透射电镜 样品处理和固定

透射电镜生物样本制备流程及注意事项透射电镜（Transmission Electron Microscope，简称TEM）是一种使用电子束而不是光束进行成像的显微镜。

它可以提供高分辨率的图像，因此被广泛应用于生物样本的观察和研究。

然而，由于其特殊的工作原理和生物样本的复杂性，透射电镜生物样本的制备过程需要注意一些关键的步骤和细节。

下面将逐步介绍透射电镜生物样本制备流程及注意事项。

一、样品固定1.选择合适的固定剂：固定剂的选择应根据所研究的样本类型和要观察的细胞结构而定。

常用的固定剂包括戊二醛（glutaraldehyde）、乙酰化亚胺（acrolein）、纤维蛋白素（formaldehyde）等。

2.采取合适的固定时间和固定温度：固定时间和温度应根据固定剂的要求和样本的特性进行优化。

通常情况下，固定时间为数小时至数天，温度在4℃至25℃之间。

3.注意透射电镜样品的固定深度：样品应保持较小的厚度以便透射电子束的穿透。

二、样品剖解1.剖解细胞膜：通常采用超声波振荡或冷冻断裂等方法来剖解细胞膜。

超声波振荡可用于含有细胞膜的细胞或组织，而冷冻断裂则适用于脆弱细胞和膜脂体系。

2.剖解细胞核：利用离心裂解法可以将细胞核分离出来。

离心裂解可分为机械法和渗透法两种，机械法利用高速离心的作用将细胞核分离，而渗透法则是通过渗透剂将细胞核溶胀并破碎。

三、样品固化1.脱水：样品在固定后需要进行脱水处理，以便在后续的步骤中更好地渗透和浸透。

常用的脱水剂有乙醇、丙酮和乙醚等，脱水过程往往需要进行多次重复。

2.浸透：在脱水后，样品需要在树脂中进行浸透，使其固化为坚硬的样品。

通常采用环氧树脂或比较稳定的丙烯酸树脂来进行浸透。

这一步骤通常需要较长时间，如数小时甚至数天。

3.树脂填充：浸透后的样品需要在模具中进行树脂填充，并在适当的温度下进行固化。

树脂填充的过程需要注意排除气泡和避免过度填充。

四、样品切片1.选择合适的切割工具和方法：样品通常使用切片机和切片刀进行切割。

透射电镜制样步骤以及注意事项透射电子显微镜（Transmission Electron Microscope，简称TEM）是目前最常用的高分辨率电子显微镜，可以用于观察物质的微观结构。

