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腺病毒知识点总结1. 腺病毒的分类腺病毒目前已知包括了六个属，分别为腺病毒属（Mastadenovirus）、阿卡洛病毒属（Atadenovirus）、索哈病毒属（Siadenovirus）等。
其中腺病毒属包括高度致病性的人类腺病毒、犬腺病毒等。
2. 腺病毒的结构腺病毒的外壳由蛋白质构成，内含双链DNA。
典型的腺病毒粒子呈多面体或类似无规则聚合的形状，直径约70-90纳米，表面均匀分布有纤维状的突起。
腺病毒粒子内含有DNA、蛋白质和酶。
3. 腺病毒的感染机制腺病毒通过呼吸道、消化道、眼部粘膜等途径进行感染。
一旦腺病毒进入人体，通过与细胞表面相关受体结合，进入细胞内。
腺病毒感染后，宿主细胞会被利用来合成病毒的DNA 和蛋白质，在宿主细胞内进行繁殖和增殖，破坏并利用宿主细胞的资源。
4. 腺病毒的致病性腺病毒引起的疾病种类繁多，常见的包括呼吸道感染、结膜炎、胃肠道感染、脑膜炎等。
不同种类的腺病毒可引起不同的疾病。
例如，腺病毒D型和E型主要引起呼吸道感染，腺病毒F型主要引起眼部感染。
5. 腺病毒的预防措施目前，预防腺病毒感染的主要措施包括加强个人卫生、保持良好的生活习惯、接种疫苗等。
通过保持清洁卫生，避免接触患者体液，保持良好的生活习惯，如良好的饮食习惯、充足的睡眠等，有助于预防腺病毒感染。
此外，疫苗接种也是预防腺病毒感染的有效手段。
目前，已有一些疫苗用于预防特定种类的腺病毒感染。
总之，腺病毒是一类广泛存在的病原体，对人类和动植物造成了严重威胁。
了解腺病毒的分类、结构、感染机制、致病性和预防措施等知识，有助于人们更好地认识腺病毒，预防和控制腺病毒感染，保障公共健康。
希望通过本文的介绍，读者能够更全面地了解腺病毒及其相关知识。
腺病毒的分子进化和流行病学腺病毒是一类广泛存在于人类、动物和植物中的病毒，由于其感染力强、传播性广、病程短暂等特点，腺病毒感染在医学和公共卫生领域一直备受关注。
本文将重点探讨腺病毒的分子进化和流行病学，以期对该病毒的防治和治疗提供一定的参考。
一、腺病毒的分子进化腺病毒是一类非包膜RNA病毒，其基因组由单股线性的RNA组成。
腺病毒包含7个不同的基因型，分别为A、B、C、D、E、F、G型。
其中，A、B、C、D型是人类最主要的腺病毒感染病原体，而E、F、G型则主要感染动物。
腺病毒的分子进化主要通过基因重组和点突变进行。
在基因重组方面，腺病毒的基因组非常灵活，可以轻松地进行基因重组以适应环境的改变。
例如，在病毒的品系亚型之间，可能会发生基因重排的现象，使得该病毒产生了新的基因型。
同时，腺病毒还可以通过点突变来适应环境的压力。
研究表明，腺病毒的基因型随着时间的推移，会发生一定的点突变，使得其在基因组上发生变化，对宿主的感染能力也发生变化。
二、腺病毒的流行病学腺病毒的流行病学研究要从其宿主和传播方式入手。
腺病毒在人类的感染很普遍，感染的方式有很多，可以通过空气、水、食物等多种方式传播。
腺病毒的感染主要分为肠道感染和呼吸道感染两种类型。
其中，肠道感染主要通过食物、饮水等途径传播，呼吸道感染则主要通过空气传播。
此外，腺病毒还可以在动物中传播，不同基因组的腺病毒可以感染不同类别、不同物种的动物，包括人类、猕猴、类人猿、啮齿类动物、鸟类等。
人类除了是腺病毒的主要宿主之一，还是许多病毒接种计划的接种对象。
