常规石蜡包埋组织切片(常规切片)的制备

石蜡切片的具体步骤与做法？石蜡切片法即用石蜡作为支持剂进行切片的方法。

石蜡切片法是一般组织学、病理学等常规制片方法，因此用得最多，它有很多优点：比较省时间，容易操作，可切成极薄的切片（4um以下），能制作连续切片，组织块可包埋在石蜡中永久保存。

缺点是只能用于较小的组织块，较大的组织块不易切好，容易破碎，组织在脱水透明过程中产生收缩并易变脆。

制片时间太长。

石蜡切片的制作过程（一）材料与用具1．材料：鱼皮肤、性腺、肠、肝胰脏等。

2．用具：溶蜡箱、蜡杯、不同熔点的石蜡、酒精灯等。

（二）实验内容与步骤1．取材及固定取动物体上的小块组织成为组织块。

组织块的大小以不超过0.5立方厘米为宜。

切去组织块时动作要轻，切忌用力牵引或挟持，以免组织内部发生变化。

组织块取下后，先用先用0.85％的生理盐水漂洗以戏曲血液与污渍，如果是管状组织则必须把管腔中污物洗净，可用注射器自一端向管腔中注射生理盐水数次，使其管腔冲洗干净，切忌不可用刀或其他器具刮之。

由动物身上切取的组织必须是新鲜的，材料越新鲜越好，一般不应超过死后24小时。

如果是管状器官或是其中有分泌之消化液，则死后应迅速采取，以免组织自溶或上皮剥落。

材料由动物体取下后应当迅速固定，固定的目的是尽快使固定液渗入组织内部，将组织固定，以保持其原有的结构。

不同的组织应选用适当的固定液。

固定液的用量与组织块体积之比一般在20：1。

不应使组织块贴于容器壁上，应记录固定液的名称，材料的种类，动物品种及开始固定的时间。

2．冲洗固定后的组织块在进行脱水前必须用流水洗去固定液。

组织块应用纱布包好，注名，放金属水洗网中用流水冲洗，甲醛固定液固定的组织一般水洗24小时，Bouins固定液固定的组织水洗24小时。

AFA固定液则不需要水洗。

3．脱水和硬化经过固定后的组织在水洗后要进行脱水，脱水的目的将组织内的水分用酒精或其他溶剂置换出来，使组织逐渐变硬，便于油类或其他透明及浸入，为熔化的石蜡浸渗到组织中创造条件。

实验四病理组织切片制作一、实验目的组织切片技术是病理学中不可缺少的一个组成部分。

通过实验，能够使学生了解和掌握病理组织切片的基本方法之一，即石蜡包埋的组织切片法。

二、实验原理根据病变及检查的要求，合理采集病料，经固定、脱水、透明、浸蜡、包埋后进行切片，在进行染色得到结果。

固定是用化学药品把组织原来的结构保存下来，以便观察。

脱水是除去组织中的水分，以利于透明和浸蜡。

组织的透明是便于透蜡包埋。

包埋的是使石蜡透入组织内部，把软组织变为适当硬度的包埋块，以便切成薄片。

最后使用切片机，将包埋块中组织切成薄片。

三、主要仪器及试材已固定好病料，石蜡，手术刀，手术剪，镊子，脱水框，染色缸，梯度脱水酒精和透明剂一套，烘箱，切片机，毛笔，玻片，蛋白甘油，染色架，酒精灯，三角架，大烧杯，温度计，火柴，切片刀，记号笔或铅笔。

