Ca++ Mg++- ATP酶活性检测试剂盒说明书 微量法

亚铁氧化酶（HP ）活性检测试剂盒说明书微量法货号：BC4345规格：100T/48S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称规格保存条件试剂一液体20 mL×1瓶2-8℃保存试剂二液体3 mL×1瓶2-8℃保存试剂三粉剂×1瓶2-8℃保存标准品液体1 mL×1支2-8℃保存溶液的配制：1、试剂三：临用前加入6 mL 蒸馏水溶解备用，用不完的试剂2-8℃保存4周。

2、标准品：9 µmol/mL 的亚铁离子标准液。

产品说明：亚铁氧化酶（Hsphasetin ，HP ）是铜蓝蛋白的同系物，催化亚铁离子（Fe 2+）氧化为三价铁离子（Fe 3+），从而三价铁与转铁蛋白结合，参与细胞铁释放。

以一定浓度的Fe 2+ 为底物，在亚铁氧化酶的催化作用下Fe 2+ 被氧化为Fe 3+，Fe 2+ 与菲咯嗪形成有色复合物，在562 nm 处有特征吸收峰，先计算出未被氧化的Fe 2+ 的含量，进而得出被氧化的Fe 2+ 的含量，可通过Fe 2+被氧化的速率来反映亚铁氧化酶活性。

FeFe 3+Fe 2+[Fe (phen)3]2+ (562nm)注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、低温离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水、EP 管。

操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、组织：按照质量（g ）︰蒸馏水体积(mL)为1︰5~10的比例（建议称取约0.1 g ，加入1 mL 蒸馏水）加入蒸馏水，冰浴匀浆后于10000 rpm ，4℃离心10 min ，取上清置于冰上待测。

2、血清或血浆：建议用蒸馏水将血清或血浆稀释2~4倍后直接检测。

NADP-苹果酸酶（NADP-ME）活性检测试剂盒说明书微量法货号：UPLC-MS-4365规格：100T/96S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称规格保存条件提取液液体110mL×1瓶4℃保存试剂一液体20mL×1瓶4℃保存试剂二粉剂×1瓶4℃保存试剂三粉剂×1支4℃保存试剂四粉剂×1支-20℃保存溶液的配制：1、试剂二：用时加入10mL提取液充分溶解备用；2、试剂三：用时加入用时每支加1mL双蒸水充分溶解备用；3、试剂四：用时每支加500μL双蒸水充分溶解备用；4、工作液：在7.5mL试剂二中加入1mL试剂三和0.5mL试剂四，可以根据比例现用现配。

产品说明：ME广泛存在于微生物、培养细胞、动物和植物胞浆中，尤其在植物组织中活性较高。

ME催化苹果酸氧化脱羧的可逆反应，产生丙酮酸和CO2，以及伴随NAD(P)+的还原反应，是苹果酸代谢的关键酶。

ME活性与生物合成和抗氧化密切相关。

近年来植物ME活性测定较多，已经成为抗氧化研究的热点。

根据辅酶专一性和对底物特异性的不同，可将ME分为NAD-ME(EC1.1.1.38)和NADP-ME(EC1.1.1.40)。

NADP-ME催化NADP+还原成NADPH，在340nm下测定NADPH增加速率。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：紫外分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、微量石英比色皿/96孔UV板、研钵/匀浆器和蒸馏水。

操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、细菌、细胞或组织样本的制备：细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，弃上清，按照每500万细菌或细胞加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率20%，超声3s，间隔10s，重复30次）。

线粒体呼吸链复合体Ⅳ/细胞色素C 氧化酶活性检测试剂盒说明书微量法注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。

货号：BC0945规格：100T/96S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称规格 保存条件 提取液液体75 mL×2瓶 2-8℃保存 试剂一液体33mL×1瓶 2-8℃保存 试剂二粉剂×2瓶 -20℃保存 试剂三粉剂×2支 2-8℃保存溶液的配制：1、 试剂二：试剂放于试剂瓶内玻璃瓶中。

