菌种保存的实验报告

一、实验目的1. 掌握发酵菌种的制备方法。

2. 了解发酵菌种在食品、医药、化工等领域的应用。

3. 熟悉发酵菌种的筛选、鉴定和保藏方法。

二、实验原理发酵菌种是指用于发酵过程的微生物，包括细菌、真菌、放线菌等。

发酵菌种在适宜的条件下，能够将有机物质转化为人类所需的代谢产物，如酸、酒精、酶、抗生素等。

本实验主要采用固体培养基和液体培养基，通过摇瓶发酵和发酵罐发酵两种方式，对发酵菌种进行制备和筛选。

三、实验材料与仪器1. 实验材料（1）菌种：酵母菌、黑曲霉、乳酸菌等。

（2）培养基：葡萄糖、酵母提取物、蛋白胨、琼脂等。

（3）其他：pH试纸、无菌水、酒精、盐酸、蒸馏水等。

2. 实验仪器（1）摇床：用于摇瓶发酵。

（2）发酵罐：用于发酵罐发酵。

（3）培养箱：用于菌种培养。

（4）显微镜：用于菌种观察。

（5）天平：用于称量。

四、实验方法1. 菌种制备（1）摇瓶发酵：将菌种接种于固体培养基，置于培养箱中培养，待菌落长成后，用无菌水洗涤菌落，收集菌悬液，备用。

（2）发酵罐发酵：将菌种接种于液体培养基，置于发酵罐中，在适宜的温度、pH值和溶氧条件下进行发酵。

2. 菌种筛选（1）平板划线法：将菌悬液涂布于固体培养基表面，待菌落长成后，挑选单菌落进行培养。

（2）稀释涂布平板法：将菌悬液进行系列稀释，涂布于固体培养基表面，待菌落长成后，挑选单菌落进行培养。

3. 菌种鉴定（1）形态特征观察：通过显微镜观察菌落形态、菌丝形态、孢子形态等。

（2）生理生化试验：通过糖发酵试验、产酸试验、产气试验等，鉴定菌种的功能特性。

4. 菌种保藏（1）斜面保藏：将菌种接种于斜面培养基，置于4℃冰箱中保藏。

（2）甘油保藏：将菌种接种于液体培养基，加入适量甘油，置于-20℃冰箱中保藏。

五、实验结果与分析1. 菌种制备通过摇瓶发酵和发酵罐发酵，成功制备了酵母菌、黑曲霉、乳酸菌等发酵菌种。

2. 菌种筛选采用平板划线法和稀释涂布平板法，筛选出了一批具有较高发酵性能的菌种。

菌种的宝藏实验报告1. 引言在微生物领域中，菌种是研究的基本单元。

各种菌种在自然界中广泛存在，具有丰富的生物多样性。

因此，发现和分离新的菌种对于拓展我们对微生物世界的认识以及应用领域的开发具有重要意义。

本实验旨在从土壤样品中分离出新的菌株，并对其进行鉴定和初步功能分析，以寻找潜在的菌种宝藏。

2. 实验方法2.1 样品采集和处理在一个植物生长茂盛的森林中，随机采集了5个土壤样品。

每个样品以深度为15cm的方式采集，避免表层杂质的污染。

将采集的土壤样品置于无菌试管中，并在实验室保存。

2.2 菌株分离将采集的土壤样品加入无菌生理盐水，并进行均匀搅拌。

在随后对悬浮液进行连续稀释。

将适量的稀释液平铺在含有琼脂培养基的平皿上，并在37摄氏度恒温箱中培养48小时。

2.3 菌株鉴定从培养基上挑取单一菌落进行分离培养，待菌落生长到一定程度后，进行菌株鉴定。

首先，使用显微镜观察菌落形态，并记录颜色、形状等特征。

然后，进行生理和生化特性测试，包括氧气需求性、产生酶的反应、碳源利用能力等。

2.4 菌株初步功能分析对鉴定出的菌株进行代谢产物分析，包括对抗菌活性、生物合成物质、酶活性等的测定。

在对抗菌活性测试中，使用常见的对照菌株进行对比，通过测量抑菌圈直径来评估菌株的抗菌活性。

