脑脊液(CSF)新型隐球菌墨汁染色

隐球菌性脑膜炎8例报告摘要】目的分析隐球菌性脑膜炎(CNM)的临床特点,探讨其诊治方法。

方法对8例CNM患者的临床资料进行回顾性分析。

结果 8例脑脊液检查均异常,7例常规墨汁染色找到新型隐球菌,8例脑脊液细胞学(CSFC)呈混合细胞增多反应并查见隐球菌而确诊为CNM。

2例CSF培养出隐球菌。

结论 CNM以发热、间歇性头痛为主、可有恶心、食欲不振、神倦、乏力等。

CNM的诊断应用CSFC、墨汁染色及细菌培养等多种手段相结合以提高其早期确诊率。

两性霉素B或脂质体两性霉素联合5-氟胞嘧啶疗效较好。

【关键词】隐球菌性脑膜炎诊断治疗隐球菌性脑膜炎(Cryptococcal neoformans meningitis CNM)临床上仍不太少见；近年来随着免疫缺陷病的人群有所增长和应用皮质激素及广谱抗菌素等，CNM发病率有所增长[1]。

本病临床上仍与结核性脑膜炎易混淆，治疗上有效药物尚少，病死率较高，为寻求早期诊断和有效的治疗手段，现将2005年2月～2010年9月诊治的8例CNM报告如下。

1 一般资料本组8例，男5例，女3例，年龄15～55岁，其中小于18岁3例；24～33岁3例;50岁以上2例。

其中2例患有艾滋病及1例又并发肺脑结核。

2 症状及体征入院时均有发热、间歇性头痛、可有恶心、食欲不振、神倦、乏力等。

查体T37.1～38.7℃，R18～23次/分，P60～81次/分，BP10.7/6.8kPa2例,12～14/8～10.7kPa6例。

神志清楚，表情忧虑，8例均有痛苦貌、后期颈项强直，布氏征、克氏征(＋)，巴氏征(十)、外周血WBC增高5例（WBC11.50～14.3×109/L,N0.73～0.85）。

3 脑脊液(CSF)检查压力1.63～2.06kpa8例，无色微混5例，无色透明3例，蛋白(+)7例，葡萄糖减少6例。

CSF白细胞15～280×106/L7例，正常1例，多核细胞0.25～0.36、5例，0.09～0.24、3例，单核细胞0.64～0.75、5例，0.76～0.81、3例，7例常规墨汁染色找到新型隐球菌,2例CSF培养出隐球菌。

颅内新型隐球菌感染联合检测在实验诊断中的应用摘要】目的：探讨临床实验室常用的几种检测方法在早期新型隐球菌性脑膜炎诊断中的临床应用价值；方法：以脑脊液墨汁染色阳性和/或脑脊液真菌培养鉴定为新型隐球菌作为确诊新型隐球菌脑膜炎的金标准。

对37例新型隐球菌脑膜炎患者1次或多次腰穿脑脊液，同时以单纯墨汁染色、脑脊液培养、胶体金法、墨汁染色联合脑脊液培养方法分别检测脑膜炎新型隐球菌。

结果：单纯墨汁染色和单纯脑脊液培养初次腰穿检出率(48.6% vs 56.8%)比较无明显差异（P>0.05）。

墨汁染色联合脑脊液培养(81.1%)较上述两种方法单独检测初次腰穿检出率均显著增高（P<0.05），与胶体金法(94.6%)比较无明显差异（P>0.05），但胶体金法初次腰穿检出率看似更高一些。

胶体金法在2例非隐球菌性脑膜炎标本中出现假阳性。

结论：脑脊液墨汁染色联合脑脊液培养较该两种方法分别单纯检测明显提高新型隐球菌初次腰穿的检出率，该联合检测可做为颅内新型隐球菌感染灵敏、特异的实验室检测方法在临床早期诊断中应用。

胶体金法首次腰穿检出率最高，其阳性高度提示了新型隐球菌脑膜炎感染，但应注意假阳性的可能。

【关键词】颅内新型隐球菌感染；检测；应用价值【中图分类号】R742【文献标识码】A1、资料和方法1.1病例来源2010年1月～2015年10月在承德医学院附属医院住院确诊为新型隐球菌脑膜炎的37例患者。