总之，腺病毒的流行病学研究是极其重要的，不仅可以对腺病毒的防治起到积极的作用，还能通过对研究不同基因型、传播途径、病毒定量等方面的数据进行综合分析，探究腺病毒分子进化的规律及趋势。
三、腺病毒的防治及治疗腺病毒的防治和治疗是一个复杂的过程，需要通过多种方法来进行。
首先，要加强环境卫生和个人卫生，防止腺病毒的传播。
其次，针对不同基因型的腺病毒，可以开发不同类型的疫苗进行防治。
腺病毒总结引言腺病毒是一类广泛存在于人类和其他动物体内的病毒，可以引起多种疾病。
腺病毒具有多样的血清学类型，根据不同的类型和基因组组合，腺病毒可以引发不同的临床表现。
本文将对腺病毒进行总结，包括病毒的结构、感染机制、临床表现、预防措施等内容。
腺病毒的结构腺病毒是非包膜的DNA病毒，属于腺病毒科。
腺病毒颗粒呈正二十面体对称性，直径为70-90纳米。
腺病毒的基因组是一条双链DNA，长度约为26-45千碱基对。
腺病毒的基因组含有多个基因，编码多种蛋白质，其中包括纤维蛋白、排毒素等。
腺病毒的感染机制腺病毒主要通过经口途径传播，从而引起感染。
一旦进入宿主体内，腺病毒通过定着于宿主细胞上的腺病毒受体结合，从而进入宿主细胞内。
腺病毒的基因组在宿主细胞内被释放，并开始复制。
腺病毒具有不同的基因型和亚型，不同的类型和亚型具有不同的感染能力和临床表现。
腺病毒的临床表现腺病毒引发的疾病种类繁多，常见的包括呼吸道感染、肠道感染、眼部感染等。
腺病毒感染主要表现为发热、咳嗽、喉痛、流涕、恶心、呕吐、腹泻等症状。
腺病毒感染的严重程度因病毒类型、感染剂量、宿主免疫状况等因素而异。
严重的腺病毒感染可以导致中枢神经系统病变、心肌炎等并发症。
腺病毒的预防与控制腺病毒感染的预防主要包括以下几方面措施：1.保持良好的卫生习惯，勤洗手，注意咳嗽和打喷嚏时的口鼻遮掩。
2.避免接触已感染人群的分泌物和排泄物，尤其是病儿的鼻液、咳嗽物和粪便。
3.注意食品卫生，避免食用生的或未煮熟的食物，以及水源卫生的问题。
4.加强个体和集体免疫，通过接种腺病毒疫苗增强免疫力。
此外，在腺病毒感染季节，尽量避免去人员密集的地方，特别是儿童集中的场所，减少感染的风险。
对于病毒感染的病例，应及时就医并进行隔离治疗，以防止病毒的传播。
结论腺病毒是一类常见的感染性病毒，可以引起多种临床疾病。
了解腺病毒的结构、感染机制、临床表现以及预防措施，对于预防和控制腺病毒感染具有重要的意义。
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腺相关病毒安全操作规范1. 请在BL2⽣物安全⼆级⽣物安全柜中操作病毒。
2. 操作病毒和转染细胞时，请务必穿着实验服，佩戴⼝罩和⼿套。
3. 请⼩⼼操作，避免产⽣⽓雾或飞溅。
被病毒污染的超净⼯作台，请⽴即⽤70%⼄醇加1% SDS溶液擦拭⼲净。
接触病毒的枪头、离⼼管、培养板、培养液请使⽤新鲜配制的10％漂⽩粉进⾏消毒操作后丢弃。
4. ⽤显微镜观察细胞感染情况时，请先拧紧培养瓶或盖紧培养板，⽤70%⼄醇擦拭培养瓶外壁后，显微镜下观察拍照。
观察完毕，请⽤70%⼄醇再次擦拭显微镜实验台。
5. 离⼼病毒时，应使⽤密封性好的离⼼管，或⽤封⼝膜封⼝后进⾏离⼼，请尽量使⽤组织培养室内的离⼼机。
6. 实验完毕脱掉⼿套后，请⽴即⽤肥皂和⽔清洗双⼿。
个⼈保护措施1. 使⽤⼀次性⼿套。