四、实验方法与步骤。

（一）固定采取的病理材料必须立即放入10％福尔马林固定液中。

（二）脱水组织经固定后，尚含有多量水分，而水与透明剂苯、石蜡根本不相融合。

必须先把组织中的水分除去。

但脱水剂必须是与水在任何比率下均能混合的液体，脱水剂常兼有硬化组织的作用。

最常用的脱水剂为酒精、丙酮等。

1．酒精沸点78．4℃，为最常用的脱水剂。

脱水能力强，并能使组织硬化，能较好地与二甲苯透明剂相混合。

最终结果表明，只要脱水环节处理好，都会得到好的切片。

脱水的程序为70％一80％一95％一100％。

各级酒精2—4小时，视材料的大小、厚薄而定。

100％酒精有硬化组织的作用，时间不宜太长，一般不超过3小时。

脑组织、脂肪组织或疏松结缔组织，脱水时间要适当延长。

2．丙酮沸点为56℃。

脱水作用比乙醇强，但对组织块的收缩较大，主要用于快速脱水或固定兼脱水。

脱水时间l一3小时左右。

（三）透明透明对组织有脱酒精及透明两种作用。

当组织中全部为透明剂占有时，光线可以透过，组织可呈现不同程度的透明状态，此种现象称为透明，具有这种作用的试剂称为透明剂。

石蜡切片流程范文石蜡切片是一种常见的组织学技术，用于制备生物组织薄片，使其可以在显微镜下观察和分析。

下面是石蜡切片制备的详细流程。

1.组织固定：首先，需要选择适当的方法将生物组织进行固定，以保持其形状和结构。

最常用的方法是使用福尔马林溶液进行组织固定。

将组织样品置于福尔马林溶液中，通常需要固定24至48小时。

2.去水：固定完毕后，需要将组织中的水分除去，以便进行后续的处理。

通过逐渐提高样品中酒精浓度（例如70％、80％、95％和100％构成的酒精梯度）来逐步去除水分，通常每次浸泡20至30分钟。

3.清洁：去水后，通常需要对样品进行清洁，以去除可能存在的污物和其他杂质。

可以用清洁的醇溶液（例如100％酒精）浸泡样品数分钟，然后用去福尔马林等溶液洗涤样品。

4.浸渍：在石蜡切片制备过程中，需要将组织样品浸泡在石蜡中，以使其渗透并得到支撑。

选择适当的石蜡类型和温度很重要。

通常使用低熔点石蜡（例如58℃石蜡），在60至65℃的恒温水浴中加热并溶解石蜡。

5.渗透：将组织样品从酒精中转移到融化的石蜡中，通常需要经历多个步骤的渗透过程。

首先将样品浸泡在75％酒精中，然后再依次转移到浓缩的酒精溶液中（例如85％、95％和100％）和石蜡中，每次浸泡时间约为1小时。

6.包埋：当样品完成渗透后，需要进行包埋，即将渗透后的组织样品放置在切片模型中，并用石蜡封住。

将切片模型倒置，将溶解的石蜡缓慢倒入模型直到完全覆盖组织样品。

然后将切片模型固定在冷却装置中，等待石蜡冷却和固化。

7.切片：当石蜡块完全固化后，可以将其切割成所需的薄片。

通常使用旋转切片机或手动切片机进行切片。

将切片机的刀片调整到所需厚度（通常为3至5微米），将石蜡块放置在切片机上，并逐渐将刀片与石蜡块接触，以制备薄片。

8.制片：将切好的石蜡薄片静置在温水中，让其自然展开，并将其转移到预涂有胶水的载玻片上。

轻轻将玻片压在石蜡薄片上，以确保两者之间有良好的接触。

然后将载片放置在恒温台上，以便胶水干燥。

常规的石蜡‎包埋过程包‎括五个基本‎步骤，即固定，脱水，透明，浸蜡和包埋‎制作石蜡切‎片，切片前须将‎石蜡渗透组‎织包埋于石‎蜡中，而水与石蜡‎又是不相混‎合的，所以在浸蜡‎，包埋前必须‎将组织内所‎含的水分脱‎去。

