细菌形态学检查法二
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你需要的微生物检验基础知识汇总!一、分类细菌属于原核细胞型微生物。
最精确的方法为遗传学分类方法。
最常用的是经典传统分类法:根据细菌的亲缘关系,界门纲目科属种型株分类。
科:由共同关系的属组成,如肠杆菌科;属:是种的高一级分类单位,通常包含有共同特征或关系亲密的种,用以描述微生物的主要特征,如埃希氏菌属;种:是分类等级的基本单位,同一种微生物形态、生理学特征和组成成分基本相同,用以描述微生物的次要特征,如大肠埃希氏菌;菌株或品系:同一种微生物中不同来源的纯培育物,如大肠埃希氏菌CGMCC 1.3373。
二、细菌形态学及形态学检查法细菌形态结构主要指细菌的大小、外形、排列及超微结构。
细菌结构与其生理功能、致病性、免疫性有关。
2.1形态结构2.1.1基本形态3类:球菌、杆菌、螺旋菌,杆菌是最常见的形态。
2.1.2大小测量细菌大小的单位为微米m。
球菌以直径表示大小,杆菌以长与宽表示大小,同一种细菌在不怜悯况下大小形态也有差别:涂片干燥、固定、染色时细菌收缩;快速生长的球菌往往呈短杆状。
菌龄与细菌大小的关系受很多因素影响,主要与代谢废物的积累及培育基中渗透压上升等因素有关。
2.1.3结构基本结构:细胞壁、细胞膜、细胞质、核质;特别结构:鞭毛、菌毛、荚膜、芽孢等。
菌毛是什么?菌毛(Pilus)很多革兰氏阴性菌菌体表面遍布的比鞭毛更为细、短、直、硬、多的丝状蛋白附属器,也叫做纤毛(Fimbriae)。
其化学组成是菌毛蛋白(Pilin),菌毛与运动无关。
菌毛可分为一般菌毛(Commonpilus)和性菌毛(Sexpilus)两种。
一般菌毛长0.3~1.0um,直径7nm。
具有粘着细胞(红细胞、上皮细胞)和定居各种细胞表面的力量,它与某些细菌的致病性有关。
无菌毛的细菌则易被粘膜细胞的纤毛运动、肠蠕动或尿液冲洗而被排解,失去菌毛,致病力亦随之丢失。
性菌毛有的细菌还有1~4根较长的性菌毛,比一般菌毛而粗,中空呈管状。
性菌毛由质粒携带的一种致育因子(Ferility factor)的基因编码,故性菌毛又称F菌毛。
1实验内容:2显微镜油镜的使用与保护。
3细菌的形态与结构的观察。
4实验目的:5学会显微镜的使用,重点掌握油镜的使用与保护。
6进一步认识细菌的形态,明确细菌的大小与测量单位。
7熟悉细菌的特殊结构。
8实验材料:显微镜、擦镜纸、液体石蜡、消毒液、细菌的基本形态标本、细菌的特殊结构标本。
4实验方法:(1)显微镜油镜的使用与保护显微镜是一种贵重的光学仪器,而油镜又是显微镜的最精密部分,是观察细菌最重要的工具。
因此,要求大家必须熟练地掌握显微镜的使用和保护,尤其是油镜,避免损坏。
1识别油镜:95╳、100╳、HI、OeL。
2对光:自然光用平面反光镜,人工光用凹面反光镜;先用低倍镜对光,次用高倍镜。
对好光源后,染色标本将聚光器升高,光圈放开。
3、调节焦距:选一张细菌染色标本置于载物台上,用推进器固定,用低倍镜先找准物象,再用高倍镜看清物体,于标本上加镜油一滴。
⑴用眼从侧面观察,转动粗螺旋调节器,将油镜头徐徐下降浸入其中,切不可用力过猛,以免损坏油镜。
⑵用左眼从接目镜观察,徐徐向上转动粗螺旋调节器,见模糊物象后,再用细螺旋调节器,直到物象完全清晰为止。
4、显微镜的保护:⑴所有的光学部分结构都不能用手指、普通布擦拭,用过的油镜头应立即先用擦镜纸蘸少许二甲苯擦拭,再用干擦镜纸擦去二甲苯,以防二甲苯镜头上的固定胶,致使镜片脱落。
⑵显微镜的光学部分应避免日光直射。
避免接触强酸、强硷、氯仿、酒精。
⑶显微镜用毕,将物镜转成品字形并下降集光器和镜筒,用软布擦拭各部件后覆盖于接目镜上,双手端平送入镜箱内。
置于干燥处,以防受潮。
