雷公藤根化学成分的分离与鉴定

39BIOTECHWORLD 生物技术世界临床研究表明,雷公藤具有着诸多的药理作用,例如杀虫止痒,清热解毒,舒筋活血等,在临床中的诸多疾病中均有着一定的应用,例如对肝炎患者,风湿关节炎患者或者肝炎患者等,然而,虽然雷公藤具有着十分显著的临床应用效果,然而,其本身也存在着一定的毒性,在对其进行应用时,则属于在服用有毒的药物,在本文中,笔者主要对雷公藤的化学成分进行研究与探讨,并对其提取物进行相应的检验。

1 实验的部分1.1 实验的试剂选择使用5.83×10-4mol/L的雷公藤内酯醇乙醇溶液:选择10mg的雷公藤内酯醇,并使用无水乙醇将其溶解,容量设定为100ml。

对硼砂缓冲溶液的配置:配置P H值为9.26的硼砂溶液共计0.1m ol/L。

1.2 实验的方法在10ml的比色管中将雷公藤内酯醇乙醇溶液溶入,并在其中PH 值适当的一定量的缓冲溶液以及KCL溶液1mol/L,在将一种新的溶液加入到试管中后,均要轻轻地将试管摇动,保证溶液的均匀性,而后将其定容为10ml,而后选择部分的溶液放置在电解池之中,并应用三电极系统对其进行扫速,速率为500V/s,在其达到了一定的电位后,由研究人员对其进行扫描并对其循环伏安的曲线进行记录。

[l1]当实验完成之后,对相关文献资料的数据以及实验的结果进行综合性总结,分析与讨论。

2 结果与讨论2.1 化学成分的研究2.1.1 生物碱从1950年科学家将第一个生物碱提出出来开始,对于这一方面的研究便从未间断,据相关资料表明,到当前为止,已经被提出出来的生物碱共计由13个,主要分为两个不同的类别,分别为精脒类生物碱以及大环酯类生物碱。

两种类别的生物碱主要由下图1所示:2.1.2 二萜类作为雷公藤生理活性的最为主要的成分,二萜类到目前已知已经分得的共计有13个,在当前对其基本结构主要可以分为以下三类,分别为环氧二萜类,雷酚萜类以及山海棠素类,三类的结构图分别如下图2所示:2.1.3 三萜类从1936年科学家将第一个三萜类化合物研究出来开始直至当前,科学家们通过你的研究,已经从含有雷公藤的植物之中划分出了18中不同的三萜类化合物,雷公藤的三萜类化合物均属于五环化合物,其分贝属于乌素烷型,齐墩果烷型以及本栓烷型,三类的结构图分别如下图3所示:2.2 化学成分的活性研究研究表明,雷公藤的活性种类较多,主要包含杀虫作用,免疫与抗炎作用,抗生育作用以及抗肿瘤作用,将其中不同的成分进行组合,所得到的药理活性也必然是不同的,在药理活性之中,免疫与抗炎的作用是最为主要的,也是当前临床中对雷公藤药物应用最为广泛与直接的。

雷公藤提取物中主要物质基础及其抗肿瘤活性研究作者：胡丹，丁同同，李江，邓璐璐，吴树燕，穆淑珍来源：《广西植物》2022年第09期摘要：為进一步阐明雷公藤中的主要物质基础，并评价其抗肿瘤活性。

该研究采用柱层析、HPLC等技术，对雷公藤提取物进行研究。

结果表明：（1）从雷公藤95%乙醇提取物中分离得到12个化合物，根据理化性质及波谱数据鉴定各化合物的结构分别为α，β-amyrenone （1）、3β-acetoxyolean-12-en-28-oic acid （2）、antriptolactone （3）、ω-hydroxypropioquaiacone （4）、3-（4-hydroxy-3-methoxyphenyl）-propenal （5）、3-methoxy-4-hydroxy phenylethanol （6）、vanillin （7）、3， 4， 5-三甲氧基苯酚（8）、对羟基苯甲酸（9）、对羟基苯甲醛（10）、vanillyl alcohol （11）、2，6-dimethxy-1，4-benzoquinone （12）。

其中，化合物1、2、5、12为首次在该属植物中分离得到。

（2）采用噻唑蓝（MTT）法对12个化合物进行抗SH-SY5Y细胞株、K562细胞株和Hel细胞株3种肿瘤细胞系细胞增殖活性的筛选，并对活性较好的化合物12进行Hoechst荧光染色和促凋亡作用的检测发现，化合物2、3、5、12具有一定的抗肿瘤活性，其中化合物12的抗肿瘤活性最为显著（SH-SY5Y细胞、Hel细胞、K562细胞的 IC50值分别为35.6、14.3、28.8 μmol·L-1）。

