拟南芥室内简易栽培和田间大规模种植的方法

培养基上点种子：1.种子处理1.1 种子消毒处理在培养基中点样前，必须对种子进行消毒，防止感菌，具体方法为：先将种子倒在干净的纸上，挑去大的杂质，再将种子倒入EP管中，加入1mL70%酒精，振荡10min，将种子放在超净台中吹干。

1.2 点样将消毒处理后的种子，可以利用牙签点到培养基上，每次仅点一粒种子，根据培养皿的大小，确定一个里面能够点多少个种子，每个90mm培养皿上大约种30粒种子，防止植株长大后影响根与子叶的发育。

1.3 春化种子点样完毕后，将培养基密封，置于4℃冰箱里放置72h后，放回温室。

土培法：1.种种子前，要将营养土用自来水混匀后，121℃灭菌30min，待土冷却后，装入种植拟南芥的方盒中，再将方盒放入红色托盘中。

2.将要点的种子平铺在称量纸上，用牙签蘸取一粒种子点在营养土上,每点一个小盒时都用牙签做标记，以免遗种某个盒子。

（每个小盒子种5粒种子，每个大方盒子种9粒种子）3.将点了拟南芥种子的托盘置于22℃温室，并用一个干净的托盘盖在上面，大约两天后就可以打开上面的托盘，待植物长出4片叶子时，可以根据自己的实验需求对植物的幼苗进行取舍。

4.植株生长条件的控制幼苗移植后将花盆置于温室内，保证温室温度恒定在22℃，空气湿度70—80%，光照强度100—150μmol/m2/s，每天浇两次纯净水，上午9点左右一次，下午5点左右一次；一周浇一次营养液（1平匙溶于1L水中），营养液要灌在盆底。

浇水注意事项：1）水不可以浇的过多或过少，用手捏起一些土能挤出水来说明就有点太湿；2）水要浇均匀，托盘四个角的方向如果喷壶喷不到，可以用挤瓶均匀地喷一些水；3）用喷壶浇水时，喷壶的水柱不可以太大，以免把植物连根拔起；4）当植株出现花芽时，一定要保证水分的供应，促进果实的发育。

当植株结有豆荚时，可以适当的减少供水量，每两三天浇一次水便可，以利于种子的成熟。

开花后的植物不能再用喷壶浇水，要从盆底灌水，但不可以一次性灌太多水；5）在盆底灌水后，待植物吸收完水后，可以将盆底多余的水分倒出来；6）拟南芥受到胁迫判断标准：叶柄发紫，叶片发黄，开花期提前等；7）如果做生理实验，植物一旦受到胁迫，需要把植物丢弃，重新种植，以免实验数据不准确。

拟南芥种植花序浸染法转化拟南芥（1）种植：选择吸水性好，土质松软的蛭石配合营养土（1：1/2）作为拟南芥种植土壤。

直径9cm的花盆，每盆播种20-30颗。

播种以后在花盆上罩上薄膜，给植株的生长提供一个湿润的环境。

（2）去顶：在拟南芥初次开花时将花蕾剪掉，可以促进侧枝更多的花枝的增生。

适合转化植株的花卉并没有成熟，也没有产生已受精的角果。

（3）配制浸染液：在5%的蔗糖溶液中重悬农杆菌使OD=0.8，为了保持蔗糖溶液的新鲜，可以现配现用，无需灭菌。

100-200ml浸染2-3个小盆植株，400-500ml浸染，2-3个花盆（9cm）植株。

在浸染之前加入表面活性剂至浓度0.05%（500ul/L），如果产生表面活性剂的毒性现象（浸过部分发黄或死亡），将浓度降至0.02%。

（4）浸染：将盛花期拟南芥的花表面部分浸泡在农杆菌悬浮液中2-3s，同时轻轻旋转。

（5）暗培养：将浸染后植株套袋保持高度的湿润状态暗室培养24h。

（6）浸染后培养：隔天浇水，保证水分充足即可。

（7）种子收集：种子成熟，角果自然开裂后可以收种子。

（8）转基因种子筛选：在含有Kan抗生素的平板上培养浸染后所得种子。

40mg的种子大约200颗于含kan 10-50μg/ml 的0.5×MS培养基上春化2天，之后在持续光照条件下培养7-10天。

根据生长状况判断是否为转基因种子。

成功转入重组质粒的种子能够在抗性培养及上正常生长出4片以上真叶。

非转基因种子不能正常生长，仅能长出2片子叶，根的生长也受到严重抑制，一般萌发10天以后死亡。

（9）转基因植株转土栽培。

转基因种子在MS+kan平板上萌发2周以后，将阳性植株转入土壤继续培养。

转基因拟南芥纯合子筛选由于农杆菌介导的花序浸染法只能将目标片段整合到一条DNA单链上，为后续生理性状实验需要，将T0代转基因种子培育至T2代，利用抗性筛选得到纯合子。

