同,具体比拟见下表：进一步的,革兰氏阳性细菌的细胞壁主要由肽聚糖和包括磷壁酸的酸性多糖构成,细胞外表整体带负电的局部原因就是由于磷壁酸带负电.同时,磷壁酸赋予了革兰氏阳性细菌以特异的外表抗原.总的说来,细胞壁结构的差异导致了染料吸收的差异,也导致了很多生理特性的不同.2 .非细胞壁结构性性一兰早明性郛菌•兰氏阴性细菌外壁层结构Hl# nm)Z-J0三房飞三、M配/F冬吟日T5%汪单位交联,正箔益密上图华巳翔阳碑位空於瞬曲城沱=1阴m性美系腾箍二汩性1毛『|』口%福如5%; “ D%土蜜〔龄一蛔王五宅法天五蛋E五一或无无fi指雪龙三存11S-22%在非细胞壁结构中,革兰氏阳性细菌和阴性细菌主要的区别在于是否有芽抱和鞭毛与性菌毛的不同上.芽孢是某些细菌菌体发育过程中的一个阶段,在一定的环境条件下由于细胞质和核质的浓缩凝集形成的一种特殊结构.革兰氏阴性细菌中没有会形成芽抱的菌种,而局部革兰氏阳性细菌可以.另外,在鞭毛和性菌毛方面两者也有不同.鞭毛和性菌毛都是附属物.某些细菌外表伸出的细长、波曲的附属物称为鞭毛.革兰氏阳性细菌的鞭毛上根本着生两个环,革兰氏阴性细菌那么根本着生四个环.性菌毛只见于革兰氏阴性菌,参与细胞间称作接合作用的交配过程.生理特性以下是关于革兰氏阳性细菌和阴性细菌在生理特性方面的比拟. 两者的不同从本质上来说,还是主要是由细胞结构的不同所决定的.用日虽兰对日性细菌革兰氏阴性和菌对机械力的抗性强弱至1胞壁抗花菌南弱〔砂感〕理〔不原感,*对青毒春、磷胺钻感不勘感*对链霉素、氯霉素、哩F素八城魅前感对碱性霜的抑菌作用强弱*对阴离子去污剂敏感不敏感*对叠氨叱论颍感不勖感对一曜血性强疝件弱代卅抱壁最外层中脂务雄阻碍流阕诙、亩牛叁.染料、去污各I等式十分千番入步骤：革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤,具体操作方法是：〔1〕制片.取菌种培养物常规涂片、枯燥、固定.要用活泼生长期的幼培养物作革兰氏染色；涂片不宜过厚,以免脱色不完全造成假阳性；火焰固定不宜过热〔以玻片不烫手为宜〕.〔2〕初染.滴加结晶紫〔以刚好将菌膜覆盖为宜〕染色1-2min,水洗.〔3〕媒染.用碘液冲去残水,并用碘液覆盖约1min,水洗.〔4〕脱色.用滤纸吸去玻片上的残水,将玻片倾斜,在白色背景下,用滴管流加95%的乙醇脱色,直至流出的乙醇无紫色时,立即水洗.乙醇脱色是革兰氏染色操作的关键环节：脱色缺乏,阴性菌被误染成阳性菌；脱色过度,阳性菌被误染成阴性菌.因而脱色时间一般为 20-30S.〔5〕复染.用番红液复染约2min,水洗.〔6〕镜检.枯燥后,用油镜观察.菌体被染成蓝紫色的是革兰氏阳性菌, 被染成红色的为革兰氏阴性菌.明第名燃料S扇港U疑isr：i生五丸红匕用说也染#1；i月等红化江电韭闲箱状.亚色t用酒新瑞色原理:通过结晶紫初染和碘液媒染后,在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物,再用95%乙醇脱色.革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密,故遇乙醇或丙酮脱色处理时,因失水反而使网孔缩小,再加上它不含类脂,故乙醇处理不会出现缝隙,因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内,使其仍呈紫色；而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差,在遇脱色剂后,以类脂为主的外膜迅速溶解,薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出,因此通过乙醇脱色后仍呈无色,再经沙黄等红色染料复染,就使革兰氏阴性菌呈红色 [1].染色的差异主要是阴性与阳性细菌细胞壁的差异所引起的.①革兰氏阳性细菌的细胞壁G+细菌细胞壁具有较厚〔20-80nm〕而致密的肽聚糖层,多达50层,占细胞壁成分的40%〜95%,它同细胞膜的外层紧密相连〔图2-9〕.有的G+细菌细胞壁中含有磷壁酸〔teichoic-acid〕,也称胞壁质〔murein〕,它是甘油和核糖醇的聚合物,磷壁酸通常以糖或氨基酸的酯而存在.由于磷壁酸带负电荷,它在细胞外表能调节阳离子浓度.磷壁酸与细胞生长有关,细胞生长中有自溶素〔autolysins〕酶类起作用,磷壁酸对自溶素有调节功能,阻止胞壁过度降解和壁溶.如果细胞壁的肽聚糖层被消溶,G+细胞成为原生质体(protoplasts),细胞壁不复存在,而只存留细胞膜.除链球菌外, 大多数G+细菌细胞壁中含极少蛋白质.②革兰氏阴性细菌的细胞壁G一细菌细胞壁比G+细菌细胞壁薄(15〜20nm)而结构较复杂, 分外膜(outer membrane)和肽聚糖层(2〜3nm)(图2-10).在细胞壁和细胞质膜之间有一个明显的空间,称为壁膜间隙(periplasmic space).外膜G—细菌细胞壁外膜的根本成分是脂多糖(lipopolysaccharide,LPS),它同细胞质膜相同之处也是双层类脂,但除磷脂外还含有多糖和蛋白质.LPS的多糖局部包括核心多糖和O-特异多糖.O-特异多糖由重复分支的碳水化合物分子组成,含有已糖(葡萄糖、半乳糖和鼠李糖) 和二脱氧已糖.由于糖的种类不同,使各种G—细胞具有不同特性的LPS.核心多糖(core polysaccharide)的主要组分是酮脱氧辛酸(ketodeoxyoctonate, KDO).外膜中还含有几种蛋白,如脂蛋白、通透蛋白.有些蛋白具有通孔作用(porin),调控外界分子进入细胞；有的蛋白分子可以作为噬菌体的受体；许多G—细菌对高等生物有致病性是由LPS的成分决定的,它的毒性组分常称为内毒素(endotoxins).肽聚糖层G—细菌细胞壁的肽聚糖层很薄,在大肠杆菌和其它细菌中仅有单层.肽聚糖层和外膜的内层之间通过脂蛋白连接起来.壁膜间隙G—细菌细胞壁的外膜与细胞质膜之间存在明显的壁膜间隙,一层薄的肽聚糖处于其间,肽聚糖层和细胞质膜之间的间隙较宽,肽聚糖层至外膜之间的间隙较窄.大肠杆菌的壁膜间隙宽度为12〜15nm,呈胶胨态.其间含有三类蛋白质：水解酶,催化食物的初步降解；结合蛋白,启动物质转运过程；化学受体(chemoreceptors), 在趋化性中起作用的蛋白.染色结果：革兰氏阳性菌呈蓝紫色,革兰氏阴性菌呈红色.。