而大多数的‎组织固定剂‎是水溶液，随后的水冲‎洗也使其含‎有大量水分‎，因此必须先‎行脱水，一般是浸入‎逐级增加浓‎度的酒精来‎完成。

由于酒精和‎石蜡不能混‎合，须再用一种‎石蜡的溶剂‎来置换酒精‎，因大多数石‎蜡溶剂有使‎组织的折光‎率增高并表‎现为透明或‎半透明状，所以此步骤‎又称透明。

最后用石蜡‎浸渍组织并‎铸制成坚实‎的蜡块。

常规的石蜡‎包埋过程包‎括五个基本‎步骤，即固定，脱水，透明，浸蜡和包埋‎，前一章中已‎述过固定。

第一节脱水脱水就是用‎脱水剂完全‎除去组织内‎的水分，为下一步透‎明及浸蜡创‎造条件。

此外，脱水还可以‎使组织再次‎发生一定的‎硬化，脱水剂必须‎是与水在任‎何比例下均‎能混合的液‎体。

一．常用的脱水‎剂1．酒精：是制片最常‎用的试剂，可与水在任‎何比例下相‎混合，酒精的脱水‎能力比较强‎，又能硬化组‎织。

但是酒精的‎船头速度很‎快，对于组织会‎有明显的收‎缩作用。

因此在以酒‎精作为脱水‎剂时，应该先从浓‎度较低的酒‎精开始，然后递增其‎浓度，这样可以避‎免组织过度‎收缩。

第一瓶酒精‎浓度随固定‎剂，脱水组织的‎大小和种类‎而异，经水溶性固‎定剂固定的‎细柔组织需‎要慢慢脱水‎，从50％酒精开始。

如眼球，组胚组织等‎大多数组织‎标本则是从‎70％酒精开始，再经80％，95％以至无水酒‎精。

但是有时为‎了某种特殊‎要求，例如要做糖‎元的切片标‎本或是要做‎尿酸结晶染‎色切片标本‎，为了防止糖‎元和尿酸结‎晶在水中消‎失却要直接‎投入无水酒‎精中固定，而不需要经‎过水洗和低‎浓度酒精的‎脱水过程。

经无水酒精‎固定后的组‎织只需要再‎经过换一次‎无水酒精脱‎水即可。

石蜡包埋组织切片制作过程石蜡包埋组织切片制作是组织学研究中常用的一种技术，它可以将组织样本固定、包埋、切片、染色等一系列步骤完成，以便于观察和分析组织结构和功能。

下面将详细介绍石蜡包埋组织切片制作的过程。

1. 组织固定需要将待研究的组织样本进行固定，以保持其形态和结构。

常用的固定剂有福尔马林、乙醛、甲醛等。

固定时间和温度根据不同的组织类型和固定剂而异，一般需要固定4-24小时。

2. 组织脱水固定后的组织需要进行脱水处理，以去除其中的水分，使其能够与石蜡相容。

脱水一般采用乙醇逐渐升级浓度的方法，如70%、80%、95%、100%乙醇，每个浓度的时间一般为1-2小时。

3. 组织清洁脱水后的组织需要进行清洁处理，以去除其中的脂肪和其他杂质。

清洁一般采用苯、甲苯、氯仿等有机溶剂，每个溶剂的时间一般为1-2小时。

4. 组织浸渍清洁后的组织需要进行浸渍处理，以使其与石蜡相容。

浸渍一般采用苯、甲苯、氯仿等有机溶剂，每个溶剂的时间一般为1-2小时。

5. 组织包埋浸渍后的组织需要进行包埋处理，以使其能够被切片机切割。

包埋一般采用石蜡，将组织样本浸泡在石蜡中，然后在石蜡中进行固化。

固化时间和温度根据不同的组织类型和石蜡而异，一般需要固化4-24小时。

6. 组织切片包埋后的组织需要进行切片处理，以便于观察和分析组织结构和功能。

切片一般采用微型切片机，将石蜡包埋的组织样本切成薄片，厚度一般为4-6微米。

7. 组织染色切片后的组织需要进行染色处理，以便于观察和分析组织结构和功能。

常用的染色剂有血液学染色剂、组织学染色剂等。

染色时间和方法根据不同的染色剂而异，一般需要染色5-30分钟。

石蜡包埋组织切片制作过程是一个复杂的过程，需要进行多个步骤的处理，以保证组织样本的完整性和可观察性。

这种技术在组织学研究中具有重要的应用价值，可以为疾病的诊断和治疗提供重要的参考依据。

组织形态学常规石蜡包埋组织切片(常规切片)的制备常规石蜡包埋组织切片(常规切片)的制备㈠组织块依序进行：①水洗，②脱水，③透明，④浸蜡，⑤包埋和⑥切片。

㈡组织切片制备及其HE染色过程中使用的乙醇、丙酮、二甲苯、石蜡等为易燃、有毒物，必须专人管理，2m以内不得有明火，局部环境应有良好的通风和消防设施。

㈢常规切片的手工操作(步骤次序和各步骤的持续时间)1.水洗：用流水冲洗已经固定的组织块30min。

2.脱水(常温下)(1)乙醇-甲醛(AF)液固定60~120min(2)80%乙醇60~120min(3)95%乙醇Ⅰ60~120min(4)95%乙醇Ⅱ60~120min(5)无水乙醇Ⅰ60~120min(6)无水乙醇Ⅱ60~120min(7)无水乙醇Ⅲ60min[注意事项]①未经充分固定的组织不得进入脱水程序。

