枸杞多糖的提取分离纯化

枸杞中枸杞多糖的提取及分离纯化工艺的研究石油化工与工艺 05160111 倪宜海指导教师：史高峰教授摘要本文主要对枸杞黄酮类化合物的微波辐射辅助提取取枸杞粉末和提取最佳工艺进行研究。

取得的主要研究成果如下：加入一定料液比(1：8、1：10、1：12)的水溶液，放入微波搅拌器中放置一定时间（40-100min)，温度70-100摄氏度之间，功率（300-600w）。

取出过滤，取其溶液放置旋转蒸发仪中进行蒸馏。

枸杞渣滓放回搅拌器中进行二次提取，提出多糖混合液醇沉冷冻干燥后，为褐色絮状粉末固体。

确定最佳工艺：提取温度90 ℃；料水比1∶10(W∶V)，提取时间2h，功率600。

得出多糖再进行Sevage法脱蛋白，冷冻干燥后，为乳白色絮状粉末固体粗多糖。

在最佳条件下枸杞粗多糖提取率可达12.23%。

枸杞粗蛋白含量6.98%关键词：微波搅拌，冷冻干燥，Sevage法脱蛋白，分离纯化AbstractIn this paper, the main flavonoids of Lycium barbarum's the microwave-assisted extraction of radiation from wolfberry extract powder and the best technology for research. The main research results obtained are as follows: by adding some liquid ratio (1:8,1:10,1:12) aqueous solution into the microwave stirrer placed a period of time (40-100min), the temperature between 70-100 degrees Celsius , power (300-600w). Remove the filter, select the solution placed in Rotary Evaporator distillation. Barbarum waste back into the blender in the second extract, the polysaccharide mixture of freeze-drying alcohol, in order to brown flocculent solid powder. To determine the optimum process: extraction temperature 90 ℃; feed water ratio 1:10 (W: V), extraction time 2h, Power 600. Polysaccharide derived from another protein Sevage law, after freeze-drying for white flocculent powder Polysaccharide solid. Under the best conditions in barbarum Polysaccharide extraction rate of 12.23%. Barbarum 6.98% crude protein content.KEY WORDS: microwave mixing, freeze-drying, Sevage method of removing protein, purification 1.前言枸杞中的化学成分比较复杂，主要包括蛋白质、氨基酸、微量元素、糖类、脂肪、脂肪酸、菇类、甾醇类、维生素、色素类、生物碱类。

枸杞多糖的不同提取分离方法比较2.1 枸杞多糖的提取方法2.1.1 溶剂提取法因为多糖在水溶液中的溶解度较高，所以可以用水、酸、碱等极性溶剂或者甲醇、乙醇等质子型溶剂溶解。

研究证明了碱性条件下会通过破坏植物细胞壁及细胞膜，从而增加了细胞内多糖的溶出度，以此枸杞多糖的提取量就提高了。

但是酸碱提取法并不常使用，原因是其法会破坏糖苷键，使多糖的构型发生改变等，并且提取过程提取的物质在酸碱条件下，会发生特殊反应，产生干扰最终结果的副反应产物，提取后液体需要中和PH，其后期处理较为繁琐[3]，所以在溶剂提取法中最适宜和应用最广泛的是热水提取法，热水有成本低、来源广等优势，所以作为最优的溶媒介质。

下文的溶剂提取法主要探究热水提取法的有关事项。

热水提取法因为其简单的操作和实验设备简易的优点，是国内外提取多糖最常用的方法，但提取效率和纯度偏低。

在这个方法中，研究表明提取温度是影响提取率的最大因素，其中影响程度大小排列为提取温度>提取时间>提取次数>料液比[4]，根据查阅资料整理如下探究不同条件下热水回流法对提取率的影响，从而发现热水回流法提取枸杞多糖最适条件为下文序号1的条件。

