透射电镜样品制备步骤
- 格式:doc
- 大小:23.00 KB
- 文档页数:1
透射电镜制样流程透射电镜(Transmission Electron Microscopy,TEM)制样是指通过一系列的化学和物理方法来制取透射电镜所需的样品。
透射电镜是一种高分辨率的显微镜,可以在纳米尺度下观察材料的原子结构和微观形态。
为了获取高质量的TEM图像,制样过程非常关键。
下面将详细介绍透射电镜制样的流程。
1.样品制备:样品可以是纳米颗粒、薄膜、纤维或生物样品等。
首先,准备适宜的基底材料,如碳膜覆盖的铜网格或碳膜覆盖的铜刀片。
样品通常需要制成非常薄的切片,通常在50到100纳米的厚度范围内。
制备方法包括机械切割、电解石蠟切片、离子切割或电离蚀刻等。
2.固定和固化:对于生物样品,需要先进行固定处理,以保持样品的形态和结构。
常用的固定剂包括戊二醛、酸性醛或重金属盐。
然后,固定的样品需要进一步处理以固化,如用过氧化物、树脂或聚合物进行浸渍,以增加样品的稳定性。
3.切割和悬浮:将固化的样品切割成适当的尺寸和形状。
使用超微切割机、离子切割仪或其他切割工具进行切割。
切割后,样品通常会悬浮在水或有机溶液中,以便进一步处理。
4.脱水和对比染色:脱水是将样品从水中逐渐转移到有机溶剂中的过程。
这种处理可以控制样品的体积,以减少对比染色和观察中的伪影。
脱水通常通过渗透固定液逐渐转移,然后通过有机溶剂(如醋酸乙酯、丙酮或丙二醇)进行交换。
5.嵌入:将样品嵌入到透明的聚合物或树脂中。
嵌入过程中,通常采用逐渐增加浓度的树脂混合物,以确保样品得到完全浸透。
然后,将样品与树脂进行硬化,通常在高温下进行。
6.超薄切片:将固化的样品切割成非常薄的切片。
使用超薄切片机和钻磨刀片进行切割。
切割后的切片应尽快收集并转移到透明的铜网格或铜刀片上。
7.超薄切片处理:超薄切片通常需要进行后继处理以增强对比度和解决其他问题。
这可能包括染色、胶层增强或薄膜剥离等方法。
8.观察:将制备好的样品放入透射电镜中进行观察。
在观察前,样品需要在真空中或过氮气中去除气泡和其他杂质。
透射电镜样品制备步骤透射电镜是一种重要的材料表征技术,它利用电子的波动性和微粒性来观察材料的结构和性质。
为了能够使用透射电镜观察样品,首先需要对样品进行制备。
透射电镜样品制备步骤如下:1.选择合适的样品:透射电镜样品可以是固体、液体、薄膜或纳米颗粒等。
根据研究目的和样品性质选择合适的样品。
2.样品预处理:根据样品性质的不同,进行必要的预处理。
例如,对于固体样品,可以选择切割、抛光或电解抛光等方法来得到平滑的表面。
3.样品固定:将样品固定到透射电镜样品架上。
不同的样品有不同的固定方法。
例如,对于固体样品,可以使用导电胶将其固定在样品架上。
4.薄层制备:对于厚度过大的样品,需要将其制备成透明的薄层以便透射电镜观察。
常用的方法有机械研磨、电子束刻蚀或离子束刻蚀等。
5.样品清洁:将样品放入超声波清洗机中进行清洗,以去除可能附着在样品表面的杂质或污染物。
6.特殊处理:如果需要对样品进行特殊处理,例如加热、冷冻处理或受到特定环境气氛的影响等,根据需要进行相应的处理。
7.样品干燥:将样品放入真空或氮气环境中,以确保样品干燥。
避免样品受到水汽的污染。
8.获得薄片:使用切片机将固态样品切割成适当厚度的薄片。
为了获得高质量的薄片,可以选择特殊的切片工具和技术,例如离子束切片或低速钻磨切片。
9.薄片形状整理:使用不同的研磨和抛光方法,将薄片的形状和表面进行调整,以确保样品的平滑度和一致性。
