2021年洁净手术室空气采样方法

层流手术室空气日常监测方法：要求日常实行动态监测，必测项目为平板采样法（沉降法）或采样器法(浮游菌法)检测细菌菌落总数。

（1）回风口动态平板采样法：应在手术开始、手术2小时、手术结束前抽检3-4次。

每个回风口中部摆放3个倾斜30℃，Φ90培养皿，暴露30分钟后，37°C培养24小时。

标准：每皿菌落计数平均值应符合表4标准要求。

单皿最大值不应超过平均值3倍。

（2）动态采样器法：浮游菌菌落检测应在手术进行如切皮、缝合、连台手术之间、手术进行4小时等，选择不少于3个程序，测定细菌菌落总数。

标准：I级<30cfu/m3；II级<150cfu/m3；III级<450cfu/m3；IV级<500cfu/m3。

（3）其他洁净用房在当天上午10时和下午4时各测1次，在每个回风口中部摆放3个Φ90培养皿，沉降后在37℃下培养24h。

标准：同回风口动态平板采样法标准。

层流手术室静态（空态）时空气采样方法：1、采样方法：（1）当送风口集中布置时，应对手术区和周边区分别检测；当送风口分散布置时，按全室统一布点方法检测。

（2）沉降法采样时，用直径9cm的培养皿，在空气中暴露30min，37℃培养24h，培养皿中的菌落数（cfu）代表空气中沉降下来的细菌数，以个/皿表示。

（3）浮游法采样时，用裂隙采样器在空气中随机采样30min，对采样皿或采样条培养得出的菌落数（cfu），代表空气中浮游下来的细菌数，以个/m3表示。

2、采样高度：（1）采样点可布置在地面上或不高于地面的任意高度上；（2）在手术区检测时应无手术台；当手术台已固定时，检测高度应在台面之上。

3、布点方法：（见表1）4、采样注意事项：（1）在100级区域检测时，采样口应对着气流方向；在其他区域检测时，采样口均向上；（2）采样后的培养基条或培养皿，应37℃条件下培养24h，并计算菌落数，菌落数的平均值均四舍五入选位到小数点后1位；（3）当采用浮游法测定浮游菌浓度时，细菌浓度测点数应和被测区域的含尘浓度测点数相同，且宜在同一位置上。

手术室管理与监测一、手术室空气净化微生物监测洁净手术室空气净化微生物监测包括静态〔空态〕空气采样和动态空气采样两种方法，采样可以选择平皿沉降法和空气样器法两种方法，我院采用平皿沉降法。

1、静态〔空态〕空气采样法（1）采样时间：新房验收、净化设备检修或更换后，在洁净系统自净后与从事医疗活动前采样。

（2）采样方法：①静态〔空态〕空气采样宜在其他项目检测完毕，对全室外表进行常规清洁消毒之后进行。

②当送风口集中布置时，应对手术区和周边区分别检测，当送风口分散布置时，全室统一检测。

采样点可布置在地面上或不高于地面0.8m的任意高度上。

空气采注：分布在集中送风面正投影区角的采样点距离邻近两边的距离位0.12米。

③当用平皿沉降法采样时，采样布点数既要不少于〔表1〕中的布点数，又应满足〔表2〕规定的最少培养皿数的要求表2 平皿沉降法最少培养皿数被测区域洁净度级别最少培养皿数〔Ø 9cm,以沉降30分钟计〕100级131000级 510000级 3100000级 2300000级 2④不管用何种方法检测细菌密度，都必须有2次空白对照。

