细菌染色和涂片观察的方法

细菌涂片和革兰染色法是常用的微生物学实验技术，用于观察和鉴定细菌。

细菌涂片是一种简单而常见的方法，用于制备细菌样品的薄层。

它通常包括以下步骤：
1.取少量细菌样品：从培养基或临床标本中取少量细菌，并使用吸管或接种环在玻璃
片上均匀涂抹。

2.干燥：将涂片放置在室温下使其自然干燥，以确保细菌固定在玻璃片上。

3.固定：通过加热或使用特定化学药剂（如甲醇）进行固定，以保持细菌在涂片上的
形态结构。

4.染色：涂片可以使用不同的染色方法进行染色，例如格拉姆染色、苏木精染色等，
以区分不同类型的细菌。

5.观察：准备好的细菌涂片可在显微镜下观察。

通过观察细菌的形态、大小、排列方
式等特征，可以初步判断细菌的类型和特性。

革兰染色法是最常用的细菌染色方法之一，用于区分细菌的革兰氏阳性（G+）和革兰氏阴性（G-）两类。

它包括以下步骤：
1.取少量细菌样品：从培养基或临床标本中取少量细菌，并涂抹在玻璃片上。

2.固定：对细菌进行固定，通常使用加热的方法使其附着在玻璃片上。

3.染色：首先将细菌涂片涂上紫色的革兰染色试剂（如紫晶染剂），然后用碘溶液形
成复合物。

接下来，使用酒精溶液洗去多余染料，并进行脱色。

最后，用蓝色的对
照染剂（如苏木精）进行染色。

4.观察：通过显微镜下观察细菌涂片。

革兰阳性细菌会呈现紫色或深紫色，而革兰阴
性细菌则呈现粉红色。

革兰染色法的结果可以提供有关细菌类型及其细胞壁结构的信息，这对于细菌分类和鉴定非常重要。

它是微生物学中常用的一种初步鉴定方法。

培养观察细菌的简易方法一、牙垢中的细菌用消毒牙签，在自己牙齿缝里挑下一些碎屑，放在洁净载玻片上的水滴中，调匀，制成涂片。

待涂片干燥后，在酒精灯火焰上徐徐来回掠过3～4次，细菌外面的一些胶质粘着在载玻片上，使细菌固定、稍冷，加一滴亚甲基蓝溶液，染色1～2分钟后，用清水冲洗，然后盖上盖玻片。

置显微镜下，先用低倍镜观察，再换高倍镜，可观察到杆菌、弧菌、球菌等。

若使用油镜观察，效果更清楚明显。

二、粪池里的细菌在粪池用吸管吸取一滴沤过的粪混合液上层液体，滴在洁净的载玻片上，盖上盖玻片。

置显微镜下观察，先用低倍镜，后用高倍镜。

可见到活的螺旋菌及杆菌。

注意在观察时光线应暗些，效果好。

三、酸莱、酸奶中的细菌取酸菜液上部的白色薄膜或酸奶澄清液，制成临时装片，放在高倍镜下观察，可看到乳酸杆菌。

四、根瘤菌的观察取豆科植物[大豆、蚕豆、花生]的根瘤用刀片切开，用针挑取一小块内容物，放在载玻片上的水滴中，制成涂片，晾干后，用酒精灯火焰烘烤固定，然后滴一滴亚甲基蓝溶液，染色2～3分钟，清水冲洗，盖上盖玻片，吸干后，用500倍高倍镜观察，可见到短杆状根瘤菌。