3. 实验结果通过菌株分离的方法，我们获得了8个单一菌株。

这些菌株经过鉴定后，鉴定出其中5个菌株为新菌种。

根据菌落形态和生理生化特性的测试，我们初步确定了这些新菌株的分类和功能。

其中，新菌株A具有棕色的菌落形态，为耐氧菌株，具有较强的蛋白水解酶活性，同时显示出显著的抗菌活性。

初步分析表明，菌株A可能具有重要的应用潜力。

新菌株B和C具有黄色的菌落形态，分别为需氧菌和微需氧菌。

这两个菌株在碳源利用能力上表现出一定的差异，但均具有产生抗菌物质的活性。

这表明这两个菌株可能对抗一些病原菌具有一定的潜力。

新菌株D和E则具有白色菌落形态，分别为厌氧菌和需要淹水环境的菌株。

菌种保藏实验报告菌种保藏实验报告一、引言菌种保藏是一项重要的实验技术，它对于维护菌种的纯度和保存其遗传特性具有重要意义。

本实验旨在探究不同的菌种保藏方法对菌株存活率和遗传特性的影响，为菌种保藏提供科学依据。

二、材料与方法1. 实验菌株：本实验选取了两种常见的细菌菌株，分别是大肠杆菌和枯草杆菌。

2. 菌种保藏方法：本实验采用了冷冻保存法和液氮保存法两种常见的菌种保藏方法。

3. 实验步骤：a) 冷冻保存法：首先，将培养好的菌株用无菌的冷冻保藏液悬浮均匀，然后将悬浮液分装于无菌冷冻管中，标明菌株名称和保存日期，最后将冷冻管置于-80℃的冷冻库中保存。

b) 液氮保存法：将培养好的菌株用无菌的冷冻保藏液悬浮均匀，然后将悬浮液分装于无菌冷冻管中，标明菌株名称和保存日期，接着将冷冻管迅速浸入液氮中保存。

三、结果与讨论1. 存活率比较：经过一段时间的保存后，我们对两种菌株进行了存活率比较。

结果显示，冷冻保存法的存活率较高，大肠杆菌存活率为90%，枯草杆菌存活率为85%；而液氮保存法的存活率稍低，大肠杆菌存活率为85%，枯草杆菌存活率为80%。

这说明冷冻保存法相对于液氮保存法更适合于菌种的长期保存。

2. 遗传特性分析：我们进一步对两种保存方法下的菌种进行了遗传特性分析。

通过PCR扩增和电泳分析，我们发现，冷冻保存法下的菌株与原始菌株在遗传特性上基本保持一致，而液氮保存法下的菌株在一些遗传特性上发生了变异。

这表明冷冻保存法对于菌种的遗传稳定性更有利。

四、结论根据本实验的结果，我们可以得出以下结论：1. 冷冻保存法相对于液氮保存法更适合于菌种的长期保存，具有较高的存活率和较好的遗传稳定性。

2. 菌种保藏的方法选择应根据具体的实验需求和菌株特性进行综合考虑。

五、进一步研究尽管本实验对菌种保藏方法进行了初步探究，但仍有许多问题需要进一步研究。

例如，不同保存液对菌株存活率和遗传特性的影响、菌株保存时间的长短对菌株的影响等等。

一、实验目的本实验旨在了解和掌握细菌保存的方法，通过对不同保存方法的实验操作，观察并分析不同保存方法对细菌生长和存活的影响，为实际工作中细菌的保存提供理论依据。

二、实验原理细菌保存是指将细菌置于特定的条件下，使其生长和代谢受到抑制，从而保持其原有的生物特性。

常用的细菌保存方法有斜面低温保存法、液体石蜡保存法、冻干保存法等。

三、实验材料与仪器1. 材料：大肠杆菌、牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、牛肉膏蛋白胨液体培养基、无菌水、无菌棉塞、无菌试管、酒精灯、接种环、恒温培养箱、冰箱等。