该研究结果进一步丰富了雷公藤的化学成分，发现了1个具有明显抗肿瘤活性的单体物质，为雷公藤的进一步开发提供了科学依据。

关键词：雷公藤，物质基础，分离纯化，结构鉴定，抗肿瘤活性中图分类号： Q946文献标识码： A文章编号： 1000-3142（2022）09-1514-08Main material basis and anti-tumor activitiesof Tripterygium wilfordii extractHU Dan1，2，3， DING Tongtong1，2，3， LI Jiang1，2， DENG Lulu1，2， WU Shuyan2， MU Shuzhen1，2*（ 1. State Key Laboratory of Functions and Applications of Medicinal Plants， Guizhou Medical University， Guiyang 550014， China;2. Key Laboratory of Chemistry for Natural Products of Guizhou Province and Chinese Academy of Sciences， Guiyang 550014，China; 3. School of Pharmaceutical Sciences， Guizhou Medical University， Guiyang 550025， China ）Abstract： In order to clarify the main material basis of Tripterygium wilfordii and evaluate its anti-tumor activity. This study used column chromatography， HPLC and other separation materials and techniques. The results were as follows：（1） A total of 12 compounds were isolated from 95% ethanol extract of T. wilfordii， and according to the physicochemical properties and spectral data，the structures of the compounds were identified as α，β-amyrenone （1），3β-acetoxyolean-12-en-28-oic acid （2）， antriptolactone （3），ω-hydroxypropioquaiacone （4）， 3-（4-hydroxy-3-methoxyphenyl）-propenal （5）， 3-methoxy-4-hydroxy phenylethanol （6），vanillin （7）， 3， 4， 5-trimethoxyphenol （8）， p-hydroxybenzoic acid （9）， p-hydroxybenzaldehyde （10）， vanillyl alcohol （11） and 2， 6-dimethxy-1， 4-benzoquinone （12）. Among them， compounds 1， 2， 5 and 12 were isolated from this genus for the first time. （2） In terms of biological activity， their anti-tumor activities in vitro were screened for the SH-SY5Y cell line， K562 cell line and Hel cell line by MTT method， and Compound 12 with better activity was subjected to Hoechst fluorescent staining to detect its pro-apoptotic effect. The results showed that compounds 2， 3， 5 and 12 had certain anti-tumor activity， of which Compound 12 had the most significant anti-tumor activity （IC50 values of SH-SY5Y，Hel，K562 were 35.6，14.3，28.8 μmol·L-1）. This study further enriches the chemical components of T. wilfordii， and discoveres a monomer substance with obvious anti-tumor activity， which provides a scientific basis for the further development of T. wilfordii.Key words： Tripterygium wilfordii， material basis， separation and purification， structure identification， anti-tumor activity雷公藤（Tripterygium wilfordii）是卫矛科（Celastraceae ）雷公藤属（Tripterygium ）植物，又名莽草、黄藤木、断肠草等，主要分布于中国长江中下游地区、西南地区以及韩国、日本等地（利剑余，2017）。

具杀虫活性雷公藤内生菌的分离与筛选从医用植物中筛选与开发具有农用价值的内生菌资源已成为研究热点。

内生菌具有广泛性与多样性的特点，它们的代谢产物结构新颖、生物活性多样，已受到医药学、植物病理学和微生物学等多个领域的重视。

雷公藤是中国传统医用植物，已从其根皮中分离得到多种具有医用及农用活性的化合物。

本研究以雷公藤为植物材料，对其内生菌进行较为系统的分离，并进行杀虫活性的筛选，以期得到能够产生较高杀虫活性的物质的菌株。

主要过程和结果如下：1.从雷公藤植物材料中共分离得到内生菌183株，其中真菌111株，放线菌23株，细菌49株。

真菌比例最大，占总分离菌株数的60.65%，细菌占总分离株数的26.78%，放线菌占总分离株数的12.57%。

雷公藤植株的不同组织部位的内生菌数量有较大的差异，雷公藤根中分离得到的内生菌最多(89株)，占总数的48.63%，叶部次之(72株)，占总数的39.35%茎部分离得到的内生菌最少(22株)，占总数的12.02%。

2.以卤虫和三龄淡色库蚊幼虫为试虫对183株内生菌的杀虫活性进行初步筛选，结果表明，卤虫24h 后死亡率在90%以上的菌株有11-3-8、11-3-37、11-6-58、11-6-76、11-6-73等34株菌株，占供试菌株的18.58%。