第1次对用于检测的培养皿或培养基条做比照试验，每批1个对照皿。

第2次是在检测时，每室或每区1个对照皿，对操作过程做对照试验，模拟操作过程，但培养皿或培养基条打开后应又立即封盖。

两次对照结果都必须为阴性，整个操作应符合无菌操作的要求。

⑤采样后的培养基或培养皿，应立即置于36℃+1℃温箱培养48小时，计数生长的菌落数，菌落数的平均值均四舍五入进位到小数点后一位。

(3)结果判断：我国洁净手术室的等级标准以及主要洁净辅助用房等级标准分别见表3表3 洁净手术室的等级标准〔静态或空态〕等级手术室沉降法细菌最大平均密度外表最大空气洁净度级别名称手术区周边区染菌密度手术区周边区I 2 100级1000级手术室Ø9皿Ø9皿II2 1000级10000级手术室Ø9皿Ø9皿III一般洁净2个/30min 4个/30min 5个/cm2 10000级100000级手术室Ø9皿Ø9皿IV 准洁净5个/30min ·Ø9皿5个/cm2 300000级手术室注：I级眼科专用手术室周边区按10000级要求表4 洁净辅助用房的等级标准〔静态或空态〕等沉降法细菌最大平均密度外表最大染菌密度空气洁净度级别级〔个/ cm2〕I· Ø9皿 5 局部100级· Ø9皿其他区域1000级II· Ø9皿 5 10000级III4个/30min · Ø9皿 5 100000级IV5个/30min · Ø9皿 5 300000级注：细菌密度是直接所测的结果，不是沉降法和采样器法互相换算的结果。

洁净手术室空气采样方法Revised as of 23 November 2020洁净手术室空气采样方法1、采样时间：消毒后、操作前进行采样。

2、采样方法：（1）布点：室内面积≤30 m2，设内、中、外对角线3点，内外点距墙1m；室内面积 >30 m2，设四角及中央5点，四角点距墙1m。

（2）平板暴露法平板直径9cm、采样高度，暴露5min。

3、检验方法平板37℃培养48h。

计数菌落数并分离致病菌。

4、平板暴露法结果计算50000N细菌总数（cfu/m3）=A×TA为平板面积（cm2）； T 为暴露时间（min）；N 为平均菌落数（cfu）5、结果判定（1）I、II类区域，细菌总数≤10cfu/cm3，并未检出致病菌为消毒合格。

（2）III类区域，细菌总数≤200cfu/cm3，并未检出致病菌为消毒合格。

（3）IV类区域，细菌总数≤500cfu/cm2，并未检出致病菌为消毒合格。

6、注意事项：采样前关好门窗，在无人走动的情况下，静止10min 进行采样层流手术室空气日常监测方法：要求日常实行动态监测，必测项目为平板采样法（沉降法）或采样器法(浮游菌法)检测细菌菌落总数。

（1）回风口动态平板采样法：应在手术开始、手术2小时、手术结束前抽检3-4次。

每个回风口中部摆放3个倾斜30℃，Φ90 培养皿，暴露30分钟后，37°C培养24小时。

标准：每皿菌落计数平均值应符合表4标准要求。

单皿最大值不应超过平均值3倍。

（2）动态采样器法：浮游菌菌落检测应在手术进行如切皮、缝合、连台手术之间、手术进行4小时等，选择不少于3个程序，测定细菌菌落总数。

标准：I级<30cfu/m3 ；II级<150 cfu/m3；III级<450 cfu/m3；IV级<500cfu/m3。

（3）其他洁净用房在当天上午10时和下午4时各测1次，在每个回风口中部摆放3个Φ90培养皿，沉降后在37℃下培养24h。

1、采样时间：消毒后、操作前进行采样。

2、采样方法：(1)布点：室内面积w 30 m2,设内、中、外对角线3点，内外点距墙1m;室内面积＞30 m2，设四角及中央5点，四角点距墙1m。

(2)平板暴露法平板直径9cm采样高度，暴露5min。

3、检验方法平板37 C培养48h。

计数菌落数并分离致病菌。

4、平板暴露法结果计算50000N细菌总数(cfu/m3 ) =A X TA为平板面积(cm2); T为暴露时间(min); N为平均菌落数(cfu )5、结果判定(1)I、II类区域，细菌总数w 10cfu/cm3，并未检出致病菌为消毒合格。