所有检测标本为上述患者脑脊液标本。

以脑脊液墨汁染色阳性和、或脑脊液真菌培养鉴定为新型隐球菌作为确诊新型隐球菌脑膜炎的金标准。

1.2仪器试剂梅里埃VITEK 2 compact全自动细菌鉴定仪及YST酵母菌鉴定卡；梅里埃BACT/ALERT 3D全自动血培养仪及配套儿童型微生物培养瓶；IMMY公司CrAg Lateral Flow Assay隐球菌抗原检测试剂盒（胶体金免疫层析法）；珠海贝索公司印度墨汁染色试剂盒；温州康泰沙氏培养基及念珠菌鉴别琼脂。

新型隐球菌墨汁染色步骤-概述说明以及解释1.引言1.1 概述隐球菌是一种普遍存在于自然环境中的真菌，它们可以引起隐球菌病，这是一种严重的感染性疾病。

隐球菌墨汁染色是一种常用的实验方法，用于快速检测和鉴定隐球菌的存在。

通过染色，可以使隐球菌在显微镜下更加清晰可见，从而提高诊断效果。

隐球菌墨汁染色步骤主要包括样本制备、染色操作和显微镜观察。

首先，需要采集合适的样本，比如体液或组织切片，然后进行固定和固化处理，以保持细胞的形态和结构。

接下来，将样本进行染色，常用的染色剂是隐球菌墨汁，它可以特异性地染色隐球菌。

在染色过程中，需注意控制染料浓度和染色时间，以确保染色效果的准确性和稳定性。

最后，利用显微镜观察染色后的样本，观察到隐球菌的形态特征，如菌落颜色和形状等，从而判断样本中是否存在隐球菌。

隐球菌墨汁染色的优点是操作简单、成本低廉且结果可靠。

然而，也有一些限制，比如可能存在假阳性结果和染色结果的主观性等。

因此，在进行隐球菌墨汁染色时，应注意控制实验条件，确保染色结果的可靠性和准确性。

总而言之，隐球菌墨汁染色是一种常用的实验方法，用于快速检测和鉴定隐球菌的存在。

在实际应用中，我们需要掌握正确的操作步骤和注意事项，以提高染色效果和准确性。

未来，随着科技的不断进步，相信隐球菌检测方法会变得更加快速、准确和可靠。

1.2文章结构文章结构部分的内容可以按照以下方式编写：文章结构部分是对整篇长文的组织和布局进行介绍。

它描述了该文本的主要节（章节）的结构和内容，以帮助读者了解文章的框架和逻辑顺序。

本文将按照以下结构来组织内容：第一节引言部分概述了本文的主要内容和目的。

将介绍什么是隐球菌墨汁染色以及其在实验或临床应用中的重要性和作用。

同时，还会对文章的整体结构和框架进行简单介绍，为读者提供整个阅读过程的指南。

第二节正文部分将详细介绍新型隐球菌墨汁染色步骤的要点。

其中，2.1节将重点介绍染色步骤的要点1，可能包括准备实验材料、处理样本、选择合适的染色方法等内容。

中枢神经系统新型隐球菌病中枢神经系统新型隐球菌病，简称新型隐球菌病(Crytococcosis)是由新型隐球菌感染引起的亚急性或慢性深部真菌病。

新型隐球菌可以通过呼吸道、皮肤黏膜、消化道等途径侵入人体，在局部或经血流、淋巴循环侵及中枢神经系统、肺、淋巴腺、骨等组织，从而引起中枢神经系统有更高的亲和性，所以新型隐球菌病中，以中枢神经隐球菌病最常见。

据国内外统计，中枢神经隐球菌病占隐球菌病的70%～80%。

新型隐球菌根据其荚膜抗原性质，分A，B，C，D四个血清型。

本菌侵入中枢神经系统(CNS)后，常表现为脑膜炎或脑膜脑炎，并可进入脑实质内，形成血管炎和肉芽肿。

以往认为本病系罕见病。

但近年来世界各地的报道日渐增多。

其原因是：①使用攻击性更强的抗肿瘤药物;②长期应用广谱抗生素;③接受激素治疗的病人数增加;④获得性免疫缺陷病人数增加;⑤烧伤和外科大手术增多;⑥高价营养液输注;⑦应用更多的导管和修复器械;⑧诊断技术的提高。

