氨基酸自动分析仪
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全自动氨基酸分析仪安全操作及保养规程1. 引言全自动氨基酸分析仪是一种高精准度的仪器设备,广泛应用于生物化学、制药、食品科学和环境科学等领域。
为了确保全自动氨基酸分析仪的正常运行,保障操作人员的安全,提高仪器使用寿命,特制定本安全操作及保养规程。
2. 安全操作规程2.1. 仪器准备在使用全自动氨基酸分析仪之前,必须做好以下准备工作:•检查仪器及附件的完整性和完好性,确保没有破损或缺失部分;•检查仪器的电源是否正常,接地是否良好;•检查仪器各项连接是否牢固,不得存在松动或漏气的情况;•准备好所需的标准品、试剂和样品。
2.2. 操作流程全自动氨基酸分析仪的操作流程如下:1.打开仪器电源,启动仪器,等待仪器自检完成;2.根据实验要求,选择相应的测试方法和参数;3.准备好标准品和待测样品,并按照规定的比例进行稀释;4.将标准品和样品加入仪器中,按照指示设置仪器的运行参数;5.启动仪器运行,等待测试结果;6.记录测试结果,并根据需要进行数据处理和分析;7.清洗仪器和配件,关闭仪器电源。
2.3. 仪器维护为了确保全自动氨基酸分析仪的正常运行,必须进行定期的维护保养工作。
以下是常见的维护保养内容:•每天使用后,对仪器进行外观清洁,包括仪器表面、键盘、显示屏等;•每周清洗仪器内部,包括进样器、反应器、光路和传感器等部分;•定期检查仪器的气路系统,确保气路畅通无阻;•定期校准仪器,以确保测试结果的精确度和准确性;•定期更换仪器的耗材和配件,如注射器、试剂瓶等。
3. 安全注意事项在操作全自动氨基酸分析仪时,必须注意以下安全事项:•操作人员必须穿戴防护眼镜、实验手套和防护服;•操作人员应严格按照操作流程进行操作,不得随意更改参数或操作顺序;•在使用化学试剂时,应注意避免直接接触皮肤和眼睛,并注意避免吸入有害气体;•禁止在仪器运行过程中离开操作区域,以免发生意外事故;•操作人员应定期参加相关培训,了解仪器的安全操作和应急处置方法。
自动氨基酸分析仪安全操作及保养规程氨基酸分析仪是广泛用于科学研究、教学和企业生产的仪器,能够分析不同样品中氨基酸的含量及其组成成分。
在进行氨基酸分析实验时,必须严格遵守安全操作规程,以免发生意外事故或影响实验结果。
本文将介绍自动氨基酸分析仪的安全使用和保养规程,帮助使用者安全、稳定地完成实验。
安全操作规程1. 使用前准备在使用自动氨基酸分析仪前,必须对仪器进行检查。
首先,检查仪器电源是否连接稳定。
其次,检查试剂、标准样品、废液等物品是否充足。
最后,检查仪器与计算机之间的连接是否正常。
2. 佩戴个人防护用品操作氨基酸分析仪前,必须佩戴适当的个人防护用品,如安全眼镜、手套、实验服等,以防止试剂和样品对身体造成伤害。
3. 样品处理在样品处理过程中,必须遵守化学安全操作规程,防止误操作。
需要避免接触酸、碱等腐蚀性试剂,如若不慎溅到身上,应及时用大量清水冲洗。
4. 仪器操作在操作自动氨基酸分析仪时,需要经过仪器的预热和自检等程序后,才能正常操作。
在操作过程中,需要根据分析任务调整仪器的相应参数,如样品量、提取溶液、分离液等。
需要严格遵守操作手册中的设备操作顺序,并始终保持仪器和周边环境的清洁。
5. 废液处理做完实验后,需家庭进行废液的处理,以避免污染环境和影响健康。
废液需严格按照科学处理方法处置,如通过中和处理、离子交换层析等方法,处理完成后需要进行分类存放,并及时清理和消毒仪器。
保养规程1. 仪器清洁定期清洗自动氨基酸分析仪的各个组件,避免仪器表面积存灰尘和样品残留物。
可以用无水乙醇或稀酸进行清洗,但不能使用有机溶剂和刷子等。
2. 玻璃组件的清洁在实验过程中,如果发现玻璃组件出现脏污或污垢,应当及时清洗,避免污染下一批次的样品。
可以用清水和洗涤剂进行清洗,仪器内部清洁可以使用纯净水冲洗。