(2)III类区域，细菌总数w 200cfu/cm3，并未检出致病菌为消毒合格。

(3)IV类区域，细菌总数w 500cfu/cm2，并未检出致病菌为消毒合格。

6、注意事项：采样前关好门窗，在无人走动的情况下，静止10min进行采样层流手术室空气日常监测方法：要求日常实行动态监测，必测项目为平板采样法(沉降法)或采样器法(浮游菌法)检测细菌菌落总数。

(1)回风口动态平板采样法：应在手术开始、手术2小时、手术结束前抽检3-4次。

每个回风口中部摆放3个倾斜30C,①90培养皿，暴露30分钟后，37°C培养24小时。

标准：每皿菌落计数平均值应符合表4标准要求。

单皿最大值不应超过平均值3倍。

(2)动态采样器法：浮游菌菌落检测应在手术进行如切皮、缝合、连台手术之间、手术进行4小时等，选择不少于3个程序，测定细菌菌落总数。

标准：I 级＜30cfu/m3 ；II 级＜150 cfu/m3 ；III 级＜450 cfu/m3 ；IV 级＜500 cfu/m3。

(3)其他洁净用房在当天上午10时和下午4时各测1次，在每个回风口中部摆放3个①90培养皿，沉降后在37C下培养24h。

标准：同回风口动态平板采样法标准。

层流手术室静态(空态)时空气采样方法：1、采样方法：(1)当送风口集中布置时，应对手术区和周边区分别检测；当送风口分散布置时, 按全室统一布点方法检测。

洁净手术室的取样
百级：布点：局部百级区5点（双对角线布点）、Ⅰ级周边区8点（每边内2点）
千级：布点：Ⅱ级周边区6点（长边内2点，短边内1点）
万级：布点：Ⅲ（10万级）级周边区4点（每边内1点）
布点；Ⅳ（30万级）级周边区，面积＞30m2，布4点（每边内1点）；面积≤30m2，布2点，均避开送风口正下方。

1、测点布置在距地面0.8m的平面上，在手术区检测时应无手术台；当手术台已固定，测点高度在台面之上0.25m。

2、在100级检测时，采样口应对着气流方向，在其他级别区域检测时，采样口均向上。

3、检测人员不得多于2人，都应该穿洁净工作服，处于测点下风向的位置，尽量少动作。

4、采样时间为30min。

5、结果判定：
Ⅰ级洁净手术室：手术区≤10cfu/m3，周边区≤10cfu/m3(特别洁净手术室)
用于关节置换、器官移植手术及脑外科、心脏外科和眼科等手术中的无菌手术。

Ⅱ级洁净手术室：手术区≤25cfu//m3，周边区≤50cfu/m3 (标准洁净手术室)
用于胸外科、整形外科手术、泌尿外科、肝胆胰外科、骨外科和普通外科中的Ⅰ类切口无菌手术。

Ⅲ级洁净手术室：手术区≤75cfu//m3，周边区≤150cfu/m3(一般洁净手术室)
用于普通外科（除去Ⅰ类切口手术）、妇产手术。

Ⅳ级洁净手术室≤175cfu/m3(准洁净手术室）
用于肛肠手术及污染类手术。

医院常规空气细菌培养（自然沉降法）采样方法一、采样时间?????选择消毒处理后与进行医疗活动之前采样。

二、采样高度与地面垂直高度80-150厘米。

三、布点方法1.面积≤30 m2，设一条对角线取三点，即中间一点，两端各距墙1米处各取一点（图1）2．室内面积>30m2，设两条对角线，东，西，南，北，中取五点，其中东，西，南，北距墙均1米（图2）四、采样方法用9厘米直径普通琼脂平皿，打开盖后面朝下斜扣到底盘，在采样点准确暴露5分钟后，送检培养。

五、结果分析I类区域：<10 cfu/m3II类区域：<200 cfu/m3III类区域：<500 cfu/m3六、附录Ⅰ类区域：层流洁净手术室、层流洁净病房（参照洁净室空气培养方法与标准）。