根据杂合子在发生性状分离时会产生野生型后代，而野生型种子不能在MS+Kanr（50μg/ml）平板上正常生长，进行转基因植株纯合子的筛选。

培养基上点种子：1.种子处理1.1种子消毒处理在培养基中点样前，必须对种子进行消毒，防止感菌，具体方法为：先将种子倒在干净的纸上，挑去大的杂质，再将种子倒入EP管中，加入1mL70%酒精，振荡10min，将种子放在超净台中吹干。

1.2点样将消毒处理后的种子，可以利用牙签点到培养基上，每次仅点一粒种子，根据培养皿的大小，确定一个里面能够点多少个种子，每个90mm培养皿上大约种30粒种子，防止植株长大后影响根与子叶的发育。

1.3春化种子点样完毕后，将培养基密封，置于4℃冰箱里放置72h后，放回温室。

土培法：1.种种子前，要将营养土用自来水混匀后，121℃灭菌30min，待土冷却后，装入种植拟南芥的方盒中，再将方盒放入红色托盘中。

2.将要点的种子平铺在称量纸上，用牙签蘸取一粒种子点在营养土上,每点一个小盒时都用牙签做标记，以免遗种某个盒子。

（每个小盒子种5粒种子，每个大方盒子种9粒种子）3.将点了拟南芥种子的托盘置于22℃温室，并用一个干净的托盘盖在上面，大约两天后就可以打开上面的托盘，待植物长出4片叶子时，可以根据自己的实验需求对植物的幼苗进行取舍。

4.植株生长条件的控制幼苗移植后将花盆置于温室内，保证温室温度恒定在22℃，空气湿度70—80%，光照强度100—150μmol/m2/s，每天浇两次纯净水，上午9点左右一次，下午5点左右一次；一周浇一次营养液（1平匙溶于1L水中），营养液要灌在盆底。

浇水注意事项：1）水不可以浇的过多或过少，用手捏起一些土能挤出水来说明就有点太湿；2）水要浇均匀，托盘四个角的方向如果喷壶喷不到，可以用挤瓶均匀地喷一些水；3）用喷壶浇水时，喷壶的水柱不可以太大，以免把植物连根拔起；4）当植株出现花芽时，一定要保证水分的供应，促进果实的发育。

当植株结有豆荚时，可以适当的减少供水量，每两三天浇一次水便可，以利于种子的成熟。

开花后的植物不能再用喷壶浇水，要从盆底灌水，但不可以一次性灌太多水；5）在盆底灌水后，待植物吸收完水后，可以将盆底多余的水分倒出来；6）拟南芥受到胁迫判断标准：叶柄发紫，叶片发黄，开花期提前等；7）如果做生理实验，植物一旦受到胁迫，需要把植物丢弃，重新种植，以免实验数据不准确。

植物学通报 2004, 21 (2): 201￣204Chinese Bulletin of Botany技术与方法拟南芥室内培养技术①１，３李俊华 ２张艳春 １徐云远 １种 康② ３王 辉1 (中国科学院植物研究所光合作用与环境分子生理学重点实验室北京 100093)2 (华东师范大学生物学系上海 200062)3 (西北农林科技大学农学院杨凌 712100)摘要本文报道了室内培养拟南芥的一些简便易行的改进技术。

采用我们改进的营养土、蛭石、素沙混合培养介质和直播方式培养拟南芥, 并根据其生物学特性在温度、空气湿度、土壤水分和光照等方面给予适当管理，能培养出生长更健壮、更好地满足实验要求的拟南芥植株。

