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安捷伦液质使用中注意ppt课件

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安捷伦液质使用中注意

安捷伦液质使用中注意

2021/3/7
CHENLI
16
Agilent 1100/1200 在线脱气机及溶剂管理
防止堵塞溶剂过滤器
污染的溶剂或溶剂瓶里的藻类生长将缩短溶剂过滤器的使用寿命 ，并且影响色谱泵的运行。另外，其分泌物会很容易在质谱上表 现为干扰或者离子化抑制。这在水相溶剂中尤其如此。下列建议 将会防止质谱分析受到影响并延长溶剂过滤器的使用寿命。
18
Agilent 1100/1200 四元泵／二元泵
Agilent 1100/1200 色谱泵工作原理
2021/3/7
CHENLI
19
Agilent 1100/1200 自动进样器
Agilent 1100 自动进样器工作原理
2021/3/7
CHENLI
20
HPLC常用的色谱柱接头及管路
Swagelok Parker
- 使用棕色的溶剂瓶来减缓藻类生长。
- 每两天更换水相溶剂。
- 避免溶剂瓶暴露在直射阳光下。
Tips: • 如果经常使用同一方法，可以将平时放置水相的A瓶，更换为预先 配好的流动相（等度分析）或者初始比例的混合流动相（梯度分 析）。当流动相中有机溶剂比例大于10%时，微生物生长会被抑制， 可以保存较长时间。 • 较长时间不使用系统时，请用甲醇将水相管路中溶剂冲洗替换之后 再停机，防止微生物生长。
CHENLI
12
质谱维护时间表
任务 冲洗样品通路 清洁喷雾室 检查前级真空泵油的液面 开启气镇阀 检查并清空排污瓶 清洁或钝化毛细管 更换在线过滤器筛板 更换前级泵泵油 更换喷雾针 清洁离子光学 更换电子倍增器
每日 X X
每周 每6个月
根据需要
X X X
X X

安捷伦液相色谱仪讲座 ppt课件

安捷伦液相色谱仪讲座 ppt课件
安捷伦科技液相色谱基本维护故障诊断交 流讲座
1100 HPLC Maintenance & Troubleshooting
Agilent 1100系列HPLC 工作原理 日常维护 故障诊断 技术支持＆服务流程
安捷伦科技有限公司 生命科学与化学分析仪器部
2
1100 HPLC Maintenance & Troubleshooting
13
Agilent 1100 四元泵 (G1311A)
14
Agilent 1100 四元泵工作原理
15
Agilent 1100 泵
Agilent 1100 泵头(Pump Head)结构图
16
Agilent 1100 泵头(Pump Head)结构图
Pump head screws
17
Agilent 1100 泵头(Pump Head)结构图
Agilent 1100系列密封垫冲洗－Seal Wash ( 可选)
Washer

Seal

Support seal assembly

当流动相中盐浓度>0.01M时，可以 减小密封垫的磨损。 对于Agilent 1100系列泵为可选件 。 用10%异丙醇水溶液冲洗
20
带有Seal Wash的泵头结构图
脱气机的操作：操作泵之前，用至少两个体积（标准脱气
机30ml，对微脱气机10ml）冲洗 真空脱气机，特别是当 泵关闭了一段时间后（例如，过夜），以及在通道中使用 挥发性混合溶剂 时。
标准脱气机（G1322A).
标准脱气机每个通道体积为12ml 建议排液操作：5ml/min 排液6min以上。
微脱气机（G1379A).

