病毒的血凝及血凝抑制试验[医学参照]

病毒血凝与血凝抑制实验报告一、实验目的病毒血凝与血凝抑制实验是一种常用的病毒学检测方法，旨在检测病毒的血凝活性以及血清中特异性抗体的存在和滴度。

本次实验的主要目的是：1、熟悉病毒血凝与血凝抑制实验的基本原理和操作流程。

2、掌握检测病毒血凝活性的方法，并确定病毒的血凝效价。

3、运用血凝抑制实验检测血清中特异性抗体的水平，为疾病的诊断和防控提供依据。

二、实验原理1、病毒血凝现象许多病毒表面具有血凝素，能够与红细胞表面的受体结合，使红细胞发生凝集。

这种现象称为病毒血凝现象。

不同的病毒血凝素与红细胞结合的特异性不同，因此可用于病毒的鉴定和分类。

2、血凝抑制实验当血清中存在特异性抗体时，抗体能够与病毒表面的血凝素结合，从而阻断病毒与红细胞的结合，抑制血凝现象的发生。

通过系列稀释血清，以能完全抑制血凝现象的最高血清稀释度作为抗体的血凝抑制效价。

三、实验材料与设备1、实验材料病毒悬液：本次实验使用的是_____病毒悬液。

红细胞：选用新鲜的鸡红细胞或豚鼠红细胞。

标准阳性血清和阴性血清。

待检血清。

2、实验设备微量移液器。

96 孔 V 型微量反应板。

离心机。

恒温箱。

四、实验步骤1、病毒血凝效价的测定用 PBS 缓冲液将病毒悬液进行 2 倍系列稀释，从 1:2 至 1:256，共11 个稀释度，每个稀释度设 2-3 个重复孔。

在 96 孔 V 型微量反应板中，每孔加入25μL 稀释好的病毒液。

向每孔中加入25μL 1%的红细胞悬液，轻轻振荡反应板，使病毒液和红细胞充分混合。

将反应板置于 37℃恒温箱中孵育 30-60 分钟，观察血凝现象。

以出现“＋＋”凝集的最高稀释度作为病毒的血凝效价。

2、血凝抑制实验对待检血清进行 2 倍系列稀释，从 1:2 至 1:256，共 11 个稀释度。

在 96 孔 V 型微量反应板中，每孔加入25μL 稀释好的待检血清。

向每孔中加入25μL 4 个血凝单位的病毒悬液，轻轻振荡反应板，混合均匀，置 37℃恒温箱中孵育 30 分钟。

病毒的血凝试验名词解释病毒的血凝试验是一种常见的检测方法，用于确定病毒感染的存在以及病毒类型的鉴定。

该试验利用了人体免疫系统对病毒的免疫反应，通过检测血浆中的凝集反应来判断病毒感染的有无。

本文将对与病毒的血凝试验相关的一些术语进行解释。

1. 血凝试验（Hemagglutination）：血凝试验是一种常用的免疫学方法，通过观察红细胞的凝集反应来判断病毒的存在。

在病毒感染的情况下，病毒可以使得红细胞发生凝集现象，从而形成一种网状结构。

这种凝集反应可以帮助医生确定病毒感染的类型和程度。

2. 血凝抑制试验（Hemagglutination Inhibition Assay）：血凝抑制试验是一种用于确定病毒感染的抗体的存在与否以及抗体的效力的方法。

在这个试验中，医生将不同浓度的病毒抗原加入患者血浆样本中，观察其中是否出现了病毒凝集反应。

如果患者的血浆中存在与病毒抗原相结合的特异性抗体，那么这些抗体会与病毒抗原结合，并阻止病毒与红细胞产生凝集反应。

通过检测凝集反应的程度，可以评估患者血浆中的抗体效力及抗体的浓度。

3. 血凝试验凝集效价（Hemagglutination Titer）：血凝试验凝集效价是用来表示血浆中抗体浓度的方法。

凝集效价通常以最高稀释度的倒数来表示，也就是需要将血浆稀释到什么程度才能抑制病毒凝集。

凝集效价越高，表示血浆中的抗体浓度越高，对病毒的抵抗能力也就越强。

4. 血凝图谱（Hemagglutination Curve）：血凝图谱是在血凝试验中绘制的一种图形，用于表示血浆稀释度与血凝反应之间的关系。

血凝图谱的横轴通常表示血浆的稀释度，纵轴表示血浆与病毒的凝集反应的程度。

通过绘制血凝图谱，可以评估不同血浆样本的抗体效力以及浓度的分布情况。

这样的图形有助于医生判断病毒感染的程度，病程的演变以及抗体的持续时间等信息。

血凝试验作为病毒感染的常用检测方法，在临床医学中扮演着重要的角色。

通过观察红细胞的凝集反应，医生可以准确判断患者是否感染了病毒，并进一步确定病毒的类型。

实训九 NDV的血凝及血凝抑制试验（微量法）目的要求熟练掌握病毒的血凝及血凝抑制试验（微量法）的操作方法及结果判定，明确其应用价值。

仪器及材料pH7.2生理盐水、1％鸡红细胞悬液、NDV、新城疫病毒待检血清、微量血凝板（96孔V型板）、微量移液器（带吸头）、微型振荡器、温箱、离心机、天平、注射器。