根部、茎部和叶部分别有19株、11株和3株，分别占活性菌株数的55.88%、32.35%和8.82%。

34株活性菌株中有33株真菌，1株放线菌；3龄蚊幼24h死亡率在70%以上的菌株有11-3-37、11-6-58、11-6-76、11-6-71等18株，占分离总株数的9.83%，其中根部和叶部有13和5株，分别占活性菌株的72.22%和27.78%，茎部无对三龄蚊幼有毒杀活性的菌株。

3.以蚜虫为试虫，采用浸虫浸液法对初筛得到的18株内生菌的杀虫活性进行复筛，筛选得到3株对蚜虫具有较高毒杀活性的菌株。

其中菌株11-6-76的胞内和胞外代谢物均具有较高的杀蚜活性，蚜虫的死亡率分别为78.64%和70.75%；菌株11-3-37和12-2-47的胞内代谢产物提取物对蚜虫的毒杀活性较高，蚜虫死亡率分别为82.74%和76.97%。

雷公藤甲素的提取方法总结1 雷公藤甲素简介雷公藤甲素（Triptolide, TPL）又称雷公藤内酯、雷公藤内酯醇，是从卫矛科植物雷公藤的根、叶、花及果实中提取的一种环氧二萜内酯化合物，与雷公藤碱、雷公藤次碱、雷公藤晋碱、雷公藤春碱、雷公藤增碱和雷公藤明碱等生物碱构成了雷公藤提取物的主要活性成分，白色针状晶体，难溶于水，易溶于甲醇、二甲基亚砜、无水乙醇、乙酸乙酯、氯仿等。

CAS #38748-32-2分子式：C20H24O6分子量：360.4保存: -20℃2 雷公藤及雷公藤甲素价格雷公藤8-10元/kg；雷公藤提取物5000-9000/g，雷公藤甲素含量不同价格不同；雷公藤甲素对照品800元/20mg（国产）2380元/10mg（进口）3 雷公藤提取分离方法3.1 回流法萃取药材粉末加入95%乙醇或石油醚加热回流提取三次，提取液回收溶剂得浸膏，浸膏用氯仿或者乙酸乙酯萃取，雷公藤甲素提取率0.00099%。

3.2 水提醇沉药材粉末加水回流提取，提取液加乙醇沉淀除杂质，回收乙醇得水溶液用乙酸乙酯萃取，得到粗总萜提取物。

3.3 超临界萃取雷公藤生药粉末，按1.0 mL /g 生药的比例加入乙醇作为夹带剂，混合均匀，将混合好的物料装入萃取釜中。

通过往复泵把二氧化碳加入到萃取釜中，使萃取釜的压力达到 30 MPa，温度40 ℃，维持 1 h。

收集物在40−50℃条件下，除去夹带剂乙醇溶液，并把得到的浸膏在真空干燥箱中充分干燥。

使用超临界CO2萃取技术提取雷公藤有效成分，甲素的得率为0.00115-0.00168 %。

3.4 液-液三相萃取柱层析采用乙醇回流提取雷公藤粉末后，在乙醇和磷酸二氢钠水溶液刚好出现两相时用乙酸乙酯/石油醚（V/V）为2∶8的体系做萃取剂来萃取雷公藤甲素。

乙酸乙酯萃取乳化很严重，且得到的浸膏杂质多，不利于后续处理。

此法改善了乙酸乙酯萃取的不足。

粗提浸膏进行硅胶柱层析，采用乙酸乙酯及石油醚洗脱，流出液浓缩，反复重结晶得雷公藤甲素。

雷公藤和昆明山海棠植物根中卫茅醇的提取方法及鉴别研究雷公藤Triptergiumwilfordii Hook．f．和昆明山海棠T．hypoglaucum (Levi．) Hutch．均属于卫茅科雷公藤属植物，药用部位为根，临床用于治疗类风湿性关节炎、红斑狼疮、多型肾炎及麻疯病等［1～3］，均有一定疗效，且两者在临床上疗效有许多相似点。