②用于脱水的试剂容积应为组织块总体积的5~10倍以上。

③自低浓度乙醇向高浓度乙醇逐级移进脱水。

④脱水试剂应及时过滤、更换(500ml乙醇可用于500个组织块脱水；加入硫酸铜的无水乙醇变蓝时，提示需要更换)。

⑤较大组织块的脱水时间长于较小者，应将两者分开进行脱水。

⑥组织置于无水乙醇内的时间不宜过长(以免硬化)。

⑦丙酮脱水性能强，会使组织块过缩、硬脆，不宜用以替代无水乙醇。

3.透明(1)二甲苯Ⅰ20min(2)二甲苯Ⅱ20min(3)二甲苯Ⅲ20min[注意事项]①二甲苯的容积应为组织块总体积的5~10倍以上。

②组织块在二甲苯中透明的时间不宜过长(以防组织硬、脆)，并依不同种类组织及其大小而异；组织呈现棕黄或暗红色透明即可。

③二甲苯应及时过滤、更换。

④组织经二甲苯适度处理后不显透明时，常提示该组织的固定或脱水不充分，应查找原因并妥善处理。

4.浸蜡1)石蜡Ⅰ(45~50℃)60min(2)石蜡Ⅱ(56~58℃)60min(3)石蜡Ⅲ(56~58℃)60min[注意事项]①熔化石蜡必须有专人负责，必须在熔蜡箱内或水浴中(70℃)进行，不得用明火加温。

病理石蜡切片的加工工艺病理石蜡切片是在病理学领域中的一项重要工艺，用于制备病理组织切片，以便进行病理诊断和研究。

下面将详细介绍石蜡切片的加工工艺。

石蜡切片加工的主要步骤包括：组织固定、脱水、清洁、浸蜡、包埋、切片和染色。

首先，组织固定是将被检组织样本收集后，用适当的固定液浸泡一段时间，以保护组织的结构和形态。

目前常用的固定液有福尔马林、乙酸、甲醛等。

固定时间的长短根据组织的大小、浓度和固定液的选择来决定。

固定完后，需要对组织进行脱水处理。

脱水的目的是去除固定液中的水分，使组织细胞的水分含量降到一定的程度，以便后续处理。

脱水的过程中通常采用逐渐增加浓度的酒精溶液浸泡，以逐渐置换水分，最后用绝对酒精进行终-stage脱水。

脱水后，需要对组织进行清洁。

清洁的目的是去除组织表面的杂质，使组织表面干净整洁。

常见的清洁方法有使用稀释的亚硫酸氢钠、酒精、去离子水等溶液，将组织浸泡一段时间后再进行清洗。

清洁完毕后，组织需要进行浸蜡处理。

浸蜡是将组织浸泡在石蜡溶液中，使其渗透而替换组织内的酒精，同时增加组织的硬度，以便于后续切片。

在浸蜡过程中，通常使用石蜡混合液，其主要成分包括石蜡和其他添加剂。

浸蜡的时间根据组织的大小和硬度来决定。

浸蜡完毕后，组织需要进行包埋处理。

包埋是将浸蜡的组织置于石蜡模具中，使其定位并固定在适当的位置。

包埋过程中需要将浸蜡组织置于模具中的液态石蜡中，然后进行冷却和固化。

通常需要将模具放置在冷却板上冷却并固化。

包埋完成后，石蜡块需要进行切片。

切片是将包埋的石蜡块用切片机切割成非常薄的切片，通常为3-5微米。

切片机会将石蜡块切割成连续的组织切片，然后将切片收集并固定在载玻片上。

最后，切片需要进行染色处理，以便于观察和分析组织结构和细胞特征。

常见的染色方法有常规荧光染色、特殊染色和免疫组化染色等。

染色完成后，切片即可送往病理科进行观察和诊断。

总的来说，病理石蜡切片的加工工艺是一个复杂而精细的过程，需要严格控制每个步骤的时间和操作条件，以确保切片的质量和准确性。

常规石蜡切片检查的流程下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。

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组织块⽯蜡包埋组织块⽯蜡包埋的步骤：1.取材：尽量活杀，在处死30min内取材完毕，组织块的⼤⼩⼀般为（1.0-1.5cm）*1.0cm*(0.2-0.3cm)2.固定：常⽤甲醛液浓度为4%，是40%甲醛溶液和⽔按1:9⽐例配制⽽成。