方法与步骤（一）病毒的血凝（HA）试验1．1％鸡红细胞悬液的制备（1）采血先在注射器中吸入抗凝剂（3.8％枸橼酸钠液）1ml，采成年健康鸡血，心脏或静脉采血3-4ml。

（2）离心洗涤共3次，每次2000r/min，5min，每次离心后弃去上清液和白细胞，仅留纯的红细胞，最后读出红细胞的体积。

（3）配制用生理盐水将纯的红细胞稀释成体积比为1%的红细胞悬液。

2．操作术式振荡1min，室温(18℃～20℃)下作用30～40min,或置37℃恒温培养箱中作用15～30min观察结果（1）加生理盐水 1-12孔，每孔中分别加入50μl。

（2）NDV病毒液倍比稀释换吸头，吸取50μl病毒液，加于第1孔的生理盐水中，并用移液器吹打3～5次使液体混和均匀，然后取50μl移入第2孔，混匀后取50μl移入第3孔，依次倍比稀释到第11孔，第11孔中液体混匀后从中吸出50μl弃去。

第12孔不加病毒抗原，作盐水对照。

（3）加1%红细胞悬液换吸头，1-12孔，每孔中分别加入50μl。

加样完毕，振荡1min ，室温（18～20℃）下作用30～40min ，或37℃恒温箱中作用15～30min ，观察并判定结果。

3．结果判定及记录完全凝集（＋）：红细胞呈伞状分布于反应孔底层。

伞完全不凝集（－）：红细胞呈点状沉淀于反应孔底层。

点不完全凝集（±）：介于＋与－之间。

病毒的血凝价（或称血凝滴度）：能使一定量红细胞发生完全凝集的病毒最大稀释倍数为该病毒的血凝滴度，或称血凝价。

（二）病毒的血凝抑制（HI ）试验采用同样的血凝板，每排孔可测1份血清样品。

病毒血凝与血凝抑制实验报告一、实验目的本次实验旨在研究病毒的血凝现象以及血凝抑制反应，以深入了解病毒的特性和相关的免疫学机制。

通过实验，掌握病毒血凝与血凝抑制实验的操作方法和结果判断，为病毒的检测、诊断以及疫苗研发提供实验依据。

二、实验原理（一）病毒血凝现象某些病毒表面具有能够与红细胞表面受体结合的血凝素，从而使红细胞发生凝集。

这种凝集现象可以在显微镜下观察到，并且凝集的程度与病毒的浓度有关。

（二）血凝抑制反应当特异性抗体与病毒表面的血凝素结合后，会阻断病毒与红细胞的结合，从而抑制血凝现象的发生。

通过检测血清中抗体对血凝的抑制作用，可以判断血清中是否存在特异性抗体以及抗体的效价。

三、实验材料（一）病毒株选用已知血凝特性的病毒株，如流感病毒、新城疫病毒等。

（二）红细胞新鲜采集的鸡、豚鼠或人“O”型红细胞。

（三）血清待检血清和已知阳性、阴性对照血清。

（四）试剂磷酸盐缓冲液（PBS）、生理盐水等。

（五）器材96 孔微量血凝板、移液器、离心机、显微镜等。

四、实验步骤（一）红细胞悬液的制备1、采集新鲜血液，加入抗凝剂。

2、离心去除血浆，用生理盐水洗涤红细胞 3 5 次，直至上清液无色。

3、最后用生理盐水将红细胞配制成 1%的悬液备用。

（二）病毒血凝滴度的测定1、在 96 孔微量血凝板中，从第 1 孔至第 12 孔，每孔加入25μL PBS。

2、在第 1 孔中加入25μL 病毒液，然后从第 1 孔吸取25μL 病毒液至第 2 孔，依次倍比稀释至第 11 孔，从第 11 孔吸取25μL 弃去。

3、每孔加入25μL 1%红细胞悬液，轻轻振荡混匀，室温静置 30 60 分钟。

4、观察血凝结果，以出现“＋＋”凝集的最高稀释度作为病毒的血凝滴度。

（三）血凝抑制实验1、取已测定血凝滴度的病毒液，按照 4 个血凝单位/25μL 的量加入 96 孔微量血凝板的第 1 孔至第 10 孔，第 11 孔为病毒对照，第 12 孔为红细胞对照。