2. 在注射病毒或是其后的解剖时，使⽤⼀次性⼿术服或是相当的⾐物，如果是感染细胞时，可以穿着实验服。
3. 佩戴护⽬镜或是⾯罩。
4. 所有的操作应当是在 Class II ⽣物安全柜中进⾏。
如果实验条件不能满⾜，则应当在空⽓稳定的空间中操作，减少操作时间和病毒与外界接触的时间。
不慎接触病毒时的急救1. 病毒飞溅或是⽓溶胶与⼈体接触–眼，⽪肤或是粘膜⽤⼤量清⽔冲洗眼睛或是其他接触的部位⾄少15 分钟。
第一节AAV病毒的生活周期腺病毒伴随病毒（adeno-associated virus, AAV）是微小病毒科（Parvoviridae）家族的成员之一。
这一家族成员是一类微小、无被膜及具有二十面体结构的病毒。
病毒颗粒的直径在20～26nm之间，含有大小在4. 7~6kb之间的线状单链DNA基因组。
从昆虫到人类都已分离到微小病毒。
AAV病毒属于依赖性病毒类（De pendovirus），最初是在纯化的腺病毒液中发现的一种污染成分（Atchinson et al. 1965）, 顾而得名。
从鸟类到许多哺乳动物包括人的体内都分离到各种血清型的AAV病毒。
大多数成年人都感染过AAV病毒，但尚未发现该病毒是任何疾病的致病因素。
在多数情况下，AAV在培养的正常细胞中不发生产毒性感染，只有在有辅助病毒包括腺病毒或疱疹病毒共同感染时才发生产毒性感染（Hoggan et al. 1966; Buller et al. 1981）。
因此，AAV病毒长期以来被认为是一种缺陷性病毒。
进一步的研究发现AAV病毒并非缺陷性病毒，而是在正常细胞中偏向于建立潜伏感染,仅在宿主细胞受到刺激时才被诱发进行感染性增殖。
AAV的生活周期有两种不同的胞内期。
在无辅助病毒存在时，AAV病毒颗粒进入细胞，脱衣壳后AAV的调节蛋白发生有限的表达，并抑制病毒基因的进一步表达和病毒DNA的复制。
这种负调节作用的结果是促进病毒基因组整合到宿主的基因组中建立潜伏感染。
AAV病毒偏向于整合到人基因组19号染色体q臂的特定位置（Kotin et al. 1990,1991,1992; Samulski et al. 1993）。
研究被AAV病毒潜伏感染的细胞发现，AAV对细胞表型往往有微弱影响，并影响细胞对刺激的反应能力（Yalkinoglu et al. 1988; Yakobson et al. 1987,1989; Bantel-Schaal et al. 1992, 1991）。
2023年最新的腺病毒腺病毒防治相关知识认识腺病毒一、什么是病毒？生物病毒是一类个体微小，结构简单，只含单一核酸（DNA/RNA），必须在活细胞内寄生并以复制方式增殖的非细胞型微生物。
不同病毒的大小变动于20～450纳米之间。
老百姓常听到的病毒有冠状病毒（引起非典），HIV(引起艾滋病)，HBV（引起乙肝）。
二、什么是腺病毒？腺病毒为DNA病毒，属腺病毒科。
因能致淋巴结（腺）、咽及结膜炎症，又称腺―咽―结膜病毒(简称APC病毒)。
是一种没有包膜的直径为70～90 nm的颗粒，由252个壳粒呈廿面体排列构成，大小相当于一根头发丝直径的800分之一。
腺病毒可以导致多种疾病，甚至可以导致动物发生肿瘤。
约1/3的人腺病毒与人类疾病有关，主要有：呼吸道感染、流行性结膜炎(俗称：红眼病)、病毒性胃肠炎、急性出血性膀胱炎等，其中腺病毒引起的呼吸道疾病和红眼病最为常见。