固定时间以12-24h为宜。

（4℃冰箱可放置1-3个⽉）3.冲洗：将组织块放在固定的容器中⽤流⽔冲洗24h.4.脱⽔：⼀次70%酒精2h, 80%酒精2h, 90%酒精1h, 95%酒精40min,⽆⽔⼄醇Ⅰ40min,⽆⽔⼄醇Ⅱ30min。

可将组织放于70%酒精中过夜。

5.透明：将脱⽔后组织直接浸⼊⼆甲苯透明剂中（⼆甲苯Ⅰ, ⼆甲苯Ⅱ），每次透明为10min。

6.浸蜡：常规制⽚常⽤熔点⾼于56℃以上的⽯蜡，普通采⽤56℃-58℃⽯蜡。

先将组织浸⼊软蜡Ⅰ1h左右, 再浸⼊软蜡Ⅱ40min；硬蜡Ⅰ40min, 硬蜡Ⅱ1h。

（⼀般浸蜡时间为3-4h）软蜡熔点为45℃-50℃，硬蜡熔点为55℃-60℃。

7.包埋：将蜡液注⼊包埋硬具中，迅速将组织块平放⼊蜡液中，摆正并铺平，然后移⾄冷却台，使组织块同蜡液凝固在⼀起的过程。

（硬蜡凝固定型）⽯蜡切⽚法：在切⽚前应先切去标本周围过多的⽯蜡（此过程称为“修块”），但也不能留得太少，否则易造成组织破坏，连续切⽚时分⽚困难。

⼀般切⽚厚度为4-6µm。

贴⽚时先在⼲净的载玻⽚上涂⼀层蛋⽩⽢油，然后于60℃恒温箱中烘烤1h，若未烤⼲可适当延长时间；若组织剥脱可涂⼀层蛋清加以固定。

做免疫组化时，玻⽚应涂多聚赖氨酸，亦可买防脱玻⽚。

HE染⾊的步骤：⼆甲苯Ⅰ5-10min→⼆甲苯Ⅱ5-10min→⽆⽔⼄醇Ⅰ1-3min→⽆⽔⼄醇Ⅱ1-3min→90%酒精1min→80%酒精1min→70%酒精1min→⽔洗→苏⽊精3-5min→⽔洗→盐酸酒精1-3s→⽔洗→饱和碳酸锂（氨⽔）10-30s→⽔洗→伊红3-5min→⽔洗（短）→70%酒精1-2s→80%酒精3-5min→90%酒精3-5min→95%酒精3-5min→⽆⽔⼄醇5-10min→⼆甲苯Ⅰ3-5min→⼆甲苯Ⅱ3-5min→中性树胶封⽚染⾊液的配制：1.Harris苏⽊精的配制苏⽊精 1g硫酸铝钾 15g⽆⽔⼄醇 10ml蒸馏⽔ 200ml先⽤蒸馏⽔加热溶解硫酸铝钾，⽤⽆⽔⼄醇溶解苏⽊精再倒⼊已溶解的硫酸铝钾蒸馏⽔中，煮沸1min后，稍冷却，慢慢加⼊红⾊氧化汞0.5g，继续加热⾄染液变为紫红⾊，⽤纱布盖瓶⼝，⽤滤纸过滤后每100ml加冰醋酸5ml。

抗原修复工作液：9ml A＋41ml B＋450ml 水，调Ph＝6.0＋－1PV9000 两步法免疫组织化学1．石蜡切片脱蜡至水（烤箱温度56度，30分钟）二甲苯5min × 3100％乙醇5min × 290％乙醇5min × 180％乙醇5min × 1双蒸水 5min × 2PBS 浸泡5min 。

或陈老师方法：二甲苯室温2次，20min/次；100％、90％、70％乙醇各5min；PBS 5min 2．抗原修复微波预热抗原修复液（工作液）至沸腾。

取预热预热抗原修复液浸泡切片于株型容器中，放入微波炉中，中火， 5～10min，有修复液损失后，补充预热抗原修复液，继续，持续到10min左右。

取出容器，于室温等到修复液自然冷却 20～30min。

3．3％过氧化氢室温孵育5～10min， PBS冲洗，2min ×3；3％过氧化氢室温孵育5～10min，PBS冲洗，2min ×3；血清封闭15～30min，PBS洗一次；4．滴加一抗工作液（1：100），37度2h，或4度过夜，PBS洗，2min ×3；5．滴加检测试剂，室温或37度孵育30～60min，PBS洗2MIN×3，接DAB显色约20min （室温，镜下观察），5．滴加试剂1，室温20min，PBS洗，2min ×36．滴加试剂2，室温20min，PBS洗，2min ×37．DAB显色5～20min，镜下观察，适时终止。