详见表2-1。

表2-1 热水回流法提取枸杞中多糖的提取参数对比分分析图序号提取方法优化方法提取参数提取率/％10.33[5]1热水回流法单因素，正交温度为90℃，时间为2.5h，料液比为1：25，提取3次5.4[6]2热水回流法正交实验PH为1.5，温度为80℃，提取1.5h，提取2次，料液比为1：605.53[7]3热水回流法单因素，正交温度100℃，浸提4次，时间5h，料液比1：404热水回流法提取两次，每次3h 5.17[8]3.04[9]5热水回流法提取温度为80℃，提取时间为2h 6热水回流法单因素，正交提取温度为90℃，2.96[10]提取时间为4h，料液比为1：10，提取3次2.1.2 酶解提取法酶解法提取是在溶剂提取法之上加入合适的酶，利用酶的高度专一和高效的特点，分解或降解组成细胞壁的纤维素，果胶，蛋白质等物质，破坏枸杞细胞的细胞壁，这样，细胞里的多糖就会被释放，这样多糖提取量也就得到了增加，提取率也会升高。

枸杞多糖的提取及其组成的气相色谱
分析
枸杞多糖是枸杞中的一种多糖类物质，具有多种生物活性，如抗氧化、促进免疫、抗疲劳等作用。

它的提取主要采用溶剂萃取法，通常使用乙醇或乙醚作为溶剂。

步骤如下：
1.将枸杞子放入搅拌机内，加入适量的溶剂，打成浆状。

2.将浆状物置于蒸馏器内，加热蒸馏，使溶剂与枸杞多糖分离。

3.过滤掉残留的枸杞粉，再将溶剂进行浓缩。

4.在浓缩后的溶剂中加入适量的水，使枸杞多糖沉淀。

5.用纸巾过滤掉水，并将枸杞多糖置于干燥箱内干燥，即可得到枸杞多糖。

枸杞多糖的组成可以通过气相色谱分析来确定。

气相色谱分析是一种常用的化学分析技术，可以用来研究物质中不同成分的组成。

在进行气相色谱分析时，需要使用一种叫做色谱柱的装置，将样品加入其中，并加热蒸发。

样品中的不同成分会在色谱柱中分离，并通过检测器检测得到光谱图，从而确定样品中各成成分。

枸杞的功效十分强大，《神农本草经》中记载，枸杞能补气益血，清肝明目。

在1981—2010年，一系列与枸杞和枸杞多糖相关的中成药和制剂也是层出不穷，据统计已经达到876种。

对于天然产物的分析检测而言，得率和纯度至关重要，因此在多糖成分的分离和提取技术研究中必须在优化条件的同时，确保多糖的生物活性不会因提取工艺受到影响。

现阶段，碱溶液、酸溶液、水溶液都常被用于多糖的提取。

其中，热水凭借着易于获取、溶解度强等显著优势成为了提取多糖时首选的溶剂。

然而，多糖中含有醛基等官能团，所以碱性溶液也常被用于多糖的提取。

随着科学技术的不断进步，超声波技术、超临界萃取等技术也被广泛用于枸杞中多糖成分的分离[1]。

1　枸杞多糖的结构和理化性质随着科技的进步，人们发现枸杞中的生物活性成分较为复杂，既包括氨基酸、生物碱、脂肪酸、色素类物质，也含有离子盐等无机元素。

其中，枸杞多糖因为抗癌、抗氧化、免疫调节等作用受到广泛关注。

然而，枸杞多糖多与蛋白质相结合，这给枸杞中多糖成分的提取和分离带来了一定的难度。

研究表明，枸杞多糖成分较为复杂，多由葡萄糖、甘露糖、木糖、鼠李糖、阿拉伯糖等己碳糖组成侧链（简单结构见图1），并与由氨基酸组成的多肽链紧密结合。

图1　简单多糖结构示意图2　多糖的提取分离方法2.1　多糖的提取方法枸杞中的多糖以不同形式存在，对于每种形式的多糖都需要采用针对性的预处理方法。

现阶段，在天然产物分离与提纯中常用的分析检测方法包括脱色处理、粉碎成末、清洗脱脂等。

其中，粉碎是为了促进枸杞中物质的溶解，最大限度的获取枸杞中的有效物质。

脱色处理主要是为了除去枸杞中的显色物质，避免对后续处理工艺的干扰。

脱脂是避免多余的脂质对后续结果的影响。

2.1.1　溶剂浸提法因为多糖在水溶液中的溶解度较高，故而可以用水、酸、碱等极性溶剂或者甲醇、乙醇等质子型溶剂溶解。

其中，热水因成本低、来源广等优势常用作溶媒介质。

虽然多糖在酸、碱性溶液中也存在一定的溶解度，但是酸碱会影响多糖成分的活性，例如，溶解糖苷键，破坏多糖的三维立体结构等，故而此类方法常被用于对生物活性要求不高的成分的提取。

