线性泛素连接酶HOIP调控结肠癌细胞增殖的作用和分子机制

ATF4基因与肿瘤王慧;刘勤江【摘要】转录激活子4(ATF4)属于ATF/CREB家族,在缺氧、氨基酸缺失、氧化应激和内质网应激等应激反应中发挥重要作用.在多数肿瘤中ATF4表达上调,并能增强肿瘤的缺氧耐受和促进肿瘤的生长及血管生成因子的表达,进而参与调节肿瘤发生发展的相关过程.因此,ATF4可能成为肿瘤治疗领域中的潜在新靶点.本文通过复习相关文献对ATF4基因在肿瘤研究中的相关进展进行综述.【期刊名称】《中国医药导报》【年(卷),期】2018(015)018【总页数】4页(P36-39)【关键词】肿瘤;转录激活子4;内质网应激【作者】王慧;刘勤江【作者单位】兰州大学生命科学学院,甘肃兰州730000;甘肃省肿瘤医院头颈外科,甘肃兰州730050【正文语种】中文【中图分类】R730转录激活子 4（activatingtranscriptionfactor4，ATF4）是一种普遍的胁迫反应响应基因，被称为环腺苷酸（cAMP）连接效应元件 2（CREB2），同时也是综合应激反应途径中的重要响应器，属于激活转录因子/循环AMP反应元素结合蛋白（ATF/CREB）家族，在由缺氧、氨基酸缺失、氧化应激和内质网应激（endoplasmic reticulum stress，ERS）等应激信号诱导的反应中发挥重要作用。

近年来，许多研究发现，ATF4表达在多种肿瘤中上调，并参与调节肿瘤进展的相关过程，这提示ATF4有可能成为肿瘤治疗的潜在新靶点。

1 ATF4基因ATF4基因定位于22号染色体的q13.1，大小约2122 bp，含有3个外显子，编码蛋白包含351个氨基酸，属于ATF/CREB家族[1]。

ATF家族是一群含有碱性亮氨酸拉链区域（bZIP）的转录因子，而此区域与蛋白之间的相互作用有关，该家族成员除了ATF4外还包括 ATF1、CREB/CREM、CREB314、CREB-H、ATF2、ATF3、ATF6、ATF7、B-ATF 和 ATFX（也称为 ATF5），根据每个激活子与cAMP的结合位点不同可以区分各个成员[1]。

泛素连接酶与肿瘤关系的研究（作者：_________ 单位：___________ 邮编：___________ ）【关键词】泛素连接酶肿瘤目前认为，真核细胞内的蛋白质主要通过两种不同的蛋白酶解系统降解：溶酶体途径和泛素拟蛋白酶途径。

其中，约80%通过泛素拟蛋白酶体途径降解。

泛素连接酶是泛素拟蛋白酶体系统的重要成分，它在癌形成过程中扮演着重要的角色［1］。

本文从细胞周期、凋亡、肿瘤治疗等方面来介绍泛素连接酶与肿瘤发生和治疗的关系。

1泛素连接酶与泛素拟蛋白酶体系统1.1泛素化与蛋白降解泛素拟■蛋白酶体系统成分复杂，主要包括泛素、泛素激活酶、泛素结合酶、泛素连接酶、蛋白26S酶体等。

泛素化是一种蛋白质翻译后修饰形式，是泛素结合至靶蛋白的过程，是泛素拟蛋白酶体系统进行蛋白降解必需步骤。

泛素拟蛋白酶体系统降解蛋白的过程如下：泛素激活酶（E1）利用以ATP形式存在的能量，与泛素结合形成高能硫酯键，即E1的半胱氨残基与泛素的C末端甘氨酸残基形成高能硫酯键，构成泛素拟E1耦联物并将泛素激活。

然后通过转酯作用将活化的泛素转移到泛素结合酶（E2）的活性半胱氨酸残基上，接着E2将活化的泛素转移至相应泛素连接酶（E3）上形成高能量E3泛素耦联物，E2也可以直接将泛素转移到靶蛋白的Lys残基上，但一般靶蛋白的泛素化需要一个特异的泛素连接酶E3,最后E3可直接或间接地促使泛素转移到特异靶蛋白，使泛素的C末端羧酸酯与靶蛋白赖氨酸的£拟氨基形成异肽键，或转移到已与靶蛋白相连的泛素上形成多聚泛素链，重复直到靶蛋白质上连接的多个泛素形成一条短链。

