色谱分离过程最终版 ppt课件

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色谱法叶绿素分离实验PPT课件

五、检测技术
检测灵敏度
1．系统适用性试验比移值
分离效能
第37页/共48页
2．鉴别
等浓度对照法----同板---大致同位、同大、同色泽
等体积混合法----斑点单一、紧密结构相似对比法-----Rf不同或两斑点
杂质对照品法 3．杂质检查样品溶液的自身稀释对照法
二者合用法
第38页/共48页
4．定量方法（1）目视比色法 -----半定量法（精度±10%）（2）斑点洗脱法
第11页/共48页
• （2）如何选择流动相？
最佳方案总是实验确定
第12页/共48页
❖想一想在吸附色谱
中，以硅胶为固定相，当用三氯甲烷为流动相时，样品中某些组分保留时间太短，若改用三氯甲烷–甲醇（1:1）时，则样品中各组分的保留时间是变长，还是变得更短？为什么？
4．吸附柱色谱操作技术
• （1）装柱
• A.质量要求
装柱之前，先将空柱洗净干燥，再将空柱垂直固定在铁架台上。如果色谱柱下端没有砂芯横隔，就取一小团脱脂棉，用玻璃棒将其推至柱底，再在上面平铺上一层厚0.5~1cm的洗过、干燥石英砂，有助于分离时色层边缘整齐，加强分离效果。柱的长度与直径比一般为10 ~ 20:1。色谱柱的填装要均匀，不能有气泡。
(3）特点
消除系统误差，值的重复性和可靠性都比好
Rr
Rf
第23页/共48页
3．分离度
（1)定义衡量薄层色谱分离效果的重要指标，是指相邻两斑点中心至原点的距离之差与两斑点平均径向宽度（径向宽度是指斑点沿着展开方向的宽度）的比值
(2）计算方法
R l2 l1 2(l2 l1 ) (W1 W2 ) / 2 W1 W2

《色层分离法》PPT课件_OK

31
（6）纤维素
• β-1,4 相连的D-葡萄糖（偶而有1，6 键合）线性天然高聚物。
• （1）亲水
• （2）微晶与无定型两部分组成，缺乏孔度
• 大孔珠状纤维素
• （1）高孔度
• （2）高机械强度
• （3 ) 亲水性强
应用：离子交换分离蛋白质介质
32
（7）聚丙烯酰胺
性质：（1）丙烯酰胺与交联剂N, N’-甲叉双丙烯酰胺共聚。
6
二、层析法的分类
• ⑴ 根据层析机理不同的划分
吸附层析法 —— 吸附剂为固定相，利用吸附能力
强弱的差异来分离
分配层析法 ——
利用组分在固定相和流动相间分配系数的差异来分离
离子交换层析 ——
离子交换剂作固定相，利用离子交换亲和力的差异来分离
凝胶层析法 ——
凝胶作固定相，利用对分子大小7 的筛分作用来分离
• (2)功能团极性：有机分子基本母核相同时，取代基极性增强，整个分子极性增强；极性基团增多，整个分子极性增强。分子中双键多，吸附力强；共轭双键多，吸附力强。分子形成内氢键，吸附力弱于不能形成内氢键的化合物。
34
烷烃（—CH3 ，—CH2 —） ﹤烯烃（—CH= CH—） ﹤醚类（—OCH3，—OCH2—） ﹤硝基化合物（—NO2） ﹤二甲胺 ﹤酯类（—COOR）﹤酮类（ C=O） ﹤醛类（—CHO） ﹤硫醇（—SH） ﹤胺类（—NH2） ﹤酰胺 ﹤醇类（—OH） ﹤酚类（Ar—OH）﹤羧酸类（—COOH）
些物质通过某种过程有选择地阻留了液体内的某些组分。”
——马丁（A. J. P. Martin）（英）
5
6.1 概述
一、层析法的条件
层析法应具备的因素或条件是： 1. 具有两相