3. 检查仪器连接使用自动氨基酸分析仪时,需要经常检查仪器与电脑和仪器与电源之间的连接,防止出现不良接触和松动现象。
4. 维护好仪器的小配件在使用过程中,有一些小配件容易丢失或弄坏,如玻璃管、螺丝等。
全自动氨基酸分析仪的技术指标及特性全自动氨基酸分析仪的技术指标及特性一、仪器配置全自动氨基酸分析仪:包括自动进样器、泵、检测器、分析软件、带电子制冷功能的溶液存放单元,所有缓冲液及茚三酮都有惰性气体隔离保护。
溶剂输液单元有集成四通道真空脱气装置。
分析柱或反应器具有泄漏保护、压力过高保护性能。
二、技术参数1( 分析柱电子恒温(制热或制冷)温度梯度可编程 20?,99?准确度 0.1?安全保护过热保护2( 自动进样器进样模式100μl体积可变循环进样进样体积可变; 1μl,5000μl,0.1μl增量重现性10μl 变体积进样时变异低于1% 温度控制 +5?(?1?),70?(电子恒温) 3( 分析时间蛋白质水解产物 30分钟,50分钟,自动时间控制生理体液 90分钟,180分钟,自动时间控制 4( 缓冲泵(溶剂递送单元)活塞双活塞流速 0.01ml/min,2.00ml/min 压力波动低于0.1%最大压力 40MPa (400bar,6000psi) 材料 PEEK5 检测系统检测波长 570nm, 440nm(可同时检测) 流动池体积8μl检测极限茚三酮(可见光度计)10pmol 荧光光度计3pmol6( 系统控制和数据处理软件(2软件,4通道,2接口板)用户可配置的工作站,用于数据采集和系统控制操作系统Windows 98以上,输出报告兼容Excel 软件有预置的不同格式的打印模板根据美国药典(USP)和欧洲药典(ESP)标准自动地对峰参数和数值进行计算根据预先设置,系统可多次自动进行基线校正测量过程中可以随时进行基线校正故障诊断系统,可诊断缓冲压和流速的高低等异常可支持严格的GLP要求。
全氨基酸自动分析仪基本操作操作规程注意事项:1、使用仪器前必需检查主机上各缓冲液瓶中液体是否足够(应保持至少1/2);2、检查进样器中清洗液(2%异丙醇)是否够用;3、盖样品槽盖子时必需到位(听到“咔嚓”声),以免损坏进样针;4、氨基酸标样原始浓度为125μmol/50μL ,测定时最少应该稀释10倍,即为12.5μmol/50μL ,用pH2.2的buffer 来配制。
仪器操作:1、打开氨基酸分析仪、进样器及电脑开关;2、冲洗进样器针头:3、数据采集A 、 对话框中选中Reaction Coil 并设置reaction coil:135℃;Column temp:50℃B 、菜单中View Fluidics Diagram 观察整个流程运行情况 C 、设置进样顺序:(必需先再生后进样) View program control sample list insert program filename regen.prg 再生程序 输入sample ID: zs No. of sample 默认为1 ok insert programe filename standard sample for sodium column. Prg 样品程序 输入Sample ID: by No. of sample: 1 vial No(s): 1(标样位置) enter volume ok设置好后先不要按“RUN”D 、设置进样信息打开氨基酸工作站界面 选择通道并显 分别在通道1、2中输入进样信息4、数据处理A 、标准曲线的绘制打开一个标样,按住shift ,双击各峰排序 修改配样信息:标准浓度单位:nmol/50μL ;进样体积:据具体情况(半胱氨酸浓度比其它要低一倍) 保存 按“”校正.B 、 试样与标准曲线进行校正。
氨基酸分析仪工作原理
氨基酸分析仪是一种用于检测和分析氨基酸组成的仪器。
其工作原理基于氨基酸分析技术,下面将介绍其工作原理。
首先,样品制备阶段。