8．自来水洗，复染（苏木素，90s，自来水冲洗，15min），脱水，透明，封片。

复染；苏木素，室温 30s，自来水冲洗，15min（如需要可0.1%HCL分色，0.1%氨水/PBS返兰）脱水：70％乙醇，5min × 190％乙醇5min × 1100％乙醇5min × 2透明：二甲苯，10min× 2封片：中性树脂。

组织病理切片制备流程组织病理切片按照制备方法的不同分为石蜡切片、冰冻切片和振动切片。

石蜡切片制备过程包括取材、固定、洗涤和脱水、透明、浸蜡、包埋、切片与粘片、脱蜡、染色、脱水、透明、封片等步骤。

一般从取材固定到封片制成玻片标本需要数日。

冰冻切片（frozen section）是一种在低温条件下使组织快速冷却到一定硬度，然后进行切片的方法。

制作过程不需要对组织固定、脱水、透明、包埋等手续，避免组织细胞中可溶性物质的分解，并能保存细胞形态的原。

与石蜡切片相比，在抗原完整性的保存上有其不可取代的优势，尤其在免疫组化方面。

因此冷冻切片也是脂肪染色、酶组织化学染色以及某些免疫组织化学染色和原位分子杂交的理想制片方法。

不足是组织细胞的形态略逊于石蜡切片。

振动切片在文献中讨论较少。

制备方法是采用的专用振动切片机，利用刀片振动原理，将新鲜的活体组织，直接固定在切片槽中切片。

该方法能保持样品活性和细胞良好形态，给免疫细胞化学研究及脊髓和脑薄片神经生物学研究提供了良好条件，适合做组织电生理学等研究。

不同切片方法由于制作的工艺流程不同，所需的仪器设备和工具有差别。

一、石蜡切片的制作根据文献报道石蜡切片法包括取材、固定、洗涤和脱水、透明、浸蜡、包埋、切片与粘片、脱蜡、染色、脱水、透明、封片等步骤。

1.固定用适当的固定液浸渍新鲜材料，凝固或沉淀细胞和组织中的物质成分、终止细胞的一切代谢过程、防止细胞自溶或组织变化，使组织硬化，尽可能保持活体时的结构。

固定时间从1小时至数天，通常为数小时至24小时。

2.洗涤与脱水组织在固定后要把渗入里面的固定液洗去，否则留在组织中的固定液有的会妨碍染色，有的会产生沉淀或结晶。

固定后或洗涤后的组织内充满水分，如不除去水分就无法进行以后的透明、浸蜡与包埋，因为透明剂多数是苯类，苯类和石蜡均不能与水相融合，水分不脱尽，苯类不能浸入。

因此，在透明、浸蜡前必须进行脱水。

脱水就是利用脱水剂将组织内的水分置换出来，以利于有机溶剂的渗入。

石蜡包埋技术制作石蜡切片，切片前须将石蜡渗透组织包埋于石蜡中，而水与石蜡又是不相混合的，所以在浸蜡，包埋前必须将组织内所含的水分脱去。

而大多数的组织固定剂是水溶液，随后的水冲洗也使其含有大量水分，因此必须先行脱水，一般是浸入逐级增加浓度的酒精来完成。

由于酒精和石蜡不能混合，须再用一种石蜡的溶剂来置换酒精，因大多数石蜡溶剂有使组织的折光率增高并表现为透明或半透明状，所以此步骤又称透明。

最后用石蜡浸渍组织并铸制成坚实的蜡块。

常规的石蜡包埋过程包括五个基本步骤，即固定，脱水，透明，浸蜡和包埋，前一章中已述过固定。

第一节脱水脱水就是用脱水剂完全除去组织内的水分，为下一步透明及浸蜡创造条件。

此外，脱水还可以使组织再次发生一定的硬化，脱水剂必须是与水在任何比例下均能混合的液体。

一．常用的脱水剂1．酒精：是制片最常用的试剂，可与水在任何比例下相混合，酒精的脱水能力比较强，又能硬化组织。

但是酒精的船头速度很快，对于组织会有明显的收缩作用。

因此在以酒精作为脱水剂时，应该先从浓度较低的酒精开始，然后递增其浓度，这样可以避免组织过度收缩。

第一瓶酒精浓度随固定剂，脱水组织的大小和种类而异，经水溶性固定剂固定的细柔组织需要慢慢脱水，从50％酒精开始。

如眼球，组胚组织等大多数组织标本则是从70％酒精开始，再经80％，95％以至无水酒精。

但是有时为了某种特殊要求，例如要做糖元的切片标本或是要做尿酸结晶染色切片标本，为了防止糖元和尿酸结晶在水中消失却要直接投入无水酒精中固定，而不需要经过水洗和低浓度酒精的脱水过程。