三、腺病毒急性传染病的传染源有哪些？怎么传染的？一般来说，传染源为病人和隐性感染者(身上有病毒但是没有发病的人)，病毒由呼吸道（大家所说的飞沫和痰）和眼结膜分泌物（大家所说的眼屎、眼泪）、粪便及尿排出体外，经空气飞沫、密切接触及粪―口途径传播。
四、哪些人群容易得腺病毒急性传染病？腺病毒在全球广泛流行，尤其会侵袭婴幼儿和免疫低下人群。
这次在北京战区流行爆发的是腺病毒55型，是一个比较新的病毒类型，人群普遍缺乏抵抗力而容易感染。
病人的密切接触者是本病的高位人群。
五、哪些情况属于密切接触者？密切接触者是指：诊疗、护理过病人；探视过病人；直接接触病人的分泌物；与病人共同生活或在同一办公室共同工作过，或者共同进餐、娱乐，或者乘坐同一交通工具时近距离接触。
诊断与治疗一、腺病毒所致传染病的表现有哪些？不同血清型的腺病毒引起的临床表现不同，可分以下类型：1 急性上呼吸道感染。
有发热、流清鼻涕、咽痛、咳嗽、声音嘶哑等。
半数病例咽部出现白色渗出物及颈淋巴结肿大，多于3～4天后退热，全身症状减轻，但咳嗽等呼吸道症状可持续1～2周。
腺病毒防治知识宣传1. 什么是腺病毒？腺病毒是一种无外壳的双链DNA病毒，在自然界中分布广泛。
易引起人体呼吸、消化和泌尿等多系统感染，以呼吸道感染较为常见。
2. 腺病毒的传染源是什么？腺病毒感染者和隐性感染者是主要传染源。
潜伏期一般3～8天，潜伏期末至发病急性期传染性最强。
3. 人是如何感染腺病毒的？主要通过空气飞沫传播，如病人打喷嚏或咳嗽传染给健康人。
密切接触（手-鼻）传播也是重要传播途径，如用脏手揉眼睛、鼻子等也可感染。
4. 哪些人容易感染腺病毒？各个年龄人群均可感染腺病毒，但婴幼儿、老年人以及免疫功能低下者较容易感染。
集体生活的幼儿、学生或新兵由于生活环境封闭聚集也容易发生群体性感染。
5. 什么季节易出现腺病毒感染暴发流行？冬春季节气温较低，人群多在室内活动，环境相对密闭，通风不畅，易于病毒传播。
因此，冬春季容易出现腺病毒感染暴发流行。
6. 腺病毒有哪些临床表现？腺病毒引起的急性呼吸道感染、急性角膜结膜炎等可导致人群暴发或流行。
病人多以轻症为主，表现出发热、咳嗽、咽痛、头痛和全身不适等症状，少数有恶心、腹泻。
大部分经过治疗后能够康复，少数可发展为重症肺炎。
7. 腺病毒有什么药物可以预防和治疗？疫苗预防：4型和7型腺病毒有口服疫苗，效果较好。
但近年流行的55型腺病毒是一种新型重组病毒，目前尚无针对性疫苗。
一般治疗与病情监测：卧床休息，注意维持水、电解质平衡，密切观察病情变化，定期复查。
对症治疗：①体温高于38.5℃，给予冰敷、酒精擦拭、降温毯等物理降温措施。
效果不佳者可予化学药物降温。
②咳嗽剧烈者可给予镇咳药。
③大量出汗者注意补液及纠正水、电解质失衡。
8.如何预防腺病毒感染？1、避免接触出现发热、咳嗽、流涕等症状的呼吸道疾病病人。
2、避免前往人群拥挤的场所。
3、注意个人卫生，经常使用肥皂和清水洗手，尤其在咳嗽或打喷嚏后；注意开窗通风，保持室内空气流通；每天要多饮水，劳逸结合，坚持体育锻炼，保证睡眠，生活规律，合理膳食，增强机体抵抗力。
第一节AAV病毒的生活周期腺病毒伴随病毒（adeno-associated virus, AAV）是微小病毒科（Parvoviridae）家族的成员之一。
这一家族成员是一类微小、无被膜及具有二十面体结构的病毒。
病毒颗粒的直径在20～26nm之间，含有大小在4. 7~6kb之间的线状单链DNA基因组。