2. 仪器：显微镜、酒精灯、无菌操作台、接种环、无菌试管、恒温培养箱、冰箱等。

四、实验方法1. 斜面低温保存法（1）将牛肉膏蛋白胨琼脂培养基制成斜面，待凝固后，用接种环挑取适量大肠杆菌接种于斜面。

（2）将接种好的斜面放入无菌操作台中，用无菌棉塞封口。

（3）将斜面放入冰箱中保存，定期观察细菌生长情况。

2. 液体石蜡保存法（1）将牛肉膏蛋白胨液体培养基制成无菌液体石蜡。

（2）将适量大肠杆菌接种于无菌液体石蜡中。

（3）将接种好的液体石蜡放入无菌操作台中，用无菌棉塞封口。

（4）将液体石蜡放入冰箱中保存，定期观察细菌生长情况。

3. 冻干保存法（1）将牛肉膏蛋白胨液体培养基制成无菌冻干剂。

（2）将适量大肠杆菌接种于无菌冻干剂中。

（3）将接种好的冻干剂放入无菌操作台中，用无菌棉塞封口。

（4）将冻干剂放入冰箱中保存，定期观察细菌生长情况。

五、实验结果与分析1. 斜面低温保存法经过一段时间保存后，斜面低温保存法中的细菌生长良好，菌落饱满，颜色鲜艳，说明该方法能够较好地保存细菌。

2. 液体石蜡保存法经过一段时间保存后，液体石蜡保存法中的细菌生长情况良好，菌落生长速度略慢于斜面低温保存法，说明该方法也能较好地保存细菌。

3. 冻干保存法经过一段时间保存后，冻干保存法中的细菌生长情况较好，菌落生长速度较慢，但仍然能够生长，说明该方法能够较长时间保存细菌。

一、实训目的通过本次实训，了解和掌握菌种保存的基本原理和方法，提高实验室菌种保存技能，为后续的微生物学研究和工作打下基础。

二、实训时间2021年X月X日三、实训地点微生物实验室四、实训材料1. 菌种：大肠杆菌（Escherichia coli）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）2. 培养基：营养琼脂、沙土管、液体石蜡、无菌甘油、冷冻干燥机、低温冰箱、高压蒸汽灭菌器、无菌操作台等五、实训内容1. 斜面低温保藏法（1）将菌种接种于营养琼脂斜面培养基上，置于37℃恒温培养箱中培养过夜。

（2）待菌落生长充分后，用无菌接种环挑取单菌落，接种于新的营养琼脂斜面培养基上。

（3）将斜面培养基放入2-8℃低温冰箱中保存。

2. 液体石蜡覆盖保藏法（1）将菌种接种于营养琼脂斜面培养基上，置于37℃恒温培养箱中培养过夜。

（2）待菌落生长充分后，用无菌接种环挑取单菌落，接种于新的营养琼脂斜面培养基上。

（3）将灭菌后的液体石蜡倒入无菌试管中，使液面高出斜面顶端1cm。

（4）将斜面培养基插入液体石蜡中，确保菌落被液体石蜡完全覆盖。

（5）将试管直立，置于4℃低温冰箱中保存。

3. 沙土管保藏法（1）将培养好的菌种接种于无菌沙土管中，加入适量的无菌沙土，搅拌均匀。

（2）将沙土管置于干燥器中，抽真空至干燥。

（3）密封沙土管，置于4℃低温冰箱中保存。

4. 甘油管保藏法（1）将菌种接种于营养琼脂斜面培养基上，置于37℃恒温培养箱中培养过夜。

（2）待菌落生长充分后，用无菌接种环挑取单菌落，接种于新的营养琼脂斜面培养基上。

（3）将无菌甘油加入试管中，使其浓度为30%。

（4）将菌种与甘油充分混合均匀。

（5）将混合液置于-20℃低温冰箱中保存。

5. 冷冻干燥保藏法（1）将菌种接种于营养琼脂斜面培养基上，置于37℃恒温培养箱中培养过夜。

（2）待菌落生长充分后，用无菌接种环挑取单菌落，接种于新的营养琼脂斜面培养基上。

实验十三菌种保藏一、目的要求学习与比较几种菌种保藏的方法。

二、基本原理微生物具有容易变异的特性，因此，在保藏过程中，必须使微生物的代谢处于最不活跃或相对静止的状态，才能在一定的时间内使其不发生变异而又保持生活能力。

低温、干燥和隔绝空气是使微生物代谢能力降低的重要因素，所以，菌种保藏方法虽多，但都是根据这三个因素而设计的。

保藏方法大致可分为以下几种：1．传代培养保藏法又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等（后者作保藏厌氧细菌用），培养后于4—6℃冰箱内保存。

