饮料中金黄色葡萄球菌doc
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西瓜汁中分离出金黄色葡萄球菌对巴南区食源性致病菌的污染情况进行监测,了解食品中致病菌污染状况,为食源性疾病的检测、预防、控制提供科学依据。
方法依据食品安全国家标准食品微生物学检验GB4789-2010 和2010年食源性致病菌监测工作手册进行。
结果2010-08巴南区在餐饮食品西瓜汁中分离出1株金黄色葡萄球菌。
结论重庆市巴南区餐饮食品西瓜汁中存在致病菌污染。
金黄色葡萄球菌广泛分布于空气、土壤、水及食具中,人和动物有较高的带菌率,健康人咽喉、鼻腔、皮肤、头发等常有本菌存在,故易于经手或空气污染食品。
主要引起局部化脓性感染,也可引起肺炎、伪膜性肠炎,心包炎、甚至败血症等全身感染。
因由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒事件较多,是卫生部门重点检测项目。
1 材料与方法1.1 材料1.1.1 样品来源来源于食源性致病菌监测抽检样品中的某餐馆餐饮食品西瓜汁。
1.1.2 标准菌株来源①金黄色葡萄球菌标准菌株ATCC-29213由重庆市疾控中心提供。
②表皮葡萄球菌菌株由本中心微生物实验室提供。
1.1.3 培养基及试剂7.5%NaCl肉汤、Baird-Parker琼脂、血平板由杭州天和微生物试剂有限公司提供,有效期内使用。
1.2 检验方法参照食品安全国家标准食品微生物学检验GB4789-2010[1]和2010年食源性致病菌监测工作手册[2]。
2 结果2.1 检测结果西瓜汁按卫生标准,开展大肠菌群计数、沙门菌、金黄色葡萄球菌检测。
检测结果为大肠菌群计数240MPN/ml、未检出沙门菌、检出金黄色葡萄球菌。
2.2 金黄色葡萄球菌的分离和鉴定2.2.1 形态及镜检在7.5%NaCl肉汤中呈混浊生长,在Baird-Parker琼脂平板上发现2.5mm 大小的菌落,颜色呈灰色或黑色。
边缘为淡色,周围为一混浊带,在其外层有一透明圈。
在血平板上发现菌落较大,圆形、光滑凸起、湿润、金黄色菌落,菌落周围可见透明溶血圈。
革兰染色镜检为革兰阳性球菌、呈葡萄串状排列。
FSPYL030 饮料金黄色葡萄球菌的检验 酶试验法 F_SP_YL_030饮料—金黄色葡萄球菌的检验—酶试验法 1 范围本方法适用于饮料中金黄色葡萄球菌的检验。
2 原理饮料样品处理后,经增菌及分离,采用血浆凝固酶试验判定结果并计数。
3 试剂3.1胰酪胨大豆肉汤3.1.1 成分胰酪胨(或胰蛋白胨) 17g植物蛋白胨(或大豆蛋白胨) 3g氯化钠100g磷酸氢二钾 2.5g葡萄糖 2.5g蒸馏水1000mL3.1.2 制法将上述成分混合,加热并轻轻搅拌至完全溶解,分装后,于121℃下高压灭菌15min,溶液的最终pH为7.3±0.2。
3.2 7.5%氯化钠肉汤3.2.1 成分蛋白胨 10g牛肉膏 3g氯化钠 75g蒸馏水 1000mL3.2.2 制法将上述成分加热溶解,校正pH为7.4,分装试管,于121℃下高压灭菌15min。
3.3 血琼脂平板3.3.1 成分pH 7.4~7.6豆粉琼脂 100mL脱纤维羊血(或兔血) 5~10mL3.3.2 制法加热溶化琼脂,冷至50℃,以灭菌手续加入脱纤维羊血,混匀,倾注平板。
亦可分装灭菌试管,置成斜面。
亦可用其他营养丰富的基础培养基配制血琼脂。
3.4 Baird-Parker琼脂平板3.4.1 成分胰蛋白胨 10g牛肉膏 5g酵母膏 1g丙酮酸钠 10g甘氨酸 12g氯化锂(LiCl・6H2O) 5g琼脂 20g蒸馏水 950mL3.4.2 增菌剂的配法30%卵黄盐水50mL与除菌过滤的1%亚碲酸钾溶液10mL混合,保存于冰箱内。
3.4.3 制法将各成分加到蒸馏水中,加热煮沸至完全溶解。
冷至25℃,校正pH为7.5。
分装每瓶95mL,于121℃下高压灭菌15min。
临用时加热溶化琼脂,冷至50℃,每95mL加入预热至50℃的卵黄亚碲酸钾增菌剂5mL,混匀后倾注平板。
培养基应是致密不透明的。
使用前在冰箱储存不得超过48h。
3.5 肉浸液肉汤3.5.1 成分绞碎牛肉 500g氯化钠 5g蛋白胨 10g磷酸氢二钾 2g蒸馏水 1 000mL3.5.2 制法将绞碎之去筋膜无油脂牛肉500g加蒸馏水1000mL,混合后放冰箱过夜,除去液面之浮油,隔水煮沸半小时,使肉渣完全凝结成块,用绒布过滤,并挤压收集全部滤液,加水补足原量。