安捷伦液相色谱仪讲座 ppt课件

安捷伦液相色谱仪讲座 ppt课件

28
Agilent 1100 系列泵的使用须知
更好地使用泵
当泵头安装有冲洗附件时，由于该附件中也有密封垫，这样就 会增加活塞杆运动时的阻力。所以开泵前一定要用10％异丙醇， 并将其流速调至约20滴/分钟使这溶液流过冲洗装置。
10％异丙醇有助于降低水的表面张力，并有抑菌作用。最好不 要用其它溶剂代替。
3.清洗球形单向阀
31
4.更换密封垫，活塞杆
Question?
Agilent 1100 泵的日常维护
1.如何简单判断比例阀是否内漏？ 2.何时应该更换Purge阀内的过滤白头？ 3.泵压力不正常可能由那些原因引起？
32
Question?
Agilent 1100 系列泵的日常维护
1.如何简单判断比例阀是否内漏？ 设定泵使用一个单独通路（A），打开Purge阀，流 速5ml/min，提起其他溶剂瓶内的溶剂过滤头直至离 开液面，观察这些通路（B、C、D）内的溶剂是否随 着流动，正常时均不应流动。 2.何时应该更换Purge阀内的过滤白头？ 使用纯水作流动相，打开Purge阀，流速5ml/min， 观察系统压力，如果超过10bar，应该更换。 3.泵压力不正常可能由那些原因引起？ 气泡，主动阀故障，出口阀故障，密封垫或柱塞杆 磨损，渗漏或堵塞，比例阀故障，传感器故障，使用 比例阀混合时盐浓度太高
33
Agilent 1100 自动进样器(G1313A)
34
Agilent 1100 自动进样器工作原理
35
Agilent 1100 自动进样器工作原理
36
Agilent 1100 自动进样器结构
37
Agilent 1100 自动进样器结构
38
Agilent 1100 自动进样器结构

液质联用仪基本介绍及其应用技术PPT课件

液质联用仪基本介绍及其应用技术PPT课件

四极杆质量分析器的示意 图
4.检测接收器
接收离子束流的装置有： 电子倍增器、光电倍增器、微通道板
5.数据及供电系统 将接收来的电信号放大、处理并给出分析 结果及控制质谱仪个部分工作。 从几伏低压到几千伏高压。
质谱仪的主要性能指标

1.分辨率resolution power 即表示仪器分开两个相邻质量离子的能力，通常用 R 表示，实验室内的TSQ Quantum 分别率为0.7。 2.质量范围mass range 四极质谱： 4000以内 离子阱质谱： ~ 6000 飞行时间质谱： 无上限
溶剂在蒸发 器中蒸发
+ ++ + + + ++ + + + + + + + + ++ + ++ ++
通过电晕针放电 形成带电荷的反 应剂离子
流动相 分析物
电荷转移至 分析物分子
+ + + + +
蒸汽
分析物离子
液质联用的大气压化学电离源(APCI)接口
锥孔 毛细管 透镜
高能打拿极/ 电子倍增器
八极杆
开 机 步 骤
• 5.确认氮气气源输出已经打开，气体输出压力为90 psi。 • 6.等待四极杆温度达到100℃，高真空达到4 x10-5 Torr之后，即 可进行调谐或开始实验。
• 1. 在MassHunter采集软件内点击三级四极杆MS的图标， 选择Vent执行放空操作。
关 机 步 骤
• 2.可以在三重四极杆Method的Diagnosis界面观察涡轮 泵转速的下降情况。 • 3.等待真空泵停转且内部真空放空后，系统会给出放 空完成的提示，关闭MassHunter 软件，然后关闭质谱 及LC各模块、PC的电源.