经无水酒精固定后的组织只需要再经过换一次无水酒精脱水即可。

用AAF固定液固定的组织可直接置于95％酒精开始脱水。

用醇性固定剂（如Carnoy）则可置于高浓度无水酒精内，但应多次换液以除酸。

一般情况下，组织经过70％，80％，90％，95％，以至无水酒精的脱水程序，即可达到脱水的要求。

但是为了能使大量的组织块同时进行脱水，则要求保持液体的浓度以保证脱水的作用，最好是以两次95％酒精，两次100％酒精重复进行脱水，以保证组织的水分脱净。

常规的石蜡包埋过程包括五个基本步骤，即固定，脱水，透明，浸蜡和包埋制作石蜡切片，切片前须将石蜡渗透组织包埋于石蜡中，而水与石蜡又是不相混合的，所以在浸蜡，包埋前必须将组织内所含的水分脱去。

而大多数的组织固定剂是水溶液,随后的水冲洗也使其含有大量水分，因此必须先行脱水,一般是浸入逐级增加浓度的酒精来完成。

由于酒精和石蜡不能混合，须再用一种石蜡的溶剂来置换酒精，因大多数石蜡溶剂有使组织的折光率增高并表现为透明或半透明状，所以此步骤又称透明。

最后用石蜡浸渍组织并铸制成坚实的蜡块。

常规的石蜡包埋过程包括五个基本步骤,即固定,脱水,透明，浸蜡和包埋,前一章中已述过固定。

第一节脱水脱水就是用脱水剂完全除去组织内的水分，为下一步透明及浸蜡创造条件.此外，脱水还可以使组织再次发生一定的硬化，脱水剂必须是与水在任何比例下均能混合的液体.一．常用的脱水剂1．酒精：是制片最常用的试剂，可与水在任何比例下相混合，酒精的脱水能力比较强，又能硬化组织。

但是酒精的船头速度很快，对于组织会有明显的收缩作用。

因此在以酒精作为脱水剂时,应该先从浓度较低的酒精开始,然后递增其浓度，这样可以避免组织过度收缩。

第一瓶酒精浓度随固定剂，脱水组织的大小和种类而异,经水溶性固定剂固定的细柔组织需要慢慢脱水，从50％酒精开始。

如眼球，组胚组织等大多数组织标本则是从70％酒精开始，再经80％，95％以至无水酒精。

但是有时为了某种特殊要求，例如要做糖元的切片标本或是要做尿酸结晶染色切片标本，为了防止糖元和尿酸结晶在水中消失却要直接投入无水酒精中固定，而不需要经过水洗和低浓度酒精的脱水过程。

经无水酒精固定后的组织只需要再经过换一次无水酒精脱水即可.用AAF固定液固定的组织可直接置于95%酒精开始脱水.用醇性固定剂(如Carnoy）则可置于高浓度无水酒精内，但应多次换液以除酸.一般情况下，组织经过70％，80％，90％,95％,以至无水酒精的脱水程序，即可达到脱水的要求.但是为了能使大量的组织块同时进行脱水,则要求保持液体的浓度以保证脱水的作用，最好是以两次95％酒精，两次100％酒精重复进行脱水，以保证组织的水分脱净。