10.网格制备:将薄片粘贴在透射电镜网格上。
网格可以增强样品的稳定性和保护,同时提供用于定位和标识的标记。
11.后续处理:根据研究目的和透射电镜分析的要求,可以对样品进行进一步处理。
例如,可以进行染色、脱膜、溅射或腐蚀等处理。
以上是透射电镜样品制备的一般步骤。
不同样品和研究目的可能会有所不同。
因此,根据具体的研究需求和样品特点,制备过程可以做相应的调整和优化。
透射电镜样品制备方法透射电镜(Transmission Electron Microscope,简称TEM)是一种高分辨率的显微镜,能够观察到纳米级别的细微结构。
在进行透射电镜观察之前,制备样品是非常关键的一步。
本文将介绍透射电镜样品制备的方法,希望能够对相关研究者提供一些参考和帮助。
首先,样品的制备需要从样品的选择开始。
在透射电镜观察中,样品通常是非晶态材料、纳米颗粒、生物样品等。
根据需要观察的对象,选择合适的样品非常重要。
在选择样品时,需要考虑到样品的尺寸、形状、结构等因素,确保样品能够满足观察要求。
其次,样品的制备需要进行样品的处理和制备。
对于非晶态材料和纳米颗粒样品,通常需要将样品制备成薄膜或薄片的形式,以便透射电镜能够观察到样品的内部结构。
而对于生物样品,则需要进行化学固定、脱水、包埋等处理,以保持样品的形态和结构。
在样品的处理和制备过程中,需要严格控制各个步骤的条件和参数,确保样品的质量和结构不受影响。
接着,样品的制备需要进行样品的切割和抛光。
对于非晶态材料和纳米颗粒样品,通常需要使用离心切片机或离心抛光机进行样品的切割和抛光,以获得薄膜或薄片样品。
而对于生物样品,则需要使用超薄切片机进行样品的切割,以获得透明的样品切片。
在样品的切割和抛光过程中,需要严格控制切割和抛光的条件和参数,确保样品的表面平整和光滑。
最后,样品的制备需要进行样品的染色和标记。
对于生物样品,通常需要使用染色剂对样品进行染色,以增强样品的对比度和清晰度。
同时,还可以使用金标记等方法对样品进行标记,以便观察特定结构或分子。
在样品的染色和标记过程中,需要严格控制染色和标记的条件和参数,确保样品的染色和标记效果良好。
综上所述,透射电镜样品制备是透射电镜观察的关键步骤之一。
通过选择合适的样品、进行样品的处理和制备、进行样品的切割和抛光、进行样品的染色和标记等步骤,可以获得高质量的透射电镜样品,为后续的观察和分析提供可靠的基础。
透射电镜的样品制备透射电镜的样品制备是一项较复杂的技术,它对能否得到好的TEM像或衍射谱是至关重要的.投射电镜是利用样品对如射电子的散射能力的差异而形成衬度的,这要求制备出对电子束"透明"的样品,并要求保持高的分辨率和不失真.电子束穿透固体样品的能力主要取决加速电压,样品的厚度以及物质的原子序数.一般来说,加速电压愈高,原子序数愈低,电子束可穿透的样品厚度就愈大.对于100~200KV的透射电镜,要求样品的厚度为50~100nm,做透射电镜高分辨率,样品厚度要求约15nm(越薄越好).透射电镜样品可分为:粉末样品,薄膜样品,金属试样的表面复型.不同的样品有不同的制备手段,下面分别介绍各种样品的制备.(1)粉末样品因为透射电镜样品的厚度一般要求在100nm以下,如果样品厚于100nm,则先要用研钵把样品的尺寸磨到100nm以下,然后将粉末样品溶解在无水乙醇中,用超声分散的方法将样品尽量分散,然后用支持网捞起即可.