Ⅱ类区域：普通手术室、产房、婴儿室、早产儿室、普通保护性隔离室、供应室无菌区、烧伤病房、重症监护病房。

Ⅲ类区域：儿科病房、妇产科检查室、注射室、换药室、治疗室供应室清洁区、急诊室、化验室、各类普通病房和房间。

Ⅳ类区域：传染病科及病房。

洁净室空气细菌培养监测布点与标准一、局部百级，周围千级：共放13个培养皿，其中手术区域5点，周边区8点。

采样布置点示意图：二、局部千级，周围万级：共放9个培养皿，其中手术区域3点，周边区6点。

采样布置点示意图：三、局部万级，周围十万级：共放7个培养皿，其中手术区域3点，周边区域4点。

采样布置点示意图：四、三十万级：面积>30m2布放4点，面积≤30 m2布放2点。

五、要求：1.送风口集中布置时，应对手术区和周边区分别检测；如送风口分散布置时，全室统一检测，测点可均布，不应布置在送风门正下方；2.采样点可布置在地面上或不高于地面0.8m的任意高度上，手术区域放置在四角的平皿应离手术区边缘0.12m，培养皿放置30分钟；3.采样后的培养皿，应立即置于37度条件下培养48小时；4.然后计数生长的菌落数，菌落数的平均值均四舍五入进位到小数点后１位。

洁净手术室空气采样办法1、采样时间：消毒后、操纵前进行采样。

2、采样办法：（1）布点：室内面积≤30 m2，设内、中、外对角线3点，内外点距墙1m；室内面积>30 m2，设四角及中央5点，四角点距墙1m。

（2）平板流露法平板直径9cm、采样高度1.5m，流露5min。

3、检验办法平板37℃培养48h。

计数菌落数并别离致病菌。

4、平板流露法结果计算50000N细菌总数（cfu/m3）=A×TA为平板面积（cm2）；T 为流露时间（min）；N 为平均菌落数（cfu）5、结果判定（1）I、II类区域，细菌总数≤10cfu/cm3，并未检出致病菌为消毒合格。

（2）III类区域，细菌总数≤200cfu/cm3，并未检出致病菌为消毒合格。

（3）IV类区域，细菌总数≤500cfu/cm2，并未检出致病菌为消毒合格。

6、注意事项：采样前关好门窗，在无人走动的情况下，静止10min 进行采样层流手术室空气日常监测办法：要求日常实行静态监测，必测项目为平板采样法（沉降法）或采样器法(浮游菌法)检测细菌菌落总数。

（1）回风口静态平板采样法：应在手术开始、手术2小时、手术结束前抽检34次。

每个回风口中部摆放3个倾斜30℃，Φ90 培养皿，流露30分钟后，37°C培养24小时。

标准：每皿菌落计数平均值应合适表4标准要求。

单皿最年夜值不该超出平均值3倍。

（2）静态采样器法：浮游菌菌落检测应在手术进行如切皮、缝合、连台手术之间、手术进行4小时等，选择很多于3个法度，测定细菌菌落总数。

标准：I级<30cfu/m3 ；II级<150 cfu/m3；III级<450 cfu/m3；IV级<500 cfu/m3。

（3）其他洁净用房在当天上午10时和下午4时各测1次，在每个回风口中部摆放3个Φ90培养皿，沉降0.5h后在37℃下培养24h。

标准：同回风口静态平板采样法标准。

层流手术室静态（空态）时空气采样办法：1、采样办法：（1）当送风口集中安插时，应敌手术区和周边区辨别检测；当送风口分离安插时，按全室统一布点办法检测。

洁净手术室空气采样方法Document serial number【KKGB-LBS98YT-BS8CB-BSUT-BST108】洁净手术室空气采样方法1、采样时间：消毒后、操作前进行采样。