HPLC安捷伦高效液相使用维护常见问题PPT课件

HPLC安捷伦高效液相使用维护常见问题PPT课件

启动液相色谱仪器的流程
流动相冲洗系统
水相走A、D泵，有机 相走B、C泵，可防止
缓冲盐析出
流动相配制后，先使用过滤装置过滤，然后超声15min，排除气泡干扰。流速 1ml/min，使用流动相冲洗系统至少30min，待基线平稳即可进行下一步操作。
进样测定 具体操作如下：点击“序列”-“序列表”-输入相关信息确定（样品瓶、样品 名称、方法名称-TEST、进样次数、进样量）-“开始序列”。待进样结束后， 进行下一步操作。 注意：在进样前，最好用100%甲醇进行洗针，以防进样针中残留的其它样品 影响实验结果。
稳定性考察： 取同一份供试品溶液，分别于不同时间进样测定（如0、2、4、6、8、10、12、 24h）。
HPLC色谱柱
数据处理系统
自动进样器 色谱泵
检测器
废液
第5页/共42页
一些商品化仪器
流动相
脱气装置
四元泵
样品盘 柱温箱 检测器
第6页/共42页
溶剂
棕色玻璃瓶会避免藻类的生长。 经常过滤溶剂以免其中微粒永久性阻塞毛细管。
第7页/共42页
启动液相色谱仪器的流程
开启HPLC系统各个设备的电源
打开泵、自动进样器、检测器电源，打开计算机启动 “1260联机工作站”，待
标准加样回收---已知浓度样品中加入药品
数据要求： 在规定范围内，至少用9个测定结果
进行评价。例如，设计3个不同浓度，每个 浓度各分别制备3份供试品溶液，进行测定。
第27页/共42页
分析方法的建立及验证
绝对回收率=提取回收率/（1－基质效应），HPLC中基质效应为0 1.绝对回收率=提取回收率=萃取回收率，是用药品加血浆经萃取处理后的进 样峰面积除以该药品溶液直接进样峰面积的比值，一般来说，该比值不可能 超过100%，能做到80%就不错了。以前国家对绝对提取率还有些要求，现在 随着lc-ms的应用，最低定量限已经能做到很低，也就不需要再对绝对回收率 提具体要求，只要相对回收率满意就可以。--生物样品：用于筛选提取溶剂， 可以低但要稳定 2.相对回收率=方法学回收率，是血浆处理后的进样峰面积代入血浆标准曲 线，计算所得浓度除以真实血样浓度.该比值在100%左右.一般要求高、中浓 度点在15%以内，低浓度点可适当放宽。--内标的相对回收率值与绝对回收 率要求类似 (1)举例：10ng A药加入1ml空白血浆（10ng/ml），经萃取处理后用0.5ml流动 相复溶，进样所得峰面积8000;配制对照溶液（浓度10ng/0.5ml=20ng/ml）， 进样所得峰面积假设为10000.那么萃取回收率为8000/10000=80%.

安捷伦操作流程课件演示文稿(共37张PPT)

安捷伦操作流程课件演示文稿(共37张PPT)
1MPa=100kPa
1260HPLC四元泵中集 对于溶解在流动相中的极微气体，安捷伦1260HPLC四元泵中集合了脱气机，可以进一步对混合后的流动相进行脱气处理。
一般HPLC流动相过滤使用孔径为 m的滤膜。
5小时，然后保存方法和仪器设置。 序列样品：命名与序列表设置
合了脱气机，可以进一
0mL/min，再用100甲醇冲洗0.
分类：组成分-单组分和多组分
退出化学工作站，及其它窗口，关闭计算机。
视图→在线信号→为信号了窗口除1 去溶解在流动相中得气泡,降低基线噪音，
1MPa=100kPa
左 点流击动仪 相器瓶1、联在四机元进H泵入、P工自L作动C站进开样器机、柱前温箱应、把二极各管阵溶列检剂测器瓶在超声机中超声30min
右。 关机前，用90%水冲洗柱子和系统0.
流动相不要使用多日存放的蒸馏水，一般不易超过三天（易长菌），影响基线平衡；
安5小捷时伦，12然6后0分H保P存类LC方：法和组仪器成设置分。 -单组分和多组分
1MPa=100kPa
点极击性仪 -极器性1、联弱机极进性入、工非作极极站性性-极性、弱极性、非极性 常用溶剂：甲醇、水、乙腈、乙醇、乙酸乙酯、四 加热后的流动相进入液相系统和色谱柱后，会影响基线噪声的增加，使平稳时间延长。
步对混合后的流动相进
行脱气处理。
操作前准备
流动相冷却
流动相在超声机中长时间超声后，由于水分子振动 摩擦，使水温上升，因此流动相瓶中的溶剂也会被加热。 加热后的流动相进入液相系统和色谱柱后，会影响基线 噪声的增加，使平稳时间延长。
开机及关机
1260HPLC及化学工作站开机使用与关机
打开计算机
关闭排气阀
柱温箱 二极管阵列检测器