(2)薄膜样品绝大多数的TEM样品是薄膜样品,薄膜样品可做静态观察,如金相组织;析出相形态;分布,结构及与基体取向关系,错位类型,分布,密度等;也可以做动态原位观察,如相变,形变,位错运动及其相互作用.制备薄膜样品分四个步骤:a将样品切成薄片(厚度100~200微米),对韧性材料(如金属),用线锯将样品割成小于200微米的薄片;对脆性材料(如Si,GaAs,NaCl,MgO)可以刀将其解理或用金刚石圆盘锯将其切割,或用超薄切片法直接切割.b切割成φ3mm的圆片用超声钻或puncher将φ3mm薄圆片从材料薄片上切下来.c预减薄使用凹坑减薄仪可将薄圆片磨至10μm厚.用研磨机磨(或使用砂纸),可磨至几十μm.d终减薄对于导电的样品如金属,采用电解抛光减薄,这方法速度快,没有机械损伤,但可能改变样品表面的电子状态,使用的化学试剂可能对身体有害.对非导电的样品如陶瓷,采用离子减薄,用离子轰击样品表面,使样品材料溅射出来,以达到减薄的目的.离子减薄要调整电压,角度,选用适合的参数,选得好,减薄速度快.离子减薄会产生热,使样品温度升至100~300度,故最好用液氮冷却样品.样品冷却对不耐高温的材料是非常重要的,否则材料会发生相变,样品冷却还可以减少污染和表面损伤.离子减薄是一种普适的减薄方法,可用于陶瓷,复合物,半导体,合金,界面样品,甚至纤维和粉末样品也可以离子减薄(把他们用树脂拌合后,装入φ3mm金属管,切片后,再离子减薄).也可以聚集离子术(FIB)对指定区域做离子减薄,但FIB很贵.对于软的生物和高分子样品,可用超薄切片方法将样品切成小于100nm的薄膜.这种技术的特点是样品不会改变,缺点是会引进形变.(3)金属试样的表面复型即把准备观察的试样的表面形貌(表面显微组织浮凸)用适宜的非晶薄膜复制下来,然后对这个复制膜(叫做复型)进行透射电镜观察与分析.复型适用于金相组织,断口形貌,形变条纹,磨损表面,第二相形态及分布,萃取和结构分析等.制备复型的材料本身必须是"无结构"的,即要求复型材料在高倍成像时也不显示其本身的任何结构细节,这样就不致干扰被复制表面的形貌观察和分析.常用的复型材料有塑料,真空蒸发沉积炭膜(均为非晶态物质).常用的复型有:a塑料一级复型,分辨率为10~20nm;b炭一级复型,分辨率2nm,c塑料-炭二级复型,分辨率10~20nm;d萃取复型,可以把要分析的粒子从基体中提取出来,这种分析时不会受到基体的干扰.除萃取复型外,其余复型只不过是试样表面的一个复制品,只能提供有关表面形貌的信息,而不能提供内部组成相,晶体结构,微区化学成分等本质信息,因而用复型做电子显微分析有很大的局限性,目前,除萃取复型外,其他复型用的很少.。
透射电镜样品制备过程
组织取材(60s内),体积<1mm3,之后进行如下步骤
1)前固定:3%戊二醛2h或过夜。
2)漂洗:磷酸缓冲液,3次,10min/次。
3)后固定:1%锇酸固定液,2h。
4)漂洗:(同上)。
5)梯度脱水:50%丙酮,70%丙酮,80%丙酮,90%丙酮两次,各10min 。
100%丙酮两次,各15min。
6)渗透:丙酮/包埋剂(1:1,1:2),室温各1h。
丙酮/包埋剂1:3, 4度过夜。
纯包埋剂,4度过夜。
7)包埋:纯包埋剂(37度,45度,60度各24h)。
取出包埋块,进行超薄切片,片厚70nm。
分别采用醋酸双氧铀对切片进行染色30min,双蒸水漂洗3-5次,之后用柠檬酸铅
染色10min,双蒸水漂洗3-5次。
待切片干燥后,透射电镜观
察。
切片机型号:Leica UC7 超薄切片机,速度1mm/s.