(二)细菌形态观察1、细菌的基本形态;球菌:肺炎球菌、脑膜炎球菌、葡萄球菌、链球菌杆菌:大肠杆菌、炭疽杆菌、结核杆菌、白喉杆菌弧菌:霍乱弧菌2、细菌的特殊结构:荚膜:肺炎球菌、产气荚膜杆菌鞭毛:水弧菌(周毛菌)一、实验内容:3细菌标本片的制备(操作)4革兰染色法(操作)二、实验目的:1进一步了解细菌特殊结构在鉴别细菌过程中的实用意义。
细菌的形态学检查常用的方法
细菌的形态学检查是指通过观察细菌的形态、结构和大小来进
行分类和鉴定的方法。
常用的方法包括:
1. 显微镜观察,使用光学显微镜或电子显微镜观察细菌的形态
和结构。
通过放大细菌的形态特征,如形状、大小、细胞壁结构等
来进行分类和鉴定。
2. 染色法,常用的染色方法包括革兰氏染色、折射率染色、吉
姆萨染色等,这些染色方法可以使细菌在显微镜下更清晰地显示出
形态特征,有助于鉴定。
3. 形态培养特性,利用不同的培养基和培养条件,观察细菌在
不同环境下的生长特性和形态变化,如菌落形态、生长速度等。
4. 生化反应,通过观察细菌对不同生化试剂的反应,如碘试验、氧化酶试验等,来鉴定细菌的形态学特征。
5. 分子生物学方法,包括PCR、序列分析等技术,通过对细菌
的基因组进行分析,可以更准确地鉴定细菌的形态学特征。
综上所述,细菌的形态学检查常用的方法包括显微镜观察、染色法、形态培养特性、生化反应和分子生物学方法,这些方法可以从不同角度全面地观察和鉴定细菌的形态学特征。
---------------------------------------------------------------最新资料推荐------------------------------------------------------细菌形态学检查法(一)细菌形态学检查法(一) 细菌形态学检查法(一)细菌形态学检查是细菌检验的重要方法之一,不仅可以为后续的进一步检验提供参考依据,更重要的是可以通过细菌形态学检查迅速了解标本中有无细菌及菌量的大致情况;对少数具有典型形态特征的细菌可以作出初步诊断,为临床选用抗菌药物治疗起到重要的提示作用。
临床标本的细菌形态学检查方法主要包括染色标本和不染色标本的检查。
一、显微镜细菌体积微小,必须借助显微镜放大后才能观察。
细菌的一般形态结构可用光学显微镜观察,而细菌内部的超微结构则需用电子显微镜观察。
1.普通光学显微镜普通光学显微镜以可见光作为光源,波长 0.4~0.7m,最大分辨率 0.2m,约为波长的一半。
人肉眼能分辨的最小距离是 0.2mm,因此用油镜放大 1000 倍,0.2m 的微粒即被放大到肉眼可见的 0.2mm。
一般细菌都大于 0.m,故可用普通光学显微镜进行观察。
2.暗视野显微镜暗视野显微镜是在普通光学显微镜上装暗视野聚光器,使照明光线不直接进入物镜,只允许被标本反射和衍射的光线进入物镜,背景视野变暗,菌体发亮。
观察时黑暗的背景中可见到发亮的菌体,明暗反差提高了观察效1 / 3果,常用于不染色标本的动力及运动状况检查。
3.荧光显微镜荧光显微镜以高压汞灯作为光源,能发出280~600nm波长的光线,主要在 365~435nm 之间。
根据使用荧光素的不同选择不同波长的光线作为激发光。
因其波长比可见光短,故分辨率高于普通光学显微镜。
细菌预先经相应的荧光素处理,然后置荧光显微镜下激发荧光,在暗色背景中可见到发荧光的菌体。
用于观察细菌的结构及鉴别细菌。
国家高等职业教育畜牧兽医专业教学资源库《动物微生物与免疫技术》技能点13 病料中细菌的形态学检查
实训目标
1.病料中细菌的形态学检查实验目标:
通过观察病料中是否有菌,从而初步判断病料是否取自细菌感染病例。
若病料中有菌,根据细菌形态初步鉴定其种类
2.病料中细菌的分离培养实验目标:
用鉴别培养基分离培养后,看是否得到菌落。
若有菌落生长,则根据菌落特征进一步鉴定细菌种类。
仪器及材料疑似大肠杆菌病料、镊子、剪刀、玻片、酒精灯、染色缸及染色架、美兰染液、吸水纸、擦镜纸、香柏油、乙醇乙醚、洗瓶、烙刀、接种环、麦康凯平板、记号笔、温箱、酒精灯等
方法与步骤
1.触片以无菌剪刀、镊子剪取被检组织一小块,以其新鲜切面在玻片上做数个压印或涂抹成适当大小的一薄层。