需要将待测样品或混合物进行样品制备,取出所需氨基酸,并将其转化为可以被仪器检测的形式。
常见的制备方法有酸水解、酶解和自动制备等。
接下来,进行氨基酸分离阶段。
分析仪通常采用高效液相色谱(HPLC)技术进行分离。
样品溶液被注入到色谱柱中,利用
柱中的填料即色谱介质,不同氨基酸会在填料中以不同速度移动,从而实现氨基酸的分离。
然后,进行氨基酸检测阶段。
分离出的氨基酸会通过检测器进行检测。
常用的检测器包括紫外检测器(UV-DAD)和荧光检测器。
UV-DAD可以通过测量氨基酸在紫外光下的吸收来得
到其浓度信息,而荧光检测器则利用氨基酸的荧光特性进行检测。
最后,进行数据处理和结果分析。
仪器会自动将检测到的氨基酸信号转化为数字信号,并通过连接的计算机或数据处理系统进行数据转储和分析。
分析人员可以根据需要选择合适的分析方法和数据处理软件,对结果进行计算、统计和解读。
综上所述,氨基酸分析仪的工作原理主要包括样品制备、氨基酸分离、氨基酸检测以及数据处理和结果分析等步骤。
通过这
些步骤,可以准确地分析和确定样品中存在的氨基酸成分和浓度,为相关领域的研究和应用提供重要的实验数据。
氨基酸分析仪概况氨基酸分析仪是一种用于检测和分析氨基酸的仪器设备,广泛应用于食品、农产品、生物医药等领域。
该仪器通过特殊的分析方法和技术,可以快速、准确地测定样品中氨基酸的含量和组成,为科研和生产提供了重要的数据支持。
氨基酸是构成蛋白质的基本组成单位,同时也是生命体内重要的代谢产物。
因此,准确测定样品中的氨基酸含量和组成对于了解生物体的代谢状态、蛋白质的结构和功能等方面具有重要意义。
氨基酸分析仪的出现大大简化了氨基酸的分析过程,提高了分析效率和准确性。
1.试剂槽和自动进样系统:用于储存和供给所需的试剂。
自动进样系统能够实现样品的自动进样,提高分析效率。
2.反应器:用于将样品与试剂进行反应。
反应过程中,氨基酸与试剂发生特定的化学反应,产生可检测的信号。
3.检测器:用于检测反应产生的信号。
常见的检测器包括紫外-可见光谱检测器、荧光检测器等。
检测器能够将检测到的信号转化为可读取的数据。
4.数据分析系统:用于处理和分析检测到的数据。
数据分析系统可以进行数据的整理、统计和绘图等操作,提供数据报告和结果分析。
5.控制系统:用于控制仪器的运行和参数调节。
控制系统可以对温度、压力、流速等参数进行调控,保证仪器的稳定运行。
氨基酸分析仪的工作原理通常基于特定的化学反应原理,常用的分析方法包括高效液相色谱法(HPLC)、氨基酸分析仪电泳法(AAA)等。
其中,HPLC是目前应用最广泛的分析方法之一、HPLC基于样品中氨基酸与特定试剂发生反应,形成具有特定吸收或荧光性质的产物,通过波长选择器和检测器对产物进行检测和分析。
AAA则是通过电泳的原理分离和检测样品中的氨基酸,根据氨基酸的电泳迁移速率和特定检测方法进行分析。
氨基酸分析仪的应用领域非常广泛。
在食品工业中,氨基酸分析仪可以用于检测食品中的氨基酸,评估蛋白质的含量和质量,并对食品中的氨基酸进行监控和调节。
在农业领域,氨基酸分析仪可以帮助农业科研人员了解植物和动物组织中的氨基酸含量和代谢状态,对肥料的选择和使用提供科学依据。
氨基酸自动分析仪安全操作及保养规程氨基酸自动分析仪是一种用于分析蛋白质、肽和氨基酸等化合物的仪器。
在使用过程中,必须遵守安全操作规程,以保障人员安全、设备安全和分析结果的准确性。
本规程旨在帮助用户正确操作和保养氨基酸自动分析仪。
操作规程1. 环境设定•要求仪器放置在干燥、通风良好的房间。
•避免仪器震动和外界干扰。
•仪器应远离电磁干扰源,如电视、电脑、手机等。
•室温应保持在20-25℃之间。
2. 电源连接•仪器必须接地,电源电压符合额定值。
•禁止同时连接多个电源插座,以免造成火灾隐患。
•在清洁或保养仪器时,必须切断电源,并等待至少10分钟,确保内部所有器件都已冷却。
3. 空气泵操作•确保空气泵连接正确。