2．液体石蜡覆盖保藏法是传代培养的变相方法，能够适当延长保藏时间，它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡，一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡，另一方面可阻止氧气进入，以减弱代谢作用。

3．载体保藏法是将微生物吸附在适当的载体，如土壤、沙子、硅胶、滤纸上，而后进行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。

4．寄主保藏法用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物，如病毒、立克次氏体、螺旋体等，它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代，此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。

病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。

5．冷冻保藏法可分低温冰箱（-20—-30℃，-50—-80℃）、干冰酒精快速冻结（约-70℃）和液氮（-196℃）等保藏法。

6．冷冻干燥保藏法先使微生物在极低温度（-70℃左右）下快速冷冻，然后在减压下利用升华现象除去水分（真空干燥）。

有些方法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备细胞悬液，以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害。

保护性溶质可通过氢和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。

保护剂有牛乳、血清、糖类、甘油、二甲亚砜等。

三、器材细菌、酵母菌，放线菌和霉菌；肉膏蛋白胨斜面培养基，灭菌脱脂牛乳，灭菌水，化学纯的液体石蜡，甘油，五氧化二磷，河沙，瘦黄土或红土，冰块、食盐，干冰，95％酒精，10％盐酸，无水氯化钙；灭菌吸管，灭菌滴管，灭菌培养皿，管形安瓿管，泪滴形安瓿管（长颈球形底），40目与 100目筛子，油纸，滤纸条（0．5×1．2cm），干燥器，真空泵，真空压力表，喷灯，L形五通管，冰箱，低温冰箱（-30℃），液氮冷冻保藏器。

实验七菌种保存一、实验目的为保持细菌原有的性状和活力，通过人为方法提供一定的条件，使细菌在低温、干燥、缺氧的环境中，生长受到抑制、新陈代谢处于最低范围内，生命活动基本处于休眠状态，从而达到保存菌种的目的。

保存菌种的方法有很多，如斜面保存法、液体石蜡法、干燥保存法、液氮法、冷冻真空干燥法等。

这里仅介绍斜面保存法。

二、讲解要点1、斜面保存法，亦称传代培养保藏法，是指将菌种接种于适宜的培养基中，最适条件下培养，待生长充分后，于4～6℃进行保存并间隔一定时间进行移植培养的菌种保藏方法。

2、实验内容：无菌斜面制作、斜面接种；培养方法。

3、操作要点1) 无菌操作要点2) 斜面制作的基本操作手法3) 火焰灼烧范围、避免烫伤菌体4) 贴标、分区5）接种要点6) 培养要点三、实验材料仪器1.细菌培养平板2.斜面培养基3.酒精灯、移菌环、无菌操作台、高压灭菌锅等。

四、实验步骤1 培养基制备1.1 器皿准备培养基制备过程中所用的一些玻璃器皿，如三角瓶、试管、培养皿、烧杯、吸管等，经洗涤、干燥、包装、灭菌后使用。

1.2 溶解培养基配料先在烧杯中放适量水，按培养基配方称取各项材料，依次将缓冲化合物、主要元素、微量元素、维生素等材料加入水中溶解，最后加足水量，搅拌均匀。

1.3 调pH值配料溶解后将培养基冷却至室温，根据要求加稀酸（0.1mol/L盐酸）或稀碱(10%氢氧化钠)调pH值。

加酸或碱液时要缓慢、少量、多次搅拌，防止局部过碱或过酸而导致测量不准确和营养成分被破坏。

1.4 加凝固剂配制固体培养基时需加凝固剂，如琼脂、明胶等。

将凝固剂加入液体培养基中，加热并不断搅拌至融解，再补足所蒸发水分。

1.5 过滤分装在二层纱布中间夹入脱脂棉，将配好的培养基趁热过滤并分装。

斜面培养基分装量约为试管高度的四分之一(4～5mL)，穿刺培养基分装量以试管高度的二分之一为宜。

分装过程中勿使培养基沾污管口，以免弄湿棉塞造成污染。

1.6 包扎标记将试管加棉塞，外面包扎一层牛皮纸或铝箔并注明培养基名称及配制日期。