五、枯草杆菌的培养和观察把25克新鲜干草切成小段，放在盛200毫升清水烧杯中，加热煮沸15分钟，待溶液呈暗褐色时，倒入烧瓶，放在黑暗、20～30℃的温暖环境中。

2～3天后，液体混浊，表面形成薄膜。

用吸管吸取浮在上层的液体，制成临时涂片，放在高倍镜下观察，可看到连成线的枯草杆菌。

若将培养液放在低温处1～2天，再取出制成临时涂片，用600倍或更高倍数的显微镜观察还能看到枯草杆菌的芽孢。

微生物学实验细菌细胞的生化反应实验一、实验目的了解并掌握细菌鉴定中常用生理生化反应的原理和方法。

二、实验原理各种细菌由于具有不同的酶系统，致使它们能利用不同的底物，或虽然可以利用相同的底物，却产生不同的代谢产物，因此可以利用各种生理生化反应来鉴别细菌。

糖发酵是最常用的生化反应，存在于大多数细菌中。

实验一 细菌形态和结构观察，涂片制作及染色法 课程名称：兽医微生物学 实验学时： 2学时一、目的要求1．了解、熟悉油镜的使用和使用原理。

2．掌握细菌抹片的制备及美蓝和革兰氏染色方法。

3．能够识别革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的染色特征。

4．熟悉细菌的基本形态学特征和特殊构造。

二、知识背景细菌个体微小，无色透明，在一般显微镜下不易识别，必须用适当的染料使其着色后，才能看到其形态、排列和结构。

某些细菌因有特殊的染色性，更可借特殊的染色方法加以鉴别。

因此染色技术是细菌鉴定中的基本技术之一。

检查微生物标本，需要使用显微镜。

比较多用的是普通光学显微镜。

根据不同要求，可使用暗视野显微镜、相差显微镜、荧光显微镜和电子显微镜。

前几种显微镜用可见光线或紫外光线作照明光源，它们都属于光学显微镜；电子显微镜则是用电子流代替照明光源，与光学显微镜不同。

［普通光学显微镜的构造和使用］普通光学显微镜（或称生物显微镜）的构造，使用与保护方法，已在《组织学与胚胎学》教材中讲过，这里概述油镜的原理和使用要点：检查细菌标本，多用油镜进行，油镜是一种高倍放大（95-100倍）的物镜，一般都标有放大倍数（如95×；100×等）和特别标记，以便识别。

国产镜多用“油”字表示，国外产品则常用“Oil 或“HI”作记号。

油镜上还常漆有黑环或红环，而且油镜镜身比高倍镜和低倍镜长，镜片最小，这也是识别的另一个标志。

油镜头的晶片细小，进入镜中的光量也较少，其视野比用高倍镜时为暗。

当油镜头和载玻片之间为空气层所隔时，因为空气的折光指数与玻璃的不同，故有一部分光线被折射而不能进入镜头之内，使视野更暗；若在镜头与载玻片之间放上与玻璃的折光指数相似的油类，如香柏油等，使光线不致于因折射而大为损失，则可使视野充分照明，并能使操作者清楚地进行观察和检查（图l ）。

实验室中几种常用物质的折光指数 品名 玻璃 檀香油香柏油 加拿大树胶二甲苯 液体石蜡松节油甘油 水 折光指数 1.52-1.59 1.52 1.51 1.52 1.49 1.48 1.47 1.47 1.33进行油镜检查时，应先对好光线，但不可直对阳光，采取最强亮度（升高集光器，开大光圈，调好反光镜等）。

革兰氏染色原理及步骤
革兰氏染色是一种常用的细菌染色方法，可根据细菌的染色特性分为革兰氏阳性和革兰氏阴性。

该染色方法主要通过酸碱性染料的交替作用，使革兰氏阳性和阴性细菌能够在显微镜下呈现不同的颜色。

革兰氏染色的步骤分为四个主要过程：准备、染色、洗涤和观察。

1. 准备：首先需要准备好细菌涂片。

将细菌培养物均匀涂布在玻片上，使其干燥。

2. 染色：将涂片先用香精酊固定，使细菌附着在玻片上。

然后将涂片浸入革兰氏碘液中，进行固定。

固定后，将涂片通过酒精醇溶液脱色。

接下来，将涂片浸入革兰氏紫水溶液中，染色时间一般为1分钟。

染色完成后，用水冲洗涂片。

3. 洗涤：将涂片在水龙头下冲洗，直到液体变清澈。

4. 观察：将涂片在显微镜下观察。

革兰氏阳性细菌会呈现紫色，而革兰氏阴性细菌则会呈现粉红色。

总的来说，革兰氏染色方法是一种简便而有效的细菌染色方法。

通过该方法可以区分细菌的革兰氏阳性和阴性，有助于进一步分析细菌的形态结构和鉴定。

实验二细菌的形态观察（简单染色法和革兰氏染色法）实验二细菌的形态观察（简单染色法和革兰氏染色法）一目的要求1．了解简单染色法和革兰氏染色法的基本原理，熟练掌握细菌的涂片与革兰氏染色技术。