透射电镜型号:日立高新HT7700,电压80kv 电流10μa.。
1.取样在平板上选取不同位置组织,用小刀切取1*2mm2的长方形样品。
Ps:取样时小心进行,切勿触碰样品表面,样品的培养基需全部刮除。
2.前固定不同样品分别放入装有1mL2.5%戊二醛的1.5豪升的离心管中,常温固定5-6小时后于4℃冰箱中保存过夜。
Ps:戊二醛挥发性强,对人体有害。
请于通风橱中进行。
3.冲洗取出样品,立即放入装有1mL 0.1M PBS缓冲液的1.5豪升的离心管中,10分钟后换新PBS缓冲液,重复7-8次。
Ps:整个实验过程中,溶液加入量均不超过1mL。
4.后固定取冲洗后的样品,立即放入装有按比例1 : 1(PBS 30uL: 锇酸30uL)配好的锇酸溶液的1.5豪升的离心管中,常温固定1-2小时。
Ps:锇酸挥发性强,对人体有害。
请于通风橱中进行。
5.冲洗取出样品,立即放入装有1mL 0.1M PBS缓冲液的1.5豪升的离心管中,10分钟后换新PBS缓冲液,重复7-8次。
Ps:锇酸废液放入制定回收瓶中,切勿乱倒。
六.梯度脱水配好浓度分别为:30%、50%、70%、80%、90%、95%、100%的乙醇,吸出1.5豪升的离心管中的PBS缓冲液,按浓度顺序加入梯度乙醇,每一级浓度乙醇脱水10min,最后100%乙醇重复2-3次,保证样品绝对无水。
Ps:操作过程中切勿伤及样品,各个梯度乙醇现配现用。
七.置换吸除1.5豪升的离心管中的100%乙醇,加入100%丙酮,持续置换10min,重复3次。
Ps:丙酮以及上一步的无水乙醇都需要现开现用,以防浓度变化,影响结果。
八.浸透吸除离心管中的丙酮,按照总体积80uL,Spurr树脂:丙酮(1:3)的比例,将混液加入样品管中。
间隔8小时以上,加入总体积80uL,Spurr 树脂:丙酮(1:1)比例的混液。
间隔8小时以上,加入总体积80uL,Spurr树脂:丙酮(3:1)比例的混液。
即终体积为240uL。
Ps:一个样品一个样品的在干燥环境中操作,以防止样品受潮,同时操作过程中切勿伤及样品,下同。
¾透射电子显微镜成像时,电子束是透过样品成像。
¾由于电子束的穿透能力比较低,用于透射电子显微镜分析的样品必须很薄。
¾根据样品的原子序数大小不同,一般在50~500nm之间。
透射电镜样品的要求:¾1. 样品必须对电子束透明。
¾2. 所制得样品必须具有代表性,以真实反映所分析材料的特征。
主要方法:粉末样品、复型、离子减薄、电解双喷。
¾透射电镜观察用的样品很薄,需放在专用的样品铜网上。
¾透射电子显微镜使用的铜网一般直径为3毫米,上面铳有许多微米大小的孔,在铜网上覆盖了一层很薄的火棉胶膜并在上面蒸镀了碳层以增加其膜的强度,被分析样品就承载在这种支撑膜上。
样品铜网的作用:¾承载样品,并使之在物镜极靴孔内平移、倾斜、旋转,寻找观察区。
¾样品通常放在外径3mm ,200目方孔或圆孔的铜网上,铜网牢固夹持在样品座中保持好的热、点接触,减少因电子照射引起的热或电荷积累而产生样品漂移或损伤。
样品台透射电子显微镜样品制备电镜观察时样品受到的影响:(1)真空的影响。
含有挥发溶剂或易升华的试样必须冷冻后观察。
(2)电子损伤的影响。
试样在电镜中受到l0-3~1A/cm2的电子束照射,电子束的能量部分转化为热,使试样内部结构或外形发生变化或污染。
观察有机物或聚合物试样时,为防止电子束对试样的损伤和污染,应提高电压。
(3)电子束透射能力的影响。
由于电子束透射能力较弱,一般100kv加速电压时,试样厚度必须在20~200nm之间。