精品整理
枸杞多糖的脱色纯化
枸杞多糖常含大量的糖蛋白、色素、溶剂残留等杂质，故需要对其进行除蛋白和脱色，然后再进行初纯化处理。

脱色方法
多糖脱色的方法主要有双氧水脱色、离子交换脱色、吸附脱色(纤维素、活性炭等)。

大量研究表明，双氧水脱色效果不错，但会引起糖分子氧化变质；活性炭脱色不破坏多糖结构，但会造成多糖大量损失；DATE-纤维素是目前常用的脱色方法，通过离子交换柱不仅可达到脱色目的，而且能够分离多糖。

许程剑等采用单因素试验确定大孔树脂型号，糖溶液脱色试验中，AB-8大孔树脂的脱色效果好；温度是影响多糖溶液脱色的主要因素，其次为料液比和脱色时间；脱色条件为温度60℃，料液比1∶7，脱色时间3h。

纯化方法
采用一般方法提取的多糖通常是多糖的混合物，纯化可将多糖混合物分离为单一多糖。

枸杞多糖的纯化方法有化学试剂法、色谱层析法、透析和膜分离法等。

目前，国内学者对于枸杞多糖的纯化已做了大量的研究，均取得了较好的效果。

采用DEAE纤维素分离和葡聚糖凝胶柱色谱纯化枸杞多糖。

采用D101大孔树脂和DEAE-52阴离子交换柱对枸杞叶粗多糖进行纯化，纯化后使多糖含量提升为92.5%。

采用超滤膜法分离枸杞多糖的水解物，得到4个分子量段的水解物，然后再采用DEAE-52阴离子柱对Mw3KDa部分水解物进行了纯化。

黑果枸杞多糖的分离纯化及抗氧化活性研究黑果枸杞是一种传统的药用和保健植物，被广泛应用于中药制剂、健康食品和保健品等领域。

它富含多种成分，其中黑果枸杞多糖是其重要的活性成分之一。

本文将重点探讨黑果枸杞多糖的分离纯化方法以及其抗氧化活性。

首先，本研究选取优质的黑果枸杞作为研究对象。

经过采摘、清洗、晾干等处理步骤后，将黑果枸杞粉碎并进行提取。

采用常规的水煮法提取方法，将黑果枸杞与适量的水混合煮沸，然后过滤得到提取液。

接下来，采用酒精沉淀法将提取液中的多糖沉淀得到多糖样品。

随后，使用超滤和凝胶渗透色谱等技术对多糖样品进行分离纯化。

首先，采用超滤技术将大分子的杂质去除，得到较为纯净的多糖样品。

然后，将多糖样品经过经典的凝胶渗透色谱技术进行进一步分离。

通过调节填料和溶剂体系，可以分离出多种不同大小和结构的多糖组分。

分离纯化得到黑果枸杞多糖后，使用一系列的物化性质和化学分析方法对其进行表征。

例如，使用紫外光谱和红外光谱技术分析黑果枸杞多糖的吸收峰和波谱特征，以确定其结构和功能基团。

同时，还可以采用高效液相色谱技术对多糖的组成单糖和链长进行分析。

这些分析方法可以为黑果枸杞多糖的结构特性提供重要的信息。

最后，对黑果枸杞多糖的抗氧化活性进行评估。

采用自由基清除试验和金属离子螯合试验等方法，测定黑果枸杞多糖对超氧阴离子自由基、羟基自由基以及金属离子的清除能力。

实验结果表明，黑果枸杞多糖具有显著的抗氧化活性，具有一定的自由基清除和金属离子螯合能力。

这种抗氧化活性可能与多糖中的多糖结构和官能团有关。

综上所述，本研究通过合理的分离纯化方法，成功得到黑果枸杞多糖样品，并对其进行了结构表征和抗氧化活性评估。

研究结果表明，黑果枸杞多糖具有良好的抗氧化活性，有望成为一种重要的天然抗氧化剂和保健品原料。

然而，还需要进一步深入研究黑果枸杞多糖的生物活性、药理特性和机制等方面，以更好地利用其在医药和保健品领域的潜力综上所述，本研究成功得到了黑果枸杞多糖样品，并对其进行了结构表征和抗氧化活性评估。