从植物形态上看，两者也十分相似，雷公藤被面为绿色，而昆明山海棠被面为粉白色［4，5］。

据文献报道，雷公藤根中主要含有生物碱，卫茅醇，二萜内酯，三萜类化合物等［6，7］。

两者目前国内取得重大进展的是抗生育及抗癌研究方面［8～11］。

本课题的研究目的是从雷公藤和昆明山海棠植物根中提取卫茅醇并鉴别比较，寻找雷公藤和昆明山海棠植物在临床疗效上具有相似性的原因，供临床研究参考。

1器材1.1 药物与试剂雷公藤根购自桂林市药材站；昆明山海棠根及合成卫茅醇由桂林市药检所提供。

乙醇为分析纯（成都科龙化工试剂厂），硅胶G（中国青岛海洋化工集团公司），其它试剂均为分析纯。

1.2 仪器SF-170型高速粉碎机（上海中药机械厂）；BSZ-2型自动双重蒸馏水器（上海博通）；TD-II全自动薄层制板器（上海科哲）；DHG101-7A电热鼓风式干燥箱（巩义市英峪予华仪器厂）；WFH-201B紫外透射反射仪（上海精科）。

2 方法及结果2.1 薄层层析板的制备取E.meick硅胶27.5 g，加0.5%（W/V）羧甲基纤维素钠的上清液80 ml，充分拌匀，加数滴乙醇，倒入清洁的两块3 mm厚的玻璃中间，另取一块边缘光滑的玻片，从一端刮向另一端而成，室温空气干燥后，置105℃烘箱活化30 min，然后放入干燥器中备用。

2.2 实验样品的制备取雷公藤根粉（或昆明山海棠根粉）分别置于连续提取器中，用95%乙醇［12］连续提取，提取液过滤，浓缩至小体积，冰箱放冷析出沉淀，过滤得桔黄色结晶（A），母液加水使沉淀物析出完全，过滤，滤并水洗至洗脱液无色止，抽干滤并干燥，得粉红色粉状沉淀物（B），过滤母液浓缩至小体积，使醇基本除尽，加入5%明胶溶液与鞣质沉淀，加至明胶鞣质复合物使之不再析出，加入95%乙醇使溶液含乙醇量达75%，放置冰箱过夜，过滤，滤液浓缩至干得样品（C），然后对各部A、B、C进行鉴别分析。

究雷公藤和昆明山海棠植物根中卫茅醇的提取方法及鉴别研究一. 研究背景雷公藤和昆明山海棠是两种常见的中药材，具有一定的药用价值。

这两种植物根中含有卫茅醇，卫茅醇是一种天然的四环三萜醇化合物，具有多种药理活性。

因此，对其提取方法和鉴别研究具有一定的研究意义。

二. 卫茅醇的提取方法1.乙醇提取法1.将干燥的中药材（雷公藤或昆明山海棠）粉碎，粉末过筛后加入95%乙醇中，提取4-5次；2.将提取液过滤，收集滤液；3.将滤液用旋转蒸发器浓缩至固体残渣，得到卫茅醇的提取物。

2.冷水提取法1.将中药材（雷公藤或昆明山海棠）粉末过筛后，在冷水（4℃）中浸泡24小时；2.将浸泡过的材料过滤，滤液收集；3.将滤液用旋转蒸发器浓缩至固体残渣，得到卫茅醇的提取物。

3.热水蒸馏提取法1.将粉碎干燥的中药材（雷公藤或昆明山海棠）置于水蒸气上加热蒸馏，使挥发油经冷凝收集器冷凝，收集冷凝水液，处理得到卫茅醇提取物。

4.微波辅助提取法1.将中药材（雷公藤或昆明山海棠）粉末过筛后，加入适量的水或乙醇溶剂中，一般按药材重量的5倍∼10倍的比例加入；2.将混合物置于微波设备中，调整微波功率和时间，进行微波提取；3.将微波提取液过滤，滤液收集；4.将滤液用旋转蒸发器浓缩至固体残渣，得到卫茅醇的提取物。

三. 卫茅醇提取物的鉴别研究1. 紫外光谱法卫茅醇的紫外光谱图谱在紫外区域呈现一个明显的吸收峰，一般位于λ=210∼270nm内。

利用紫外光谱法可以对卫茅醇提取物进行鉴别，从而确定提取物的纯度和含量。

2. 高效液相色谱法高效液相色谱法是一种分离技术，可以快速分离和检测样品中的多种成分。

利用高效液相色谱法可以对卫茅醇提取物进行鉴别和含量测定。

3. 熔点测定法卫茅醇的熔点为207℃，利用熔点测定法可以对卫茅醇提取物进行鉴别。

4. 薄层色谱法薄层色谱法是一种简单、快速、经济的分离方法，具有高效、准确、灵敏的优点。

利用薄层色谱法可以对卫茅醇提取物进行鉴别和纯度检验。

雷公藤红素提取来源及萃取方法的研究摘要：雷公藤红素是一种红色结晶粉末，是雷公藤多苷片等治疗类风湿疾病药物的主要成分，具有抗氧化，抗癌症新生血管生成以及抗类风湿作用等,是值得关注的天然活性产物。