粉末样品制备¾随着材料科学的发展,超细粉体及纳米材料发展很快,而粉末的颗粒尺寸大小、尺寸分布及形态对最终制成材料的性能有显著影响,因此,如何用透射电镜来观察超细粉末的尺寸和形态便成了电子显微分析的一的一项重要内容。
¾其关键工作是是粉末样品的制备,样品制备的关键是如何将超细粉的颗粒分散开来,使其均匀分散到支持膜上,各自独立而不团聚。
透射电镜样品制备流程由于透射电镜能观察的样品必须很薄(60~70nm),所以透射电镜的样品准备要求很严格,方法也很单一,仅有一下两种方法:一.负染色技术负染色技术简单快速,可以显示生物大分子、细菌、分离的细胞器以及蛋白晶体等样品的形态、结构、大小以及表面结构的特征。
尤其在病毒学中,负染色技术有着广泛的应用。
样品要求:①样品悬液的纯度不要求很纯,但是如果杂质太多,如大量的细胞碎片,培养基残渣,糖类以及各种盐类结晶的存在都会干扰染色反应和电镜的观察。
尤其是不能有过多的糖类,因为在电子束的轰击下,糖类容易碳化而有碍观察,因此样品要适当提纯。
②样品悬液的浓度要适中,太稀在电镜下很难找到样品,太浓样品堆积影响观察。
操作流程:吸取样品悬液滴到有膜的铜网上,静置数分钟,然后用滤纸吸去多余的液体,滴上负染色液,染色1~2min后滤纸吸去负染色液,待干后用于电镜观察。
二、超薄切片技术超薄切片技术是为透射电镜观察提供薄样品的专门技术,是生物学中研究细胞超微结构最常用的技术。
广泛应用于生物体的各种细胞的超微结构观察。
一般厚度在10~100nm的切片称为超薄切片,制作这种切片的技术叫做超薄切片技术。
超薄切片制作的过程包括取材、固定、脱水、渗透、包埋、聚合、切片和染色等几个环节,和一般光学显微镜的石蜡切片过程相似。
但是,超薄切片切片过程更为细致与复杂,要求更严格,而且所用的试剂比较昂贵、配制复杂、强致癌。
具体操作步骤、注意事项如下:1.取材和前固定:快速的切取大小为0.5~1.0mm3的样品块,一分钟内把组织(样品)块浸入2.5%戊二醛(进口品质)溶液(取样前来平台领取),每个离心管内装20个以上的样品块,作为一个样送到平台。
要求:①取材前一定要和工作人员取得电话联系!②取材选择部位要准确可靠,确保每块材料都是要观察的部位。
③所有植物样品一定要抽真空,能够沉底的样品也抽真空15mins,不能沉底的样品一定要抽真空致沉底!④细菌、散在细胞等不能成块的样品,加戊二醛固定液,离心沉淀后送到平台,由平台工作人员处理。
透射电镜样品制备方法及优缺点
透射电镜样品制备主要分为两步,即液体/固体样品处理和超薄切片制备。
1、液体/固体样品处理
第一种方法是基于普通电镜样品制备的双步处理法,即第一步用电子束处理样品表面,使其导电,再经过透射电子束进行处理。
在这种方法下,样品表面层只有几百到几千纳米厚,因此,只有比较薄的样品才能够得到满意的结果。
另一种方法是采用高真空下的固态电子涂覆,即将样品表面涂覆上薄层特殊金属。
例
如可以用铱、金、铂或其它金属的熔合物作为涂层,以获得特殊的涂层电导能力,从而保
证样品的电子图像分辨率和可视深度。
2、超薄切片制备
超薄切片制备分为超声切片和非超声切片两类。
超声切片通常是采用高能量超声波振
荡使容易被劈开的液体/固体样品形成自发非规则薄片,有时还可以加入一定量的碎薄片,从而使超声对样品的透射变的更容易,提高了结果的准确性。
非超声切片制备则采用比较稳定的技术来实现,如钻石刀片切割、钝型刀制备和原子
力显微镜焦点束来制备,具有薄层切片准确厚度的特点,且可以满足多层次数据获取。
优点:
1、透射电镜样品制备要求低,可以在常规实验室条件下完成,便于实验和分析;