安捷伦液质使用中注意讲解学习


Agilent 1100/1200 在线脱气机及溶剂管理
检查溶剂过滤器
－拧开脱气机出口或比例阀入口管线，此时溶剂会因为重力流出，脱气机或溶 剂过滤头堵塞时，溶剂会流出不畅或不流出。
－查看过滤器是否变色．
－临时取下过滤器，检查柱前压力是否正常．
清洁溶剂过滤器
将堵塞的溶剂过滤器从瓶头组件中拿下。将堵塞的过滤器放在装有浓 硝酸 （35％）的烧杯里浸一小时。
谢谢！
Agilent 1100/1200 色谱泵工作原理
Agilent 1100/1200 自动进样器
Agilent 1100 自动进样器工作原理
HPLC常用的色谱柱接头及管路
Swagelok Parker
0.090 in.
Waters
Rheodyne
0.090 in.
0.130 in.
0.170 in.
每周 每6个月
根据需要
X X X
X X
1年 1-2 年 1-2 年 2-3 年
Agilent 6400 QQQ MSD 日常维护
前级泵的日常维护
Tips: • 当质谱开机时，就应通干燥气，尽量避 免抽入空气。
• 定期检查前级泵废气过滤器，如果存有 较多泵油，打开气振阀可以促使泵油回流。 为防止停电或误操作导致泵油反抽到系统 内部，请在泵油回流后及时关闭气镇阀。
- 避免溶剂瓶暴露在直射阳光下。
Tips: • 如果经常使用同一方法，可以将平时放置水相的A瓶，更换为预先 配好的流动相（等度分析）或者初始比例的混合流动相（梯度分 析）。当流动相中有机溶剂比例大于10%时，微生物生长会被抑制， 可以保存较长时间。 • 较长时间不使用系统时，请用甲醇将水相管路中溶剂冲洗替换之后 再停机，防止微生物生长。

液质联用仪原理与操作注意事项安捷伦6410


3
和键合相的坍塌。（特殊柱子除外，如T3柱， 因具有三相键合相，所以高耐水性，用于分
析丙酸、EDTA、三聚氰胺等）
三、液质操作系统的注意事项
紫外检测器 UV
检
测
质谱检测器 MS
器
的
选
择
二极管阵列 检测器DAD
示差检测器 RID
荧光检测器 FLD
蒸发光散色 检测器ELSD
三、液质操作系统的注意事项
不能使用的溶
剂添加剂
3
4 溶剂截止波长
三、液质操作系统的注意事项
反
1
色谱柱根据键合相的不同可分为氨基柱、C8、 C18、C30柱等等
相
色
谱 柱
色谱柱使用完要冲洗，特别是使用缓冲盐分
2
析样品时，原则上用于冲洗的流动相中水的 比例应该等于或高于分析时所用流动相中水
的比例。
严禁用纯水冲洗柱子，易造成固定相的流失
库伦爆炸
原理：带有被测物质离子的流动相在雾化针尖端发生雾化， 液滴表面富集带同种电荷的离子，内部带相反电荷聚集， 形成带电液滴细的喷雾，在电场的作用下，飞向毛细管。 加热的氮气干燥气体反向流动，带走液滴中的中性溶剂分 子，从而收缩液滴，直至排斥的静电力超过液滴表面张力， 引起库伦爆炸，过程不断重复，待分析物离子最终变成气 态进入毛细管。
动 相
过膜处理
1
2 缓冲盐的使用
•LC/MS中不能使用磷酸盐、 硼酸盐、硫酸盐、三氟乙 酸、三乙胺，易残留，会 形成强离子对，产生离子
抑制，降低灵敏度
•溶剂的截止波长：乙腈 /190nm,甲醇/210nm, 水/190nm.一般分析时样 品检测波长应至少大于所 用溶剂的截止波长20nm 以上，否则背景较高。

液质联用仪原理及操作注意事项安捷伦ppt课件

LDD
高效液相色谱质谱联用（HPLC/MS）是指高效液 相色谱与质谱串联的技术，是将应用范围极广的 高效液相分离方法与灵敏、专属、能够提供分子 量和结构信息的质谱法结合起来的一种现代分析 技术。
HPLC-MS主要由HPLC仪、接口离子源（LC与MS连接装置）、 质量分析器、真空系统、计算机数据处理系统组成。
四、故障排除
信号低 质量准确度差 雾化器出口是小 液滴而不喷雾
1.确保雾化气压设定 足够高以利液相色谱 流动相气化 2.检查雾化器中针头 的位置 3停止溶剂流动，卸 下雾化装置，检查雾 化器末端是否损坏
无液流
1.检查溶液化学性质，确 定样品溶剂是合适的 2.保证用新样品，并且正 确存储样品 3.检查雾化器条件 4.清洁毛细管入口 5.检查毛细管有无损坏和 污染源自. MRM优化子离子碰撞能
三、液质操作系统的注意事项
•流动相以及样品必须过膜 （有机滤膜、水系膜） •流动相应超声脱气 10~20min,否则压力易 波动（装有在线脱气机， 影响会小一些） •反相常用流动相为甲醇、 乙腈、水以及缓冲盐溶液。
• 注意：LC中常采用无机缓冲 盐，LC/MS中则应该使用挥 发性的缓冲盐，如甲酸铵、 乙酸铵；或挥发性酸碱甲酸、 乙酸、氨水等调节pH
三、液质操作系统的注意事项
紫外检测器 UV
检 测 器 的 选 择
质谱检测器 MS
二极管阵列 检测器DAD
示差检测器 RID
荧光检测器 FLD
蒸发光散色 检测器ELSD
三、液质操作系统的注意事项
正 负 离 子 模 式 选 择 的 一 般 原 则 ：
适用于碱性样品，可用乙酸或 甲酸对样品甲乙酸化。样品中 含有仲氨或叔氨时可优先考虑 使用正离子模式（如磺胺类、 喹诺酮类物质）

