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Pretransfusion Testing （輸血前檢查）(Type and screen, crossmatch)-----包括血型、抗體篩檢、交叉配合試驗等輸血前檢查成大醫院病理部陳容卿95.8.23備輸血程序備血醫囑血庫檢驗1. 病人輸血經歷調查2. 正確收集病人檢體3.填醫囑單1. 偵測目前檢體與過去ABO、抗體報告是否相符2. 準備血品–進行交叉配合試驗輸血1.核對、輸血、監控2.記錄生命跡象輸血前檢查的目的l達到輸血治療的目的—為輸血病患選擇適當之血液成分，以保障輸血時，不會造成自身血球被破壞並維持輸入血品的存活率。
1.選擇適當的ABO血型2.檢測病患的不規則抗體反應3.受血者(病患)與捐血者(血品)間的配合試驗備輸血流程l適當的醫囑及正確的檢體l實驗室(血庫)的數據資訊保存完整---過去輸血史、抗體記錄、本次結果l確實執行輸血核對l落實輸血回報ABO typing操作步驟血球分型（Cell typing）：1 紅血球以0.9% Normal Saline 洗3次後，泡製成3-5% 細胞懸浮液備用。
2 取兩支試管分別加入anti-A或anti-B試劑2滴。
3 再加入病人3-5%紅血球懸浮液各1滴。
4 輕搖混合後，以900 -1000 g 離心15秒。
5. 取出試管輕輕搖動，目測觀察有無凝集反應，記錄結果價數血清分型（Serum typing）：1 取兩支試管分別加入A1 cell 或B cell試劑各1滴。
2 再加入病人血清各2滴。
3 輕搖混合後，以900 -1000g 離心15秒。
4 取出試管輕輕搖動，目測觀察有無凝集反應，記錄結果價數AB--++A +--+B 0++-O ++--ABO GroupB Cell A1Cell Anti-B Anti-A InterpretationReaction of Serum TestedAgainstReaction of TestWith ABO typing 之結果判讀判讀血型的注意事項l如何確保判讀的正確性l詳實記錄l技術員間的誤差l定義異常血型抗體篩檢(Antibody Screening Test)l目的：利用2~3支已知抗原的血球測定血清中的不規則抗體－自體或是異體抗體l autologous control or DAT 可以不列入例行工作l發生原因：懷孕、輸血、移植、免疫注射或其他不明原因l臨床意義：避免使輸入的RBC壽命減短或引起溶血反應抗體篩檢血球的特性l一定是O型陽性l因種族抗原分布頻率不同, 偵測重要的紅血球抗原系統, 如Miltenberger system---Mi al考慮重要抗原系統劑量效應(Dose effect)如Rh, Kidd, Duffy, MNSsScreening cell I, II, III抗原組成表貼在操作台, 以便檢視陽性結果Manual Polybrene TestPt’s serum 2 drops + Donor 3-5% cells 1drop0.6 ml LIM(low ionic medium)incubate 1 min2 drops Polybrene reagent mixing3400 rpm 15 seconds & discard supernatant2 drops Resuspending reagentinterpretation影響IAT結果的重要步驟l血球與血清的比例l Incubation time：加入enhancement reagent的培育時間長短l Washing：洗滌次數的多寡與技巧(是否倒乾上清液)l AHG phase：判讀技巧l最後是否加入Coombs Control CellNewer routine non-test-tube methods for antibody detection and identificationl The microtube test: column agglutination Gel test-----ReACT; Diamedglass bead-----BioVuel Solid-Phase techniquel Six column configuration l Microwell spacingl Plastic compositionl Identifying labelsl Sealed with foil抗體篩檢陽性時l如何簡易判斷抗體種類？1.先判斷室溫是否反應---1)可先找出會干擾其他溫型抗體,如anti-M2)決定鑑定和交叉試驗方法的方向2.善用screening cell抗原組成表3.利用價數強度, 判斷單一抗體或多重抗體4.與過去抗體紀錄比較5.病患抗原的表現進行抗體鑑定l調閱並比較病患過去的抗體紀錄, 依screening cell反應型態改變, 決定重新鑑定的方向l區分是否有害的抗體l結果永久存檔,下次輸血可立即調閱l提出適當的交叉試驗方法供所有血庫同仁遵循The clinical significance of antibodies of given specificities and selection/testing of red-cell units prior to their issueAntigen-negativeYesAnti-S,-sAntigen-negative Yes Kidd antibodies Antigen-negative Yes Duffy antibodies Antigen-negative Yes Kell antibodies Antigen-negative