临用前取1支加入13.5mL 试剂一溶解，用不完的试剂-20℃分装保存2周，避免反复冻融；2、 试剂三：试剂置于试剂瓶内EP 管中；临用前取1支加入2mL 试剂一溶解，用不完的试剂-20℃保存2周，避免反复冻融；3、 工作液的配制：临用前取0.5mL 试剂三加入到溶解好的4.5mL 试剂二中混合备用（约25T ），或者按比例现用现配。

产品说明：线粒体复合体Ⅳ又称细胞色素C 氧化酶，也是线粒体呼吸电子传递链主路和支路的共有成分，负责催化还原型细胞色素C 的氧化，并最终把电子传递给氧生成水。

还原型细胞色素C 在550nm 有特征光吸收，线粒体复合体Ⅳ催化还原型细胞色素C 生成氧化型细胞色素C ，因此550nm 光吸收下降速率能够反映线粒体复合体Ⅳ酶活性。

Reduced Cytochrome C （550nm ） Oxidized Cytochrome C注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器/细胞超声破碎仪、冰和蒸馏水。

操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1. 称取约0.1g 组织或收集500万细胞，加入1.0 mL 提取液，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。

1. Introduction
ATPLite TM is an Adenosine TriPhosphate (ATP) monitoring system based on firefly (Photinus pyralis) luciferase. This luminescence assay is the alternative to colorimetric, fluorometric and radioisotopic assays for the quantitative evaluation of proliferation and cytotoxicity of cultured mammalian cells. ATP monitoring can be used to assess the cytocidal, cytostatic and proliferative effects of a wide range of drugs, biological response modifiers and biological compounds 1,2,3,4,5,6. The major advantages of this system are high sensitivity, excellent linearity, simplicity, fast results and the lack of cell harvesting or separation steps. Furthermore, the PerkinElmer ATPLite “Constant Quanta TM ” assay system produces a long lived “glow” type signal with a half-life of greater than five hours, therefore a special luminometer with injectors is not required. The kit is ideal for use with the PerkinElmer TopCount Microplate Scintillation and Luminescence Counter and the LumiCount Microplate Reader in both 96- and 384-well microplates. The simplicity of the ATPLite assay system in a 96-well microplate is illustrated in Figure 1.

植酸酶活性检测试剂盒说明书微量法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

货号：UPLC-MS-5122规格：100T/48S产品内容：提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存。

缓冲液：液体10mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：粉剂×2支，4℃保存，临用前加缓冲液4mL配制，现用现配。

试剂二：液体10mL×1瓶，4℃保存。

试剂三：液体10mL×1瓶，4℃保存。

显色剂：粉剂×6瓶，4℃保存，临用前根据用量每瓶加0.4mL双蒸水溶解，再加1.6mL试剂三混匀。

样本处理产品说明：植酸酶（phytase）是催化植酸及其盐类水解为肌醇与磷酸（盐）的一类酶的总称，属磷酸单酯水解酶，它能将食品和饲料中植酸及其盐转化为可供有机体利用的有效磷，降低粪便中的磷含量，减轻对环境的污染，改善营养成分的吸收和利用，因此具有极其广泛的研究和应用价值。

测定原理植酸酶在一定温度和pH值条件下，水解底物植酸钠生成无机磷与肌醇衍生物，无机磷在酸性环境中与钼酸铵显色剂反应生成蓝色复合物，在700nm处有特征吸收峰，根据700nm处吸光值变化可计算得植酸酶活性。

自备实验用品及仪器天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、恒温水浴锅，超声溶解器，回旋式振荡器。

操作步骤：1.酶制剂：按照质量（g）：提取液体积(mL)为1：500~1000的比例（建议称取约0.001g，加入1mL提取液）加入提取液，在超声波溶解器上溶解15min，再用回旋式振荡器振荡15min，待测。

2.组织：按照质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，在超声波溶解器上溶解15min，再用回旋式振荡器振荡15min，4℃，4000g离心10min，取上清待测。

3.饲料样品：饲料烘干粉碎，过40目筛，按照质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，在超声波溶解器上溶解15min，再用回旋式振荡器振荡15min，4℃，4000g离心10min，取上清待测。