本文首先介绍了雷公藤红素的药理作用，然后介绍了其提取来源和萃取方法，旨在通过对比得出雷公藤红素萃取的最佳方法。

关键词：雷公藤红素；提取；萃取一、雷公藤红素简介雷公藤是一种卫矛科雷公藤属植物，也是我国传统的中药材之一，常用于治疗类风湿性关节炎、肾病综合征、系统性红斑狼疮，并被广泛用作民间药物。

雷公藤红素是从雷公藤根皮部提取的一种醌甲氧基三萜化合物。

近年来，越来越多的报道显示雷公藤红素在体内和体外对多种癌细胞模型具有抗肿瘤活性，其中包括胃癌、肝癌、肾癌、非小细胞肺癌、结肠癌、胶质瘤和神经质瘤等。

雷公藤红素的单独或联合用药通过诱导细胞凋亡和自噬、诱导细胞周期停止、抗转移和抗肿瘤血管生成作用、抗炎症作用和抗氧化作用来抑制癌症的生物学进展。

然而，雷公藤红素的口服生物利用度较低，主要是因为其水溶性较差。

此外，使用高剂量的雷公藤红素与多种副作用相关，包括腹泻、头痛、恶心和不孕等。

二、雷公藤红素的药理作用雷公藤红素是一种天然的木栓烷型五坏三萜，为卫矛科植物雷公藤的有效活性成分之一，具有多种药理活性，是目前广受关注的热点天然产物。

雷公藤红素还具有抗类风湿性关节炎、抗肿瘤、抗氧化、神经元保护、降血糖等药理活性。

1. 抗炎及免疫抑制作用研究证明，雷公藤红素具有免疫调节和抗炎作用。

雷公藤内酯治疗可降低TNF-α诱导的磷酸化JNK的表达，减少RAFLS的迁移，还可能参与抑制TLR4诱导的NF-κB/IL-1β免疫通路，抑制NF-κB/TNF-α/VCAM-1炎症通路，调节TGF-β1/α-SMA/波形纤维化通路，从而对类风湿关节炎，扩张性心肌病起到治疗作用。

雷公藤作为免疫抑制剂广泛应用于临床，对治疗类风湿关节炎、系统性红斑狼疮、过敏性紫癜、肾小球疾病、白塞病等自身免疫性疾病具有良好疗效。

雷公藤乙酸乙酯部位和水部位化学成分的分离与鉴定
雷公藤（Tripterygium wilfordii）是一种被广泛应用于中医药领域的药用植物，它
的乙酸乙酯部位和水部位具有重要的药用活性。

在这里，我们将讨论雷公藤乙酸乙酯部位
和水部位的化学成分分离与鉴定。

乙酸乙酯部位的化学成分分离可以通过以下步骤进行：
1. 取得雷公藤乙酸乙酯部位样品，并进行粉碎和研磨，得到细粉末。

2. 将细粉末与适量的乙酸乙酯混合，进行浸提。

可以采用常温或者回流浸提的方式，使得部分药用成分溶解于乙酸乙酯中。

3. 将浸提液进行过滤，去除杂质。

4. 将过滤液进行蒸发，得到乙酸乙酯提取物。

5. 对乙酸乙酯提取物进行柱层析或者高效液相色谱（HPLC）等手段进行进一步分离。

6. 通过质谱、紫外-可见光谱、核磁共振等仪器进行化学成分的鉴定和结构解析。

雷公藤乙酸乙酯部位的化学成分主要包括雷公藤醇、雷公藤苷、双马尼龙酮等。

这些
成分具有抗炎、免疫抑制、抗肿瘤等多种活性，适用于类风湿性关节炎、自身免疫性疾病
等疾病的治疗。

对于雷公藤水部位的化学成分分离和鉴定可以采取类似的步骤。

水部位的提取可以采
用水煎剂、浸泡提取等方式，得到水部位提取物。

然后可以通过柱层析、HPLC等手段进行分离，并通过仪器手段进行成分的鉴定和结构解析。

雷公藤乙酸乙酯部位和水部位的化学成分的分离与鉴定是通过提取、分离、鉴定等多
个步骤完成的。

这些成分具有重要的药用活性，对于相关疾病的治疗具有重要的临床价
值。