靶蛋白与多个泛素共价结合后被蛋白酶复合体识别并降解。

1.2泛素连接酶及其类型泛素连接酶是泛素与靶蛋白结合所需要的第三个酶，它选择性地识别并结合特异的靶蛋白，决定了其在泛素介导的降解靶蛋白底物的选择性方面的重要作用。

根据识别靶蛋白序列中结构域不同，E3可分为两大类型：⑴、HECT结构域（homologous to E^A APC terminus，HECT家族的泛素连接酶（HECT E3s：HECT泛素连接酶有一个分子量约40kDa的羧基末端催化结构域，即HECT吉构域。

《LPS诱导人结肠上皮细胞（NCM460）凋亡机制研究》篇一一、引言细胞凋亡是一种复杂的生理过程，对于维持体内稳态具有至关重要的作用。

近年来，许多研究指出脂多糖（LPS）对多种细胞类型的生物学行为有显著影响，其中也包括对人类结肠上皮细胞的影响。

人结肠上皮细胞（NCM460）作为肠道屏障的主要组成部分，其凋亡过程对于理解肠道炎症性疾病的发生与发展机制具有重大意义。

本研究将深入探讨LPS诱导NCM460细胞凋亡的机制，为肠道疾病的治疗和预防提供理论依据。

二、材料与方法1. 材料实验选用人结肠上皮细胞（NCM460）作为研究对象，LPS 为刺激剂，同时使用一系列相关试剂和设备进行实验操作。

2. 方法（1）细胞培养与处理：在适宜条件下培养NCM460细胞，并使用不同浓度的LPS进行处理。

（2）凋亡检测：通过流式细胞术、Western blot等方法检测细胞凋亡情况。

（3）信号通路分析：利用PCR、免疫印迹等技术分析相关信号通路的变化。

（4）数据统计与分析：采用SPSS软件进行数据分析，结果以平均值±标准差表示。

三、结果1. LPS诱导NCM460细胞凋亡实验结果显示，随着LPS浓度的增加，NCM460细胞的凋亡率显著增加。

流式细胞术检测结果表明，LPS处理后，细胞早期和晚期凋亡的比例均有所上升。

2. 凋亡相关基因和蛋白的表达变化Western blot和PCR结果表明，LPS处理后，促凋亡基因和蛋白的表达水平上升，而抗凋亡基因和蛋白的表达水平下降。

3. 信号通路分析通过对相关信号通路的检测，发现LPS处理后，NF-κB、MAPK等信号通路被激活，进一步促进了细胞的凋亡。

四、讨论本研究表明，LPS能够诱导人结肠上皮细胞（NCM460）发生凋亡。

通过检测凋亡相关基因和蛋白的表达变化，以及分析相关信号通路的激活情况，我们得出以下结论：1. LPS通过上调促凋亡基因和蛋白的表达，下调抗凋亡基因和蛋白的表达，从而诱导NCM460细胞发生凋亡。

《LPS诱导人结肠上皮细胞（NCM460）凋亡机制研究》篇一一、引言结肠癌是一种常见的消化系统恶性肿瘤，其发生、发展与细胞凋亡的调节机制密切相关。

在细胞凋亡的诸多因素中，脂多糖（LPS）作为一种常见的外源性刺激物，其对人结肠上皮细胞（NCM460）的凋亡作用机制研究显得尤为重要。

本篇论文将深入探讨LPS诱导NCM460细胞凋亡的机制，为进一步研究结肠癌的发病机理和防治提供理论依据。

二、材料与方法1. 实验材料（1）细胞株：人结肠上皮细胞株NCM460。

（2）试剂与药品：LPS、细胞培养基、胰酶等。

（3）仪器设备：倒置显微镜、流式细胞仪、实时荧光定量PCR仪等。

2. 实验方法（1）细胞培养：培养NCM460细胞并调整至对数生长期。

（2）LPS处理：将NCM460细胞分别以不同浓度LPS处理，观察其形态变化及凋亡情况。

（3）凋亡检测：采用流式细胞仪检测细胞凋亡率，实时荧光定量PCR检测相关基因表达水平。

（4）数据分析：对实验数据进行统计分析，绘制图表。

三、实验结果1. LPS诱导NCM460细胞凋亡的形态学观察通过倒置显微镜观察，发现LPS处理后NCM460细胞出现典型的凋亡形态学改变，如细胞皱缩、胞质浓缩等。