2.干燥涂片应在室温下自然干燥,必要时将涂面向上,置火焰高处微烤加热干燥。
3.固定火焰固定是最常用的方法,将干燥好的抹片涂面向上,在火焰上来回通过数次(一般4~6次),以手背触及玻片微烫手为宜。
4.美蓝染色在已固定好的抹片上,滴加适量美蓝染色液覆盖涂面,染色2~3min,水洗,晾干或吸水纸轻压吸干和镜检,结果菌体呈蓝色。
细菌的形态检查主要有哪几种方法 ?说起细菌,大家都不陌生,随着科技的高速发展,细菌逐渐走进了人们的生活,无论是男女老少,对于细菌都或多或少知道一些常识。
例如面团需要发酵,则需要酵母;酸奶需要乳酸菌才能变得可口;酒在醋酸菌的作用下才能成为调味品——醋;而腹泻是因为大肠杆菌作祟等等。
更有文章指出人类身体表面细菌覆盖率高达90%!可见,细菌与人们的生活关系十分密切,那么细菌究竟是何方神圣呢?细菌最早是被科学家列文虎克在一位从未刷过牙的老人牙垢上所发现的,只不过那时人们认为细菌是自然界已有的生物。
直到后来,在巴斯德实验之后,人们才知道,细菌是由空气中已有细菌产生的,而不是自行产生,人们才慢慢终于揭开了这位神秘人物的面纱。
1 细菌的构造及其繁殖细菌的结构包括基本结构和特殊结构。
细菌都具有的普遍结构即基本结构,如细胞壁、细胞膜、细胞质以及核质。
而某些细菌特有的结构称为特殊结构,包括细菌的荚膜、鞭毛、菌毛、芽孢等。
每一种结构都各司其职,有其独特的作用,例如鞭毛是某些细菌的“双腿”。
可以让细菌来去自如;荚膜可以保护细菌不被白细胞吞噬,抵御外部的不利环境等。
按照不同的分类依据,细菌可以被分成许多类型。
按细菌的生活方式来分类,细菌可以分成自养菌和异养菌,其中异养菌包括腐生菌和寄生菌;根据形状可以分为球菌、杆菌和螺旋菌(包括弧菌、螺菌、螺杆菌);按细菌生存温度分类,可分为喜冷、常温和喜高温三类。
另外,细菌的繁殖速度极快,这是由它们独特的繁殖方式所决定的,即无性二分裂(裂殖):细菌生长到一定时期,在细胞中间逐渐形成横隔,由一个母细胞分裂为两个大小相等的子细胞。
一般细菌约20到30分钟便分裂一次,即为一代。
不难想象,若是环境适宜,且时间充分的条件下,细菌的繁殖会有多么迅速!用不了多久,世界都是细菌的“殖民地”了。
2 细菌的形态检查方法什么是细菌形态检查?细菌形态检查就是对细菌的菌体形态和菌群的形态进行观察,进而对所检查的细菌的类型进行归属和划分菌属的检查方法。
细菌形态学检查法(二)
三、染色标本的检查细菌标本经染色后,不仅能清晰地看到细菌的形态、大小及排列方式,还可根据染色结果将细菌进行分类。
染色标本与周围环境在颜色上形成鲜明对比,可在普通光学显微镜下进行观察。
一般形态学检查均需染色。
(一)常用染料用于细菌染色的染料,大部分是人工合成的含苯环的有机化合物,在其苯环上带有色基和助色基。
色基赋予化合物颜色,助色基可增加色基与被染物的亲和力。
助色基有的为碱性(如一NH2),有的为酸性(如一0H),因此助色基的性质决定染料的酸碱性。
常用染料一般均难溶于水,易溶于有机溶剂,实验室配制时通常制成盐类水溶液。
1•碱性染料常用的碱性染料有碱性亚甲蓝、结晶紫及碱性复红等,这些染料电离后色基带正电荷,易与带负电荷的被染物结合。
多数细菌等电点(pl)在2〜5
之间,在中性、碱性以及弱酸性环境中都带负电荷,易被碱性染料着色,故细菌学检查中常用此类染料。
2.酸性染料常用的有伊红、酸性复红及刚果红等,这些染料电离后色基带负电荷,不易与细菌结合,不常用于细菌染色。
必要时可降低菌液的pH,使细菌带正电荷,方可着色。
3.中性染料是碱性染料与酸性染料的复合物,如瑞氏染液中的伊红亚甲蓝、吉姆萨染液中的伊红天青等,可用于较特殊染色技术。
(二)常用的细菌染色法根据所用染料是一种还是多种,细菌染色法分为单染色法和复染色法。
单染色法是用一种染料染色,细菌涂片染成同一颜色,可观察到形态、大小及排列等特点,但不能显示细菌染色特性。
复染色法是用两种或两种以上染料进行染色,将不同细菌或同一细菌的不同结构染成不同颜色。