ATP酶活性检测试剂盒（样本无需高速离心样本无需高速离心，，可测Na+k+、Ca2+Mg2+、Ca2+、Mg2+_ATPase)说明书修订日期：2019.01.22 Cat number：KGT026Store at -20 for for 6 months℃For Research Use Only（科研专用）一、试剂盒介绍ATP酶存在于组织细胞及细胞器的膜上，是生物膜上的一种蛋白酶，它在物质运送、能量转换以及信息传递方面具有重要的作用。

本试剂盒的测定原理是依据ATP酶可分解ATP生成ADP及无机磷，测定无机磷的量可判断ATP酶活力的高低。

本试剂盒可测不需要高速离心的红细胞膜以及不需要高速离心的组织匀浆中的ATPase。

二、试剂组份组份名称KGT02650tests保存条件试剂A 10mL×3试剂B 10mL×1试剂C 10mL×12-8℃试剂D 粉剂×3 -20℃试剂E 粉剂×1试剂F 粉剂×12-8℃试剂G 10mL×2 RT试剂H 粉剂×3试剂I 粉剂×12-8℃试剂J：2.5 mol/L 硫酸100mL×1 RT 试剂K：10 m mol/L 标准磷储液10mL×1 2-8℃试剂D：-20℃以下保存6个月。

用时每支加双蒸水至5ml，现用现配。

余下的-20℃以下可保存一周。

试剂E：用时每支加双蒸水至5ml，适当加热溶解，4℃保存3个月。

试剂F：用时每支加双蒸水至10ml[注1]，充分加热使其完全溶解，室温保存。

试剂H：用时每瓶加双蒸水至40ml溶解，（溶解后避光4℃可保存一周）。

试剂I：用时加水至100ml溶解，室温保存3个月。

0.5umol/ml标准磷工作液配制：用时将试剂K作20倍稀释: 取0.5ml加蒸馏水定容至10ml。

定磷剂的配制：按双蒸水：2.5mol/L硫酸：试剂H：试剂I=2:1:1:1的比例配制，配好的定磷剂应为浅黄色，若无色则试剂失效，若是蓝色则为磷污染，定磷剂现用现配。

ATP酶测试盒说明书（不高速可测Na+-k+、Ca2+-Mg2+、Ca2+、Mg2+-ATPase）此试剂盒可测不需要高速离心的红细胞膜以及不需要高速离心的组织匀浆中的ATPase。