生鲜牛乳中金黄色葡萄球菌及其肠毒素检测In order to study the contamination status of Staphylococcus aureus and its enterotoxin-producing property in raw milk, and to provide references for monitoring the bromatoxism resulted from Staphylococcus aureus and pollution source tracking, 152 raw fresh milk samples collected from dairies of two cities in Shandong Province were conducted Staphylococcus aureus detection according to the national standard method (GB 4789.10―2010). Subsequently, the enterotoxin in samples from No.1 city was tested. The results showed that there were 84 positive samples and the detection rate was 55.26%. Among which, 63 and 21 positive samples were detected from 114 and 38 samples coming from No.1 and No.2 city respectively, and the detection rate were both 55.26%. The contamination levels were significantly different in samples derived from different regions. Additionally, the enterotoxin were all not detected in 114 samples of No.1 city. Theresults demonstrated that the levels of Staphylococcus aureus contamination in raw fresh milk were high in two cities of Shandong Province, and it advised that the milk management should be strengthened to avoid food poisoning.Keywords Raw fresh milk; Staphylococcus aureus;Enterotoxin牛乳是人类最理想的营养食品之一,但其易遭受污染而腐败变质。
食品中金黄色葡萄球菌检验(一)原理金黄色葡萄球菌进入人体内,可引起局部的痈疾和蜂窝组织炎,还可引起肺炎、心肌炎、骨骼炎、肾盂肾炎等系统化脓性感染,甚至可发展成败血症。
此外,食品中生长金黄色葡萄球菌是食品卫生中的一种潜在危险,因为金黄色葡萄球菌在食品中会产生肠毒素,食用后将引起食物中毒,这在我国细菌性食物中毒事件中,仅次于沙门氏菌和副溶血弧菌。
因此,检验食品中金黄色葡萄球菌有实际意义。
绝大多数金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上产生金黄色色素,菌落周围有透明的溶血圈,在厌氧条件下能分解甘露醇产酸,产生血浆凝固酶和耐热性的DNA 酶。
(二)仪器和设备(1)显微镜(2)培养箱:(36±1)℃(3)离心机(4)灭菌吸管:1mL、10mL(5)灭菌小试管(6)培养皿:皿底直径9cm(7)均质机(8)载玻片(10)酒精灯(11)水浴锅(三)培养基和试剂(1)胰酪胨大豆肉汤培养基成分:胰酪胨(或胰蛋白胨)17g 磷酸氢二钾 2.5g植物蛋白胨(或大豆蛋白胨)3g 葡萄糖 2.5 g氯化钠100g 蒸馏水1000mL 制法:将上述各成分混合,加热时轻轻搅拌使之溶解,分装三角瓶后,于121℃下高压灭菌15min。
最终pH为7.3±0.2。
(2)7.5%的氯化钠肉汤培养基成分:蛋白胨10g 蒸馏水1000mL 牛肉膏3g pH=7.4 氯化钠75g 制法:将上述各成分加热溶解,校正pH,分装于三角瓶中,在121℃下高压灭菌15min。
(3)黄豆粉浸液取黄豆粉5g、氯化钠10g,加入蒸馏水100mL。
置100℃水浴内加热1h,放于冰箱中过夜。
吸取上清液即为黄豆浸液。
(4)牛肉消化汤成分:绞碎牛肉1000g 15%氢氧化钠溶液27mL胰蛋白酶40mL 三氯甲烷1mL氯化钠10g 蒸馏水2000mL 制法:①称取碎牛肉,加蒸馏水,隔水加热到80℃,维持15min。
②加氢氧化钠溶液,pH试纸呈弱碱性,冷至40℃。