2、采样方法：（1）布点：室内面积≤30 m2，设内、中、外对角线3点，内外点距墙1m；室内面积 >30 m2，设四角及中央5点，四角点距墙1m。

（2）平板暴露法平板直径9cm、采样高度1.5m，暴露5min。

3、检验方法平板37℃培养48h。

计数菌落数并分离致病菌。

4、平板暴露法结果计算50000N细菌总数（cfu/m3）=A×TA为平板面积（cm2）； T 为暴露时间（min）；N 为平均菌落数（cfu）5、结果判定（1）I、II类区域，细菌总数≤10cfu/cm3，并未检出致病菌为消毒合格。

（2）III类区域，细菌总数≤200cfu/cm3，并未检出致病菌为消毒合格。

（3）IV类区域，细菌总数≤500cfu/cm2，并未检出致病菌为消毒合格。

6、注意事项：采样前关好门窗，在无人走动的情况下，静止10min 进行采样层流手术室空气日常监测方法：要求日常实行动态监测，必测项目为平板采样法（沉降法）或采样器法(浮游菌法)检测细菌菌落总数。

（1）回风口动态平板采样法：应在手术开始、手术2小时、手术结束前抽检3-4次。

每个回风口中部摆放3个倾斜30℃，Φ90 培养皿，暴露30分钟后，37°C培养24小时。

标准：每皿菌落计数平均值应符合表4标准要求。

单皿最大值不应超过平均值3倍。

（2）动态采样器法：浮游菌菌落检测应在手术进行如切皮、缝合、连台手术之间、手术进行4小时等，选择不少于3个程序，测定细菌菌落总数。

标准：I级<30cfu/m3 ；II级<150 cfu/m3；III级<450 cfu/m3；IV级<500 cfu/m3。

（3）其他洁净用房在当天上午10时和下午4时各测1次，在每个回风口中部摆放3个Φ90培养皿，沉降0.5h后在37℃下培养24h。

手术室Ⅰ类环境空气采样标准操作规程
根据《医疗机构消毒技术规范》（ WS/T367--2012）及《医院洁净手术部建筑技术规范》（GB50333-2013）相关规定，并结合我院实际情况制定本操作规程。

第一条相关概念
Ⅰ类环境：洁净手术室、其他洁净场所
周边区：洁净手术室内除去手术区以外的其他区域。

第二条采样时间
在洁净系统自净与从事医疗活动前采样；或怀疑与医院感染暴发有关时采样。

第三条采样注意事项
采样者要求：采样前做好手卫生，采样时严格遵守无菌操作原则。

采样时长：30min
采样点：距地0～0.8m
采样时间：净化系统运行30min后，在净化系统开启的情况下采样。

采样送检：采样后应在4h内送检
第四条采样布点方法
Ⅰ级手术室布点图示
Ⅱ级手术室布点图示
Ⅲ级手术室布点图示
第五条结果判定标准。

手术室空气采样的方法 Document number：PBGCG-0857-BTDO-0089-PTT1998五月培训内容：手术室空气采样方法1、采样时间：消毒后、操作前进行采样。

2、采样方法：（1）布点：室内面积≤30 m2，设内、中、外对角线3点，内外点距墙1m；室内面积 >30 m2，设四角及中央5点，四角点距墙1m。

（2）平板暴露法平板直径9cm、采样高度，暴露5min。

3、检验方法平板37℃培养48h。

计数菌落数并分离致病菌。

4、平板暴露法结果计算50000N细菌总数（cfu/m3）=A×TA为平板面积（cm2）； T 为暴露时间（min）；N 为平均菌落数（cfu）5、结果判定（1）I、II类区域，细菌总数≤10cfu/cm3，并未检出致病菌为消毒合格。

（2）III类区域，细菌总数≤200cfu/cm3，并未检出致病菌为消毒合格。

（3）IV类区域，细菌总数≤500cfu/cm2，并未检出致病菌为消毒合格。

6、注意事项：采样前关好门窗，在无人走动的情况下，静止10min 进行采样层流手术室空气日常监测方法：要求日常实行动态监测，必测项目为平板采样法（沉降法）或采样器法(浮游菌法)检测细菌菌落总数。