色谱分离过程最终版ppt课件

R
)2 16( tR )2
n=L/H
Y1/ 2
其中L为色谱柱的柱长； H为理论板高度。
Wb
;.
24
考虑到组分在死时间内不参与柱内分配，用调整保留时间代替保留时间，得有效塔板数和有效塔板高度：
n 5.54( tR )2
Y1/ 2
n有效
5.54(
t
' R
)2
Y1/ 2
16(
t
' R
)2
Wb
H 有效
;.
45
高效液相色谱仪
✓ 高效液相色谱是20世纪60年代末发展的一种以液体为流动相的色谱技术。
✓ 特点如下： ✓ 高压一般可达（150~350）×105 Pa ✓ 高速一般可达1~10mL/min ✓ 高效 ✓ 高灵敏度 ✓ 分析时使用样品少一般仅几毫升
;.
46
高效液相色谱仪流程（图）
1．贮液罐（滤棒，可滤去颗粒状物质） 2．高压泵（输液泵） 3．进样装置 4．色谱柱——分离 5．检测器——分析 6．废液出口或组分收集器 7．记录装置
❖ 调整保留时间（t R ＇）：t R＇= t R－t M
;.
21
❖ 分离度
❖ 峰宽Wb：色谱峰拐点处的两条切线与基线的两个交点之间的距离；
❖ 半峰宽Y1/2：峰高一半处对应的峰宽，为2.35 ；
❖ 相邻色谱峰峰顶之间的距离除以此二色谱峰的平均宽度。用R表示：
t t R
r2 r1
2tr
;.
32
优点： ❖ 设备简单、操作方便、运行费用低； ❖ 分离时间短，工作效率高； ❖ 展开剂选择范围广，展开方式多样； ❖ 显色方便，检测手段丰富； ❖ 既可分析，又可制备； ❖ 试样一般不需要经过严格预处理即可分离。

《色谱分离法》课件

按分离机制分类
吸附色谱法
利用固体吸附剂对不同组分的吸附能力差异进行分离。
分配色谱法
利用固定相和流动相之间的分配平衡实现分离。
离子交换色谱法
利用离子交换剂对不同离子的亲和力差异进行分离。
空间排阻色谱法
利用凝胶的分子筛效应，根据分子大小进行分离。
03 色谱分离法的操作流程
CHAPTER
样品前处理
度法、荧光光谱法等。
检测灵敏度设置
根据待分离物质的浓度设置合适的检测灵敏度，以提高检测准确
性。
收集结果
根据检测结果将各组分分别收集起来，并进行后续处理和利用。
04 色谱分离法的优缺点
CHAPTER
优点
分离效果好
色谱分离法可以将混合物中的各组分进行高效分离，得到较为纯净的单一组分。
适用范围广
在药物分离纯化中的应用
药物分离纯化是色谱分离法应用的重要领域之一。通过色谱分离法，可以将混合药物中的有效成分与杂质进行分离，提高药物的纯度和药效。
在药物分离纯化中，色谱分离法可以用于中药、西药、生物药物等的分离纯化，如大黄素、紫杉醇、蛋白质等物质的分离纯化。
在食品检测中的应用
01
色谱分离法在食品检测中也有广泛应用，主要用于食品中农药残留、添加剂、有害物质的检测。
1950年代
出现了气相色谱法，利用气体作为流动相，广泛应用于气体
和挥发性化合物的分析。
1960年代
出现了高效液相色谱法，利用高分离效能的色谱柱和高压泵，提高了分离速度和灵敏度。
色谱分离法的应用领域
医药工业
用于药物生产和质量控制，以及生物样品的分离和纯化。
食品工业

高效液相色谱分析(主要分离类型与原理)课件

高效液相色谱分析(主要分离类型与原理)课件
• 高效液相色谱分析简介 • 高效液相色谱的主要分离类型 • 高效液相色谱的分离原理 • 高效液相色谱分析实验操作与注意事项 • 高效液相色谱分析的应用实例
目录
Part
01
高效液相色谱分析简介
高效液相色谱分析的定义
高效液相色谱分析（HPLC）是一种分离和检测复杂样品中各种组分的方法。它利用不同物质在固定相和流动相之间的分配平衡来实现分离。
THANKS
感谢您的观看
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
Part
03
高效液相色谱的分离原理
高效液相色谱的固定相与流动相
固定相
是色谱柱中的填充物，用于吸附和固定样品中的组分。常见的固定相包括硅胶、氧化铝、活性炭等。
流动相
是携带样品通过色谱柱的液体或气体，与固定相相互作用，使各组分得以分离。
高效液相色谱的分离过程
样品在流动相中溶解并被带入色谱柱。
实验操作前的准备
实验器材与试剂准备
确保所需的色谱柱、检测器、流动相、样品等都已准备好，并确保试剂的质量和纯度。
实验条件设定
仪器校准与维护
确保色谱仪器的准确性和稳定性，进行必要的校准和日常维护。
根据实验需求，设定合适的流动相比例、流速、检测波长等参数。
实验操作步骤与要点
样品处理
根据实验要求，对样品进 1
Part
02
高效液相色谱的主要分离类型
吸附色谱
STEP 01
原理
STEP 02
应用
利用固定相吸附剂对不同组分的吸附能力差异实现分离。
STEP 03
特点
固定相的吸附能力可以通过改变流动相的组成进行调节。