一、病因与病理新型隐球菌是一种酵母样霉菌。

广泛地存在于水果、牛奶、草地、蜂巢、鸽粪中。

其中鸽是人感染新型隐球菌的中间宿主，是主要的感染源。

感染的主要途径是呼吸道(因为在正常人体内咽部可以分离出纯菌种，多数病人发病前有呼吸道感染或伴有肺部感染)，当然还可以由皮肤、黏膜或消化道侵入。

人体抵抗力降低成为易感人群。

如白血病、淋巴肉瘤、系统性红斑狼疮、类风湿、肝肾疾患、结核、糖尿病、获得性免疫缺陷综合征(AIDS)的患者，再如接受大量抗生素、激素、抗癌药物、免疫抑制剂治疗的人群。

所以，从某种意义上讲，新型隐球菌是一种条件致病菌。

新型隐球菌的致病因素主要包括以下两个方面：①新型隐球菌的荚膜：这是该菌的主要致病因素。

荚膜可作为屏障，同时可以抑制吞噬细胞调理因子与受体结合;②酚氧化酶：该酶可以氧化酚类，从而在菌的细胞壁形成黑色素沉积，抵抗宿主的杀伤。

新型隐球菌可以侵犯肺、中枢神经系统、骨骼、肾上腺等。

但对中枢神经系统有更高的亲和性，其原因有以下几点：①中枢神经系统封闭性高，机体的免疫机能不易起作用;②有适合的营养物质和气体环境，利于荚膜形成;③该系统代谢最旺盛，葡萄糖含量低，可刺激酚氧化酶活性;④该系统有大量的儿茶酚胺，可作为酚氧化酶的底物;⑤由呼吸道感染的隐球菌经溶菌酶作用而发生变性，致病性减弱，但播散到脑膜后易恢复而致病。

·144·脑脊液常规检查主要是对中枢神经系统疾病开展诊断及预后判断的重要检验项目，包括一般形状检查、细胞计数与分类、蛋白定性与定量、葡萄糖定量测定、微生物学检查、细胞学检查等检查内容，脑脊液由于采集难度较高，操作繁琐，检查结果易受到主观因素影响。