比色法：50管/48样一、测定原理：ATP酶可分解ATP生成ADP及无机磷，测定无机磷的量可判断ATP酶活力的高低。

二、试剂组成与配制：试剂一：液体10ml×3瓶，4℃保存6个月。

试剂二：液体10ml×1瓶，4℃保存6个月。

试剂三：液体10ml×1瓶，4℃保存6个月。

试剂四：粉剂×3支，-20℃以下保存6个月。

用时每支加蒸馏水至5ml，现用现配。

余下的-20℃以下可保存一周。

试剂五：粉剂×1支，4℃保存6个月。

用时加蒸馏水至5ml，适当加热溶解，4℃保存3个月。

试剂六：粉剂×1支，4℃保存6个月。

用时加蒸馏水至10ml，充分加热使其完全溶解，室温保存。

试剂七：液体10ml×2瓶，室温保存6个月。

试剂八：粉剂×3瓶，4℃保存6个月。

用时每瓶加水至40ml溶解。

（溶解后避光4℃可保存一周）。

试剂九：粉剂×1瓶，4℃保存6个月。

用时加水至100ml溶解，室温保存3个月。

试剂十：液体100ml×1瓶，室温保存6个月。

试剂十一：10mmol/L标准磷贮备液10ml×1瓶，4℃保存6个月。

0.5μmol/ml标准磷应用液配制：用时将贮备液20倍稀释，即取0.5ml加蒸馏水定容至10ml。

定磷剂的配制：按试剂八：试剂九：蒸馏水：试剂十=1：1：2：1的比例配制，配好的定磷剂应为浅黄色，若无色则试剂失效，若是蓝色则为磷污染，定磷剂现用现配。

三、试剂组成与配制：试剂一：液体10ml×6瓶，4℃保存6个月。

试剂二：液体10ml×2瓶，4℃保存6个月。

试剂三：液体10ml×1瓶，4℃保存6个月。

试剂四：粉剂×5支，-20℃以下保存6个月。

ATP含量试剂盒使用说明一、试剂盒的组成1.ATP酶：可催化ATP与啶酮核苷酸底物反应，产生荧光发射。

2.底物液：包含啶酮核苷酸底物、辅酶CoA、磷酸化底物和缓冲液等成分。

3.酶反应终止液：用于停止ATP酶的活性，停止荧光信号的产生。

4.荧光标准品：已知浓度的ATP溶液，用于绘制标准曲线。

5.读取缓冲液：用于在荧光分析仪上读取荧光信号。

二、使用步骤1.试剂室温平衡：将试剂盒中的所有试剂恢复到室温，并确保所有试剂充分均匀混合。

2.样品预处理：根据实验需要，选择合适的方法提取细胞或组织中的ATP，并计算样品的蛋白质含量。

3.准备标准曲线：取不同浓度的荧光标准品，并用读取缓冲液稀释到一系列已知浓度的溶液。

每个浓度至少重复3次。

将这些标准品稀释到试管中。

4.样品处理：将不同待测样品分别加入到试管中，各样品至少重复3次。

同时加入空白对照组，只加读取缓冲液而无待测样品。

5.加入试剂：将相应体积的底物液加入到每个试管中，充分混合。

立即向每个试管中加入适量的ATP酶，同时进行混合。

6.反应：将试管密封，并在37℃下孵育一段时间，一般为10-30分钟。

7.停止反应：向每个试管中加入相应体积的酶反应终止液，停止ATP酶的活性，停止荧光信号的产生。

8.读取荧光：将每个试管置于荧光分析仪上，使用适当的激发波长和发射波长对荧光信号进行测量，记录下荧光单位值。

9.绘制标准曲线：将标准曲线上的荧光单位值与标准品的ATP浓度进行对应，绘制标准曲线。

10.计算样品ATP含量：根据样品荧光单位值和标准曲线，计算出样品中的ATP含量。

三、注意事项1.所有试剂的操作应按照试剂盒说明进行，不同品牌可能有些许差异，应严格按照相应说明进行操作。

2.手术操作时应采取无菌操作，避免对样品的污染。

3.混合试剂时需充分振荡，确保试剂均匀混合。

4.在实验过程中，所有试管、吸头等实验用具应标注清楚，避免混淆和误操作。

5.反应时间会影响结果，不同实验目的可根据需要进行时间的调整，一般30分钟内可得到稳定的信号。

ATP发光检测试剂盒(ATP-Lite Assay Kit)产品说明：ATP，是生命体最基本的能量分子，一种通用的能量“货币”。

ATP参与多种酶促反应，维持正常的生命活动。

通过ATP检测，可以间接定量测定细菌、细胞的数量和活性状态，了解体外ATP参与的酶促反应的进程，在生物检定和生命科学研究中有广泛的应用。

本试剂盒采用生物发光(bioluminescent)法，依据荧光素酶(luciferase)催化底物荧光素的转化，高效利用ATP的能量，发射出光子。

萤火虫荧光素酶(Fireflyluciferase)催化的发光反应，与ATP浓度具有很好的线性依赖关系和极高的敏感性，ATP的检测灵敏度达到10-13 mol。

本试剂盒采用优化的酶反应体系，使发光反应持续数十分钟，以便于手工操作多个样品。

操作简便，可快速获得结果。

产品内容与储存方法：名称数量保存条件100x Lysis Buffer (细胞裂解液) 1 ml -20℃ATP Assay Buffer (反应缓冲液) 10 ml -20℃mlLuciferin 0.5-20℃Firefly luciferase 1 ml -20℃ATP (1 mM) 0.5 ml -20℃可作200次以上ATP检测。