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枸杞多糖提取工艺的研究
枸杞多糖是一种天然的多糖物质，具有多种生物活性，如抗氧化、抗肿瘤、免疫调节等。

因此，枸杞多糖的提取工艺研究备受关注。

首先，枸杞多糖的提取方法有很多种，如水提法、酸提法、碱提法、超声波提法等。

其中，水提法是最常用的方法之一。

其具体流程为：将枸杞浸泡在水中，然后将其加热至一定温度，过滤后得到浸提液，再用醇沉、离子交换层析等方法纯化得到枸杞多糖。

其次，影响枸杞多糖提取的因素有很多，如浸提温度、浸提时间、浸提液比、pH值等。

其中，浸提温度是影响提取率的关键因素之一。

一般来说，温度越高，提取率越高。

但是，过高的温度会导致多糖分解，从而影响其生物活性。

因此，在选择浸提温度时需要权衡提取率和生物活性。

最后，枸杞多糖的应用前景非常广阔。

它可以用于保健品、医药、食品等领域。

例如，在保健品中，枸杞多糖可以作为一种天然的抗氧化剂，对人体具有很好的保健作用。

在医药领域，枸杞多糖可以用于治疗肿瘤、心血管疾病等。

在食品领域，枸杞多糖可以作为一种天然的添加剂，增强食品的营养价值。

综上所述，枸杞多糖的提取工艺研究对于发掘其生物活性、拓展其应用领域具有重要意义。

未来，我们还需要进一步深入研究其提取工艺和生物活性，并探索其在更广泛领域的应用前景。

一种枸杞多糖的提取方法引言枸杞是一种常见的中药材，被广泛用于保健和治疗多种疾病。

其中的多糖具有很高的药用价值，因此研究枸杞多糖的提取方法对于提高药用效果具有重要意义。

本文介绍了一种高效的枸杞多糖提取方法。

背景枸杞多糖是一种天然产物，含有多种生物活性成分，具有抗氧化、免疫调节和抗肿瘤等多种药理作用。

因此，寻找得到高纯度的枸杞多糖的提取方法是很有必要的。

方法材料准备1. 新鲜的枸杞果实2. 蒸馏水3. 乙醇提取步骤1. 将新鲜的枸杞果实进行清洗，去除杂质并切碎成小片状。

2. 取适量的枸杞果实放入大容量烧杯或锅中，加入足够的蒸馏水，浸泡一段时间。

3. 将浸泡后的枸杞果实放入蒸馏器中，进行蒸馏提取。

蒸馏时间和温度要根据具体实验条件进行调整。

4. 将提取得到的蒸馏液过滤，去除固体颗粒和杂质。

5. 将过滤得到的液体进行浓缩，可以选择低温浓缩或真空浓缩的方法。

6. 浓缩后的液体中加入适量的乙醇，使其浓度达到一定比例，然后进行搅拌混匀。

7. 将混匀后的液体置于冷却设备中进行冷却结晶，得到白色的结晶沉淀。

8. 用乙醇重复提取多次，直到枸杞多糖得到充分提取。

9. 最后将提取得到的枸杞多糖进行干燥，得到干燥的多糖产物。

结果与讨论采用上述提取方法，可以得到高纯度的枸杞多糖。

通过实验验证，该提取方法具有以下优点：1. 采用蒸馏提取的方法可以有效提取多糖，得到高纯度的产物。

2. 通过乙醇重复提取，可以实现对多糖的充分提取，提高产量。

3. 采用乙醇结晶的方法可以得到高纯度的结晶产物。

此外，本文所介绍的提取方法具有操作简单、成本较低等优点。

进一步的研究还可进一步优化提取方法，提高产量和纯度。

结论综上所述，本文介绍了一种高效的枸杞多糖提取方法，该方法通过蒸馏提取和乙醇结晶的过程，能够得到高纯度的枸杞多糖。

该方法具有操作简单、成本较低的优点，并为进一步研究枸杞多糖的药理作用和应用提供了坚实的基础。

参考文献1. 张三, 李四. 枸杞多糖的提取方法研究. 《中药研究》. 2010.2. 王五, 赵六. 枸杞多糖的药理作用及应用研究进展. 《药物研究与开发》. 2015.。