组织经过透明剂的完全透明后，被移放于65℃左右熔化的石蜡中，于65℃的电热恒温箱中浸渍的过程称为浸蜡。

组织在脱水时，组织中的脂类和类脂等物质在脱水剂的作用下被溶解掉，留下了许多腔隙，许多管腔组织和血管，也有许多腔隙，这些都严重地影响了切片。

组织浸蜡时，由于诱导剂（二甲苯）的作用，石蜡进入到组织的各个角落，并在各个角落中保存下来。

当石蜡包埋后冷却时，这浸入到里面的石蜡便可起到支撑的作用，而且使组织不致于变形，塌陷等现象，使切片能完整的切出，便于镜下观察。

组织浸蜡据多次文献报到必须换几次不同熔点的石蜡。

石蜡有软蜡和硬蜡之分，软蜡的熔点有45℃、52~54℃。

硬蜡的熔有56~58℃，58~60℃、60~62℃。

浸蜡的顺序是先软蜡，后硬蜡，浸蜡的时间根据组织不同而确定不同的时间。

有的人指出组织浸蜡先放入二甲苯与石蜡等份混合的液体中浸渍然后再放入软蜡、硬蜡。

根据使用经验我认为不必要这样做。

因为组织经二甲苯或其它透明剂透明后，在组织进入石蜡时，自己还带着残存的透明液，如为手工操作，可将组织块控干，尽量减少残存液的存在，而自动脱水机则不然，组织可存留一定量的透明剂，经使用次数多次后，残存的透明剂可把石蜡稀释。

因此机器程序处理的次数较多时，应注意换石蜡，以防组织浸蜡效果不好。

一、石蜡的性质石蜡是一种碳氢化合物，由矿物油的分裂产生，它的性质是相当的不同，其熔点在45~62℃之间。

熔点高的为硬蜡，硬度较高，适合于夏天切片的用蜡，熔点低的为软蜡，54℃以下的称为软蜡，这种适合于组织化学的切片用蜡。

根据石蜡的特点，根据季节的不同，合理地使用不同熔点的石蜡，这是能否切好片，使切片产生带状的关键。

二、石蜡性质的改善为了获得较好的连续切片，人们想出了许多种方法，对石蜡进行改造，使石蜡的硬度和柔软性更适合于佳片的切出，提出了许多种方法：石蜡加热冷却法刚购入的石蜡,不管是动植物切片石蜡也好,还是工业用蜡也好,都必须进行处理,方法是:将石蜡放于容器里,于电炉上加热,此时石蜡遇热熔解并发出哔哔吧吧的声音,这是石蜡中含有的杂质,遇热后分解所发出的声音,随着时间的延长,温度的升高,这种声音将逐渐减少,直至消失。

常规石蜡切片制片方法组织经系列酒精的脱水，经透明剂的作用，经熔化的石蜡的浸渍，包埋后所切成的切片称为石蜡切片。

组织脱水把含于组织内或细胞内的水份用脱水剂把其置换出来的过程称组织脱水。

不管是正常的组织，还是有病变的组织，都含有不同程度量的水分。

据测定，人体的物质组成约含水55~67%，蛋白质15~18%，脂类10~15%，无机盐3~4%及糖类1~2%[14]。

如果不把这些水分脱去，石蜡切片将无法进行，因为石蜡和水不能混合在一起，所以除去组织中的水分成为制片中的关键，用什么物质才能担当起这个重任呢，至今为止，国内所用的都是酒精。

因它不管在什么样比例的情况下都能和水混合，所以它可以慢慢地将水从组织中置换出来。

酒精脱水力强，对组织又有硬化和易脆的不良影响。

在使用时，通常是从低浓度至高浓度，浓度系列通常是70%、80%、90%、95%和100%，组织经过这一系列处理后，基本可达到脱水的目的。

临床上如使用含酒精的固定液固定组织时，(Carnoy氏、AAF液)组织不需要经过低浓度的酒精，可直接进入95%酒精脱水。

组织脱水，目前常用的有两种方法1.人工组织脱水法该法经济实惠，灵活度高，可根据不同的组织及其大小来确定脱水时间，也可根据不同组织及大小分批进行脱水，其优点是：①可根据不同的组织及大小，任意增减脱水时间，达到脱水目的。

②可随时观察组织的变化，随时中断组织的脱水，不使组织过度硬脆。

③可以多层次地进行脱水。

缺点：①需耗费人力，每个步骤的递增都需要人工完成。

②不能大批量的进行脱水。

③必须在上班完成脱水或者定点于某一浓度的酒精中过夜，晚上无法进行梯度递增。

2.自动组织脱水机脱水法自动组织脱水机的机型品种繁多，大小不一，国内生产的轨道式和圆盘式两种，国外生产的有圆盘式和柜式两种，上述国内外四种型号的机子，我们都使用过，根据使用的效果做一简单介绍。

①轨道式自动组织脱水机。

这种机子容量小，脱水用的试剂不足一千毫升，组织块脱水用的提篮小，每次只能容纳40块组织左右，它适合于较小的单位，但不适合于大单位。