低温运输，-20℃或-80℃避光保存。

有效期6个月。

所需其它试剂：使用者需准备PBS 、双蒸水等。

操作方法：样品准备：对于细胞或微生物样品，应首先提取ATP。

本试剂盒提供培养哺乳细胞的ATP提取方法如下。

其它标本来源的ATP提取，一般可用三氯乙酸的提取方法，或参照文献一些有效提取方法进行。

对体外酶促反应样品，一般可直接用双蒸水稀释后进行检测。

样品中ATP含量应稀释到0.1 mM一下，以保证在测定的线性范围内。

培养哺乳细胞样品准备：1)配制裂解液：临用前，取适量100x Lysis Buffer (ULB)，用双蒸水稀释至1xLB，混匀。

1xLB可长期冻存于-20℃。

磷酸果糖激酶（PFK）活性检测试剂盒说明书微量法注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。

货号：BC0535规格：100T/96S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称规格保存条件提取液液体100 mL×1瓶4℃保存试剂一液体20 mL×1瓶4℃保存试剂二粉剂×1瓶-20℃保存试剂三液体25μL×1瓶-20℃保存试剂四液体10μL×1瓶4℃保存溶液的配制：1、试剂二：临用前加入17 mL试剂一和1.13 mL蒸馏水充分溶解，置于37℃（哺乳动物）或25℃（其他物种）水浴5分钟，用不完的试剂-20℃分装保存一周；2、试剂三：液体置于试剂瓶内EP管中。

临用前根据用量按照试剂三:蒸馏水为1:50的体积比例充分混匀，现用现配；用不完的试剂三原液建议-20℃分装保存，避免反复冻融；3、试剂四：液体置于试剂瓶内EP管中。

临用前根据用量按照试剂四:蒸馏水为1:125的体积比例充分混匀，现用现配。

产品说明：PFK（EC 2.7.1.11）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，负责将果糖-6-磷酸和ATP转化为果糖二磷酸和ADP，是糖酵解过程的关键调节酶之一。

PFK催化果糖-6-磷酸和ATP生成果糖-二磷酸和ADP，丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶进一步依次催化NADH氧化生成NAD+，在340nm下测定NADH下降速率，即可反映PFK活性。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿或96孔板（UV）、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）提取液体积（mL）为500-1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20%或者200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

ATP含量检测试剂盒说明书微量法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。

货号：BC0305规格：100T/96S产品内容：提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存；试剂一：液体20mL×1瓶，4℃保存；试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。

临用前加入3.5mL蒸馏水充分溶解，可加热促进溶解；试剂三：液体4mL×1瓶，4℃保存；试剂四：粉剂×1支，-20℃保存。

临用前每支加入0.4mL蒸馏水溶解，可分装后-20℃保存，避免反复冻融；试剂五：粉剂×1瓶，4℃保存。

临用前加入1mL蒸馏水；试剂六：粉剂×1支，-20℃保存。

临用前加入0.5mL蒸馏水备用，可分装后-20℃保存，避免反复冻融；标准品：粉剂×1支，-20℃保存。

5mg ATP，临用前加入0.826mL蒸馏水配成10μmol/mL的ATP标准溶液。

产品说明：ATP广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是生物能量通货，能荷是描述细胞能量代谢状态的主要参数。

测定ATP含量并且计算能荷，能够反映能量代谢状态。

HK催化葡萄糖和ATP合成6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖脱氢酶进一步催化6-磷酸葡萄糖脱氢生成NADPH，NADPH在340nm有特征吸收峰，NADPH和ATP含量成正比，以此反应ATP含量。

自备仪器和用品：紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液枪、微量石英比色皿/96孔UV板、研钵/匀浆器、蒸馏水和氯仿。

操作步骤：一、ATP的提取：1、血清（浆）中ATP的提取：按照血清（浆）体积（mL）：提取液体积（mL）为1：5~10的比例（建议取约0.1mL血清（浆），加入1mL提取液），充分震荡，10000g，4℃离心10min；取上清液至另一EP管中，加入500μL的氯仿充分震荡混匀，10000g4℃离心3min，取上清，置冰上待测（不可用于蛋白质含量测定）。

即使出厂的时候经过严格的操作，标准检测溶液中可能还会有微量的 ATP 残留，可以 通过在室温下静止的方法烧光其中的 ATP，一般需要 20 分钟，这一步对于测量超微量 ATP 是十分必要的。