复染色法不仅可以观察细菌的形态结构,还可根据染色反应鉴别细菌,故又称鉴别染色法。
临床常用的主要有革兰染色和抗酸染色。
革兰染色本法是细菌学检验中最经典、最常用的染色方法,沿用至今已有百余年历史,是一种包括初染、媒染、脱色和复染的鉴别染色技术。
通过此染色法,可将细菌分为革兰阳性(G +)菌和革兰阴性(G —)菌两大类,并可初步识别细菌,缩小范围,有助于进一步鉴定。
有时结台细菌特殊形态结构及排列方式,对病原茵可做出初步鉴定。
革兰染色的原理至今尚未完全清楚,有以下几种学说:① 细胞壁学说:G+菌细胞壁结构较致密,肽聚糖层厚,脂质含量少,乙醇不易透入,G—菌细胞壁结构较疏松,肽聚糖层少,脂质含量多,乙醇易渗入;②等电
点学说:G+菌的等电点低(pl 2〜3), G—菌等电点较高(pl4〜5),在相同pH 条件下,G+菌所带负电荷比G —菌多,与带正电荷的结晶紫染料结合较牢固且不易脱色;⑧化学学说:G+菌细胞内含有大量核糖核酸镁盐,可与结晶紫和碘牢固地结合成大分子复合物,不易被乙醇脱色,G —菌细胞内含极少量的核糖核酸镁盐,吸附染料量少,形成的复合物分子也较小,故易被乙醇脱色。
目前认为,细胞壁结构与化学组成上的差异是染色反应不同的丰要原因。
革兰染色可用于菌落涂片和标本涂片。
菌落涂片不仅可观察细菌的形态染色特点,更重要的是可以为后续选择合适的鉴定程序提供参考依据。
另外,由于G+
菌和G—菌细胞壁结构存在很大差异,对一些抗生素表现出不同的敏感性,且二者产生的致病物质及作用机制不同,因此革兰染色尚可为临床选择用药提供参考,帮助临床制定有针对性的治疗方案。
在临床上除少数标本(如粪便、血液)外,绝大多数标本在分离培养前都要进行革兰染色。
2.抗酸染色抗酸染色是细菌着色后不被盐酸乙醇脱色的染色方法,其中最具代表性的是萋-尼染色法。
经此法染色可将细菌分为抗酸性细菌和非抗酸性细菌两大类。
由于临床上绝大多数细菌为非抗酸性细菌,所以抗酸染色不作为临床上常规的细菌检查项目,只针对性用于结核病、麻风病等疾病的细菌检查。
疑似结核分枝杆菌感染的标本,经抗酸染色后在油镜下观察,根据所见结果报告找到(或未找到)抗酸菌”可作出初步鉴定。
另外,若改变脱色剂,诺卡菌属亦可呈弱抗酸性。
目前认为,抗酸染色性的差异可能与菌体中所含的分枝菌酸、脂类等成分有关。
3.荧光染色荧光染色是用能够发荧光的物质对标本进行染色,在荧光显微镜下观察发荧光的细菌。
此法具有敏感性强、效率高、结果易于观察等特点,故在临床细菌鉴定中有很大的应用价值。
目前主要用于结核分枝杆菌、麻风分枝杆菌、白喉棒状杆菌及痢疾志贺菌等病原菌的检测。
如痰标本涂片、固定后用荧光染料金胺0法(也称金胺0-罗丹明B 法)染色,在荧光显微镜下可观察到是金黄色荧光的菌体。
4.负染色是一种使标本的背景着色而细菌不着色的染色方法。
常用染液有墨汁,也可用酸性染料如刚果红、水溶性苯胺黑等,因酸性染料带负电荷,故菌体不着色,只能使背景着色。
实际工作中还可用墨汁负染色法配合单染色法(如吕氏亚甲蓝)检查细菌的荚膜,镜下可见黑色背景中蓝色菌体周围包绕一层无色透明的荚膜。
5 .特殊染色细菌的特殊结构如芽胞、鞭毛及荚膜等和其他结构如细胞壁、核质及胞质颗粒等,用普通染色法均小易着色,必须用相应的特殊染色才能染卜颜色。
常用的特殊染色法有细胞壁染色、荚膜染色、芽胞染色、鞭毛染色及异染颗粒染色等。
鞭毛染色后在显微镜下不仅可以观察到有无鞭毛,还可进一步观察到鞭毛
的位置以及数量,在细菌鉴定,尤其是非发酵菌的鉴定中具有重要价值。
荚膜染色用于有荚膜细菌的鉴定,如肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、炭疽芽胞杆菌及产气荚膜梭菌等的鉴定。
异染颗粒主要用于白喉棒状杆菌的鉴定,如疑为白喉棒状杆菌感染,进行涂片检查,除证实为革兰阳性典型棒状杆菌外,尚需用异染颗粒染色检查有无异染颗粒,若有方可初步报告检出形似白喉棒状杆菌”,为临床早期诊断提供依据。