（1）回风口动态平板采样法：应在手术开始、手术2小时、手术结束前抽检3-4次。

每个回风口中部摆放3个倾斜30℃，Φ90 培养皿，暴露30分钟后，37°C培养24小时。

标准：每皿菌落计数平均值应符合表4标准要求。

单皿最大值不应超过平均值3倍。

（2）动态采样器法：浮游菌菌落检测应在手术进行如切皮、缝合、连台手术之间、手术进行4小时等，选择不少于3个程序，测定细菌菌落总数。

标准：I级<30cfu/m3 ；II级<150 cfu/m3；III级<450 cfu/m3；IV级<500 cfu/m3。

（3）其他洁净用房在当天上午10时和下午4时各测1次，在每个回风口中部摆放3个Φ90培养皿，沉降后在37℃下培养24h。

1、采样时间：消毒后、操作前进行采样。

2、采样方法：（1）布点：室内面积w 30 m2，设内、中、外对角线点，内外点距墙1m ;室内面积＞30 m2，设四角及中央5 点，四角点距墙1m。

（ 2 ）平板暴露法平板直径9cm 、采样高度 1.5m ，暴露5min 。

3、检验方法平板37 C培养48h。

计数菌落数并分离致病菌。

4 、平板暴露法结果计算50000N细菌总数（cfu/m3 ）=A X TA 为平板面积（cm2 ）; T 为暴露时间（min ）;N 为平均菌落数（cfu ）5、结果判定(1)I、II类区域，细菌总数W 10cfu/cm3 ，并未检出致病菌为消毒合格。

(2)III类区域，细菌总数W200cfu/cm3并未，检出致病菌为消毒合格。

(3)IV类区域，细菌总数W500cfu/cm2并未，检出致病菌为消毒合格。

6、注意事项：采样前关好门窗，在无人走动的情况下，静止10min 进行采样层流手术室空气日常监测方法：要求日常实行动态监测，必测项目为平板采样法(沉降法)或采样器法(浮游菌法)检测细菌菌落总数。

(1)回风口动态平板采样法：应在手术开始、手术 2 小时、手术结束前抽检3-4次。

每个回风口中部摆放3个倾斜30C,①90培养皿，暴露30分钟后，37°C培养24小时。

标准：每皿菌落计数平均值应符合表 4 标准要求。

单皿最大值不应超过平均值 3 倍。

(2)动态采样器法：浮游菌菌落检测应在手术进行如切皮、缝合、连台手术之间、手术进行 4 小时等，选择不少于3个程序，测定细菌菌落总数。

标准：I 级＜30cfu/m3 ; II 级＜150 cfu/m3 ; III 级＜450 cfu/m3 ; IV 级＜500 cfu/m3 。

（3）其他洁净用房在当天上午 1 0时和下午4时各测 1 次，在每个回风口中部摆放3个①90培养皿，沉降0.5h后在37 C下培养24h。

标准：同回风口动态平板采样法标准。

洁净房间（Ⅰ类环境）静态空气监测方法静态：是室内设施及功能齐备，空调净化系统正常运行，但无人员的状态。

1、采样时间：洁净手术室房间清洁并擦拭消毒后，使净化空调系统达到自净时间（Ⅰ级洁净手术室和洁净辅助用房监测前，系统已运行15min，其他洁净房间应已运行40min。