制备TEM样品的过程非常重要，下面将详细介绍TEM制样的步骤以及需要注意的事项。

制备TEM样品的步骤一般包括样品的选择、固定与固化、切片、薄化、网格制备和贴膜等。

第一步是样品的选择，样品应具有研究价值且适合观察。

例如，生物样品可以是细胞、组织或器官的薄片，金属样品可以是扁平的块状、粉末或薄膜等。

第二步是固定与固化。

对于生物样品，常用的固定方法包括浸泡法、灌注法和切片冷冻法；对于无机样品，可以使用固定剂将样品固定在固定剂中。

第三步是切片。

将固定好的样品切割成薄片，一般要求薄片的厚度在100 nm以下，通常使用超薄切片机来进行切割。

第四步是薄化。

将切割好的样品进行薄化处理，使其达到TEM观察所需的薄度。

常见的薄化方法有机械薄化、电化学薄化和离子薄化等。

第五步是网格制备。

将薄化好的样品放置在铜网格上，网格的选取应该根据所研究样品的性质和需要进行选择。

最后一步是贴膜。

将组织切片或带有样品的网格进行贴膜，以保护样品并提高图像的对比度。

在以上步骤中，需要注意的事项有：1.样品在制备过程中要避免受到污染或氧化，尽量在纯净无尘的环境中进行操作。

2.固定剂的选择要合理，不同的样品可能需要使用不同的固定剂，应根据需要进行选择。

3.切片时要注意刀片的尖锐度和切割角度，以免对样品造成损伤或变形。

4.薄化过程中要控制好加工参数，以保证样品的均匀薄化。

5.制作网格时应选择合适的网格尺寸和类型，以适应观察需求。

6.贴膜时要使薄膜均匀平整，并避免出现气泡或杂质。

总之，TEM制样是一项复杂而关键的过程，要保证样品的质量和可观察性，需要仔细选择方法、控制操作参数、注意样品的保护与处理。

合理的样品制备能够获得高质量的TEM图像，并提供准确的实验数据和结论。

透射电镜细胞样品制备流程透射电镜细胞样品制备流程概述透射电镜（TEM）是一种常用于观察细胞结构和超微结构的高分辨率显微镜。

样品制备是进行TEM观察的关键步骤，正确的制备流程能够保证样品的质量和结构完整性。

流程步骤1.选择适合的细胞样品–根据研究目的选择不同类型的细胞样品，如培养细胞、动物细胞组织或植物细胞等。

–样品选择要考虑细胞生长状态、形态和结构的要求。

2.采集样品–从培养皿中取出细胞，或从动物或植物组织中切取适当大小的样品。

–注意避免样品受到污染或损坏。

3.固定样品–使用适当的固定剂，如戊二醛、冰醋酸或凝胶固定剂，对样品进行固定处理。

–固定剂的选择要根据样品类型和所需观察结构的特点。

4.去除固定剂–使用缓冲液或盐水洗涤样品，去除多余的固定剂。

–洗涤时间和次数需根据固定剂的种类和浓度进行调整。

5.后续处理–为了进一步增强对样品的对比度和分辨率，可以对样品进行染色处理。

–常用的染色剂包括重质金属盐、乙酸铀和铅染色剂等。

6.样品包埋–涂覆样品表面的浸渍剂，如环氧树脂或丙烯酸树脂。

–用于支撑样品的网格可以放置在浸渍剂中。

7.制备超薄切片–使用超薄切片机将包埋的样品切割成透明的超薄切片。

–切片的厚度通常控制在70-100纳米之间。

8.将切片转移到网格上–使用特殊工具将切片转移到电子显微镜用的网格上。

–要小心操作，避免切片受到损坏或污染。

9.干燥和稳定–将转移到网格上的切片进行脱水和干燥处理，以提高稳定性。

–常见的方法包括用醇溶液进行脱水，然后使用气体吹干。

10.开始透射电镜观察–将处理完的样品装入透射电镜，调整参数和放大倍数。

–进行细胞结构和超微结构的观察和拍摄。

结论透射电镜细胞样品制备是进行TEM观察的关键步骤。

通过选择合适的细胞样品、适当的固定、去固定剂和染色处理，以及正确的样品包埋和超薄切片制备，可以确保样品的质量和结构完整性。

准确无误的制备流程能够为细胞学研究提供可靠的数据支持。

注意事项1.样品的选择要根据研究目的和所需观察结构的特点进行。

tem透射电镜的样品制备方法TEM（透射电子显微镜）是一种常用的高分辨率显微镜，可以观察到物质的结构和组成。

样品制备对于TEM观测至关重要，良好的样品制备可以提供高质量的显微图像。

以下是TEM透射电镜的样品制备方法的详细讨论。

1.样品选择：选择适合TEM观察的样品，典型的样品包括纳米材料、生物细胞、材料薄膜等。

根据需要选择合适的样品尺寸和形状。

2.样品固定：根据样品的特性和需要，采取合适的方法将样品固定在支撑物上。

常用的方法包括离心沉淀、滴定、蒸发浓缩等。

对于生物样品，可以使用化学固定剂（如戊二醛）进行化学固定。

3.样品切片：对于大尺寸或不透明的样品，需要将其切割成薄片，一般要求切片尺寸在100 nm以下。

常用的切片工具有超声切割仪、离子切割仪等。

切割样品时要注意样品的定位和定向，以确保观察到感兴趣的区域。

4.样品脱水：对于生物样品，需要将其进行脱水处理。

脱水可以使用乙醇和丙酮等有机溶剂，逐渐将样品中的水分替换为有机溶剂。

脱水过程中要避免剧烈振荡，以防止样品的破坏。

5.样品浸渍：将脱水后的样品浸渍在透明介质中，如环氧树脂或聚合物。

浸渍过程中需要避免气泡和异物的进入，以保持样品的质量。

6.样品调平：将浸渍后的样品放在平板上，用研磨纸将其调平。

调平过程中要注意避免样品的损坏。

7.样品切割：将调平后的样品切成适当尺寸的小块，便于后续的操作。

切割时要使用锋利的刀具，以保证切面的平整度。

8.样品研磨：使用研磨纸或研磨腰带对样品进行研磨，以使其表面更加平整。

研磨过程中要注意研磨力度的控制，以免样品的破损。

9.样品薄化：使用电子束或离子束对样品进行薄化处理，将其厚度控制在适当的范围内。

薄化过程中要注意能量和时间的控制，以避免样品的损坏。

10.样品清洁：最后，使用有机溶剂或气流将样品上的杂质去除，使样品表面干净。

以上就是TEM透射电镜的样品制备方法的详细讨论。

不同的样品可能需要不同的制备方法，需要根据实际情况进行调整。

电镜样品制备步骤1、取材：放入2.5%戊二醛溶液中固定2-4h(4℃可保存1-2周，冷冻可保存2年)注：不可用自来水冲洗，被钳、镊夹取造成机械损伤的组织不可部分可取较大面积，但厚度必须小于1mm（戊二醛固定能力小于0.5mm）2、漂洗：牙签取出样品至新的1.5ml离心管，用0.1M pH7.0磷酸缓冲液（PBS）漂洗样品三次（摇床），每次15min3、锇酸固定与再漂洗：1%锇酸溶液固定样品1-2h（临用前计算用量≤50ul/样，用0.1M PBS将2%锇酸稀释至1%，通风橱操作），吸出固定液，用0.1M pH7.0 PBS漂洗样品三次，每次15min注：漂洗以清除固定液，避免产生沉淀物干扰结构观察4、脱水剂梯度脱水：用梯度浓度（50%，70%，80%，90%和95%）乙醇溶液对样品进行脱水处理，每个浓度处理15min再用100%乙醇处理20min （乙醇细胞内抽提少，但与包埋剂相容性差）最后用纯丙酮处理20min（若包埋剂为Epon改用环氧乙烷置换）注：脱水以清除游离水以便包埋剂均匀渗透；脱水剂易吸收空气中水分，密封，置换时应该迅速由低到高逐级脱水而不能急剧脱水，更换溶液时应迅速，以免组织内外产生气泡。