随着LPS浓度的增加和作用时间的延长，凋亡细胞比例逐渐增加。

2. LPS对NCM460细胞凋亡率的影响流式细胞仪检测结果显示，LPS处理后NCM460细胞的凋亡率显著升高，且呈浓度依赖性和时间依赖性。

低浓度LPS作用24小时后即可观察到明显的凋亡效应，而高浓度LPS作用时间更长时，凋亡率进一步增加。

3. LPS诱导NCM460细胞凋亡的相关基因表达实时荧光定量PCR检测结果显示，LPS处理后NCM460细胞中与凋亡相关的基因表达水平发生变化。

其中，促凋亡基因如Caspase-3、Fas等表达上调，而抗凋亡基因如Bcl-2表达下调。

这些结果表明LPS通过调节相关基因的表达来诱导NCM460细胞发生凋亡。

《LPS诱导人结肠上皮细胞（NCM460）凋亡机制研究》篇一摘要本研究旨在探讨脂多糖（LPS）诱导人结肠上皮细胞（NCM460）凋亡的机制。

通过实验观察LPS对NCM460细胞的影响，分析其凋亡过程中相关基因和蛋白的表达变化，为进一步了解LPS在结肠炎等肠道疾病中的作用提供理论依据。

一、引言脂多糖（LPS）是革兰氏阴性菌细胞壁的主要成分，其在人体内可引起免疫反应。

NCM460是人结肠上皮细胞系，其生物学特性和人结肠上皮细胞相近，因此常被用作研究模型。

近年来，LPS在结肠炎等肠道疾病中的作用备受关注。

然而，LPS诱导人结肠上皮细胞凋亡的具体机制尚不明确。

因此，本研究通过观察LPS对NCM460细胞的影响，分析其凋亡机制，以期为肠道疾病的防治提供新的思路。

二、材料与方法1. 材料（1）细胞系：NCM460人结肠上皮细胞系。

（2）试剂与药品：LPS、DMEM培养基、胎牛血清、MTT 试剂、Caspase-3活性检测试剂盒等。

（3）仪器设备：细胞培养箱、显微镜、酶标仪等。

2. 方法（1）细胞培养：将NCM460细胞接种于培养皿中，置于细胞培养箱中培养。

（2）实验分组：将细胞分为对照组和不同浓度的LPS处理组。

（3）MTT法检测细胞活力：通过MTT法检测各组细胞的活力，并计算细胞存活率。

（4）Caspase-3活性检测：利用Caspase-3活性检测试剂盒检测各组细胞Caspase-3的活性。

（5）Western blot检测相关蛋白表达：通过Western blot检测各组细胞中凋亡相关蛋白的表达情况。

三、结果1. 细胞活力检测结果对照组和各LPS处理组的细胞活力存在显著差异。

随着LPS 浓度的增加，细胞活力逐渐降低，表明LPS对NCM460细胞的生长具有抑制作用。

2. Caspase-3活性检测结果LPS处理组的Caspase-3活性较对照组明显升高，且随着LPS 浓度的增加，Caspase-3活性呈剂量依赖性增加，表明LPS可诱导NCM460细胞发生凋亡。

E3泛素连接酶三基序25的研究进展▲任伟;王志维【摘要】E3泛素连接酶三基序25(TRIM25)是E3泛素连接酶中三基序蛋白家族的成员之一,在天然免疫、防御病毒感染、调控细胞增殖和癌细胞迁移中起主要作用.研究表明TRIM25也能够结合RNA并调节Lin28a介导的let-7前体尿苷化.TRIM25作为一种新型蛋白在子宫发育、肿瘤发生发展、天然免疫和RNA代谢中发挥重要作用,本文将对其上述作用进行综述.【期刊名称】《广西医学》【年(卷),期】2018(040)021【总页数】4页(P2589-2592)【关键词】三基序25;E3泛素连接酶;子宫发育;肿瘤;天然免疫;RNA代谢;综述【作者】任伟;王志维【作者单位】武汉大学人民医院心血管外科,湖北省武汉市 430060;武汉大学人民医院心血管外科,湖北省武汉市 430060【正文语种】中文【中图分类】R34E3泛素连接酶三基序(tripartite motif，TRIM)家族的成员超过70个，其成员的N末端均包含有1个RING结构域、B盒结构域和卷曲螺旋结构域，此结构有助于确定底物的可变C-末端特异性[1]。