此外还介绍了播种、浇水、生育期调节、种子保存、病虫害防治和防混杂等环节的一些技巧措施。

与其他培养方法相比，此法不仅简便、效果好，而且适合较简易的培养条件。

关键词拟南芥，培养技术Modification of Indoor Culture Techniques forArabidopsis thaliana1,3 LI Jun-Hua 2ZHANG Yan-Chun 1XU Yun-Yuan 1CHONG Kang②3WANG Hui1(The Key Laboratory of Photosynthesis and Environmental Molecular Physiology, Institute of Botany,the Chinese Academy of Sciences, Beijing 100093)2(Department of Biology, East China Normal University, Shanghai 200062 ) 3(College of Agronomy, Northwest SciTech University of Agriculture and Forestry, Yangling 712100)Abstract Arabidopsis thaliana is a model plant in research of genetics, molecular biology and developmental biology. Several culture problems, however, exist in many laboratories of our country. We developed some indoor culture techniques of Arabidopsis for the laboratories. The modified protocol provided an appropriate indoor conditions for Arabidopsis growth and development. It emphasized culture medium, air humidity, temperature and photoperiod.Key words Arabidopsis thaliana ,Culture techniques拟南芥(Arabidopsis thaliana)我国分类学者又称之为鼠耳芥, 是十字花科拟南芥属植物，由于其具有生育期短、个体小及基因组小等特点，长期以来被作为分子生物学、发育生物学和遗传学研究的模式材料，尤其是作为第一个经完全测序的有花植物，其基因组全序列在2000年底完全测定并公开发表后，更加激发了人们对其基因结构与功能进行更为详尽研究的兴趣(黄①国家自然科学基金资助项目(30170094)。

培养基上点种子：1.种子处理1.1 种子消毒处理在培养基中点样前，必须对种子进行消毒，防止感菌，具体方法为：先将种子倒在干净的纸上，挑去大的杂质，再将种子倒入EP管中，加入1mL70%酒精，振荡10min，将种子放在超净台中吹干。

1.2 点样将消毒处理后的种子，可以利用牙签点到培养基上，每次仅点一粒种子，根据培养皿的大小，确定一个里面能够点多少个种子，每个90mm培养皿上大约种30粒种子，防止植株长大后影响根与子叶的发育。

1.3 春化种子点样完毕后，将培养基密封，置于4℃冰箱里放置72h后，放回温室。

土培法：1.种种子前，要将营养土用自来水混匀后，121℃灭菌30min，待土冷却后，装入种植拟南芥的方盒中，再将方盒放入红色托盘中。

2.将要点的种子平铺在称量纸上，用牙签蘸取一粒种子点在营养土上,每点一个小盒时都用牙签做标记，以免遗种某个盒子。

（每个小盒子种5粒种子，每个大方盒子种9粒种子）3.将点了拟南芥种子的托盘置于22℃温室，并用一个干净的托盘盖在上面，大约两天后就可以打开上面的托盘，待植物长出4片叶子时，可以根据自己的实验需求对植物的幼苗进行取舍。

4.植株生长条件的控制幼苗移植后将花盆置于温室内，保证温室温度恒定在22℃，空气湿度70—80%，光照强度100—150μmol/m2/s，每天浇两次纯净水，上午9点左右一次，下午5点左右一次；一周浇一次营养液（1平匙溶于1L水中），营养液要灌在盆底。

浇水注意事项：1）水不可以浇的过多或过少，用手捏起一些土能挤出水来说明就有点太湿；2）水要浇均匀，托盘四个角的方向如果喷壶喷不到，可以用挤瓶均匀地喷一些水；3）用喷壶浇水时，喷壶的水柱不可以太大，以免把植物连根拔起；4）当植株出现花芽时，一定要保证水分的供应，促进果实的发育。

当植株结有豆荚时，可以适当的减少供水量，每两三天浇一次水便可，以利于种子的成熟。

开花后的植物不能再用喷壶浇水，要从盆底灌水，但不可以一次性灌太多水；5）在盆底灌水后，待植物吸收完水后，可以将盆底多余的水分倒出来；6）拟南芥受到胁迫判断标准：叶柄发紫，叶片发黄，开花期提前等；7）如果做生理实验，植物一旦受到胁迫，需要把植物丢弃，重新种植，以免实验数据不准确。

拟南芥种植方法
一．拟南芥生长条件
拟南芥生长的适宜温度白天为22-24℃左右，夜温最好比日温低2℃。

拟南芥在日照长于12小时下才会开花，一般拟南芥生长室的日照长度定于14-16h为佳，土壤湿度70%—80%，营养土：蛭石=1：1，3—4天浇一次营养液，从底盘浸入。

二．种子处理
1.取适量种子置于标记好的1.5ml离心管中，加入1 ml 70％乙醇轻微振1 min；
2.去乙醇，加入1 ml体积分数为10％的NaClO (次氯酸钠), 消毒5~10 min；
3.吸去NaClO, 用无菌水冲洗种子5次后, 加入600μl无菌水；
4.取适量拟南芥种子至10 ml 离心管中，加入0.05%的琼脂悬浮，置于4℃冰箱低温春化处理2-3 天。

三．土壤培养
将已春化处理的拟南芥种子，用消过毒的牙签或者移液枪将种子，点播在土壤中，一盆2—3颗即可，将花盆放入有水的底盘中,框中的水就会通过花盆底部的孔渗上来，待花盆中的基质湿透后即可点播。