）并处于开启状态，然后进行测试，室内应无工作人员。

2、准备物品：直径为9cm的普通营养琼脂平板3、监测人员要求：穿洁净服，戴帽子口罩，手卫生。

动作要轻，避免产生二次污染。

4、布点顺序：放置培养皿从总平面中最靠里的房间开始布置,依次向外，最后人员撤出。

每间房间也是从房间最靠里的点开始布置，最后布置门附近的点，然后人员撤出。

收培养皿的顺序相反，从最外面的房间开始收,每间房间从门附近的培养皿开始收。

5、培养应必须设2次空白对照。

第1次对照：为培养皿对照，每监测批次中取1个培养皿做对比试验培养皿不打开直接培养，用于检测培养皿是否合格。

第2次对照：为操作过程对照，每室或每区取1个对照皿，对操作过程做对照试验，模拟微生物检测操作过程，但培养皿打开后应立即封盖，用于检测培养操作过程是否合格。

注意：两次对照结果都必须为阴性。

整个操作应符合无菌操作的要求。

6、布点高度：不高于地面0.8m的任意高度上，若有固定设备、仪器（如手术床等），可放置在设备上。

周边区：洁净手术室内除去手术区以外的其他区域。

8、检测方法：采样后立即送检，置于37℃温箱内培养24小时，然后计数菌落数。

菌落数的平均值均四舍五入进位到小数点后1位。

注意：手术区与周边区分别计算。

9、注意事项：（1）静态测试时，室内测试人员不能多于2人；（2）采样时应遵守无菌操作原则；（3）采样后2小时内将培养皿置培养箱培养。

（4）标明培养皿的编号；（5）化验单必须注明手术室的级别；（6）必须设两次空白对照；（7）采取一切措施防止人为对样品的污染。

1、采样时间：消毒后、操作前进行采样。

2、采样方法： （1）布点：室内面积€0 m2,设内、中、外对角线 3点，内外点距墙1m ;室内面积>30 m2，设四角及中央 5 点，四角点距墙 1m 。

（2）平板暴露法平板直径9cm 采样高度1.5m ，暴露5min 。

3、 检验方法平板37 C 培养48h 。

计数菌落数并分离致病菌。

4、 平板暴露法结果计算 50000N细菌总数（cfu/m3 ） =A>TA 为平板面积（cm2）; T 为暴露时间（min ）; N 为平均菌落数（cfu ） 5、 结果判定（1） I 、 II 类区域，细菌总数 €10cfu/cm3 ，并未检出致病菌为消毒合格。

（ 2） III 类区域，细菌总数 €200cfu/cm3 ，并未检出致病菌为消毒合格。

（ 3） IV 类区域，细菌总数 €500cfu/cm2 ，并未检出致病菌为消毒合格。

6、 注意事项：采样前关好门窗，在无人走动的情况下，静止10min 进行采样层流手术室空气日常监测方法： 要求日常实行动态监测，必测项目为平板采样法（沉降法）或采样器法 （浮游菌法 ）检测细菌菌落总数。

（ 1 ）回风口动态平板采样法：应在手术开始、手术 2 小时、手术结束前抽检 3-4 次。

每 个回风口中部摆放 3个倾斜30C,①90培养皿，暴露30分钟后，37°C 培养24小时。

标准：每皿菌落计数平均值应符合表 4 标准要求。

单皿最大值不应超过平均值 3 倍。

（ 2）动态采样器法：浮游菌菌落检测应在手术进行如切皮、缝合、连台手术之间、手术 进行 4 小时等，选择不少于 3 个程序，测定细菌菌落总数。

标准： I 级 <30cfu/m3 ； II 级 <150 cfu/m3 ； III 级 <450 cfu/m3 ； IV 级 <500 cfu/m3 。

（3）其他洁净用房在当天上午10时和下午 4时各测 1 次，在每个回风口中部摆放 3个①90培养皿，沉降 0.5h 后在37C 下培养24h 。

医院常规空气细菌培养(自然沉降法)采样方法一、采样时间选择消毒处理后与进行医疗活动之前采样。

二、采样高度与地面垂直高度 80-150 厘米。

三、布点方法1.面积≤30 m2 ，设一条对角线取三点，即中间一点，两端各距墙 1 米处各取一点(图 1)图 12．室内面积>30m2 ，设两条对角线，东，西，南，北，中取五点，其中东，西，南，北距墙均 1 米(图 2)图 2四、采样方法用 9 厘米直径普通琼脂平皿，打开后盖面朝下斜扣到底盘，在采样点准确暴露 5 分钟后，送检培养。