简述革兰染色法的步骤结果及临床意义
革兰染色法是一种常用的细菌学检查方法，用于鉴别细菌的阴性和阳性性质。

其步骤包括初染、媒染、脱色和复染等四个步骤。

具体实验流程如下:
1. 取载玻片用纱布擦干，载玻片的一面用 marker 笔画一个小圈 (用来大致确定菌液滴的位置)。

涂菌的部位在火焰上烤一下，除去油脂。

2. 涂片：液体培养基:左手持菌液试管，在酒精灯火焰附近 5cm 左右打开管盖;右手持接种环在火焰中烧灼灭菌，等冷却后从试管中沾取菌液一环，在洁净无脂的载玻片上涂直径 2mm 左右的涂膜，最后将接种环在火焰上烧灼灭菌。

固体培养基：先在载玻片上滴一滴无菌水，再用接种环取少量菌体，涂在载玻片上，使其薄而均匀。

3. 晾干：让涂片在空气中自然干燥。

4. 固定：让菌膜朝上，通过火焰 2-3 次固定 (以不烫手为宜)。

5. 染色：将固定过的涂片放报纸上，滴加草酸铵结晶紫液，染1min。

6. 水洗：用水缓慢冲洗涂片上的染色液，用吸水纸吸干。

简单染色结束可观察细胞形态。

7. 媒染：滴加 1 滴碘液，染 1min，水洗。

8. 脱色：吸去残留水，连续滴加 95% 乙醇脱色 20-30s 至流出液无紫色，立即水洗。

9. 复染：滴加蕃红复染 3-5min，水洗。

至此，革兰氏染色结束。

结果：革兰氏阳性菌呈蓝紫色，革兰氏阴性菌呈红色。

革兰染色法的临床意义在于:1. 鉴别细菌;2. 选择药物;3. 与致病性有关：革兰氏阳性菌能产生外毒素，革兰氏阴性菌能产生内毒素;而内毒素是细菌感染性休克的一个重要因素。

gram staining基本操作流程及注意事项Gram staining（简称Gram染色）是一种常见的细菌染色方法，通常用于区分细菌种类，根据其细胞壁的结构，将细菌分为Gram阳性和Gram阴性。