•推荐使用高压稳压气瓶,使空气输出流量和压力稳定。
•在始终保持样品室中的压力上升时,调整进气量到最小,以确保压缩空气的干燥和净化。
4. 样品处理•样品应在放置至少30分钟且温度稳定后,才能分析。
•各种化学试剂应当在按照说明书进行前处理。
•禁止使用未经授权的化学试剂,以免损害仪器。
•样品或缓冲液的pH值要在设备要求的范围内。
5. 管路保养•避免液体残留在管路中,以免出现混乱的剂量和分析结果。
•定期保养管路、更换阀门和管路连接器,以确保精度和准确性。
6. 日常操作•严禁将任何物品放置在仪器上或附近。
•禁止任何非授权人员操作仪器。
•仪器在运行时,不得随意开启或关闭任何开关。
•操作结束后,清洁和消毒所有样品接触面。
保养规程1. 日常维护•定期检查仪器电源、数据上传和采集系统,确保其正常工作。
•每日清理离心管、样品板、曲线器等样品接触面,以确保精度和准确性。
•定期检查探测器、泵、泵头等部件,确保其正常工作。
2. 常规保养•根据设备说明书,定期更换使用寿命到期或失效的部件和耗材,如管路、气体净化器、O环等。
•定期进行校准和验证等操作,以保证结果的准确性和可靠性。
•定期做一次样品运行,以确保仪器性能稳定并正常运转。
日立L-8900全自动氨基酸分析仪标准操作规程一、联机1. 打开电脑。
2. 打开主机电源。
3. 双击桌面图标EZchrom Elite,进入画面后,单击L-8900图标,进入程序。
4. 在菜单栏中依次点击Control和Instrument Status,进入后,单击connect联机。
大约两分钟,初始化完毕。
二、手动各组件控制操作1. 泵1与泵2点击泵1后设置泵1,流量为0.1mL/min,B1为100%。
点击pump1 SW,打开泵1。
泵打开后,泵的背景颜色由灰色变成黄色。
点击泵2后设置泵2,流量为0.1mL/min,R3为100%。
点击pump2 SW,打开泵2。
泵打开后,泵的背景颜色由灰色变成黄色。
2. 自动进样器点击自动进样器图标后,设置sampler wash 不少于3次。
3. 反应柱柱温箱点击柱温箱图标后,设置柱温135℃,设置ON,打开柱温箱,柱温箱打开后背景颜色由灰色变成黄色。
三、编辑方法1. 依次点击File >> Method >> Open,出现Open Method File 对话框。
2. 选中L89_PH 4.6×60-2622.met,点击“打开”,再依次点击Method,Instrument setup。
3. 将方法另存L8900分析方法,文件名及路径均可自选。
注意一定不要覆盖原来的方法,一定得另存。
四、编辑sequence1. 依次点击 File >> sequence >> sequence Wizard ,进入后,选中Foracquisition。
其余参数默认。
2. 依次点击进入序列表后,通过复制、编辑,最终编辑好Sequence,第一行为再生程序(RG),进样体积为0,Run type是unknown,第二行为标样,第三行起是未知样。
3.另存Sequence.五、采集数据点击 Control Single Run,运行Stand- By方法,进样体积为0。
氨基酸自动分析仪氨基酸是蛋白质的组成成分,是蛋白质化学研究的主要内容之一。
蛋白质是一切生命物质的基础,因此,探讨和揭示生命现象的发生、生长、新陈代谢、遗传变异过程,都与氨基酸的研究有关。
随着近代物理学、化学和电子学的飞速发展,氨基酸的分析技术亦在不断更新。
氨基酸分析仪是本世纪50年代研制的,仅40多年,已发展到现在的进样、分离、检测和数据处理全部自动化的程度。
检出量由微克分子到毫微克分子,分析时间由原来的24小时到现在的半个小时,分析技术的提高促进了其他科学领域的发展。
一、氨基酸自动分析仪的进展用于氨基酸分析的方法很多,有纸色谱法、柱色谱法、薄层色谱法、电泳法及气相色谱法等。