因此，在开展脑脊液常规检查时，需要严格做好质量控制，使实验的准确性、精确性、可靠性有效提高。

本文对脑脊液常规检查的内容及检查过程中相关注意事项进行总结，论述如下。

1标本收集与处理流程开展脑脊液检查时，需要抽取脑脊液3管，收集时应选择带盖的无菌管，以避免外界细菌感染脑脊液。

第一管脑脊液开展细菌培养，第二管脑脊液开展化学检查、免疫学检查，第3管开始一般性状检查、细胞学检查。

脑脊液标本采集后要立即送检，采集至送检时间应控制在1小时以内，避免标本采集后放置过久，脑脊液的性质发生改变，对检验结果准确性造成不良影响。

2一般形状检查标本为血性时主要是由于穿刺损伤出现的新鲜出血，蛛网膜下腔出血的陈旧性出血产生。

想要对出血性状进行检查时，可根据三管试验观察，若前后三管红色逐渐变浅则为新鲜出血，而红色均匀一致则为陈旧性出血。

离心处理后，上清液颜色透明无色者为新鲜出血，而呈现黄色或淡红色时为陈旧性出血。

穿刺损伤出现的新鲜血液，经上清液隐血实验为阴性，而观察红细胞形态与白细胞数时均无改变。

蛛网膜下腔出血开展隐血试验时为阳性，红细胞形态呈现锯齿状、皱缩，白细胞计数可出现反应性增加。

蛛网膜下腔梗阻会因脑脊液长期滞留，检查时，蛋白含量＞1.5g/L，颜色变黄，且蛋白含量越高颜色越黄，达到30~50g/L时，脑脊液可自凝，出现黄色胶冻状。

脑脊液胆红素＞8.5μmol/L时，可被黄染。

穿刺出血后脑脊液可检出红细胞，出现液体微微浑浊，而白细胞数＞300×106/ L时可见明显浑浊。

3细胞计数与分类血性脑脊液发生后应校正白细胞计数，主要是以白细胞与红细胞1：700比例，根据红细胞数量对白细胞进行估算。

隐球菌脑膜炎的实验室检测首都医科大学附属北京地坛医院王慧珠一、新型隐球菌的特点新型隐球菌广泛分布于自然界中，鸽子粪是主要传染源。

圆形、卵圆形，菌体为宽厚的荚膜包裹；不形成菌丝和孢子；出芽生殖。

分 A 、 B 、 C 、 D 四个血清型。

A型最多见。

致病菌属包括 17 个种和 8 个变种，主要是新型隐球菌新生变种和格特变种，已报道引起人类疾病的还有浅黄隐球菌、浅白隐球菌和罗伦隐球菌，但是很少见。

二、致病性新型隐球菌为条件致病菌，免疫功能低下者为高发人群，但也可发生在免疫功能正常人。

白血病、恶性肿瘤、艾滋病、 SLE 、尿毒症患者。

长期广谱抗生素、激素、免疫抑制剂使用者更易感染。

隐球菌侵入肺部后，局部病变进展缓慢，病变轻微，常无临床症状，但有 20% 以上的病例可由此经血进入中枢神经系统，导致隐球菌性脑膜炎的发生。

三、临床表现（一）起病缓慢、可呈亚急性，潜伏期 2-4 周。

（二）脑膜炎的表现：意识障碍，头痛、发热（以不规则热多见）。

（三）颅内压的表现，可有颅神经损害。

（四）未经治疗病情逐渐恶化（五）血常规正常（六）腰穿：压力增高明显，脑脊液外观透明或微混，白细胞轻中度增多（ 40-400/ul) ，以淋巴细胞为主。

蛋白轻度升高，糖减低，氯化物轻中度减低。

四、其他部位隐球菌病（一）肺隐球菌病（二）皮肤隐球菌病（三）骨隐球菌病五、新型隐球菌对 CNS（中枢神经系统）具有亲和力？机理可能和脑脊液中有隐球菌所需要的天门冬酰胺、肌酸内酰胺等刺激真菌生长的营养因子有关。

六、特殊宿主的隐球菌病隐球菌病是 AIDS 病人最重要的也是致命的真菌感染并发症，在 AIDS 人群中，发病率可达 6% ～ 10% ，而在中部非洲地区可高达 15% ～ 30% ，这可能与发达国家对于AIDS 合并机会感染控制水平有关，即早发现、早治疗。

AIDS 病人患隐球菌病的临床表现与其他免疫受损的病人相似，然而，感染部位常含有更多的菌体， 80% 以上的病人在做出诊断时已有脑膜炎或脑膜脑炎，且病变更广泛。

医院微生物室中枢神经系统感染病原体检验操作规程
l、标本采集以无菌方法采集脑脊液2～5ml，盛于无菌瓶中送检。

2、直接检查脑脊液可直接涂片、革兰染色或抗酸染色等，然后镜检。

无色透明的脑脊液，应作离心取沉淀物涂片、染色镜检。

3、检验步骤：
3.1、一般细菌涂片检查除结核性脑膜炎外，由其它细菌引起的化脓性脑膜炎，脑脊液明显混浊，可直接涂片，革兰染色镜检。

无色透明的脑脊液，应离心后涂片、染色、镜检，根据染色及形态特征可初步提示细菌的种类。

结核分枝杆菌涂片检查：取脑脊液的离心沉淀物(3000r／min。

30min)作抗酸染色。

新型隐球菌涂片检查：取脑脊液的离心沉淀物作墨汁负染色。

3.2、分离培养用接种环挑取混浊脑脊液或经离心沉淀的沉淀物，分别接种于血平板、巧克力平板，巧克力平板应置
- 1 -
于CO 2环境中35℃培养18～24小时。

脑脊液也可直接注入血培养瓶。

4、检验程序 脑脊液
直接涂片
分离培养 （取离心沉淀）
不染色标本 染色标本 血平板、巧克力 沙氏培养基 （5%CO 2环境） 血平板
动力试验 革兰染色 抗色染色
墨汁染色 脑膜炎奈瑟菌
脑膜炎奈瑟菌
A T
B Expression ATB 鉴定药敏试条 鉴定药敏试条
5、脑脊液培养常见病原菌
革兰阳性菌革兰阴性菌
金黄色葡萄球菌脑膜炎奈瑟菌
A、B群链球菌卡他布兰汉菌
肺炎链球菌流感嗜血杆菌
结核分支杆菌肠杆菌科菌种
产单核李斯特菌脑膜败血性黄杆菌
新型隐球菌假单胞菌
白色念珠菌
2。