Gram染色的基本操作流程如下：准备材料：空载玻片、细菌液浸液、柳枝状棒、火种、Gram染色剂（包括①靛紫（染色试剂）；②碘液（定色液）③酒精（脱色液）④接受红（染色试剂）），显微镜。

1.取一块无菌载玻片，用火种在玻片中央略微加热并让其变得干燥，避免后续的试剂淋漓。

2.用柳枝状棒，在取几滴细菌液。

3.将柳枝状棒中的细菌涂抹在玻片上，随后待其空气干燥。

4.以静态方法将已定制的靛紫染料涂于细菌涂片全面覆盖，并在其上静置10-15秒，然后用水冲洗干净。

5.华盖玻片中的碘液涂于靛紫染色后的细菌涂片上，使碘液充分渗透后静置1~2分钟。

6.将细菌涂片放于流动自来水下冲洗至清洁，使得把玻片表面的污染冲洗干净。

7.倒入95%的乙醇脱色剂，计时20秒后立刻用流动自来水冲洗干净。

8.将未染色的细胞再次染色，将接收红染料涂在细菌涂片上，保持1-2分钟。

9.再次用流动自来水洗液冲洗干净玻片表面的染色剂，待干。

10.制作的细菌涂片放于显微镜下，透过显微镜镜头观察。

注意事项：1.操作前务必保持材料的清洁与无菌状态，避免杂质或细菌引起染色结果的干扰和错误。

2.在染色的过程中，遵循步骤的每一个操作，严格按照规定的时间和量进行操作。

3.在染色的过程中，要仔细观察细菌涂片的各个环节，特别注意染色剂的使用和强度，避免过度染色或不足。

4. 注意观察细菌染色后的结果，Gram阳性的细菌染色后显示的蓝色，Gram阴性细菌染色后显示的是红色，因此染色结果应与理论上的预期一致。

5.染色后要及时用高温焚烧器让玻片变干，防止玻片退化和发霉。

在实验操作过程中，我们要遵循安全操作规程和实验守则，严格按照操作流程进行，避免误操作和人为因素对实验结果的干扰。

细菌室常规检测项目：一形态学检查（Morphological Examination）（一）各种染色1革兰染色（Gram stain）：将细菌分为革兰阳性菌如葡萄球菌属，链球菌属等；革兰阴性菌如大肠埃希菌沙门菌，志贺菌等。

2抗酸染色(Acid-fast stain)：通过染色将细菌分为两大类：抗酸性细菌和非抗酸性细菌，抗酸性细菌种类较少，如结核分枝杆菌，麻风分枝杆菌等。

正常：未见。

抗酸染色，找到红色分枝杆菌，及报告“找见抗酸分枝杆菌”，量可以用加号表示：++++每个视野>10根+++每个视野发现1～10根++100个视野发现10～99根+300个视野发现3～9根±300个视野发现1～2根3异染颗粒染色（Metachromatic granula stain）：用于检查棒状杆菌。

4墨汁染色（Indian ink negative staining）：用背景着色，而细菌本身不着色的染色方法，用于脑脊液中查找新生隐球菌。

正常：未见。

5鞭毛染色（Flagella stain）：鞭毛的数目和位置随细菌种类而不同，可分为周毛菌、单毛菌、双毛菌和丛毛菌，是细菌分类和鉴定的重要依据。

如霍乱弧菌是单鞭毛菌。

6荚膜染色（Capsules stain）：荚膜是细菌壁外一层粘液性多聚物，赋予致病菌的侵袭力。

染色将荚膜染成与菌体不同颜色，可作为细菌鉴定的依据。

如肺炎链球菌。

（二）涂片检测(smear)1便球杆比检查( stool cocus/bacillus)：即革兰阳性球菌与革兰阴性杆菌之比。

正常值：便球杆比：1:3临床意义：健康人肠道内寄居着大量厌氧菌和小部分需氧菌。

除人乳喂养的婴儿肠道内以革兰阳性球菌为主外，其余人均以革兰阴性杆菌占绝对优势。

在肠道发生致病菌如沙门、志贺、弧菌感染时往往由于使用抗生素而是革兰阴性杆菌受到抑制，此时球菌/杆菌比值有可能变大。

若比值显著增大，常提示肠道菌群紊乱或发生二重感染。