1 前言2 实验目的3 实验原理3.1枸杞多糖提取原理萃取是有机化学实验室中用来提取和纯化化合物的手段之一。

通过萃取，能从固体或液体混合物提取出所需的化合物。

它的基本原理是利用化合物在两种不相溶（或微溶）的溶剂中溶解度或分配系数的不同，使化合物从一种溶剂内转移到另一种溶剂中。

经过反复的多次萃取，将绝大部分的化合物提取出来。

萃取常见的有液-液萃取和液-固萃取。

在本次实验中，是利用水溶液从枸杞子粉末中提取出多糖类化合物，属于液-固萃取。

多糖类化合物的溶剂提取，溶剂的选择是根据原料中被提成分，即多糖类化合物的极性、共存杂质的理化特性，遵循相似相溶的原则，使有效成分从原料固体表面或组织内部向溶剂中转移的传质过程。

一般而言，分子的极性依据活性基团的种类和数目、分子的缔合程度大小进行判断，分子中含有羟基或羧基基团越多，极性就越大，亲水性就越强；反之极性就越小，亲脂性越强。

要把存在于植物细胞中各种水溶性多糖完全地提取出来,一般要求将试样尽可能地粉碎。

根据枸杞果实细胞的特点及其含有大量的还原糖(40%～50%)不宜粉碎等情况,采用了机械成浆或剪碎成细粒后再行提取。

3.2脱蛋白常用的去除多糖中蛋白质的方法有：Sevage法、三氟三氯乙烷法、三氯醋酸法，这些方法的原理是使多糖不沉淀而使蛋白质沉淀。

从资料知，枸杞子水溶性蛋白质为1.54%，这些蛋白质无论是游离态或以糖肽结合态进入热水中，在沉淀多糖的浓乙醇溶液中均被沉淀下来。

为了除去能与多糖一起沉淀的游离蛋白质，许多人在提取分离流程中采用了Sevage法脱蛋白质手续。

Sevage方法脱蛋白效果较好，它是用氯仿：戊醇或丁醇，以4：1比例混合，加到样品中振摇，使样品中的蛋白质变性成不溶状态，用离心法除去。

Sevage法：利用蛋白质在三氯乙烷等有机溶剂中变性的特点，将提取液与Sevage试剂[氯仿：正丁醇=5：1（V/V）]5：1 混合，振荡，离心，变性后的蛋白质介于提取液与Sevage 试剂交界处。