色谱分析法PPT课件

柱或平板上、与流动相互不相溶的固定相表面。样品中各组份在两相中进行不同程度的作用。与固定相作用强的组份随流动相流出的速度慢，反之，与固定相作用弱的组份随流动相流出的速度快。由于流出的速度的差异，使得混合组份最终形成各个单组份的“带(band)”或“区(zone)”，对依次流出的各个单组份物质可分别进行定性、定量分析。
a. 死时间(Dead time, t0) ：不与固定相作用的物质从进样到出现峰极大值时的时间，它与色谱柱的空隙体积成正比。由于该物质不与固定相作用，因此，
其流速与流动相的流速相近。据 t0 可求出流动相平均流速 u
u
柱长死时间
L t0
.
5
b. 保留时间tr：试样从进样到出现峰极大值时的时间。它包括组份随流动相
是最为有效的分离手段！其应用涉及每个科学领域。历史：1903年，俄国植物学家Mikhail Tswett 最先发明。他采用填充有固
体CaCO3细粒子的玻璃柱，将植物色素的混合物(叶绿素和叶黄素 chlorophylls & xanthophylls)加于柱顶端，然后以溶剂淋洗，被分离的组份在柱中显示了不同的色带，他称之为色谱 (希腊语中
V0 t0Fco
其中，Fco为柱出口的载气流速（mL/min)，其值为：
FcoF0 TTcr
•
p0 pw p0
F0-检测器出口流速；Tr-室温；Tc-柱温；p0-大气压；pw-室温时水蒸汽压。
.
6
e. 保留体积Vr：指从进样到待测物在柱后出现浓度极大点时所通过的流动相
的体积。
V0 tr •Fco
f. 调整保留体积：V 某r' 组份的保留体积扣除死体积后的体积。
.
3
色谱分离过程（色谱图）

色谱法的基本原理PPT课件

（三）离子交换色谱法
✓ 要求：
固定相→离子交换树脂
流动相→水为溶剂的缓冲溶液
被分离组分→离子型的有机物或无机物
ห้องสมุดไป่ตู้✓ 分离机制见图示
✓ 阳离子交换树脂 RSO3-H+ + X+ → RSO3-X+ + H+
固定离子可交换离子待测离子
选择性系数
K S [ [R R3 3 S S H X O O ] ]S S[ [H X ] ]m m [R [R3 S 3 H S X O ]O ] S S[[ H X ]] m
色谱图相关术语
.峰面积(Peak Area): .标准偏差(σ)(Standard Error): .拖尾峰(Tailing Peak): .前伸峰(Leading Peak):
.鬼峰,假峰(Ghost Peak):
色谱图相关术语
. 基线(Baseline): . 基线飘移(Baseline Drift): . 基线噪声(N) (Baseline Noise): . 谱带扩展(Band Broadening):
✓ 分离机制见图示
狭义分配系数
K Cs Xs Vs Cm Xm Vm
Cs为溶质分子在固定的相浓中度 Vs为固定相的体积 Cm为溶质分子在流动的相浓中度 Vm为流动相的体积
注：K与组分的性质、流动相的性质、固定相的性质以及柱温有关 next
图示
✓ 分离机制利用组分在流动相和固定相间溶解度差别实现分离连续萃取过程 back
注：Ka与组分的性质、吸附剂的活性、流动相的性质及温度有关 next
图示
✓ 分离机制：各组分与流动相分子争夺吸附剂表面活性中心利用吸附剂对不同组分的吸附能力差异而实现分离吸附→解吸→再吸附→再解吸→无数次洗脱→分开 back