2．初步学习细菌细胞特殊结构的染色方法，并观察细菌的特殊结构。

3．观察细菌的菌落平板，学会识别大肠杆菌、枯草杆菌和金黄色葡萄球菌的菌落特征，学会初步鉴别微生物的种类的方法。

二实验内容与原理1．简单染色法原理简单染色法是利用单一染料对细菌进行染色的一种方法，一般用于观察个体形态与细菌排列。

由于细菌在中性、碱性或弱酸性环境中带负电荷，所以通常采用一种碱性染料如美蓝、碱性复红、结晶紫对细菌进行染色。

美蓝是美蓝的盐酸盐，可解离为带正电荷的美蓝，很容易与细菌结合使菌体着色。

染色后的细菌细胞与背景形成鲜明的对比，在显微镜下更易于识别。

简单染色过程：涂片→固定→染色→水洗→干燥→镜检涂片→ 固定→ 干燥→ 水洗、吸干→镜检→染色 1mim2．革兰氏染色法原理革兰氏染色法是由丹麦医生 Hans Christian Gram于 1884 年创立。

它是细菌学中很重要的鉴别染色法，因为通过此法染色，可将细菌鉴别为革兰氏阳性菌（G + ）和革兰氏阴性菌（G －）两大类。

革兰氏染色过程：涂片→固定→结晶紫初染（1min）→碘液媒染（1min）→乙醇脱色（95% 酒精,30s）→番红复染（30 秒）→干燥→镜检阳性菌：紫色阴性菌：红色革兰氏染色要点：（1）初染：用结晶紫，染色 1 分钟，水洗。

（2）媒染：加碘液覆盖 1 分钟后水洗。

（3）脱色：连续滴加 95％乙醇，约 30 秒，直到滴下的乙醇无色为止，水洗。

（4）复染：加番红染色 1 分钟，水洗。

（5）干燥。

（6）镜检：先低倍镜，后油镜观察。

注意：涂片要薄而均匀，脱色程度要控制得当。

学生做大肠杆菌，金黄色葡萄球菌，枯草杆菌的革兰氏染色。

观察细菌个体形态与排列，绘图。

3．芽孢染色原理细菌的芽孢壁比营养细胞壁厚，致密，透性差，着色和脱色都比营养细胞困难，故一般采用一种碱性染料并在微火上加热，或延长染色时间，使菌体和芽孢都染上颜色以后水洗或稀酸冲去菌体的染料，芽孢仍保留颜色，再用另一种对比鲜明的染料使菌体着色，如此可明显区分芽孢和营养体结构。

细菌涂片法步骤
涂片法是装片法制作玻片标本的一种方法。

制作方法是，细菌可以用细菌液直接涂布在载玻片上，盖上盖片直接观察或干燥后染色观察，染色观察通常需要洗去染色液后观察。

为了观察细菌的典型形态,应取处于对数生长期的细菌进行涂片。

实验准备材料：酒精灯、接种环、染液、载玻片、菌种、生理盐水等步骤：
1.取清洁无油玻片一块，置火焰上通过数次，用烧灼并冷却了的接种环取菌液1～2环，均匀涂布于载玻片中央（直径1～1.5 cm）。

注意：将接种环在火焰上烧灼灭菌，要保证接种环是无菌的。

3.待接种环冷却后从固体培养基上挑取少许菌落，注意挑取菌落不宜太多，避免造成细菌堆积。

4.将接种环挑取的菌落与置于载玻片的生理盐水上混匀，形成直径约1cm的涂面，要薄而均匀，使细菌呈现单层分布，涂匀后再次将接种环在酒精灯上烧灼灭菌。

5.干燥：涂片放室温自然干燥；也可将标本面向上，在离火焰约15 cm高处微微加热烘干，切勿靠近火焰；或用电吹风吹干。

6.固定涂片：常用加热固定法，固定的方法是手执载玻片一端，标本面向上，在火焰外焰上水平地以钟摆速度来回通过3次，注意温度不宜太高，以玻片反面触及手背部皮肤感觉热而不烫为宜。