本试剂盒使用方便，通常可以在 30-60 分钟内测定完成 10-20 个样品的测定。 本试剂盒提供的试剂可以检测 100 个样品。 包装清单：
ATP 检测试剂
1ml×5 瓶
ATP 标准溶液(1mM)
1ml
ATP 检测裂解液 5×
5ml
说明书
1份
保存条件： -20℃保存，半年有效。-70℃保存，一年有效。 ATP 检测试剂需避光保存。ATP 检测
沈阳中科靓马生物工程有限公司
ATP测定试剂盒使用说明书
产品简介：
本公司提供的 ATP 测定试剂盒(ATP Determination Kit),是基于有 ATP 存在的条件下，萤
火虫荧光素酶可催化底物 D－荧光素氧化并发射荧光（约 560nm，pH7.8），以及在除 ATP
外其它底物处于过量的情况下，光子数量与 ATP 量呈线性关系这一原理。
液 4℃保存请于 5 天内使用完。 注意事项： 1、ATP 检测试剂中含有荧光素酶，反复冻融将导致失活。 2、ATP，特别是裂解后样品中的 ATP 在室温下不稳定，需在 4℃或冰上操作。
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3、5×ATP 检测裂解液要用双蒸水稀释成 1 倍浓度后使用。 4、本试剂盒须与光度计或液闪仪匹配使用。 5、实验时应穿戴一次性手套操作，以免外源 ATP 污染。 使用说明： 1. ATP 标准曲线制定：
⑴．冰浴上溶解待用试剂，把 ATP 标准溶液用双蒸水或去离子水稀释成适当的浓度梯 度。具体的浓度需根据样品中 ATP 的浓度而定。一共需稀释 5 个梯度。加入标准检测溶液 中稀释的 ATP 标准溶液其体积不应超过总检测液的 10％。

ATP含量试剂盒使用说明产品简介：ATP广泛存在于动物、植物、、微生物和培养细胞中，是描述细胞能量代谢状态的主要参数。

测定ATP含量并且计算能荷，能够反映能量代谢状态。

ATP在254nm下有吸收峰，可以利用高效液相色谱法测定其含量。

试验中所需的仪器和试剂：高效液相色谱仪、低速离心机、溶剂抽滤装置、针头式过滤器（水系，50个，0.22μm）、滤膜（水系和有机系各1个，0.45μm）、C18柱（4.6×150mm）、可调式移液器、样品瓶（50个，2mL）、甲醇（色谱级，300mL）、甲醇（色谱级，300mL）、蒸馏水产品内容：试剂一：液体60mL×1瓶，4℃保存；试剂二：液体60mL×1瓶，4℃保存；试剂三：粉剂1×1瓶，粉剂2×1瓶，4℃保存；临用前用少量蒸馏水将粉剂1和粉剂2溶解后倒入1000mL容量瓶中，用蒸馏水定容至1000mL，形成流动相缓冲液基质（注：试剂瓶中的粉剂要冲洗干净）,4℃可保存1周；试剂四：ATP标准品5mg×1支，-20℃保存。

临用前加入1mL双蒸水，配成5mg/mL溶液，配好后-20℃可保存1周；操作步骤：一、实验前的准备工作：1、将双蒸水1000mL、流动相缓冲液基质1000mL和甲醇300mL用0.45μm的滤膜抽滤，以除去溶剂中的杂质，防止堵塞色谱柱。

（注：双蒸水和缓冲液基质用水系滤膜抽滤，甲醇用有机系滤膜抽滤）。

2、流动相的配制：将抽滤完毕的流动相缓冲液基质1000mL与甲醇配比为99.9：0.1（v/v），即取999mL缓冲液基质与1mL甲醇混合。

3、将抽滤完毕的甲醇和双蒸水配比成100%的甲醇，10%的甲醇，双蒸水各250mL。

将2和3中的溶剂超声30分钟，以脱去溶剂中的气泡，防止堵塞色谱柱。

二、ATP的提取：1、组织的处理：准确称取组织重量0.1g，加入1mL试剂一，提取ATP，4000g常温离心15min，取上清液，加入等体积的试剂二，混匀，4000g常温离心15min，取上清，0.22μm水系微孔滤膜过滤后冰上放置，待测。