安捷伦液相操作 PPT课件


1.在Online工作站界面的View菜单下打开VWD Scans窗 口；
2.按照正常的进样方式采集样品色谱数据，并保证能够 在
Online Signal窗口中观测到色谱信号；
3.进样后，色谱图上出现基线时，扫描空白吸收光谱 在Instrument菜单下，选择More VWD中的Blank
Scan
4.色谱图上出现色谱峰时，扫描样品吸收光谱
2019/9/12
Slide 2
第三天
上午：1 个性化报告的设定与编辑 2 工作站故障诊断功能的应用 3 结业考试
结业午餐
下午：1 化学工作站的重新安装、配置及启动(选修) 2 发结业证 3 自由练习、讨论
2019/9/12
Slide 3
第一章 化学工作站各个工作界面介绍
2019/9/12
Slide 4
HPLC 1100 ChemStation 高级操作培训
2019年9月12 日
授课教师
纪学海
Update: 2005-3-21
Slide 1
HPLC 1100 Advance操作培训日程安排
第一天 第二天
上午： 1 课程简介及相互介绍 2 化学工作站各个工作界面介绍
3 完整方法的编辑、修改、存储及运行 4 HPLC 1100 仪器配置及参数设置
Slide 19
标准自动进样器的程序进样
2019/9/12
Slide 20
Wellplate自动进样器参数
2019/9/12
Slide 21
柱温箱参数设置
控温范围：低于室温10℃～80℃ 两个单独的加热区 安装切换阀可以进行柱切换 可以容纳30 cm长色谱柱 安装柱识别可以自动记录进样次数
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防止堵塞溶剂过滤器
污染的溶剂或溶剂瓶里的藻类生长将缩短溶剂过滤器的使用寿命 ，并且影响色谱泵的运行。另外，其分泌物会很容易在质谱上表 现为干扰或者离子化抑制。这在水相溶剂中尤其如此。下列建议 将会防止质谱分析受到影响并延长溶剂过滤器的使用寿命。
- 使用棕色的溶剂瓶来减缓藻类生长。
- 每两天更换水相溶剂。
Agilent 1100在线脱气机工作原理
Tips: •G1322A通道内部体积12 mL， G1379A/B内部体积1 mL 。更换溶剂后 请冲洗2倍通道体积后再开始实验。 •使用G1379，冲洗通道时的流量最好不 要大于2 mL/min。
16
Agilent 1100/1200 在线脱气机及溶剂管理
用二次蒸馏水彻底冲洗过滤器。 将过滤器重新装好。
Tips: • 如何简单判断脱气机腔体或溶 剂过滤头是否堵塞？
注意：不要使用没有安装溶剂过滤器的系统． • 关闭泵，拧开脱气机出口或比 例阀入口管线，此时溶剂会因 为重力流出，脱气机或溶剂过 滤头堵塞时，溶剂会流出不畅 或不流出。
18
Agilent 1100/1200 四元泵／二元泵
每日 X X
每周 每6个月
根据需要
X X X
X X
1年 1-2 年 1-2 年 2-3 年
13
Agilent 6400 QQQ MSD 日常维护
前级泵的日常维护
Tips: • 当质谱开机时，就应通干燥气，尽量避 免抽入空气。
• 定期检查前级泵废气过滤器，如果存有 较多泵油，打开气振阀可以促使泵油回流。 为防止停电或误操作导致泵油反抽到系统 内部，请在泵油回流后及时关闭气镇阀。
Agilent 1100/1200 色谱泵工作原理
19
Agilent 1100/1200 自动进样器
Agilent 1100 自动进样器工作原理
20
HPLC常用的色谱柱接头及管路
Swagelok Parker
0.090 in.
Waters
Rheodyne
0.090 in.
0.130 in.
0.170 in.