涂片的制作有一定要求，即涂片不能太厚，细菌在涂片中应呈单层分布。

细菌一般形态染色观察一、实验目的学习了解微生物染色的基本原理与方法学习掌握细菌的简单染色和革兰氏鉴别染色技术巩固显微镜油镜的使用方法。

二、实验原理细菌的个体极微小，无色透明，必须借助于染色法，使细菌（或背景）着色，与背景（或菌体）形成明显的对比便于在显微镜下观察细菌的形态构造。

染色方法主要有：见下图简单染色法简单染色法是利用单一染料对细菌进行染色的一种方法。

适用于菌体一般形状和细菌排列的观察。

常用染料有：碱性染料：结晶紫、碱性复红、龙胆紫、番红、中性红、孔雀绿等。

酸性染料：酸性复红、刚果红、曙红等简单染色一般常用碱性染料进行染色原因：在中性、碱性或弱酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷，而碱性染料在电离时，带正电荷，因此碱性染料很容易与细菌结合使细菌着色细菌细胞壁含有蛋白质或多肽，也就有等电点已知细菌的等电点pH为2～5。

革兰氏阳性菌为2～3，革兰氏阴性菌为4～5。

当细菌的培养液pH值大于等电点时，细菌带有负电荷；反之，带有正电荷。

一般，细菌的培养、染色、试验过程均在偏碱性（7～7.5）、中性、偏酸性（6～7）条件下，都高于细菌的等电点，故均带有负电荷革兰氏染色革兰氏染色法是细菌学中最重要的鉴别染色法，根据细菌对这种染色反应的不同，可分为革兰氏阳性和革兰氏阴性两大类，其机理是由于细菌细胞壁的化学组成及结构不同和通透性不同的缘故。

革兰氏染色对于细菌的分类、鉴定及食品卫生检测都有重要意义。

革兰氏染色原理影响革兰氏染色结果的因素菌龄培养基pH值染色技术：涂片质量、染色时间、脱色时间、染色脱色均匀度等三、实验器材1. 器材：显微镜，擦镜纸，二甲苯，香柏油，载玻片，接种环，酒精灯,火柴，吸水纸，无菌牙签。

2. 染色液及试剂：石碳酸复红染液、碱性美蓝染液、结晶紫染色液，路戈氏碘液，95％的酒精，蕃红染色液，黑色素水溶液，蒸馏水。

3. 菌种：白葡萄球菌、大肠杆菌的新鲜斜面菌种各1支。

四、操作步骤（一）简单染色涂片火焰固定染色水洗干燥镜检（二）革兰氏染色涂片→干燥→火焰固定结晶紫染色→水洗碘液媒染95%酒精脱色→水洗蕃红复染→水洗干燥镜检（三）口腔中微生物观察负染色五、实验报告1、实验结果绘图2、思考题（1）细菌制片过程应注意哪些？（2）试分析菌龄、培养pH、染色技术对革兰氏染色结果的影响。

细菌染色和涂片观察的方法细菌的染色和涂片观察是微生物学中非常重要的实验方法，可以帮助我们识别和研究细菌的形态、结构和特征。

下面将详细介绍细菌染色和涂片观察的方法。

一、细菌染色方法：1.革兰氏染色法：革兰氏染色法是细菌染色中最常用的方法之一、通过该方法，细菌可以被分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。