五、结果分析I 类区域： <10 cfu/m3II 类区域： <200 cfu/m3III 类区域： <500 cfu/m3六、附录Ⅰ类区域：层流洁净手术室、层流洁净病房 (参照洁净室空气培养方法与标准) 。

Ⅱ类区域：普通手术室、产房、婴儿室、早产儿室、普通保护性隔离室、供应室无菌区、烧伤病房、重症监护病房。

Ⅲ类区域：儿科病房、妇产科检查室、注射室、换药室、治疗室供应室清洁区、急诊室、化验室、各类普通病房和房间。

Ⅳ类区域：传染病科及病房。

洁净室空气细菌培养监测布点与标准一、局部百级，周围千级：共放 13 个培养皿，其中手术区域 5 点，周边区 8 点。

采样布置点示意图：二、局部千级，周围万级：共放 9 个培养皿，其中手术区域 3 点，周边区 6 点。

采样布置点示意图：三、局部万级，周围十万级：共放 7 个培养皿，其中手术区域 3 点，周边区域 4 点。

采样布置点示意图：四、三十万级：面积>30m2 布放 4 点，面积≤30 m2 布放 2 点。

五、要求：1.送风口集中布置时，应对手术区和周边区分别检测；如送风口分散布置时，全室统一检测，测点可均布，不应布置在送风门正下方；2.采样点可布置在地面上或不高于地面 0.8m 的任意高度上，手术区域放置在四角的平皿应离手术区边缘 0.12m，培养皿放置 30 分钟；3.采样后的培养皿，应立即置于 37 度条件下培养 24 小时；4.然后计数生长的菌落数，菌落数的平均值均四舍五入进位到小数点后1位。

洁净手术室空气采样方法悬浮菌采样法是最常用的洁净手术室空气采样方法之一，其原理是将空气中的悬浮颗粒捕集下来，并通过培养方法验证其菌落形成单位（CFU）的数量。

悬浮菌采样常用的工具有空气采样器、以及标准方法中规定的培养基。

在采样前，首先需选择合适的采样位置，包括手术台、空调出风口、病房边墙等，然后将采样器置于采样位置，按照采样器的使用说明操作，使其吸收一定量的空气样品。

采样结束后，将采样器中的培养基进行培养，并计算出菌落形成单位，从而评估空气中的微生物水平。

震荡均衡法是另一种常用的洁净手术室空气采样方法，它主要通过震荡的方式使悬浮颗粒沉降到培养基上，然后进行培养与计数。

在使用震荡均衡法进行采样时，首先需要选择合适的采样位置，通常是手术台的稍上方或空调出风口，然后将震荡采样器放置在采样位置，并按照设备的使用说明进行操作。

采样结束后，将采样器中的培养基进行培养，并计算出菌落形成单位，从而评估空气中微生物的水平。

半封闭法采样法主要是通过半封闭的设备捕集空气样本，再将样本中的微生物培养，从而评估空气质量。

在使用半封闭法进行采样时，首先需要选择合适的采样设备，一般有采样盘和培养皿。

将采样盘放置在采样位置，然后将空气样本吸入盘中，并尽量封闭盘与外界环境的接触。

之后将采样盘上的培养皿进行培养，并计算出菌落形成单位，从而评估空气中微生物的水平。

需要注意的是，以上三种方法都是传统的微生物培养方法，无法对所有类型的微生物进行快速、准确的检测。

因此，近年来也出现了一些新的技术，如聚合酶链式反应（PCR）和荧光定量PCR（qPCR）。

这些方法可以快速检测微生物的存在，并准确计算其数量。

但这些新方法的应用还需要进一步研究和验证。

在进行洁净手术室空气采样时，还需要注意采样器的使用方法和采样时间的选择。

采样器的使用应按照说明进行操作，避免操作不当导致结果不准确。

采样时间的选择应根据手术室的使用情况和要求进行，一般建议至少进行30分钟以上的连续采样。