5、包埋剂梯度渗透：①用包埋剂丙酮混合液（V/V=1/1）处理样品1h：计算用量80ul/样再配制(参考样品大小)②用包埋剂丙酮混合液（V/V=3/1）处理样品3h：计算用量80ul/样再配制(参考样品大小)③纯包埋剂渗透样品过夜：将样品移至干燥的新离心管中，常温过夜(所用器具均应干燥)注：样品周围不能有气泡6、加热聚合：牙签取出经渗透处理的样品至0.5ml干燥离心管（预先装入约300ul包埋剂），加热聚合仪70℃加热过夜。

7、莱卡EM UC 7超薄切片仪修快、切片（50-70nm）8、正染色：塑料包埋模具（刀划几道缝隙），染色时温度低影响染色效果，冬天空调醋酸双氧铀50%乙醇饱和溶液100ul染色（15min-1h），双蒸水冲洗柠檬酸铅100ul染色15min（极易吸收空气中CO2产生PbCO3,染色时毋对着说话、呼吸，同时放置数块NaOH）9、日立H-7650透射电镜观察spurr包埋剂配制：ERL 2.5gNSA 5.2 g 混合均匀后再加入催化剂DMAE，搅拌30min；低温干燥保存DER 2.5 gDMAE 0.1g宜新鲜配制但由于使用期限长(3-4天)，混合物可在使用前一天制备。

透射电镜组织处理
透射电镜（Transmission Electron Microscope，TEM）是一种高分辨率的显微镜，可以用于观察和分析材料的微观结构和成分。