《液相色谱分离法》课件

3 后续学习和深入研
究的建议
建议进一步学习和掌握液相色谱的原理和应用，以及最新的技术进展，为研究和实验提供更丰富的分析手段。
数据的处理与分析
数据的处理与分析包括峰的识别、峰面积的计算和结果的解释，以完成定量和定性分析。
应用和拓展
1 液相色谱在实际应用中的常见场景 2 液相色谱的技术进展和未来发展
方向
液相色谱广泛应用于医药、食品、环境、
化工等领域，例如药物检测、食品安全监
液相色谱在仪器设备、分离介质和检测方
测和污染物的分析。
手性色谱
手性色谱是一种用于分离和鉴定手性化合物的方法，常用于药物合成和生化分析。
仪器设备
1 液相色谱仪的基本构成
2 液相色谱仪的使用方法和操作流程
液相色谱仪由进样系统、色谱柱、检测器和数据处理软件等组成，确保分离和检测的可靠性和准确性。
液相色谱仪的使用方法包括样品准备、进样、运行方法设置和数据分析等步骤。
法等方面不断发展，为更高效、更精确的
分离和分析提供了新的可能。
总结
1 液相色谱分离法的
优缺点
液相色谱分离法的优点包括分离效果好、选择性高和适用性广泛，缺点是分离时间长和一些化合物不易分离。
2 液相色谱在实验中
的重要性
液相色谱在分离和定量分析方面具有重要的应用价值，是科学研究和实验室工作中不可或缺的技术手段。
《液相色谱分离法》PPT课件
这个PPT课件将介绍液相色谱分离法的基本原理、仪器设备和实验步骤，以及其在实际应用中的应用场景和技术进展。同时还探讨了液相色谱分离法的优缺点，以及深入研究的建议。
什么是液相色谱分离法
液相色谱分离法是一种基于样品在液体流动相与固定相之间的分配行为进行物质分离的技术。它广泛应用于药物分析、食品安全监测和环境污染检测等领域。