一般认为离子交换柱色谱法是较为精确的检测方法,氨基酸分析仪就是在此基础上研制成功的。
1951年Moor和Stein采用离子交换树脂色谱,用茚三酮试剂显色和分光光度计检测而设计,后来在Spaekman的协助下,使分析操作自动化。
迄今氨基酸分析仪的条件和自动程度有了很大的改观,其特点主要表现以下几个方面。
⒈树脂粒径减小近年来制成的小颗粒球状树脂,使氨基酸分析仪得到很大改进。
由于树脂粒径减小就对应地增加等量树脂的总面积,使现在少量树脂达到过去大量树脂的分离效果,从而减小了树脂柱的内径和体积,节省了试剂用量,缩短了分析时间。
树脂的粒径从200→20→10→5µm。
⒉色谱柱内径缩小树脂粒径减小使填充树脂床的色谱柱内径减小,由过去的粗长柱变为微柱。
色谱柱内径的变化为18→6→2.8→1.75mm。
⒊输压泵压力增高一般氨基酸分析仪采用低压泵,其施加于输液的压力只有几9.80665×104Pa,以后增加至几十9.80665×104Pa,现在发展到2068×104Pa。
⒋分析时间缩短由于树脂粒径的改善,色谱柱内径缩小和泵压增高,使分析时间大大缩短。
蛋白质水解液的分析时间从过去的24小时缩短到现在的半个小时左右。
高速全自动氨基酸分析仪技术参数1供货范围一套完整的全自动氨基酸分析仪(包含蛋白水解系统),成套地配备安全、有效及可靠运行所需的附件。
总则:标准化的外观、运行、维护、备品备件以及制造商服务,所提供的设备是一个制造商的定型产品。
2整机技术要求2.1整机性能一以18种蛋白水解氨基酸分析为标准*2.1.1蛋白水解氨基酸18种分析时间:<30min,以提高分析效率,节省试剂消耗2.1.2进样量2nmol时保留时间重现性:WCVO.3%(精氨酸)Arg,同时标准偏差≤0.092.1.3进样量2nmol时峰面积重现性:<CV1.0%(甘氨酸,组氨酸)Gly-His2.1.4检出限W2.5pmol(信噪比=2,天冬氨酸)Asp*2.1.5净分析时间30mim内18种蛋白水解氨基酸分离度N1.2(Thr-Ser,Gly-Ala,Ile-1.eu)及全部。
2.2其他通用技术要求:1.1.11柱后衍生单元,采用内置热传导膜,长度≤10CM,以提高灵敏度、节省分析时间和试剂的消耗量1.1.22分离柱采用不大于3μm填料的高理论塔板数分离柱,以提高分析效率,节省试剂消耗1.1.33苛三酮和其缓冲液采用独立试剂瓶常温放置,不预先混合,延长试剂保存时间到1年。
1.1.4内置至少9通道真空脱气机1.1.5具有提前预警式自动计算每次分析所需要的试剂量功能1.1.6主要管路均采用耐荀三酮腐蚀的SUS合金或钛合金227反应液、缓冲液用氮气预通气除氧,并用正压氮气保护2.2.8玮三酮衍生试剂采用氮气保护,缓冲液可常温稳定存放,无需低温冷藏,无需氮气保护,节省氮气消耗2.2.9输液泵的最大输液速度不大于1.000m1.∕min,以进一步提高输液精确度和准确度,同时满足自行装填分离柱的要求;2.2.10自动进样器进样方式:高压(全体积)可变量直接进样;2.2.11可实现0~100μl任意体积直接进样,无需更换任何部件2.2.12样品盘位数不小于100位2213柱温箱:采用半导体制冷加热,非油浴或水浴控温;2.2.14检测器:分光系统采用凹面衍射光栅,消除像差能力更强2.2.15色谱工作站,能够实现仪器的控制、数据的采集和处理。
氨基酸分析仪概况氨基酸分析仪是一种用于测定氨基酸含量和氨基酸序列的仪器。
由于氨基酸在生命体内的重要作用,氨基酸分析在药物研发、蛋白质结构研究、食品安全检测等领域具有广泛的应用。
本文将对氨基酸分析仪的原理、类型、应用和发展进行详细介绍。
一、氨基酸分析仪的原理1.色谱法原理色谱法是使用气相色谱或液相色谱进行氨基酸的分离。
其中,气相色谱法(GC)是最常用的方法之一,其原理是将氨基酸样品蒸发成气体,通过柱子进行分离,再利用检测器来检测分离出的氨基酸。