在使用透射电镜进行样品观察之前，需要对样品进行适当的处理。

以下是透射电镜组织处理的一般步骤：
1. 固定样品：将要观察的组织样品进行固定处理。

常用的固定剂有醛固定剂，如戊二醛或葡萄糖醛固定剂。

固定的目的是停止细胞功能，保存细胞和组织的原貌。

2. 切片：将固定的样品块切割成非常薄的切片。

通常使用超薄切片机或者离心机来获得薄片。

厚度通常为50到100纳米左右，以保证透射电镜的有效穿透。

3. 染色：对切片进行染色以增强对细胞结构的观察。

常用的染色剂有重铀酸、铅酸等。

染色的目的是使细胞结构在电子束中的对比度增强。

4. 上膜：在切片的背面电镜网格上涂上薄膜，以便将切片固定在透射电镜的样品架上。

5. 透射电镜观察：将处理好的样品放置于透射电镜中观察。

通过调整电子束的聚焦和缩放，可以观察到组织和细胞的微观结构。

透射电镜组织处理的目的是保持样品的原始结构和形态，并使其适应电子束的穿透性观察。

注意，在进行透射电镜观察之前，样品必须成为极度干燥状态，因为电子束对水分很敏感。

通过透射电镜观察和分析组织样品，可以获得高分辨率和高对比度的图像，从而进一步了解组织和细胞的微观结构和功能组织。

这对于生物学研究、药物开发和疾病研究具有重要意义。

简述透射电镜的基本结构、操作步骤及注意事项。

透射电镜是一种高分辨率的电子显微镜，广泛用于材料科学、生物学、化学等领域的研究中。

本文将简述透射电镜的基本结构、操作步骤及注意事项。

一、基本结构透射电镜的基本结构包括电子源、准直系统、样品舞台、成像系统和探测器等部分。

电子源：透射电镜使用的电子源通常是热阴极，其工作原理是通过加热使钨丝发射电子。

准直系统：准直系统主要包括透镜和光阑，其作用是将电子束聚焦并限制其直径。

样品舞台：样品舞台通常由两部分组成，一部分用于支撑样品，另一部分用于调节样品的位置和角度。

成像系统：成像系统由物镜和投影仪组成，其作用是将电子束通过样品后的信息转换为图像。

探测器：透射电镜使用的探测器通常是荧光屏或CCD相机，其作用是记录成像系统成像的图像。

二、操作步骤1. 准备样品：样品需要制备成薄片，并在样品舞台上固定好。

2. 调节准直系统：调节准直系统，使其能够将电子束聚焦并限制其直径。

3. 调节样品位置：调节样品位置和角度，使其能够被电子束扫描到。

4. 调节成像系统：调节成像系统，使其能够将电子束通过样品后的信息转换为图像。

5. 开始成像：通过探测器记录成像系统成像的图像。

6. 分析图像：对成像得到的图像进行分析和处理，得出所需的信息。

三、注意事项1. 样品制备：样品需要制备成薄片，厚度通常在几纳米到几百纳米之间。

2. 样品固定：样品需要被固定在样品舞台上，以避免样品在扫描过程中移动或晃动。

3. 准直系统调节：准直系统需要在使用前进行调节，以确保电子束能够被聚焦并限制其直径。

4. 调节样品位置：在调节样品位置和角度时，需要小心操作，以避免损坏样品或样品舞台。

5. 成像系统调节：成像系统需要在使用前进行调节，以确保能够将电子束通过样品后的信息转换为图像。

6. 安全操作：在使用透射电镜时，需要注意安全操作，避免电子束对人体产生伤害。

总之，透射电镜是一种高分辨率的电子显微镜，其基本结构包括电子源、准直系统、样品舞台、成像系统和探测器等部分。

简述透射电镜中样品制备的常用方法一、引言透射电镜是一种非常重要的材料表征工具，可以用来观察材料的微观结构和成分。

在进行透射电镜实验时，样品制备是非常关键的一步。

本文将介绍透射电镜中样品制备的常用方法。

二、样品制备前的准备工作在进行透射电镜实验之前，需要进行一些准备工作。

首先，需要选择合适的样品，通常需要具有高度纯度、均匀性和结晶度。

其次，需要选择合适的切片方法和切片仪器。

最后，在进行样品制备之前，需要对仪器进行检查和校准。

三、传统切片法传统切片法是最常见的一种样品制备方法。

该方法主要包括以下步骤：1.将样品固定在金属网格上。

2.使用超声波清洗器将金属网格浸泡在去离子水中清洗干净。

3.使用细针将金属网格放置在相应位置。

4.使用玻璃棒将金属网格压入薄膜中，并使其平整。

5.使用细针或玻璃棒将薄膜剪成小块。

6.使用切片机将薄膜切成适当大小的样品。

7.将样品放置在透射电镜上进行观察。

四、离子切割法离子切割法是一种比传统切片法更先进的样品制备方法。

该方法主要包括以下步骤：1.将样品固定在金属网格上。

2.使用超声波清洗器将金属网格浸泡在去离子水中清洗干净。

3.使用离子束磨削仪对样品进行加工处理，得到一块平整的样品表面。

4.使用离子束切割仪对样品进行切割，得到纳米级别的薄片。

5.将薄片放置在透射电镜上进行观察。

五、焦电流加工法焦电流加工法是一种新型的样品制备方法。

该方法主要包括以下步骤：1.将样品固定在金属网格上。

2.使用超声波清洗器将金属网格浸泡在去离子水中清洗干净。

3.使用焦电流加工仪对样品进行加工处理，得到高质量的薄片。

4.将薄片放置在透射电镜上进行观察。

六、结论样品制备是透射电镜实验中非常关键的一步。

传统切片法、离子切割法和焦电流加工法是常用的样品制备方法。

在进行样品制备之前，需要进行充分的准备工作，选择合适的样品和切片仪器，并对仪器进行检查和校准。

通过合理选择样品制备方法，可以得到高质量的样品，并为后续实验提供可靠的数据支持。

透射电镜使用流程样品准备：首先，需要准备符合透射电镜观察要求的样品。

对于动物组织标本，应在取样后的短时间内（如1-3分钟内）立即投入电镜固定液中以固定组织，然后切成适当大小的块状。

固定液的渗透能力有限，超出特定尺寸后组织可能无法完全固定，因此务必注意控制取样组织的体积。

取样后，组织应在室温下避光固定一段时间，然后转移至低温保存，以待后续处理。

抽真空与加高压：打开透射电镜前，需要先接通总电源，打开冷却水，并接通抽真空开关进行抽真空。

待真空度达到指定值后，可以开始上机工作。

接着，接通镜筒内的电源，给电子枪和透镜供电，并给电子枪加高压至所需值。

观察与调整：在荧光屏状态下，通过操作工具选择观察区域，并调整画面亮度。

选定观察区域后，需要调弱光强，确保光强度在适当的范围内，然后切换到CCD模式进行进一步调整。

通过调节旋钮可以增大或减小放大倍数，选定拍照区域后，再次调整光强使图像清晰。

完成这些步骤后，点击面板上的聚焦键进行自动聚焦，并使用聚焦旋钮将图像调整至最清晰。

拍照与记录：在图像清晰并调整到最佳状态后，可以进行拍照操作。

务必注意，在拍照前点击保存按钮，否则图像不会自动保存。

卸载样品与清理：观察完成后，需要按照特定的步骤卸载样品，包括拔出样品杆、取出样品等。

然后，进行真空低温处理，以确保设备处于良好的工作状态。

请注意，透射电镜是一种高精密度的科研仪器，使用时必须严格遵循操作规程，以确保设备的安全和实验的准确性。

同时，由于透射电镜的使用涉及复杂的物理和化学原理，操作人员应具备一定的专业知识和技能。

在进行透射电镜操作时，建议由经验丰富的专业人员或在专业人员的指导下进行。

透射电镜中样品制备的常用方法透射电子显微镜（Transmission Electron Microscope，TEM）是一种重要的高分辨率显微镜，常用于研究物质的微观结构和性质。