从昆虫到人类都已分离到微小病毒。
AAV病毒属于依赖性病毒类（De pendovirus），最初是在纯化的腺病毒液中发现的一种污染成分（Atchinson et al. 1965）, 顾而得名。
从鸟类到许多哺乳动物包括人的体内都分离到各种血清型的AAV病毒。
大多数成年人都感染过AAV病毒，但尚未发现该病毒是任何疾病的致病因素。
在多数情况下，AAV在培养的正常细胞中不发生产毒性感染，只有在有辅助病毒包括腺病毒或疱疹病毒共同感染时才发生产毒性感染（Hoggan et al. 1966; Buller et al. 1981）。
因此，AAV病毒长期以来被认为是一种缺陷性病毒。
进一步的研究发现AAV病毒并非缺陷性病毒，而是在正常细胞中偏向于建立潜伏感染,仅在宿主细胞受到刺激时才被诱发进行感染性增殖。
AAV的生活周期有两种不同的胞内期。
在无辅助病毒存在时，AAV病毒颗粒进入细胞，脱衣壳后AAV的调节蛋白发生有限的表达，并抑制病毒基因的进一步表达和病毒DNA的复制。
这种负调节作用的结果是促进病毒基因组整合到宿主的基因组中建立潜伏感染。
AAV病毒偏向于整合到人基因组19号染色体q臂的特定位置（Kotin et al. 1990,1991,1992; Samulski et al. 1993）。
研究被AAV病毒潜伏感染的细胞发现，AAV对细胞表型往往有微弱影响，并影响细胞对刺激的反应能力（Yalkinoglu et al. 1988; Yakobson et al. 1987,1989; Bantel-Schaal et al. 1992, 1991）。
AAV生活周期的另一种胞内期是产毒性感染，往往在有辅助病毒（腺病毒或疱疹病毒）感染时发生。
辅助病毒的感染可以在AAV感染之前、同时或之后进行。
腺病毒（Ad）和单纯疱疹病毒（HSV）中与辅助功能有关的基因都已确定。
腺病毒中参与提供辅助功能的基因包括E1a, E1b, E2a, E4和VA RNA（Muzyczka 1 992），但不包括与腺病毒DNA复制直接相关的E2b基因产物（DNA聚合酶和末端酶）。
1型单纯疱疹病毒（HSV-1）提供辅助功能的情形则有些不同,不仅涉及与HSV病毒基因调节有关的基因包括ICP0和ICP4，还需要HSV病毒DNA复制的所必需的基因产物包括HSV螺旋酶－引物酶复合物（UL5，UL8，UL52）和主要DNA结合蛋白UL29的参与（Weindler F et al. 1991）。
这种在辅助功能方面的不同可能反映了腺病毒感染和疱疹病毒感染期间对宿主DNA合成机制的不同影响。
目前的关于AAV工作模式有以下要点：（1）AAV是一种生活周期以潜伏感染为主的病毒；（2）通过潜伏感染, 病毒基因组得以同细胞共存；（3）只要宿主细胞正常，AAV基因表达就处于抑制而维持潜伏状态；（4）如果细胞受到刺激，细胞内环境发生改变而表达应激基因；（5）导致细胞应激反应基因表达的调节状况也使得AAV基因表达，从而使AAV病毒复制；（6）产生子代病毒并释放，又感染新的正常宿主细胞，建立新的潜伏状态。
用某些可损伤基因的因素如紫外线照射、γ射线照射、各种化学致癌剂或某些代谢抑制剂处理某种类型的哺乳动物细胞，可使之在无辅助病毒存在的情况下能够发生AAV产毒性感染。
虽然这种情形比有辅助病毒存在时每个细胞产生AAV病毒的量要低几个数量级，但上述实验提示AAV病毒并不是一种缺陷性病毒，而是一种强烈偏向于潜伏的病毒。