用保鲜膜覆盖1-2天后揭膜，如果苗很弱，则在此基础上还需多覆盖1天。

当到4叶期时，要适当移苗，每盆一株。

小心轻轻用镊子拨开周围土壤，连根取出小苗（注意不要伤害根部）。

苗期不使用营养液，移栽后3-4天使用一次营养液，期间视情况浇水，但不要在底盘中始终保持水层。

在开始收籽期,不再需要过多的水分，可保持底盘干燥，此时每隔7-10天加一次水即可。

在种荚变黄，变干时可以收籽。

将种子抖落在纸上，用金属滤网过一下以除去杂质，将种子装入写了标记的小纸袋中，放于干燥的环境中让种子进一步干燥后，封存于1.5ml试管中，切记越干越好，长期保存的种子必需要干燥保存到4℃。

拟南芥的实验室种植方案————蛭石培养法一．实验原理拟南芥是十字花科植物，个体小，生活周期短，种植和生长不受季节限制，自花传粉，是植物实验常用的模式植物。

蛭石是一种天然、无毒的矿物质，在高温作用下会膨胀的矿物。

它是一种比较少见的矿物，属于硅酸盐。

有离子交换的能力，它对土壤的营养有极大的作用。

栽培介质需要有良好的排水性和透气性，以防止过湿引起真菌和昆虫幼虫的滋生。

使用泥炭土，蛭石，珍珠岩的混合土壤作培养介质能达到良好的效果。

二．实验材料和试剂花盆、铲子、小型喷水壶、薄膜、橡胶手套、尖嘴洗瓶、滤纸、烧杯、营养液、蛭石、泥炭土、珍珠岩、人工培养箱、4︒Ｃ冰箱。

三．实验步骤（2）种子处理春化种子：将种子放置于烧杯内，4︒Ｃ冰箱下，保持3-4天。

（3）土壤混合物的配置泥炭土：蛭石：珍珠岩=1：1：1。

用铲子放入花盆中，用营养液浇灌至湿润。

2.播种：将种子倒在滤纸上，轻轻震荡纸张，可均匀播撒，用薄膜（既保证所需温度又保证所需湿度）封住花盆口，薄膜扎孔（以便后继浇灌营养液）。

3.培养：（1）人工培养箱，温度23︒Ｃ，光强240 µmol·m-2·s-1，16h光照, 8 h 黑暗, 相对湿度60%~70%。

（2）在培养时浇培养液，用尖嘴洗瓶浇灌，1-2天浇一次。

（3）种子发芽后，及时揭开薄膜，幼苗生长过程中及时浇灌营养液和适宜的水分。

四. 实验结果预测3-4天后种子可发芽，此时，及时揭去薄膜，继续培养植株，作实验观察。

五．注意事项（1）实验过程中佩戴橡胶手套。

（2）幼苗浇灌水分不易过量，以避免根部缺氧死亡。

（3）种子播种时要均匀。

（4）配置土壤混合物时，要保持珍珠岩完整和土质蓬松。

五. 参考文献和资料翟中和，丁明孝，王喜中.细胞生物学（第四版）.高等教育出版社。

刘金亮. 拟南芥实验室常用的种植方法.西北师范大学，生命科学学院，730070。

张庆友，孙新月，兰伟，许树成，祝雪兰. 拟南芥实验室种植栽培要领. 生物学通报. 2015年第50卷第七期。

拟南芥拟南芥培养⽅法的进展研究拟南芥( Arabidopsis thaliana) 是⼗字花科拟南芥属植物, 虽然没有经济价值, 但具有⽣育期短, 植株个体⼩及基因组⼩等特点,因⽽长期以来⼀直被⽤来作为分⼦⽣物学和传统遗传学研究的模式实验材料, 作为⾼等植物中具有最少基因组的物种,在科学研究中的地位也是极为重要得。

为了与国际接轨, 近年来国内已引⼊了拟南芥作为实验材料。

室内培养不仅可以得到试验所需的材料,也可以打破⾃然条件的限制对拟南芥进⾏各种诱导,为拟南芥新品种的培养和种性的改良提供便利条件,掌握拟南芥室内培养技术对顺利开展植物发育⽣物学的研究具有重要的意义。