TRIM家族蛋白质在人体内具有多种作用，包括调控天然免疫中的信号转导、防御病毒感染、调控细胞增殖和癌细胞的迁移。

研究表明TRIM25、TRIM28、TRIM56和TRIM71都能结合RNA，形成一个RNA结合的E3泛素连接酶池[2-3]。

E3泛素连接酶能催化结合其泛素部分的靶蛋白，根据泛素链的类型，E3泛素连接酶池可具有不同的功能。

其中研究最多的聚泛素链是K48和K11，其形成的多聚蛋白链可以通过26S蛋白酶体来降解靶蛋白。

同时也有研究表明其他聚泛素链如K63和单泛素，在信号传导、蛋白定位和调节蛋白-蛋白质相互作用中具有重要作用[4]。

而TRIM25可以催化更多的蛋白添加到K48和K63连接的多聚蛋白链上，在天然免疫反应中能够靶向结合支架蛋白14-3-3σ，从而起到降解病毒RNA的作用，同时还可作为针对病毒RNA的下游效应物影响信号转导。

网络出版时间：２０２３－０９－２７１５：３０：１３　网络出版地址：ｈｔｔｐｓ：／／ｌｉｎｋ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｕｒｌｉｄ／３４．１０８６．Ｒ．２０２３０９２６．１４２６．００６Ｅ３泛素连接酶在结直肠癌中的作用机制研究进展李　芳１，王　珏１，晏睿阳１，李凯杨１，沈　慧１，王　丽１，张　静１，张云清２（延安大学１．医学院，２．附属医院病理科，陕西延安　７１６０００）收稿日期：２０２３－０７－１０，修回日期：２０２３－０８－１０基金项目：国家自然科学基金资助项目（Ｎｏ８２２６０５３０）；陕西省自然科学基础研究计划项目（Ｎｏ２０２２ＪＱ ９０７）；陕西省高校科协青年人才托举计划项目（Ｎｏ２０２１０３０９）；２０２２年省级大学生创新创业训练计划项目（ＮｏＳ２０２２１０７１９０８９）作者简介：李　芳（１９９０－），女，博士，讲师，研究方向：结直肠癌分子调控机制，Ｅ ｍａｉｌ：１８７９２８７３１９８＠１６３．ｃｏｍ；张　静（１９８２－），男，博士，教授，研究方向：肿瘤药理学，共同通信作者，Ｅ ｍａｉｌ：ｙａｄｘｚｊ＠ｙａｕ．ｅｄｕ．ｃｎ张云清（１９７８－），男，硕士，副主任医师，研究方向：肿瘤致病机制，通信作者，Ｅ ｍａｉｌ：ｚｈａｎｇｙｑ２８８１１２３＠１６３．ｃｏｍｄｏｉ：１０．１２３６０／ＣＰＢ２０２２１２０２２文献标志码：Ａ文章编号：１００１－１９７８（２０２３）１０－１８１１－０４中国图书分类号：Ｒ３２９ ２５；Ｒ３２９ ２８；Ｒ３４１ ３１；Ｒ７３５ ３５；Ｒ９７７ ６摘要：结直肠癌（ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌｃａｎｃｅｒ，ＣＲＣ）作为全球发病率和致死率最高的恶性肿瘤之一，其致病机制十分复杂，至今尚未完全阐明。

泛素化在ＣＲＣ的发生发展过程中扮演重要角色，其调控作用主要依赖于Ｅ３泛素连接酶泛素化修饰底物蛋白使之活性改变或发生泛素—蛋白酶体降解。

该文就ＲＩＮＧ（ｒｅａｌｌｙｉｎｔｅｒｅｓｔｉｎｇｎｅｗｇｅｎｅ）型和ＨＥＣＴ（ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓｔｏＥ６ＡＰＣ ｔｅｒｍｉｎｕｓ）型Ｅ３泛素连接酶在ＣＲＣ细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭及化疗敏感性中的作用机制及这两类Ｅ３泛素连接酶的靶向抑制剂相关研究进展作一综述，为ＣＲＣ致病机制研究及其靶向治疗提供新的思路。