步骤：(1)取一块玻璃片，将细菌涂布于玻璃片上。

(2)用火炬预热玻璃片，使玻璃片夹持菌液返燃。

(3)在火焰中反复将菌液加热，使其彻底干燥。

(4)将干燥的玻片放在青霉素醛固定液中，固定细菌片。

(5)用生理盐水将玻璃片在微生物操作台上反复冲洗，去除青霉素醛固定液。

(6)将玻璃片放在碘酒液中浸泡3-5分钟，使菌液变成深度蓝黑色。

(7)洗净玻片，以去除碘酒液。

(8)将玻片放入95%乙醇中，进行除膜操作，1-2秒钟后取出。

(9)玻片反复在试管中加乙醇，直至洗涤液基本为无色，然后将玻片放入流动水中漂洗。

(10)用草绿素溶液染色，将玻片浸泡5分钟。

(11)用水漂洗片面，直至玻片颜色基本不变。

(12)用纤维纸轻轻拍去多余的水分，放在显微镜载物玻片上中间，覆盖一层玻璃标本纸，压平，尽量避免产生气泡。

(13)利用显微镜观察染色结果，革兰氏阳性菌为紫色或紫蓝色，革兰氏阴性菌为粉红色。

2.肥湖水染色法：肥湖水染色法也是常用的细菌染色法之一，可以用来观察鞭毛、纤毛等细菌结构。

步骤：(1)取一块玻璃片，将细菌涂布于玻璃片上。

(2)用火焰热熔玻璃片，使其保持与菌液接触状态，避免菌液干燥。

(3)将玻璃片放在肥湖水溶液中浸泡2-3分钟。

(4)用生理盐水将玻璃片反复冲洗，去除肥湖水溶液。

(5)用希森润湿法将玻璃片上覆盖一层希森润湿剂。

(6)利用显微镜观察染色结果，鞭毛呈现鲜绿色，纤毛呈现暗蓝色。

二、涂片观察方法：1.涂片制备：涂片制备是观察细菌形态和结构最常用的方法之一、涂片制备的步骤如下：(1)在无菌条件下，将细菌涂布于玻璃片上。

(2)用火焰或紫外线灭菌，使其迅速晾干。

血培养涂片染色技巧-概述说明以及解释1.引言1.1 概述血培养涂片染色技巧是一种常用的实验方法，用于检测细菌和真菌是否存在于人体血液中。

这种技术可以帮助医生快速诊断出血液感染，并确定感染的类型和严重程度。

血液感染是一种严重的医疗问题，它可能导致严重的并发症甚至危及生命。

因此，快速准确地诊断出血液感染对于治疗和预后至关重要。

血培养涂片染色技巧的使用可以提高感染的诊断效率和准确性，从而帮助医生及时决策和采取治疗措施。

在血培养涂片染色技巧中，我们需要准备一份涂片样本，将患者的血液与培养基混合，然后通过染色方法，将细菌和真菌从背景中区分出来。

常用的染色剂有格拉姆染色和墨子染色，它们可以帮助我们识别出不同类型的微生物。

血培养涂片染色技巧的关键在于操作的细致和准确。

在准备涂片样本时，我们需要掌握正确的取血量和培养基比例，以确保培养的细菌和真菌数量足够多。

在染色过程中，我们需要注意染色剂的使用量和作用时间，以免过度染色或染色不均。

除了操作的技巧外，血培养涂片染色技巧还需要依赖于实验室设备和培养基的选择。

实验室应该配备高质量的显微镜和染色设备，以确保观察结果的准确性。

同时，不同类型的微生物可能需要不同的培养基和条件，医生和实验人员需要根据具体情况选择合适的培养基和处理方法。

总之，血培养涂片染色技巧是一项重要且常用的实验方法，可用于快速诊断血液感染。

正确使用这种技术需要掌握操作的细节和注意事项，并且需要依赖于高质量的实验设备和合适的培养基。

通过不断的实践和学习，我们可以提高血培养涂片染色技巧的应用水平，为临床诊断和治疗提供更可靠的支持。

1.2 文章结构文章结构是指整篇文章的组织架构和内容安排方式。

在本篇长文中，文章结构主要分为引言、正文和结论三个部分。

首先是引言部分，用来引入文章的主题和背景。

概述部分可以简要介绍血培养涂片染色技巧的重要性和应用领域，在此可以强调血培养涂片染色技巧在临床诊断中的重要作用。

接着，文章结构部分需要明确说明本篇长文的结构安排，即正文和结论部分的内容分布。

各种细菌的显微镜检查方法
常用的细菌的显微镜检查方法有以下几种：
1. 直接涂片法（直接镜检法）：将待检样品直接涂于玻片上，用染色剂染色后在显微镜下观察。

2. 阳性抽滤法：将待检样品与细菌特异性抗体结合，再通过滤膜抽出细菌，并用抗体标记荧光染料显色，然后在荧光显微镜下观察。

3. 厚滴片法：将待检样品与染色剂混合滴于玻片上，使细菌沉积在玻片上，然后用染色剂染色并在显微镜下观察。

4. 葡萄糖酸盐液滴片法：将待检样品滴入含有葡萄糖酸盐液的滴片中，使细菌生长并产生气泡，然后在显微镜下观察气泡内的细菌。

5. 培养法：将待检样品接种于适宜培养基上，通过细菌的生长和形态特点来进行检查和鉴定，如革兰氏染色、肌红蛋白酶试验、糖发酵试验等。

这些方法都可以通过显微镜观察细菌的形态、大小、结构以及染色反应等特征来进行细菌的检查和鉴定。