微量法线粒体复合体Ⅱ活性检测试剂盒说明书货号:UPLC-MS-4583规格:100T/96S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称规格保存条件提取液液体80mL×2瓶4℃保存试剂一液体40mL×1瓶4℃保存试剂二粉剂×1支-20℃保存试剂三粉剂×1支4℃保存试剂四液体 2.5mL×1瓶4℃保存溶液的配制：1、试剂二：溶于1mL丙酮，可分装后-20℃保存。

临用前再用丙酮100倍稀释后使用。

2、试剂三：临用前加入2mL丙酮溶解备用。

3、工作液的配制：临用前将试剂二和试剂三按1：1混合，现用现配。

产品说明：线粒体复合体Ⅱ又称琥珀酸-辅酶Q还原酶，广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体中，催化琥珀酸氧化生成延胡索酸，同时辅基FAD还原为FADH2，后者进一步还原氧化型辅酶Q生成还原型辅酶Q，是呼吸电子传递链的支路。

复合体Ⅱ的催化产物还原型辅酶Q可进一步还原2,6-二氯吲哚酚，2,6-二氯吲哚酚在605nm有特征吸收峰，通过检测2,6-二氯吲哚酚的减少速率来计算该酶活性。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、丙酮、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、称取约0.1g组织或收集500万细胞，加入1.0mL提取液，用匀浆器或研钵于冰上匀浆。

2、4℃600g离心10min。

将上清液移至另一离心管中，4℃11000g离心15min。

3、上清液即胞浆提取物，可用于测定从线粒体泄漏的复合体Ⅱ（此步可选做，可以判断线粒体提取效果）。

4、在沉淀中加入400μL提取液，超声波破碎（功率20%，超声5秒，间隔10秒，重复15次），用于复合体Ⅱ酶活性测定，并且用于蛋白含量测定。

ATP含量检测试剂盒（可见分光光度法）使用说明注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。

货号：BC0300规格：100T/48S产品内容：组分规格保存试剂一底物液Ⅰ粉剂×1瓶室温保存底物液Ⅰ配制：用时加10mL煮沸双蒸水溶解，并沸水浴使溶解完全；临用前观察如有结晶，可沸水浴溶解后置于37℃保存待测。

试剂二底物液Ⅱ20mL×1瓶4℃保存试剂三促进剂粉剂×2支-20℃保存稀释液760μL×2瓶4℃保存试剂三应用液（促进剂）配制：临用前取1支试剂三稀释液加入1支试剂三粉剂中，充分溶解备用。

试剂四沉淀剂液体 5.5mL×1瓶4℃保存试剂五显色剂甲液7mL×4瓶4℃保存乙液6mL×4瓶4℃保存显色应用液的配制：用时取一瓶显色剂甲液加入一瓶显色剂乙液中，充分混匀4℃待用，现用现配。

试剂六终止剂50mL×1瓶室温保存试剂七ATP标准品粉剂×2支4℃保存5mmol/L ATP标准品贮备液配制：用时加双蒸水定容至1mL，制备5mmol/L ATP标准品贮备液。