《LPS诱导人结肠上皮细胞（NCM460）凋亡机制研究》篇一一、引言结肠癌是世界上最常见的消化道恶性肿瘤之一，其发生发展机制尚未完全明确。

人结肠上皮细胞（NCM460）作为结肠癌研究的重要细胞模型，对于理解结肠癌的发病机制具有重要意义。

脂多糖（LPS）是革兰氏阴性菌细胞壁的主要成分，在体内外实验中常被用作炎症反应的诱导剂。

研究表明，LPS可以诱导人结肠上皮细胞发生凋亡，这为研究结肠癌的发病机制提供了新的视角。

本文以NCM460细胞为研究对象，探讨LPS诱导其凋亡的机制。

二、材料与方法2.1 实验材料NCM460人结肠上皮细胞、LPS、细胞培养基、胰酶、PBS 缓冲液、细胞凋亡检测试剂盒等。

2.2 实验方法（1）细胞培养：将NCM460细胞置于含有10%胎牛血清的DMEM培养基中，于37℃、5%CO2条件下培养。

（2）LPS处理：将NCM460细胞分为对照组和LPS处理组，LPS处理组加入不同浓度的LPS进行处理。

（3）细胞凋亡检测：采用Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡情况。

（4）Western Blot检测：检测相关凋亡蛋白的表达情况。

三、实验结果3.1 LPS对NCM460细胞凋亡的影响实验结果显示，LPS处理后，NCM460细胞的凋亡率显著增加，且随着LPS浓度的增加，凋亡率呈剂量依赖性增加。

3.2 LPS诱导NCM460细胞凋亡的机制Western Blot检测结果显示，LPS处理后，NCM460细胞中凋亡相关蛋白Bcl-2表达降低，而Bax、Caspase-3等凋亡相关蛋白表达增加。

这表明LPS通过调节Bcl-2家族蛋白的表达，激活Caspase-3等凋亡相关蛋白，从而诱导NCM460细胞发生凋亡。

四、讨论本研究表明，LPS可以诱导人结肠上皮细胞NCM460发生凋亡，且这一过程与Bcl-2家族蛋白的表达及Caspase-3等凋亡相关蛋白的激活有关。

Bcl-2家族蛋白在调节细胞凋亡过程中发挥重要作用，其中Bcl-2具有抑制细胞凋亡的作用，而Bax则具有促进细胞凋亡的作用。

泛素运动酶的结构与功能研究及在肿瘤治疗中的应用随着现代医学技术的发展，人们对各种疾病的病理学和生物化学机制有了更深刻的认识。

在肿瘤治疗领域，越来越多的关注点集中在蛋白质降解通路上，其中就包括泛素化修饰通路。

在这个通路中，泛素运动酶作为一个关键酶，发挥着重要的作用。

本文将介绍泛素运动酶的结构和功能研究，以及其在肿瘤治疗中的应用。

一、泛素运动酶的结构与分类泛素运动酶是一类泛素连接酶家族成员，主要负责将泛素与底物蛋白进行连接，并通过泛素化修饰通路参与到蛋白质降解和信号通路调控中。

目前已经发现了数百种泛素运动酶，其中包括E1激活酶、E2转移酶和E3连接酶。

E1激活酶可将游离泛素激活，E2转移酶可将泛素转移到底物蛋白上，而E3连接酶则是在E2的帮助下，将泛素连接到特定位置。

泛素连接酶家族根据其结构和功能特点，可以分为三大类。

第一类为HECT类型连接酶，其在连接泛素时将泛素中的C端羧基转移到EG链的赖氨酸残基上；第二类为RING类型连接酶，其作用是将底物蛋白上的特定残基与泛素连接起来，但自身并不参与连接过程；第三类为U-box类型连接酶，其结构与HECT和RING连接酶类似，但在连接过程中不需要进行协同反应。

二、泛素运动酶的功能研究泛素运动酶的功能主要涉及蛋白质降解和信号通路调控两个方面。

在蛋白质降解方面，泛素连接酶家族中的成员可将底物蛋白上的特定残基与泛素连接起来，进而招募众多的泛素连接酶，形成泛素链。

这样的泛素链可以通过蛋白质酶体等通路将底物蛋白降解掉，从而起到蛋白质降解的作用。

在信号通路调控方面，泛素连接酶家族成员也能够通过泛素化修饰的途径，调节许多细胞代谢和调控通路的功能。

例如，在细胞分裂过程中，泛素连接酶会参与到M期特定蛋白的降解中，这种降解作用能够调控细胞分裂速度和准确性。

另外，泛素连接酶在信号转导通路调控中也能发挥作用，通过泛素化修饰途径，控制细胞周期、蛋白质合成和细胞凋亡等多种生物学过程。

三、泛素运动酶在肿瘤治疗中的应用在肿瘤治疗中，泛素连接酶家族成员的应用主要与蛋白质降解通路有关。