生理盐水 病毒液 25「 25卩1\25^125^1 25 ”1 25g1 2 25gl 4 25g1、25g1 Q5 25^1 25 卩1弃去实践二病毒血凝和血凝抑制试验--（以新城疫为例）实践目的：1 •掌握血凝（HA 和血凝抑制（HI ）试验的原理2 •掌握鸡新城疫病毒血凝和血凝抑制试验的操作方法实践原理：某些病毒（如鸡新城疫病毒，禽流感病毒等）能够与人或动物的红细胞发生凝集， 此即为 红细胞凝集现象。

这种红细胞凝集现象可于病毒悬液中加入特异性抗体 （免疫血清）所抑制, 即为红细胞凝集抑制试验。

实践内容：1.红细胞凝集试验（HA 试验）主要是测定病毒的红细胞凝集价，以确定红细胞凝集抑制试验所用病毒稀释倍数（抗原单位）。

有试管法和微量法两种，现以常用的微量法进行说明。

鸡新城疫病毒的HA 试验现采用微量法，在 V 形微量反应板上进行。

（1） 首先用微量移液器向每个孔加入稀释液即灭菌生理盐水一滴 （25卩I ）。

（2）用微量移液器取病毒抗原液 25卩1加入第1孔内，吸头浸于液体中缓慢吸吹几次使病毒与稀释液混合均匀，再吸取25^1液体小心地移至第 2孔，如此连续稀释至第11孔，第11孔吸取25 ^1液体弃掉；病毒稀释倍数依为1:2〜1:2048，第12孔为红细胞对照。

（3） 再以微量移液器每孔加1.0 %红细胞悬浮液1滴（25卩I ）。

（4） 在振荡器上振荡混匀约 I 〜2分钟，再置37 C 作用15分钟后观察结果。

（5）每次测定样品都应同时做红细胞对照。

表1鸡新城疫血凝效价（HA ）的测定术式（微量法）孔号1 234567891011 12病毒稀释倍数 1:2 1:41:81:161:321:641:1281:2561:5121:10241:2048 对照1%红细胞悬液 25g1 25g1 25g1 25g1 25g1 25g1 25g1 25g1 25g1 25g1 25g1 25g1 感作 置振荡器上混匀1〜2分钟，放37 C 静置15分钟结果例示 # # # # # # # ++ - - - -表示%完全凝集 表示%凝集 表示不凝集结果判定：将反应板倾斜成45度角，沉于管底的红细胞沿着倾斜面向下呈线状流动者沉淀, 表明红细胞未被或不完全被病毒凝集； 如果孔底的红细胞铺平孔底，凝成均匀薄层，倾斜后红细胞不流动，说明红细胞被病毒所凝集。

病毒的血凝及血凝抑制试验有些病毒具有凝集某种(些)动物红细胞的能力，称为病毒的血凝，利用这种特性设计的试验称血球凝集(HA)试验，以此来推测被检材料中有无病毒存在，是非特异性的，但病毒的凝集红细胞的能力可被相应的特异性抗体所抑制，即血球凝集抑制(HI)试验，具有特异性。

通过HA-HI试验，可用已知血清来鉴定未知病毒，也可用已知病毒来检查被检血清中的相应抗体和滴定抗体的含量。

[目的要求]掌握病毒HA和HI试验的原理和基本操作方法，了解其实用价值。

[材料与试剂]1. 96孔“U”形或“V”形微量反应板，50?L定量移液器，滴头，微型振荡器。

2. 生理盐水，0.5% 鸡红细胞悬液。

3. 新城疫病毒液（尿囊液或冻干疫苗液），新城疫阳性血清，被检鸡血清。

[实验内容及操作方法]（一）血球凝集(HA)试验1. 在96孔微量反应板上进行，自左至右各孔加50?L生理盐水。

2. 于左侧第1孔加50?L病毒液（尿囊液或冻干疫苗液），混合均匀后，吸50?L至第2孔，依次倍比稀释至第11孔，吸弃50?L；第12孔为红细胞对照。

3. 自右至左依次向各孔加入0.5% 鸡红细胞悬液50?L，在振荡器上振荡，室温下静置后观察结果（表4-1）。

表 4-1 病毒血凝试验的操作方法（单位：?L）弃504. 结果判定：从静置后10 min开始观察结果，待对照孔红细胞已沉淀即可进行结果观察。

红细胞全部凝集，沉于孔底，平铺呈网状，即为100% 凝集（++++），不凝集者（-）红细胞沉于孔底呈点状。

以100% 凝集的病毒最大稀释度为该病毒血凝价，即为一个凝集单位。

从表4-1看出，该新城疫病毒液的血凝价为1:128，则l:128为1个血凝单位，1:64、l:32分别为2、4个血凝单位，或将128/4=32，即1:32稀释的病毒液为4个血凝单位。

(二) 血球凝集抑制(HI)试验1. 根据HA试验结果，确定病毒的血凝价，配制出4个血凝单位的病毒液。