在使用透射电镜观察样品之前，需要对样品进行制备，以确保样品的质量和形貌。

本文将介绍透射电镜中常用的样品制备方法，包括样品的选择、切片制备、薄膜制备等。

1. 样品的选择在进行透射电镜观察之前，样品的选择非常重要。

通常，样品需要满足以下要求：•样品具有一定的透明度，能够让电子束穿透。

•样品存在较为稳定的晶体结构，以便进行晶体学分析。

•样品的尺寸合适，不过大以免超出透射电镜的观察范围。

•样品的形状和厚度需适合观察操作。

常见的样品包括金属、有机物、无机晶体、陶瓷和生物样品等。

2. 切片制备透射电镜观察样品的常用方法之一是制备薄片，即切片制备。

切片制备的目的是将样品制备成适合透射电镜观察的薄片，通常要求薄片的厚度在几百纳米到几微米之间。

切片制备的步骤如下：步骤1：固定样品对于生物样品，首先需要将样品固定。

常用的固定方法包括冷冻固定、化学固定和凝胶固定等。

这些方法可以保持样品原有的结构和形态。

步骤2：取样从固定的样品中取出小块样品，通常使用显微针或者显微刀进行操作。

步骤3：去脂处理（可选）对于脂肪含量较高的样品，需要进行去脂处理。

常见的方法包括冷冻去脂、溶液去脂等。

步骤4：嵌培将取样得到的样品嵌入切片中，嵌培有多种方法。

常用的方法包括：冷冻嵌培、树脂嵌培等。

步骤5：切割将嵌培好的样品进行切割。

切割时需要使用马来酸酐刀或者超薄刀，在适当的位置进行切割，得到适合的样品。

步骤6：收集和保护薄片将切割好的薄片收集并放置在适当的载玻片或网格中，然后进行保护。

保护可以使用丙酮或乙醇进行漂洗、涂层等方法。

3. 薄膜制备除了切片制备外，透射电镜观察样品的另一种常用方法是薄膜制备。

相对于切片制备，薄膜制备更加灵活，可以制备更薄的样品。

薄膜制备的步骤如下：步骤1：样品制备制备需要制备的样品，并确保样品的表面较为光滑。

透射电镜细胞样品制备流程透射电镜（Transmission Electron Microscope，简称TEM）是一种利用电子束穿透样品以获取高分辨率图像的仪器。