但是,拟南芥属于较难培养的植物,许多因素制约着它的正常⽣长和发育，⽐如，拟南芥种⼦特别⼩, 幼苗很弱, 易夭折, 给它的培养带来⼀定的困难。

⽬前,国内很少有实验室具备国外⼈⼯⽓候室培养拟南芥的全⽅位调控条件, 在拟南芥培养⽅⾯存在成活率低、培养周期长等问题。

因此, 掌握拟南芥的培养技术⾮常重要。

拟南芥室内培养⽅法研究拟南芥室内培养⼀般从种⼦春化开始,经历消毒、育苗、移栽、后期管理、种⼦收集及保存等阶段。

通常采⽤⽔培和⼟培两种⽅法。

1种⼦的春化春化作⽤(verna lization)是某些⾼等植物具备成花能⼒所必需的,即通过适当长度和强度的冷处理诱导开花抑制蛋⽩基因沉默,从⽽使植物具备开花能⼒.近年来的研究已经表明春化过程中特定抑制蛋⽩表达沉默的原因部分是由于染⾊体上特定位点的组氨酸的共价修饰. 种⼦播前需在湿润条件下置4℃冰箱内低温处理3~4 d，对于已在冰箱内保存⼀个⽉以上的种⼦可不必低温处理。

2种⼦的消毒拟南芥种⼦的消毒主要是⽤次氯酸钠溶液和酒精，不同浓度的溶液对种⼦上的病毒和细菌有不同的杀灭作⽤，结合⽂献资料，在本⼈第⼆课堂的实验中（《拟南芥三种培养⽅法的⽐较》），对⽐了三种不同的消毒⽅法，探索消毒⽅法旨在寻找出⼀种对拟南芥种⼦伤害最⼩，并且最有效的消毒⽅法。

东北地区拟南芥室内栽培技术
戚晓利;赵树堂;韩诚武;张丽敏;张海军;申健;王波
【期刊名称】《中国野生植物资源》
【年(卷),期】2014(033)005
【摘要】结合东北地区气候特点摸索出一套适合拟南芥生长的室内栽培方法.采用土壤育苗法和基质育苗法培养拟南芥,并根据其生物学特性在温度、光照、肥水管理、病虫害防治等方面给予适当管理,能培养出生长健壮、满足实验要求的拟南芥植株,为拟南芥在东北地区种植提供参考资料.
【总页数】3页(P64-66)
【作者】戚晓利;赵树堂;韩诚武;张丽敏;张海军;申健;王波
【作者单位】佳木斯大学生命科学学院,佳木斯154007;林木遗传育种国家重点实验室,中国林业科学研究院,北京100091;林木遗传育种国家重点实验室,中国林业科学研究院,北京100091;佳木斯大学生命科学学院,佳木斯154007;佳木斯大学生命科学学院,佳木斯154007;佳木斯大学生命科学学院,佳木斯154007;佳木斯大学生命科学学院,佳木斯154007;佳木斯大学生命科学学院,佳木斯154007
【正文语种】中文
【中图分类】Q949.748.3
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拟南芥室内简易栽培和田间大规模种植的方法王爱荣;刘丽;周洁;鲁国东;王宗华【期刊名称】《福建农林大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2005(034)002【摘要】采用菜园土、草木灰、锯木屑体积比为4:2:1的培养基质,用1g·L-1琼脂水悬浮种子直播培养拟南芥,根据其生物学特性在温度、空气相对湿度、土壤水分、光照以及病虫害防治等方面进行管理,培养出生长健壮、充分满足实验要求的拟南芥植株.用同样基质,适当遮荫,可以在田间大规模种植拟南芥.在月均温为11-14℃,日最低气温为2.1-4.7℃的自然条件下,夜间覆盖塑料薄膜,拟南芥仍能正常生长.【总页数】3页(P252-254)【作者】王爱荣;刘丽;周洁;鲁国东;王宗华【作者单位】福建农林大学教育部生物农药与化学生物学重点实验室,福建,福州,350002;福建农林大学教育部生物农药与化学生物学重点实验室,福建,福州,350002;福建农林大学教育部生物农药与化学生物学重点实验室,福建,福州,350002;福建农林大学教育部生物农药与化学生物学重点实验室,福建,福州,350002;福建农林大学教育部生物农药与化学生物学重点实验室,福建,福州,350002【正文语种】中文【中图分类】Q94-331【相关文献】1.拟南芥实验室种植栽培要领 [J], 张庆友;孙新月;兰伟;许树成;祝雪兰2.东北地区拟南芥室内栽培技术 [J], 戚晓利;赵树堂;韩诚武;张丽敏;张海军;申健;王波3.室内花卉种植的新方法无土栽培研究 [J], 赵玉兰;罗海龙;叶广炎4.近代稀见出版物《四季栽培人工香菰简易种植法》中的栽培技术与商业营销 [J], 芦笛5.室内盆栽大规模种植强效智能系统 [J], 吴锡雄因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。