液相色谱法(HPLC)则是将样品通过柱子进行分离,再利用检测器进行检测。
2.质谱法原理质谱法是使用质谱仪来分析氨基酸的含量和序列。
其中,质谱仪可分为两类:质谱-质谱仪(MS/MS)和飞行时间质谱仪(TOF-MS)。
MS/MS是通过将氨基酸样品进行离子化,并在质谱仪中进一步分离与检测。
TOF-MS则是利用分子在质荷比与时间之间的关系进行分析。
二、氨基酸分析仪的类型根据氨基酸分析仪的原理和应用领域的不同,可以将氨基酸分析仪分为多种类型。
1.色谱法氨基酸分析仪色谱法氨基酸分析仪主要包括气相色谱仪和液相色谱仪。
气相色谱仪主要适用于挥发性氨基酸的分析,其优点是分辨率高、分离效果好。
液相色谱仪则适用于非挥发性氨基酸的分析,可以根据实际需求选择柱子和检测器。
2.质谱法氨基酸分析仪质谱法氨基酸分析仪主要包括质谱-质谱仪(MS/MS)和飞行时间质谱仪(TOF-MS)。
MS/MS可用于测定氨基酸中的特定氨基酸,如赖氨酸和精氨酸等,同时还可以用于测定氨基酸序列。
TOF-MS则适用于氨基酸含量的分析,其分辨率高,可以同时分析多个氨基酸。
三、氨基酸分析仪的应用1.药物研发氨基酸在药物研发中起着重要的作用,例如生物合成药物中的氨基酸序列是其药效的决定因素之一、氨基酸分析仪可以用于药物研发过程中的质量控制,确保药物质量稳定。
2.蛋白质结构研究蛋白质是由氨基酸构成的,因此氨基酸分析是蛋白质结构研究的重要一环。
均质仪技术参数1.主要用途:高含水量样品(如蔬菜、快餐食品)、高脂肪含量样品(如肉、腊肠、鱼)、高纤维含量样品(如饲料、青饲料)的均质化,无重金属污染样品均质。
2.工作条件:2.1电源:220V,50Hz;环境温度:5-40℃2.2功耗(220 V时) 1900 W2.3电流消耗(220 V时) 大约9 A3.技术指标:3.1粉碎样品的同时充分混匀样品,样品粉碎均匀,可减少每个样品的基本分析次数;3.2可适用低至20g样品的均质,均质后样品粒径≤2mm;3.3*均质过程电子监控并自动控制;样品杯自动升降,样品和刀头充分接触,快速均质,样品杯的抬升高度根据样品的阻力自动调整;3.4*陶制切割刀硬度:1750 Vickers;不锈钢刀头硬度:800 Vicker。
可提供不锈钢样品杯;用于难处理的样品(如肠衣,枸杞,含糖量高的果脯,枸杞等);3.5均质仪与样品接触之部件均由硼硅酸盐玻璃,惰性塑料(PP和PEEK)或钛制成,防止了交叉污染,可用于微量残留分析分析;3.6所有与样品接触的部件均可高温消毒,适用于微生物样品均质;3.7*可提供特殊的PVDF密封膜,在-40℃~150℃的温度下操作。
3.8整个过程在安全门关闭的状态下进行,如果安全门打开,仪器自动停止。
3.9刀片旋转速度最大9000 [转/分];根据刀头感受到的阻力自动调节转速;3.10*大尺寸切割刀,带两个刀刃和离心盘,可处理大体积样品,电子监控转速和扭矩;4.基本配置:4.1主机(含刀头)1台4.2玻璃样品杯5个4.3聚丙烯膜13个4.4电源线,操作指南等5.技术服务及其它:5.1货到后在接到用户安装通知后2个工作日内进行现场安装调试。
5.2在现场安装过程中至少保证对两名仪器操作人员进行现场培训,保证用户熟练掌握仪器的日常操作使用及日常维护,以后再根据需要进行必要的培训。
5.3仪器自验收合格之日起整机免费保修1年,质保期内免费维修(易损耗件除外)。
氨基酸自动分析仪
氨基酸分析仪是进行氨基酸分离、衍生和检测的自动化分析系统,广泛用于制药、食品、饲料、农业、育种、医学研究、临床诊断和地质考察等领域。
仪器类别:仪器仪表 /成份分析仪器 /氨基酸分析仪
指标信息:分辨率:THR-Ser Ile-leu ≥98% 保留时间重现性:RSD≤0.5% (水解,所有峰) 峰面积重现性:RSD≤1% (水解,所有峰)
1.原理