它是生物学、材料科学等领域研究中不可或缺的工具。

在细胞学研究中，使用透射电镜观察细胞样品的超高分辨率结构，可以帮助科学家深入了解细胞的组织结构和功能。

想要制备透射电镜的细胞样品，需要经过一系列的步骤和操作。

下面将详细介绍透射电镜细胞样品制备的流程。

1. 样品固定：首先，需要将待观察的细胞样品进行固定。

固定的目的是保持细胞的形态结构和细胞内部组织的稳定性。

常用的固定剂有戊二醛、醋酸乙酯和冰乙酸等。

固定剂的选择应根据细胞类型和实验目的来确定。

2. 组织切片：固定后的细胞样品需要进行切片。

切片可以通过机械切割或冷冻切割等方法进行。

切片时应注意样品的厚度，一般要求细胞切片的厚度在50-100纳米左右。

3. 样品染色：对于未染色的细胞样品，其对电子束的吸收能力较弱，因此需要对样品进行染色增强对比度。

常用的染色剂有重铀酸、铅酸和乙酸铀等。

染色剂的选择应根据样品的性质和实验要求来确定。

4. 薄膜制备：切片好的样品需要转移到透射电镜网格上进行观察。

通常，会使用薄膜来支撑样品，并使其保持平坦。

常用的薄膜材料有碳膜和聚合物膜等。

5. 网格制备：透射电镜网格是一种特殊的载体，用于固定细胞样品并放置在透射电镜中观察。

网格制备通常需要使用特殊的网格支架和胶水，将薄膜和网格固定在一起。

6. 清洗和干燥：制备好的细胞样品需要进行清洗和干燥处理。

清洗的目的是去除样品表面的杂质和残留物，以确保样品的纯净度。

干燥的目的是使样品完全干燥，以便在透射电镜中观察时不产生影响。

7. 观察和记录：制备好的细胞样品可以放入透射电镜中进行观察。

透射电镜通过透射电子束与样品相互作用，获取样品的高分辨率图像。

科学家可以根据观察到的图像来分析细胞的结构和功能，并进行记录和分析。

总结起来，透射电镜细胞样品的制备流程包括样品固定、组织切片、样品染色、薄膜制备、网格制备、清洗和干燥、观察和记录等步骤。

透射电镜生物样品制作方法及注意事项：1.为了能得到良好的电镜结果，用户必须严格按照取材方法和注意事项去做。

2.每一例标本切取3-5小块组织进行固定，样品大小标准为1mm*1mm *1mm，不可取太大太多组织块，固定到2ml离心管内。

3.所取样品必须要在 4℃条件下先固定48h，或室温条件下固定2h，再送到测试中心电镜室来，途中要做好样品的低温保存。

4.细菌、细胞样品量要足够多（1.5ml的离心管底部离心后约5mm高）；5.特殊样品取材，可事先与电镜室老师联系、商讨。

6.每月满50个样品做一批，最多不超过80个，每月只做一批样品。

7.每月15-20日集中送样，21-25日处理样品；8.样品前处理结束后，两周后方可预约超薄样品透射电镜观察时间；9.用户观察超薄样品前，需先查文献，明确自己的研究目的和结果；10.取材不符合要求，电镜室拒收，如因取材、固定问题导致无满意结果，请自行负责。

透射电镜样品前处理操作流程：1.取材（1mm*1mm *1mm）——前固定（2.5% 戊二醛，4 ℃冰箱，2小时以上）——漂洗（0.1M 磷酸缓冲液，3-4 次，15 分钟/次）——后固定 (1% 锇酸，动物2小时，植物4小时）——漂洗（0.1M 磷酸缓冲液，3-4 次，15 分钟/次）——梯度脱水【30%、50%、70%（过夜）、80%、90%、95%、100% 酒精各 15 分钟】——丙酮脱水，15分钟——丙酮（加无水硫酸钠）脱水，15分钟——浸透（丙酮：树脂=1：1，1小时；丙酮：树脂=1：2，2小时；纯树脂，2小时）——包埋——聚合（37℃烘箱12 小时， 60℃烘箱 48 小时）；2.包埋成块后按照老师规定时间统一磨样；3.切片：按照一天10个样品计算，切片时间约5-10天，具体时间视样品数目确定；4.染色：柠檬酸铅、醋酸铀双染色，每批次染15个样品，每天染一批，染色时间约4-7天，具体时间视样品数目确定；5.电镜观察：染完后即可陆续上透射电镜观察样品，按预约样品前后顺序排队，每个样品观察约30min-1h，每天观察约10个样品，电镜观察所需时间约5-10天。

透射电镜的制样方法一、超薄切片法。

1.1 取材。

这可是制样的头一遭，就像盖房子打地基一样重要。

取材的时候得特别小心，要选取咱们感兴趣的部位。

这部位得有代表性啊，不能瞎取。

比如说研究细胞结构的，就得找到细胞长得好、特征明显的那块组织。

而且动作要快，就像抢红包似的，手慢无。

为啥呢？因为组织一旦离开生物体，就开始发生变化了。

1.2 固定。

固定这一步可不能含糊。

就像给组织“定个型”，让它保持生前的状态。

通常会用到化学固定剂，像戊二醛啥的。

把组织泡在里面，就像把东西放在保险柜里一样，稳稳当当的。

这一步要是没做好，后面的观察就全乱套了，那可就是“一着不慎，满盘皆输”。

1.3 脱水。

脱水就像给组织“脱衣服”，把水分一点一点去掉。

用的是一系列不同浓度的乙醇或者丙酮。

这个过程得循序渐进，不能操之过急，不然组织就会被破坏。

这就好比爬山，得一步一个脚印，急不得。

1.4 浸透与包埋。

浸透呢，就是让包埋剂慢慢渗到组织里。

包埋就像给组织做个“小房子”，把它保护起来。

常用的包埋剂有环氧树脂之类的。

这一步就像给宝贝裹上一层保护膜，得仔仔细细的。

1.5 超薄切片。

这可是个精细活，切片要薄得像蝉翼一样。

用超薄切片机来切，切的时候得全神贯注，稍有不慎就会前功尽弃。

切出来的片子就像一片片小雪花，又薄又脆弱。

二、负染法。

2.1 样品准备。

先把要观察的样品处理好，比如说提纯之类的。

这就像把菜洗干净，准备下锅一样。

得把杂质去掉，让咱们想看的东西“干干净净”地呈现出来。

2.2 负染。

用重金属盐溶液来进行负染。

这就像给样品穿上一件深色的“衣服”，让它在电镜下更明显。

染的时候要控制好量，多了少了都不行，就像炒菜放盐，得恰到好处。

三、冷冻制样法。

3.1 冷冻固定。

直接把样品快速冷冻，让它瞬间定格。

这就像给样品来了个“急冻魔法”。

这样能最大程度地保持样品的原始状态，避免化学固定带来的一些变化。

3.2 冷冻超薄切片。

在冷冻的状态下进行超薄切片。

这可不容易，就像在冰上雕刻一样，需要特殊的设备和技术。

透射电镜常规样品制备流程
透射电镜是电子显微镜技术中最重要的一种技术，普通晶体样品的常
规样品制备流程如下：
1、样品的准备：将样品、水、石蜡、助融剂(如NaCl)、磷酸盐、石墨、甲醛和电子源材料(碳粉)准备好备用，并配合温度控制装置使用。