返回标题第二节AAV病毒的基因组结构和功能人2型腺病毒伴随病毒（AAV-2）的基因组为4681 个核苷酸的单链DNA，全部序列已测定。
正链和负链DN A均可被包装到AAV病毒颗粒中。
AAV-2基因组的结构如图3-1所示。
基因组的两末端为145bp的倒转末端重复序列（inverted terminal repeat, ITR）。
ITR序列之间为AAV病毒的编码区，左侧的ORF编码4种Re p蛋白；右侧的ORF编码3种Cap蛋白。
一．ITR的结构和功能AAV 病毒ITR的序列和结构见图3-2。
每个ITR长145bp。
其中前125bp可形成一个T形的发夹结构，由两个小回纹结构（palindrome）（图2 B和C）组成，旁边为一个较大的回纹结构（A）。
ITR的序列可有两种构型：flip（B回纹接近3’端）或flop（C回纹接近3’端）。
一个特定分子AAV的两个末端形成flip或flop 的机率都相等。
单链形式的AAV ITR容易形成如图2所示的T型发夹结构，还可能形成另外的构型。
ITR序列是AAV病毒的复制、整合、拯救和包装所必需的顺式作用元件。
二．Rep基因的结构和功能Rep基因编码至少4种非结构蛋白：Rep78, Rep 68, Rep 52, Rep 40。
由p5启动子起始的2种mRNA翻译成Rep78和Rep68；p19启动子起始的2种mRNA翻译成Rep52和Rep40（图3.1）。
Rep52和Rep40蛋白C末端的氨基酸序列分别与Rep78和Rep68相同。
Rep 78和Rep68蛋白与AAV基因表达的正负调控有关。
这两种蛋白都可以和ITR中的特定序列( 5’-GCTCGCTCGCTC-3’)结合。
类似的序列在AAV的3个启动子上游均可找到。
当ITR自我折叠时可加强这种结合作用。
Rep78/Rep68具有ATP酶和螺旋酶的功能。
当其与ITR结合时便成为在124位点核苷酸处特异切割的缺口酶,识别的位点是5’-T/TGG。
这两种蛋白对于AA V生活周期的每一时期都是必需的。
在非允许条件下（没有辅助病毒和刺激因素），Rep蛋白只有微量表达，这种表达又能抑制其进一步的表达。
另外，在非允许条件下Rep的表达似乎可抑制AAV基因组以直接方式复制。
近来的研究证明Rep蛋白的表达对位点特异性整合是必需的。
相反，在允许条件下，Rep蛋白的表达对AAV病毒从整合状态的拯救、各种AAV基因的表达和AAV DNA的复制都是必需的。
Rep52和Rep40参与了病毒的装配，它们在病毒双链DNA合成中是不需要的，但在单链DNA和病毒颗粒的累积中则是必需的。
三．Cap基因的结构和功能Cap基因编码衣壳蛋白，其转录从p40启动子开始，形成约2.6kb和2.3kb mRNA,拼接后分别编码三个结构蛋白VP1、VP2和VP3(图2) ，分子量分别为87、73和61kDa,在成熟毒粒中的比例为1:1:10。
没有VP1时，VP2和VP3就可以包装子代单链DNA。
但这样的毒粒感染性较低，提示VP1在病毒颗粒的稳定性或感染性上是需要的。
VP2在病毒样空颗粒的装配中起重要作用。
VP3 似乎需要与其它两个中的一个一起，完成核定位任务。
返回标题第三节重组AAV的产生原理及常规制备、检测方法在基因治疗研究中，重组逆转录病毒和重组腺病毒在基因转移载体中一直占主导地位。