2、采用精确远离样品表面的电子束,使放大比例高,且能够获得更高的分辨率和更
深的可视深度;
3、三维结构复杂的物质可以藉由采用不同的金属包覆来进行分析;
1、制备过程繁琐复杂,容易出现样品分析结果不精确的情况;
2、物质表面多层次结构信息分析难度大,可能会影响分析结果准确性;
3、结构深度较大时,获取信息较困难,分析效果受到影响。
透射电镜生物样品制备步骤
一.取材:
组织块小于1立方毫米
二.固定:
%戊二醛,磷酸缓冲液配制固定2小时或更长时间。
用磷酸漂洗液漂洗15分三次
1%锇酸固定液固定2-3小时
用磷酸漂洗液漂洗15分三次
三.脱水:
50%乙醇15-20分
70%乙醇15-20分
90%乙醇15-20分
90%乙醇90%丙酮(1:1)15-20分
90%丙酮15-20分
以上在4度冰箱内进行
100%丙酮室温15-20分三次四.包埋:
纯丙酮+包埋液(2:1)室温3-4小时
纯丙酮+包埋液(1:2)室温过夜
纯包埋液37度2-3小时
五.固化:
37度烘箱内过夜
45度烘箱内12小时
60度烘箱内48小时
六.超薄切片机切片70 nm
七.3%醋酸铀-枸橼酸铅双染色
八.透射电镜JEOL JEM-1230(80KV)观察。
拍片。
透射电镜常规样品制备流程
透射电镜是电子显微镜技术中最重要的一种技术,普通晶体样品的常
规样品制备流程如下:
1、样品的准备:将样品、水、石蜡、助融剂(如NaCl)、磷酸盐、石墨、甲醛和电子源材料(碳粉)准备好备用,并配合温度控制装置使用。
2、样品处理:将样品用接近样品发热点的温度处理,一般为200?C,把样品放入室温保温的石蜡,再将该石蜡分别放入不同的温度槽,如助融
剂的温度可以高于样品放置温度。
3、镀膜:将样品放置在硝酸银或碳材料的固体膜下,镀膜时,将碳
气体经过电子枪加热,形成形状与原子相同的表面。
4、结晶:首先需要将样品放置在一定温度和压力下,进行结晶,再
将研磨剂如磷酸盐、石墨和水添加到样品中,使样品迅速结晶,并在腔内
升温至合适温度,加快结晶过程。
5、夹具的清洗:在滴定液中加入抗蚀剂,夹具进行清洗,确保样品
无几何不良影响。
6、取晶体:用软金属夹具取出晶体,放在清洗过的滴定液中浸泡,
以使样品重新渗透,然后将样品放入滴定液腔中,进行滴定,使样品表面
无污染物。
7、安装样品:用金刚石夹具将样品安装在金刚石台子上,并将其固定,以保证样品的准确安装。
透射电镜样品制备方法透射电子显微镜(Transmission Electron Microscope,简称TEM)是一种利用电子束穿透样品而观察样品结构的高分辨率显微镜。
为了获得高质量的透射电子显微镜图像,样品制备是非常重要的一步。
下面将介绍几种常见的透射电镜样品制备方法。
1.薄片制备法:薄片制备法是最常用的透射电镜样品制备方法之一、首先,将待观察的材料切割成薄片,通常使用切片机或者离心切片机进行切割。
然后,将薄片放置在网格上,并用显微镊夹持住。
接下来,使用离心机将网格和薄片一起离心,以去除多余的液体。
最后,将网格放入透射电镜中进行观察。
2.离解法:离解法适用于那些不易制备成薄片的样品。
首先,将待观察的样品制备成溶液或者悬浮液。
然后,将溶液滴在碳膜覆盖的网格上。
接下来,使用离心机将网格和溶液一起离心,使溶液在网格上均匀分布。
最后,将网格放入透射电镜中进行观察。
3.冻结法:冻结法适用于那些需要观察生物样品或者水溶液的样品。
首先,将待观察的样品制备成溶液或者悬浮液。
然后,在液氮中冷冻样品,使其迅速冻结成冰。
接下来,使用离心机将冰冻样品离心,以去除多余的液体。
