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1. 样品制备。
将待分离的样品溶解或悬浮在合适的溶剂中。
色谱分离过程分配系数 \分配比分配过程分配平衡-分配系数m s C C K 分配系数：在一定的温度和压力下，组分在两相间达到分配平衡时，组分在固定相中的浓度C s 与在流动相中的浓度C m 之比。
K 值大的组分在固定相中滞留时间长，后流出色谱柱；反之，K 值小的组分先流出色谱柱。
混合物中各组分的分配系数相差越大，越容易分离。
ms W W k 分配比（容量因子）：在一定的温度和压力下，组分在两相间达到分配平衡时，组分在固定相中的质量W s 与在流动相中的质量W m 之比。
βk V V n nK sm m s V n V n m m s s =∙===m s c c V s ：色谱柱中固定相的体积；V m ：色谱柱中流动相的体积β：称为相比；保留值保留值保留时间保留体积相对保留值保留体积☐保留体积 V R 从进样开始到色谱峰最大值出现时所通过的流动相的体积 ☐死体积 V M 不被保留的组分通过色谱柱所消耗的流动相体积☐调整保留体积 保留体积减去死体积Rc R t F V ⋅=Mc M t F V ⋅=MR R V V V -='保留值与分配比的关系MR t tk '=MR V Vk '=相对保留值或称为选择性因子相对保留值α组分在色谱体系中的平衡分配差异；其值越大，越容易分离。
注意：相对保留值是调整保留值之比''''AB M A M B A B t t t t t t k k ===α。
亲和柱色谱分离操作过程
亲和柱色谱分离操作是一种基于生物分子之间特异性相互作用的柱色谱技术。
其操作流程一般包括以下步骤：
1. 制备亲和柱：选择合适的亲和配体，将其固定在柱内固定相上，形成亲和柱。
2. 样品前处理：将待分离的样品经过初步纯化和富集处理，去除杂质和无关物质。
3. 柱填充与平衡：将样品溶液加载到亲和柱内，让样品中的生物分子与亲和配体发生特异结合。
之后进行洗脱缓冲液的平衡，以平衡样品中其他成分的作用。
4. 样品进样：将平衡好的样品缓冲液通过进样口进入亲和柱。
5. 亲和分离：样品中的某些生物分子将与亲和配体发生特异性结合，其他无关物质则通过柱床流出。
6. 洗脱：将洗脱缓冲液通过柱床，洗脱已经结合在亲和配体上的生物分子。
洗脱缓冲液的选择要根据亲和配体和样品中生物分子之间的特异性结合条件而定。
7. 收集洗脱物：收集洗脱液中包含目标生物分子的洗脱物。
8. 分析检测：对收集的洗脱物进行进一步分析鉴定，以确认分离目标生物分子的纯度和浓度。
需要注意的是，具体的操作步骤和条件会根据不同的亲和配体、样品及分析需求而有所不同。
亲和柱色谱分离操作通常需要根据实际情况进行优化和调整。
使用化学技术进行色谱分析的步骤色谱分析是一种常见的化学分析技术，通过分离化合物混合物中的各种成分，可以快速准确地确定样品的组成和含量。
本文将介绍使用化学技术进行色谱分析的步骤，帮助读者更好地理解这一分析方法。
第一步：准备样品进行色谱分析的前提是有足够的样品进行分析。
样品的准备需要考虑到分析的目的和要求。
首先，样品需要被溶解或者提取出来，以得到可直接进行分析的适当溶液。
此外，还需要注意样品的保存和处理条件，避免样品的污染和损坏。
第二步：选择合适的色谱柱色谱柱是使用色谱分析的核心部件，它起到分离不同成分的关键作用。
在选择色谱柱时，需要根据样品的特性和分析目的进行选择。
比如，对于水溶性的样品可以选择反相色谱柱，而对于非极性的样品则需要选择正相色谱柱。
第三步：优化色谱条件色谱分析中的关键是选择合适的分离条件。
这包括流动相的选择、流速的确定、柱温的控制等。
流动相的选择是根据样品的性质和分析要求来确定的，可以是有机溶剂、水或者其它溶剂的混合物。
流速直接影响分析的速度和分离的效果，需要根据样品的复杂程度进行合理的优化。
柱温的控制也是一个重要的因素，高温可以提高分析的速度，但可能会降低分离的效果。
第四步：样品进样与分离样品进样是将待分析的样品导入色谱柱的过程。
分离过程主要包括两个步骤：吸附和解吸。
吸附是样品组分分别被固定相吸附，而解吸是样品组分在移动相中被解吸出来，并随流动相一起通过柱子。
这个过程是通过流动相的推动来实现的，不同组分的分离是因为它们与固定相的相互作用力不同。
第五步：检测和数据处理经过分离的各个组分将会依次通过色谱柱，并进入检测器。
常用的检测器包括紫外-可见光谱仪、荧光光谱仪和质谱仪等。
检测器通过检测分离出的各个组分的信号，并将信号转化为电信号。
这些电信号可以由计算机进行处理和分析，得到分析结果。
总结：色谱分析是一种广泛应用于化学和生化领域的分析技术。
通过准备样品，选择合适的色谱柱，优化色谱条件，进行样品进样与分离，最终通过检测和数据处理，可以得到准确、可靠的分析结果。
College of Chemical Engineering, Huaqiao UniversityPharmaceutical Separation Engineering 第十章色谱分离过程Chromatography)§10-1概述§10-2 色谱流出曲线§10-3 色谱法基本原理§10-4 分离度及色谱分离方程§10-5 色谱定性分析§10-6 色谱定量分析§10-7 气相色谱简介§10-8 液相色谱简介College of Chemical Engineering, Huaqiao UniversityPharmaceutical Separation Engineering§10-1 概述化学分析方法的基本要求是其选择性要高。
即，在分析过程中，待测物与潜在的干扰物的分离是最为重要的步骤！20 世纪中期，大量采用一些经典的分离方法：沉淀、蒸馏和萃取现代分析中，大量采用色谱和电泳分离方法。
迄今为止，色谱方法是最为有效的分离手段！其应用涉及每个科学领域。
College of Chemical Engineering, Huaqiao UniversityPharmaceutical Separation Engineering1、历史：1906年，俄国植物学家Mikhail Tswett 最先发明。
他采用填充有固体CaCO 3细粒子的玻璃柱，将植物色素的混合物(叶绿素和叶黄素（chlorophylls & xanthophylls)加于柱顶端，然后以溶剂（石油醚）淋洗，被分离的组份在柱中显示了不同的色带，他称之为色谱chromatography (希腊语中“chroma”=color; “graphy”=write ) 。
色谱柱(Column)：填充有固体CaCO3细粒子的玻璃柱；固定相(stationary )：固体CaCO3细粒子；流动相(mobile)：石油醚50年代，色谱发展最快，目前色谱法已成为一门专门的学科，无论是在理论、技术还是仪器、应用等方面都有极大的（一些新型色谱技术的发展；复杂组分分析发展的要求）1937-1972年，15年中有12个Nobel Prize 是有关色谱研究的！College of Chemical Engineering, Huaqiao UniversityPharmaceutical Separation Engineering1906年由俄国植物学家Tsweet 创立植物色素分离。