但近年来这一情况有所改变，用AAV作基因转移载体已成为基因治疗研究的热点。
这是由于AAV具有以下特点：（1）安全性好。
迄今从未发现野生型AAV对人体致病;重组AAV去除了野生型AAV基因组的96%，进一步保证了安全性；（2）宿主范围广。
不仅可转导分裂细胞，而且可转导静止期细胞；（3）野生型AAV可整合到人基因组19号染色体q臂的特定位置,利用这一特点,有可能研制出具有特异性整合功能的AAV载体;（4）AAV-2的基因组仅4681个核苷酸, 便于用常规的重组DNA技术进行操作；（5）物理性质稳定。
在60°C不能被灭活, 能抗氯仿;（6）重组AAV（rAAV）可长期稳定地表达外源基因。
一．重组AAV的产生原理目前在基因治疗研究中所用的AAV载体均由2型AAV改造而来。
AAV-2的ITR中包含了复制、包装、拯救及整合的信号，这使rAAV的产生成为可能：外源基因表达盒可完全取代AAV的编码序列，rep和cap基因产物则可由另一个质粒反式提供。
参照野生型AAV的生活周期，表达外源基因的rAAV的产生需要4种成分参与：1. 载体DNA。
载体DNA质粒包括了145bp的AAV ITR序列，外源基因的表达单位（通常由转录启动子、目的基因和多聚腺苷酸序列组成）位于两个ITR之间。
2. AAV的复制蛋白(Rep)和外壳蛋白(Cap)。
通常由携带它们相应基因的质粒（称为包装质粒）反式提供。
3. 宿主细胞。
多种细胞可用作产生重组AAV的宿主细胞，包括293细胞、HeLa细胞和KB细胞等，其中29 3细胞用磷酸钙转染的效率最高，因此最常用。
4. 辅助病毒。
常用的辅助病毒为腺病毒，疱疹病毒则较少用到。
腺病毒的辅助功能由E1a、E1b、E2a、E4 orf6和VA RNA基因提供；HSV-1的辅助功能由UL5、UL8、UL52和UL29等基因提供。
在辅助病毒存在的条件下，Rep蛋白可以将含有外源基因表达单位的rAAV基因组从载体质粒上拯救出来，并加以复制，得到大量复制形式的rAAV DNA。
随后，Cap蛋白可将单链的rAAV基因组包装成感染性的病毒颗粒。
二．重组AAV的常规制备及纯化方法rAAV载体的常规制备过程见图3.3。
通常采用磷酸钙共转染的方法，将载体质粒和包装质粒共转染经腺病毒感染的HeLa或293细胞(Hermonat and Muzyczka, 1984; Samulski et al., 1987,1989)。
当细胞在腺病毒感染下完全病变后（通常为感染后48-72 h），收集细胞，低速离心、去上清。
此时绝大部分rAAV存在于细胞内，去掉上清没有明显损失。
将细胞团块冻融3~4次，裂解液在55~60°C加热30~60min以灭活腺病毒。
低速离心去除细胞碎片后，将rAAV的粗提物用若干次氯化铯平衡梯度离心进行纯化。
如果rAAV基因组与野生型AAV基因组的大小一致，则密度为1.41 g/cm3,可以与密度为1.35 g/cm3的腺病毒明显分离。
对于转导培养的细胞，用rAAV的粗提物即可；但如果用于动物实验，则需进行若干次氯化铯平衡梯度离心进行纯化，因为即使污染了很少量的腺病毒（无论灭活与否）都能造成病毒接种部位的局部炎症反应。
在rAAV制备过程中，需注意以下问题：1．rAAV 的基因组长度（包括两个ITR在内）应接近野生型AAV基因组4681bp的长度，即外源基因表达盒（包括启动子、目的基因及多聚腺苷酸序列）不超过4.3 kb。