1mmol/L ATP标准品应用液配制：将标准品贮备液与双蒸水1:4稀释，即5倍稀释。

产品说明：三磷酸腺苷（adenosine5'-triphosphate，ATP）是生物体内能量转换最基本的载体,其含量的变化直接关系到各器官的能量代谢。

ATP作为最重要的能量分子在细胞的各种生理、病理过程中起着重要作用。

ATP水平的改变，会影响许多细胞的功能。

通常细胞在凋亡、坏死或处于一些毒性状态下，ATP水平会下降，而高葡萄糖刺激等对于一些细胞可以上调细胞内ATP水平。

通常ATP水平的下降表明线粒体的功能受损或下降，在细胞凋亡时ATP水平的下降通常和线粒体的膜电位下降同时发生状态。

ATP含量测定试剂盒可以用于检测红细胞或组织内的ATP水平。

自备仪器和用品：分光光度计、水浴锅、可调式移液枪、台式离心机、研钵和蒸馏水。

样本 细胞、组织 细胞、组织 细胞、组织 细胞、组织 细胞、组织
细胞、组织 细胞、组织 细胞、组织 细胞、组织 红细胞 红细胞 红细胞
红细胞
检测方法 分光光度计 分光光度计 分光光度计 分光光度计 分光光度计
微孔板，酶标仪 微孔板，酶标仪
分光光度计 分光光度计 分光光度计 分光光度计 分光光度计 分光光度计
0.3
1.0
1.0
1.0
混匀，室温静置 2 分钟
1.0
1.0
1.0
T-ATPase 测定管
0.3 1.0 1.0
混匀，室温静置 5 分钟，纯水调零，636nm，1cm 光径，测各管 OD 值。
【注】： 在比色前，将比色皿用自来水冲洗 10 余次，再用纯水冲洗 4~5 次，以免磷污染。
如果样本数量较多，可以采用简便操作法进行酶促反应：
5ml 1
组份编号
47190A 47190B 47190C 47190D 47190E1 47190E2 47190F 47190G
1
有效期：
6 个月。
【注】： 有效期为试剂盒未拆封前按要求条件保存的有效期。 试剂拆封后请尽快使用完！
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内容
产品储存条件： 产品组成： 有效期： 重要事项说明： 产品简介： 产品选择指南： 自备仪器试剂耗材： 产品使用方法： 相关产品：
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试剂盒以外自备仪器和试剂耗材：
仪器：
636nm的分光光度计 37℃恒温水浴锅 离心机 移液器 冰箱 冰盒 涡旋混匀器
试剂： 纯水
耗材： 试管 吸头
使用方法：
使用注意事项：
试剂 E 乙液在冬天或 4℃长时间保存可能会出现凝胶状物质，37℃溶解不了，可将其 60℃左右水

ATP检测试剂盒产品简介：ATP检测试剂盒(ATP Assay Kit)可以用于检测普通溶液中或细胞或组织内的ATP(adenosine 5’-triphosphate)水平。

ATP，作为最重要的能量分子在细胞的各种生理、病理过程中起着重要作用。

ATP水平的改变，会影响许多细胞的功能。

通常细胞在凋亡、坏死或处于一些毒性状态下，ATP水平会下降，而高葡萄糖刺激等对于一些细胞可以上调细胞内ATP水平。

通常ATP水平的下降表明线粒体的功能受损或下降，在细胞凋亡时ATP水平的下降通常和线粒体的膜电位下降同时发生。

本试剂盒根据萤火虫荧光素酶(firefly luciferase)化荧光素产生荧光时需要ATP提供能量研制而成。

当萤火虫荧光素酶和荧光素都过量时，在一定的浓度范围内荧光的产生和ATP的浓度成正比。

这样就可以高灵敏地检测溶液中的ATP浓度。

本检测试剂盒可以检测浓度低达0.1nmol/L的ATP。

而常规的细胞或组织裂解液中ATP的浓度仅为0.1-1μmol/L，一些常见细胞的细胞内ATP水平约为10 nmol/mg蛋白。

检测细胞或组织内ATP浓度时，用本试剂盒提供的裂解液裂解后即可以测定ATP浓度。

本试剂盒方便快捷，通常10-20个样品可以在30-60分钟内测定完毕。

本试剂盒至少可以检测200个样品。

保存条件：-20℃保存，半年有效。

-70℃保存，一年有效。

ATP检测试剂需避光保存。

注意事项：A TP检测试剂中含有荧光素酶，反复冻融会导致其逐渐失活。

为取得较好的使用效果，冻融的次数不宜超过3次。

A TP检测试剂稀释成ATP检测工作液后，最好一次用完，不宜冻存后再使用。

ATP，特别是裂解后样品中的ATP在室温不太稳定，需在4℃或冰上操作。

A TP在冰上可以稳定长达6小时。

本试剂盒需使用luminometer(检测荧光素酶报告基因时所用的仪器)。

如果没有luminometer，也可以使用液闪仪。

液闪仪的测定效果取决于液闪仪的检测灵敏度和检测精度。