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吸附色谱
凝胶过滤色谱
大孔树脂色谱
离子交换色谱
色谱分离过程最终版
吸附色谱
✓ 物理吸附：硅胶、氧化铝、活性炭为吸附剂进行的吸附色谱；
✓ 化学吸附：黄酮等酚酸性物质被氧化铝吸附、生物碱被酸性硅胶吸附等；
✓ 半化学吸附：聚酰胺与黄酮类、醌类等酚性化合物之间的氢键吸附，吸附力较弱，介于物理吸附与化学吸附之间。
色谱分离过程最终版
常用的固定相（色谱柱填料）
✓ 硅胶
✓ 凝胶
✓ 活性炭
✓ 纤维素衍生物
✓ 离子交换树脂
✓ 环糊精
✓ 大孔吸附树脂
✓ 聚丙烯酰胺
✓ 氧化铝
色谱分离过程最终版
✓ 硅胶：应用广泛，适合各类成分
✓ 氧化铝：主要用于碱性或中性亲脂性成分，如生物碱、甾体、萜类等
✓ 活性炭:用于水溶性氨基酸、糖类及苷类
成由许多小段组成。在每一小段内，一部分空间被固定相占据，而另一部分空间充满流动相。组分随流动相进入色谱柱后，就在两相间进行分配。在每一个塔板内组分分子在固定相和流动相之间形成平衡，随着流动相的流动，组分分子不断从一个塔板移动到下一个塔板，并不断形成新的平衡。一个色谱柱的塔板数越多，其分离效果就越好。
✓ 聚酰胺：主用于酚类、醌类如黄酮类、蒽醌类及鞣质等成分
色谱分离过程最终版
3.色谱的分类 ✓ 按两相状态气固色谱、气液色谱、液固色谱、液液色谱
按固定相几何形式柱色谱、纸色谱、薄层色谱
按分离原理吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱、凝胶色谱、排阻色谱、亲和色谱
色谱分离过程最终版
色谱分离法
分配色谱
✓ 两年后他发表了他的研究成果“一种新型吸附现象及其在生化分析上的应用”，提出了应用吸附原理分离植物色素的新方法，在这一方法中把玻璃管叫做“色谱柱”，碳酸钙叫做“固定相”，石油醚叫做 “流动相”。三年后，他将这种方法命名为色谱法（Chromatography）。
色谱分离过程最终版
✓ 色谱法于二十世纪五十年代之后飞速发展，并发展出一个独立的三级学科-色谱学。
叫展开。
色谱分离过程最终版
分离原理
❖ 色谱过程的本质是待分离物质分子在固定相和流动相之间分配平衡的过程，不同的物质在两相之间的分配会不同，这使其随流动相运动速度各不相同，随着流动相的运动，混合物中的不同组分在固定相上相互分离。
❖ 不同组分在色谱分离过程中分离情况取决于各组分在两相间的分配系数、吸附能力、亲和力等的差异。
✓ 常用的极性吸附剂：硅胶、氧化铝。 ✓ 常用的非极性吸附剂：活性炭。
色谱分离过程最终版
凝胶过滤色谱
凝胶过滤色谱（凝胶渗透色谱、分子筛滤过色谱、排阻色谱）
原理：分子筛作用
葡聚糖凝胶（sephadex G）羟丙基葡聚糖凝胶(sephadex LH-20)
色谱分离过程最终版
色谱分离过程最终版
离子交换树脂法
色谱分离过程最终版
4.色谱分离过程理论基础-保留值
v保留值是色谱过程的基本热力学参数之一。在相同的操作条件下，不同的物质有各自固有的保留时间，因此它也是色谱定性的基本依据。
❖ 保留时间（t R）：从进样到某个组分的色谱峰顶点之间的时间间隔
❖ 死时间（t M）：不被固定相滞留的组分从进样开始、通过色谱柱、到出现峰最大值所需要的时间。
4.色谱分离过程理论基础
❖ 随着色谱技术的发展，为了解释色谱分离现象，指导色谱技术的发展，许多研究者对色谱基础理论进行了不懈的研究，提出了多种色谱过程的理论。主要有速率方程理论、平衡色谱理论、塔板理论、轴向扩散理论。
色谱分离过程最终版
4.色谱分离过程理论基础
❖ 塔板理论 ❖ 由马丁（Martin）和欣革（Synge）最早提出 ❖ 将色谱柱比作蒸馏塔，把一根连续的色谱柱设想
色谱分离
色谱分离谱的分类色谱分离过程基础理论色谱技术的应用
色谱分离过程最终版
精品资料
1.概述-发展
✓ 关于色谱分离方法的研究始于1901年，俄国植物学家 Tswett（茨维特）在研究植物叶子的组成时，用碳酸钙填充竖立的玻璃管，以石油醚洗脱植物色素的提取液，经过一段时间洗脱之后，植物色素在碳酸钙柱中实现分离，由一条色带分散成三种颜色的6个色带。
v 工艺流程：树脂预处理→树脂上柱→药液上柱→树脂的解吸→树脂的清洗、再生。
色谱分离过程最终版
色谱分离过程最终版
分配色谱原理：被分离成分在固定相和流动相之间的
分配系数不同。
正相分配色谱：流动相极性< 固定相极性反相分配色谱：流动相极性>固定相极性
HPLC、MPLC、LPLC
色谱分离过程最终版
色谱分离过程最终版
2.色谱分离过程的基本原理
v 色谱分离的几个概念 v 所有的色谱分离操作均分为：装柱、上样、层
析、洗脱。 v 其中的固定不动的相，称为固定相； v 携带试样混合物流过此固定相的流体，称为流
动相； v 作为流动相的液体或气体，称为洗脱剂； v 洗脱时从柱中流出的溶液，称为洗脱液； v 加入洗脱剂使各组分分层的操作，叫层析，也
原理：可交换离子与树脂上的交换基团进行离子交换，并被吸附，用适当的溶剂从柱上洗脱下来，实现物质的分离。
吸附规律阳离子交换树脂—分离碱性成分阴离子交换树脂—分离酸性成分
色谱分离过程最终版
大孔吸附树脂
v 吸附性和分子筛原理相结合以苯乙烯为母体，二乙烯苯为交联剂（非极性）
v 吸附力：范德华力或氢键
✓ 1952年英国科学家阿切尔·马丁、理查德·辛格因发明了分配色谱法而共同获得诺贝尔化学奖，此外色谱分析方法
还在12项获得诺贝尔化学奖的研究工作中起到关键作用。
色谱分离过程最终版
1.概述-色谱分离的特点
✓ 应用范围广复杂混合物，有机同系物，异构体，手性异构体。气相色谱：沸点低于400℃的各种有机或无机试样的分析。液相色谱：高沸点、热不稳定、生物试样的分离分析。
✓ 分离效率高若用塔板理论数来表示色谱柱的效率，每米柱长可达几千至几十万的塔板数，特别适用于极复杂混合物的分离，且通常收率、产率、和纯度都较高。
✓ 操作模式多样可通过选择不同的操作模式，以适应不同样品的分离。
✓ 灵敏度高可以检测出μg.g-1(10-6)级甚至ng.g-1(10-9)级的物质量。