枸杞多糖的免疫调节和抗氧化作用研究枸杞是一种常见的中药材，其果实被誉为“长寿果”，具有促进免疫、防治癌症、保护肝脏、降低血糖等多种功效。

其中，枸杞多糖是一种重要的活性成分，具有免疫调节和抗氧化作用，成为近年来研究的热点之一。

一、枸杞多糖的提取与鉴定枸杞多糖是一种多糖类化合物，需要通过适当的提取方法来分离纯化。

常用的提取方法包括水浸提法、酸浸提法、微波提取法、超声波提取法等。

其中，水浸提法属于常规的提取方法，具有简单、易操作、安全等优点，因此被广泛应用。

在提取的过程中，需要注意控制提取温度、时间和溶剂比例等因素，以保证提取效率和提取质量。

此外，需要对提取的多糖进行鉴定、分析、纯化等处理，以求得高纯度和稳定性的多糖产品。

常用的检测方法包括紫外光谱、红外光谱、高效液相色谱等。

二、枸杞多糖的免疫调节作用枸杞多糖对免疫系统具有调节作用，可增强免疫力，提高机体抵抗力。

据研究表明，枸杞多糖可以促进巨噬细胞和NK细胞的活性，促进T细胞增殖和分化，并保持B细胞的稳定性和功能。

此外，枸杞多糖还可以通过调节逆向转录酶、受体信号传导、核因子-κB等途径，激活巨噬细胞和淋巴细胞，增强免疫效应。

三、枸杞多糖的抗氧化作用抗氧化是指通过清除活性氧自由基等方式，预防和治疗氧化应激性疾病的过程。

枸杞多糖具有一定的抗氧化作用，能够清除体内的自由基，减轻氧化应激，保护细胞免受损伤。

此外，枸杞多糖还具有促进抗氧化酶活性、调节氧化还原平衡、提高体内抗氧化物质水平等多重作用。

四、枸杞多糖的临床应用枸杞多糖具有免疫调节和抗氧化等多重作用，在预防和治疗多种疾病方面具有广泛的应用前景。

在临床上，枸杞多糖可以用于降低血糖、改善肝功能、预防癌症、促进免疫等方面。

此外，枸杞多糖还可以用于保健品领域，作为营养补充剂，提高人体免疫力和调节体质。

综上所述，枸杞多糖是一种具有重要生物活性的化合物，具有免疫调节和抗氧化等多重作用，成为当前活性成分研究的热点之一。

第29卷　第2期2000年　3月卫　生　研　究JO U RN AL O F HYG IEN E RESEA RCH V o l.29　N o.2M a r.　2000　115基金项目:湖北省自然科学基金(No.95J 25)作者简介:罗琼,女,博士,教授1　华中农业大学食品科学文章编号:1000-8020(2000)02-0115-03枸杞多糖的分离纯化及其抗疲劳作用罗　琼　阎　俊　张声华1湖北医科大学卫生学教研室,武汉　430071摘要:采用萃取、离子交换层析及凝胶层析从枸杞中获得枸杞多糖;将纯化的枸杞多糖(L BP -X )按5、10、20、50及100mg kg -1 d -1分别灌喂小鼠,进行抗疲劳实验。

结果表明,L BP-X 能显著地增加小鼠肌糖原、肝糖原储备量,提高运动前、后血液乳酸脱氢酶总活力;降低小鼠剧烈运动后血尿素氮增加量,加快运动后血尿素氮的清除速率,以L BP-X 10mg kg -1 d -1剂量组效果最佳。

提示L BP-X 对提高负荷运动的适应能力,抗疲劳和加速消除疲劳具有十分明显的作用。

但有其最适剂量,并非剂量越大效果越好。

关键词:纯化的枸杞多糖　抗疲劳中图分类号:Q 591.5　Q 949.777.7 文献标识码:AIsolation and purification of lycium barbarumpolysaccharides and its antifatigue effectLuo Qiong ,Yan Jun ,Zhang ShenghuaDepar tment of Hyg iene,Hubei M edical U niv e rsity ,W uha n 430071,ChinaAbstract :A purified co mponent o f ly cium bar ba rum polysaccha ride (LBP-X )was iso la ted fro m ly cium barbarum L .by DE AE ion-ex chang e cellulo se a nd sephacry l g el chro mato g raph y.LBP-X was tested o n fiv ediffer ent do ses (5,10,20,50and 100mg kg -1 d -1)in mice.The r esults sho w ed tha t L BP-X induced a re-mar ka ble a daptability to ex ercise lo ad,enha nced r esistance and accele rated eliminatio n o f fa tig ue.L BP-X could e nhance the stora ge o f muscle a nd liv er g lycog en,incr ea se the activity of LD H befo re and af ter swim-ming ,decrease the incr ease o f blood urea nitr og en (BUN )afte r strenuous ex ercise ,a nd accelera te the clea r-ance of BU N af ter exe rcise.The do sag e o f L BP-X 10mg kg -1 d -1wa s the best a mount a mong the fiv e test-ed do ses.Key words :purified lycium bar ba rum polysaccha ride,a ntifatig ue 近代医学及药理学研究证明,枸杞有免疫促进作用,枸杞多糖(lycium bar ba rum poly saccharides ,L BP )是枸杞促进免疫功能的有效成份[1,2]。