最后,将网格放入透射电镜中进行观察。
4.脂溶法:脂溶法适用于那些不溶于水的样品。
首先,将待观察的样品制备成脂溶液。
然后,将脂溶液滴在碳膜覆盖的网格上。
接下来,使用离心机将网格和脂溶液一起离心,使脂溶液在网格上均匀分布。
最后,将网格放入透射电镜中进行观察。
除了以上几种常见的透射电镜样品制备方法,还有一些特殊的方法,如原位制备法、离子切割法等。
这些方法可以根据实际需求选择使用。
总结起来,透射电镜样品制备是透射电子显微镜观察样品结构的关键步骤。
合适的样品制备方法可以保证获得高质量的透射电镜图像。
不同的样品制备方法适用于不同类型的样品,研究人员可以根据实际情况选择合适的方法进行样品制备。
透射电镜样品制备方法透射电镜(Transmission Electron Microscope,TEM)是一种能够观察物质内部微观结构的高分辨率显微镜,广泛应用于材料科学、生物学、纳米技术等领域。
而透射电镜样品的制备质量直接影响到后续的观察结果。
因此,制备高质量的透射电镜样品至关重要。
下面将介绍一些常用的透射电镜样品制备方法。
首先,对于生物样品的制备,常用的方法是冷冻切片技术。
这种方法能够保持生物样品的原始结构,避免了传统化学固定和脱水过程中可能引起的伪形态。
在冷冻切片过程中,样品被快速冷冻,并在低温下切割成极薄的切片,然后通过透射电镜观察。
这种方法适用于观察生物细胞、组织等样品。
其次,对于材料样品的制备,常用的方法是机械切割和离子蚀刻。
机械切割是指利用超薄切片机或离心切片机将材料切割成极薄的切片,然后通过透射电镜观察。
而离子蚀刻则是利用离子束对材料进行加工,形成极薄的样品。
这两种方法适用于观察金属、陶瓷、半导体等材料样品。
另外,对于纳米材料的制备,常用的方法是原位制备技术。
这种方法通过在透射电镜下直接在样品表面进行原位制备,如原位成膜、原位合成等,可以观察到纳米材料的生长过程和结构特征。
这种方法适用于观察纳米颗粒、纳米线、纳米片等样品。
总的来说,透射电镜样品的制备方法多种多样,选择合适的制备方法需要根据具体样品的性质和要求来确定。
在制备过程中,需要注意样品的预处理、切割、薄化等步骤,确保样品的质量和结构完整。
通过精心制备的透射电镜样品,可以获得清晰、准确的观察结果,为后续的科研工作提供可靠的数据支持。
在透射电镜样品制备过程中,还需要注意操作规范、安全防护等问题,确保实验过程安全可靠。
同时,不同样品的制备方法可能存在差异,需要根据具体情况进行调整和改进。
希望本文介绍的透射电镜样品制备方法能够为相关科研工作者提供一些参考和帮助,促进透射电镜技术的应用和发展。
透射电镜样品制备步骤
一.取材:组织块小于1立方毫米
二.固定:2.5%戊二醛,磷酸缓冲液配制固定2小时或更长时间。
用0.1M磷酸漂洗液漂洗15分三次
1%锇酸固定液固定2-3小时
用0.1M磷酸漂洗液漂洗15分三次
三.脱水:50%乙醇15-20分
70%乙醇15-20分
90%乙醇15-20分
90%乙醇90%丙酮(1:1)15-20分
90%丙酮15-20分
以上在4度冰箱内进行
100%丙酮室温15-20分三次
四.包埋:纯丙酮+包埋液(2:1)室温3-4小时
纯丙酮+包埋液(1:2)室温过夜
纯包埋液37度2-3小时
五.固化:37度烘箱内过夜
45度烘箱内12小时
60度烘箱内24小时
六.LKB-1型超薄切片机切片50-60nm
七.3%醋酸铀-枸橼酸铅双染色
八.日本电子JEM-1200EX透射电镜观察。
拍片
这个是上海医科大学电镜室老师那里的简单步骤,或许能用上吧。
我对此不懂的。