2、样品处理：将样品用接近样品发热点的温度处理，一般为200?C，把样品放入室温保温的石蜡，再将该石蜡分别放入不同的温度槽，如助融
剂的温度可以高于样品放置温度。

3、镀膜：将样品放置在硝酸银或碳材料的固体膜下，镀膜时，将碳
气体经过电子枪加热，形成形状与原子相同的表面。

4、结晶：首先需要将样品放置在一定温度和压力下，进行结晶，再
将研磨剂如磷酸盐、石墨和水添加到样品中，使样品迅速结晶，并在腔内
升温至合适温度，加快结晶过程。

5、夹具的清洗：在滴定液中加入抗蚀剂，夹具进行清洗，确保样品
无几何不良影响。

6、取晶体：用软金属夹具取出晶体，放在清洗过的滴定液中浸泡，
以使样品重新渗透，然后将样品放入滴定液腔中，进行滴定，使样品表面
无污染物。

7、安装样品：用金刚石夹具将样品安装在金刚石台子上，并将其固定，以保证样品的准确安装。

透射电镜样品制备步骤取材醛类前固定缓冲液漂洗饿酸固定（后固定）缓冲液漂洗脱水剂梯度脱水丙酮/环氧丙烷臵换浸透（先于不同比例包埋剂-脱水剂再纯包埋剂长时间浸透）加热聚合修快超薄切片铀铅染色1、取材：4℃冰块上迅速取材，1mm3大小，立即放入2.5%戊二醛溶液中固定2-4h(4℃可保存1-2周，冷冻可保存2年)注：不可用自来水冲洗，被钳、镊夹取造成机械损伤的组织不可部分可取较大面积，但厚度必须小于1mm（戊二醛固定能力小于0.5mm）脑、胰等柔软组织先切成较大厚片于戊二醛固定数分钟增加硬度，再切成小块臵于新的戊二醛固定液小肠、周围神经、肌肉等方向性、易扭曲样本可绑在小波棒上固定，待硬化后纵行方向切成长方形固定2、漂洗：牙签取出样品至新的1.5ml离心管，用0.1M pH7.0磷酸缓冲液（PBS）漂洗样品三次（摇床），每次15min3、锇酸固定：1%锇酸溶液固定样品1-2h（临用前计算用量≤50ul/样，用0.1M PBS将2%锇酸稀释至1%，通风橱操作）注：饿酸固定时间过长会导致脂蛋白复合体溶解，使组织变脆，不利于切片3、再漂洗：吸出固定液，用0.1M pH7.0 PBS漂洗样品三次，每次15min注：漂洗以清除固定液，避免产生沉淀物干扰结构观察骨组织漂洗后需脱钙，EDTA-2Na脱钙液4、脱水剂梯度脱水：用梯度浓度（50%，70%，80%，90%和95%）乙醇溶液对样品进行脱水处理，每个浓度处理15min再用100%乙醇处理20min （乙醇细胞内抽提少，但与包埋剂相容性差）最后用纯丙酮处理20min（若包埋剂为Epon改用环氧乙烷臵换；Cell的固定脱水无需臵换）注：脱水以清除游离水以便包埋剂均匀渗透；脱水剂易吸收空气中水分，密封，臵换时应该迅速由低到高逐级脱水而不能急剧脱水，更换溶液时应迅速，以免组织内外产生气泡。

植物组织脱水时间延长，100%脱水剂中加入烤干的无水CuSO4、无水Na2SO45、包埋剂梯度渗透：①用包埋剂丙酮混合液（V/V=1/1）处理样品1h：计算用量80ul/样再配制(参考样品大小)②用包埋剂丙酮混合液（V/V=3/1）处理样品3h：计算用量80ul/样再配制(参考样品大小)③纯包埋剂渗透样品过夜：将样品移至干燥的新离心管中，常温过夜(所用器具均应干燥)注：样品周围不能有气泡6、加热聚合：牙签取出经渗透处理的样品至0.5ml干燥离心管（预先装入约300 ul包埋剂），加热聚合仪70℃加热过夜。

透射电镜组织处理
透射电子显微镜（Transmission Electron Microscope，TEM）是一种强大的显微镜技术，可以对材料的内部结构和组织进行高分辨率的观察。

为了进行透射电镜观察，材料通常需要经过一系列处理步骤以准备样品。

下面是一般的透射电镜组织处理步骤：
1.采样和切片：从原始材料中采集要观察的样品，并使用显
微切割机或离心切片机将样品切片成适当的厚度（通常是
几十到几百纳米）。