Tips: 毛细管电流、喷雾室电流是否稳定也能判定喷雾和干燥的状况。另外， to MS/to waste压力差和废液桶中残留溶剂的积存状况也可以显示喷雾针的问题。
8
• 真空
关注参数：
• 毛细管电流(capillary current)
• 喷雾式电流(chamber current)
• HPLC泵压
- 避免溶剂瓶暴露在直射阳光下。
Tips: • 如果经常使用同一方法，可以将平时放置水相的A瓶，更换为预先 配好的流动相（等度分析）或者初始比例的混合流动相（梯度分 析）。当流动相中有机溶剂比例大于10%时，微生物生长会被抑制， 可以保存较长时间。 • 较长时间不使用系统时，请用甲醇将水相管路中溶剂冲洗替换之后 再停机，防止微生物生长。
Valco
Troubleshooting LC Fittings, Part II.
Uptight
0.080 in.
J. W. Dolan and P. Upchurch.
Color Red Green Blue
0.090 in.
LC/GC Magazine 6:788 (1988)
i.d. 0.12 mm 0.17 mm 0.25 mm
11
Agilent 质谱日常维护 -真空系统 -ESI -APCI -毛细管的清洗和钝化 -八级杆的清洗
12
质谱维护时间表
任务 冲洗样品通路 清洁喷雾室 检查前级真空泵油的液面 开启气镇阀 检查并清空排污瓶 清洁或钝化毛细管 更换在线过滤器筛板 更换前级泵泵油 更换喷雾针 清洁离子光学 更换电子倍增器
100,000
分 子
10,000
量
1000
ESI APCI
nonpolar
Very polar
5
ESI
低流速 窄径柱
高流速 常规柱
6
fragmentor Vcap
高电压
7
源参数为什么重要？
•确认喷雾气/干燥气/鞘流气设置正常。
Tips: 使用含水量高的流动相要适当提高气体流量和温度。
• 确认喷雾针是否缺损或者堵塞，必要时更换。
• 开机和放空之前，必须确认前级泵气镇 阀处于关闭状态。
• 分子涡轮泵降速时需要散热，所以应避 免采用直接关电源关机或突然停电。
• 前级真空典型值为2 torr。过高的前级 真空可能源于长期未开气镇阀或者泵油需 要更换。
14
HPLC
在线脱气机 四元泵／二元泵 自动进样器 柱温箱 检测器
15
Agilent 1100/1200 在线脱气机及溶剂管理
安捷伦液质培训
1
质谱特点：
• 1 样品必须离子化 • 2 必须具有一定的真空 • 3 必须测量质荷比（m/z）
2
质谱仪的组成
inlets
Ion source
Ion Optics
Mass Detector analyzer
数据处 理
Vacuum system
3
4
离子源
• ESI、APCI、复合源、 其它（APPI,MALDI）
17
Agilent 1100/1200 在线脱气机及溶剂管理
检查溶剂过滤器
－拧开脱气机出口或比例阀入口管线，此时溶剂会因为重力流出，脱气机或溶 剂过滤头堵塞时，溶剂会流出不畅或不流出。
－查看过滤器是否变色．
－临时取下过滤器，检查柱前压力是否正常．
清洁溶剂过滤器
将堵塞的溶剂过滤器从瓶头组件中拿下。将堵塞的过滤器放在装有浓 硝酸 （35％）的烧杯里浸一小时。
21
谢谢！229Fra bibliotek几个名词
• TIC、EIC、ECC、BPC • Tune、Calibration • CID( 传输区、碰撞池)、SIM • Mass accuracy（ppm=mass error/MW*106) • Quasi-molecular ion（[M+H]+\ [M+Na] +）
10
注意事项：
• 1 双蒸水、三蒸水？ • 2 表面活性剂？ • 3 三氟乙酸（TFA），三乙胺（TEA）? • 4 关机