测定原理是利用样品各种氨基酸组分的结构不同、酸碱性、极性及分子大小不同,在阳离子交换柱上将它们分离,采用不同pH值离子浓度的缓冲液将各氨基酸组分依次洗脱下来,再逐个以另一流路的茚酮试剂混合,然后共同流至螺旋反应管中,于一定温度下(通常为115~120℃)进行显色反应,形成在570nm 有最大吸收的蓝紫色产物。
其中的羟脯氨酸与茚三酮反应生成黄色产物,其最大吸收在440nm。
这些有色产物对570nm、440nm光的吸收强度与洗脱出来的各氨基酸的浓度(或含量)之间的关系符合比耳定律,可与标准氨基酸比较作定性和定量测定。
2.操作方法
①样品处理:
测定样品中各种游离氨基酸含量,可以除去脂肪杂质后,直接上柱进行分析。
测定蛋白质的氨基酸组成时样品必须经酸水解,使蛋白质完全变成氨基酸后才上柱进行分析。
②样品分析:经过处理后的样品上柱进行分析。
上柱的样品量根据所用自动分析仪的灵
敏度来确定。
一般为每种氨基酸0.1μmol 左右(水解样品干重为0.3mg 左右)。
测定必须
在pH5~5.5、100℃下进行,反应进行时间为10~15min,生成的紫色物质在570nm 波长下
进行比色测定。
而生成的黄色化合物在440nm 波长下进行比色测定。
做一个氨基酸全分析
一般只需1h 左右,同时可将几十个样品一起装入仪器,自动按序分析,最后自动计算给出精确的数据。
仪器精确度在±1~3%。
用阳离子交换柱分离及测定氨基酸所的如下图
自动分析仪氨基酸分离图谱
3.结果计算
带有数据处理机的仪器,各种氨基酸的定量结果能自动打印出来,否则,可用尺子测量
峰高或用峰高乘以半峰宽确定峰面积进而计算出氨基酸的精确含量。
另外,根据峰出现的时间可以确定氨基酸的种类。
4.说明
①显色反应用的茚三酮试剂,随着时间推移发色率会降低,故在较长时间测样过程中应随时采用已知浓度的氨基酸标准溶液上柱测定以检验其变化情况。
②近年出现的采用反相色谱原理制造的氨基酸分析仪,可使蛋白质水解出的17 种氨基酸在12min 内完成分离,且具有灵敏度高(最小检出量可达1pmol)、重现性好以及一机多用等优点。
5.应用举例
(一)医学上的应用
■氨基酸代谢异常角度阐述了氨基酸与肝性脑病的关系
■血清中11种游离氨基酸的降低可直接影响人体组织的正常发育、生长
■必需氨基酸在创伤愈合中的关系
■肿瘤组织氨基酸代谢的变化规律
(二)饲料上的应用
■质量控制
各种饲料必需氨基酸的含量和它们之间的比例必须恰当,测定原料和产品中的氨基酸含量,以达到保证质量的目的。
■真伪鉴别
鱼粉氨基酸组成特点是赖氨酸、蛋氨酸含量高,氨基酸分析结果很容易就可以辨别真伪。
(三)农业、食品、饮料及其它
■对玉米、大豆、小麦等农作物的氨基酸含量进行检测
■对果汁、饮料进行真伪的鉴别
■检验测定茶氨酸来鉴别真伪茶叶
■对酱油级别的认定
6.仪器推荐
代表厂家:德国曼默博尔A300、德国sykam、日本hitachi等
仪器名称:全自动氨基酸分析仪(High Speed Amino Acid Analyzer)
仪器型号:L-8900
生产厂家:日本Hitachi公司
主要配置:
²色谱柱:尺寸:4.6mm×60mm,粒度:3µm,装填日立离子交换树脂
²输液泵:微量型串联式双柱塞往复泵,压力:0-20 MPa,流量:0.000-0.999 mL/min ²自动进样器:进样量:0.1-100 µL
²柱温箱:方式:半导体制冷加热,温度设定:20-85℃
²反应单元:方式:电子加热。
温度设置范围:50- 140(步进1)
²可见光度计:光谱:消象差凹面衍射光栅,波长:570nm、440nm
性能指标:(以蛋白质水解液标准分析为例,共进样5次):
²净分析时间:约30分钟,53min/循环
²保留时间重现性:CV 0.3%(精氨酸)
²峰面积重现性:CV 1.0%(甘氨酸、组氨酸)
²最小检出限:3pmol (信噪比=2 、天门冬氨酸)
²最适浓度:2 nmol/20µL
²基线稳定性:CH1 150 or less,CH2 600 or less。