2.修剪和固定：根据需要，选择感兴趣的样品区域，修剪并
将其固定在载玻片或网状膜上，以便在电镜中进行观察。

3.固定剂处理：为了保持样品的原始结构和形态，通常使用
特定的固定剂处理样品。

例如，常用的固定剂有冷冻醇、
蛋白质交联剂（如缩醛或戊二醛）等。

4.重金属染色：为增加样品的对比度，某些样品可能需要进
行染色处理。

重金属染色剂（如铀酸或铋酸）通常用于染
色，以增强电子束与样品的相互作用。

5.脱水和浸透：为了进一步固化样品并保持其结构，通常使
用乙醇或丙酮等有机溶剂进行脱水处理，并使用一些合适
的浸透剂（如酮树脂或环氧树脂）浸透样品。

6.切片和显影：将浸透好的样品切成适当的薄片（通常是50
至100纳米），并使用硝酸铋等显影剂处理样品，以增强
对比度。

7.观察：将处理好的样品放入透射电镜中，利用电子束穿过
样品观察样品的内部结构和组织。

需要注意的是，透射电镜组织处理的具体步骤和条件可能会根据不同的样品类型和目的而有所不同。

透射电镜液态样品处理方法我折腾了好久透射电镜液态样品处理方法，总算找到点门道。

说实话啊，一开始我真的是瞎摸索。

我最开始想的特简单，就直接把液态样品放到那个载网上，哎呀，结果可想而知，那简直是一团糟。

就好像你想把水直接堆在一张纸上，根本不行，液体会到处流，根本就没办法放到电镜里面去好好观察。

然后我就想啊，得把液体固定住。

我试过用低温冷冻，想着把液态样品瞬间冻住，就像我们把水冻成冰块一样。

结果呢，这个过程很难控制。

如果冷冻速度不够快，那就会形成晶体，这些晶体就会干扰我们观察样品的微观结构，这就是一次失败的教训啊。

再后来啊，我又尝试把液态样品和一种特殊的支持膜混合。

这个支持膜呢，就有点像蚊帐，它有很多小网格。

把液体样品混在里面，期望能把液体撑开，这样就可以观察了。

但是又出现新问题了，这个支持膜在有些情况下不能很好地适应电镜的条件，比如说电压过高的时候，它会产生一些变形或者其他的反应，又影响了观察结果。

经过这么多失败，我总算找到了个目前用起来还比较顺手的方法。

就是用微量吸管吸取非常少量的液态样品，这就像我们用小吸管喝珍珠奶茶里的那些珍珠一样，要小心翼翼的，量一定要少。

然后把它滴到一种经过
特殊处理的支持膜上，这个支持膜是我经人指点后才知道该怎么处理的。

滴的时候动作要轻，要慢，尽量让液体均匀地分布在这个小小区域内。

然后稍微晾干一下，不要太干啊，太干的话样品可能会变形之类的。

不过我现在对晾干这个度还不是特别确定，有时候还是需要多试几次。

目前我觉得这个方法成功的次数更多一些，希望能给你一点启发。

液相透射电镜样品处理方法说实话液相透射电镜样品处理这事，我一开始也是瞎摸索。

我试过很多方法，就像是在黑暗里乱撞的小鹿。

最开始的时候，根本不知道从哪儿入手。

比如说样品的采集吧，我就想当然地直接取了就用，结果发现根本不行。

后来才知道啊，采集的时候得特别小心，就像从精美的蛋糕上取一块，既要取到想要的部分，又不能破坏整体结构。

这就需要用到一些很精细的工具，像那种微型的取样针之类的。

有一次我在处理样品准备阶段的时候，在样品的分散这一步上栽了跟头。

我就按书上说的加溶剂去分散，可是不管怎么搅和，样品就是不能均匀分散开。

后来我就琢磨啊，是不是溶剂的量不对呢？我又试了好几种不同的剂量，试到最后突然发现，原来是我搅拌的方式不对。

不能像平时搅拌大桶涂料那样随便搅搅就行，得非常轻柔缓慢地操作，就好比是轻轻抚摸一只小猫，太用力就把猫吓跑了。

再说说样品的浓度，这也是个头疼的事儿。

我曾经觉得浓度越高看到的效果会越好，就傻乎乎地把样品弄得特别浓。

结果电镜下简直就是一团糊，啥都看不清楚。

我才知道，合适的浓度就像做菜放盐一样，放多放少都不行，得恰到好处。

这得通过不断试验来确定，根据样品的特性和电镜的具体要求来调整。

还有样品的固定。

我试过用一种固定剂，但是效果不好。

后来换了好几种，才发现某一种特定的固定剂最适合我的样品类型。

这就像是给不同的植物找最匹配的土壤一样。

在过滤样品的时候也很有讲究。

我刚开始用的滤纸孔径不合适，要么太大，杂质过不去，要么太小，把样品也拦住了。

就像用筛子选沙子，得找到那个刚好合适的筛子。

而且过滤的时候压力也要控制好，要是压力太大，可能会破坏样品结构，太小又过滤得太慢。

这就像是给气球吹气，气少了不圆润，气多了就炸了。

不确定的地方也有，比如说样品处理的时间。

有时候按照标准流程的时间处理后，效果却不理想。

这可能跟样品的特殊性质有关。

我现在觉得可能需要根据每次样品的实际情况进行微调。

总之啊，液相透射电镜样品处理就是要不断尝试，在失败中吸取教训。