Yes Rh antibodies (reactive in IAT)Selection of units Clinicalsignificance SpecificityThe clinical significance of antibodies of given specificities and selection/testing of red-cell units prior to their issueSeek advice from transfusion centreDepends on specificityAntibodies against low/high-frequency antigensSeek advice from transfusion centre Unlikely High-titre low-avidity antibodies (HTLA)Not clinically significant and can be ignored No Anti-Le bIAT cross-match-compatible 37°CRarely Anti-Le a , Anti-Le a+b Antigen-negative Sometimes Anti-M reactive at 37°C IAT cross-match-compatible 37°C Rarely Anti-MIAT cross-match-compatible 37°C Rarely Anti-A 1, -P 1, -N Selection of units Clinicalsignificance SpecificityCrossmatching TestAntibody screening test ( MP )(+) (-)Crossmatch using MP (-)Can be transfused(+)Protocol for AntibodyidentificationOptimal method for AbspecificityAHG (-)做哪些項目?＊確認捐血者的ABO cell typing( 含紅血球成分的血品)＊執行交叉配合試驗( Minor crossmatching test is not necessary for adult )Interpretation of Antibody Screening & Crossmatching ResultsInterpretation of Antibody Screening & Crossmatching Results四個月內新生兒的輸血前檢查＊若不考慮新生兒的ABO，輸予O型紅血球，必須考慮捐血者(血袋)的anti-A、B 的價數(<32X)＊應盡量輸用5天內的新鮮血品交叉試驗的限制l無法確認病人身分l無法偵測Rh錯誤l無法偵測所有對應捐血者抗原的病人抗體l無法預防病人的異體免疫(重複輸血會產生多重抗體)緊急用血計畫通常區分為1. 「非常緊急用血」2. 「緊急用血」。
输血前血型血清学检查疑难标本的实验操作及试剂的使用北京市红十字血液中心血液研究所血型室苗天红输血前血型血清学检查（输血相容性检测）《临床输血技术规范》要求✧血型鉴定（受血者、献血者的ABO和RhD血型）✧抗体筛选（受血者意外抗体筛查）✧交叉配血一ABO血型ABO 正反定型相符：正反定型相符且正定型反应强度4+；反定型反应强度≥2+。
ABO 正反定型不符的定义和范围✧ABO 正反定型不符（多或少抗原、抗体）。
✧ABO 正反定型相符，但弱反应，正定型反应强度＜4+，反定型反应强度＜2+。
✧正定型为O型，反定型非O型或Ac、Bc凝集强度差别＞2+以上。
ABO 正反定型不符（多或少抗原、抗体）✧ABO 正反定型相符，但弱反应，正定型反应强度＜4+，反定型反应强度＜2+。
✧正定型为O型，反定型非O型或Ac、Bc凝集强度差别＞2+以上正反定型不符处理的程序✧排除仪器设备、试剂、标本及操作失误。
✧查阅、询问病历资料，设计针对性试验。
✧选择试管法做正反定型。
✧ABO血型鉴定的特殊技术。
✧吸收放散试验✧唾液型物质检测✧毛细管离心分离自身和输入红细胞 ✧DTT处理自身凝集红细胞✧分子生物学检测（血型基因）✧询问、查阅病历✧试管法正反定型✧血型鉴定特殊技术观察↓假设↓验证↓解决试管法试管法：血型定型金标准，常用于疑难血型鉴定。
✧可以反复离心看结果。
✧可以延长抗原抗体反应时间，可以改变反应温度（4℃、37℃孵育），有利于弱抗原、抗体的检出或排除冷凝集素的干扰。
✧可以观察红细胞混合外观现象。
✧可以观察红细胞溶血现象。
试管法正反定型ABO血型定型试剂抗-A1抗-A1用于检测A亚型。
注意：抗-A1反应阴性✧A亚型✧A型抗原减弱A型新生儿与抗A1反应阴性或弱反应抗-H 抗-H用于检测ABO亚型及孟买、类孟买型。
( A或B亚型H抗原增强，孟买、类孟买H抗原阴性。
)注意：✧血液病致A、B抗原减弱，H抗原可能出现增强或减弱。
✧必须做对照试验。
抗-AB 抗-AB用于鉴定A x和B x，抗-AB与A x、B x抗原会产生较强反应。
反定型✧O细胞用于确认反定型的有效性,可以发现ABO系统以外室温反应性抗体干扰ABO反定型。
✧自身对照用于检测是否存在自身冷抗体干扰ABO反定型，确认正反定型的有效性。
✧A2细胞用于A亚型的鉴定（A亚型产生抗-A1抗体）。
注意：✧反定型抗-A减弱，可能出现与A1细胞阳性反应，与A2细胞反应阴性。
规范的摇试管方法试管法凝集强度判读反应强度红细胞凝集情况4+一个结实的大凝块，背景清楚3+几个大凝块，背景清楚2+中等大小凝块，背景清楚1+小凝块，背景较混浊w+有少量肉眼可见的凝集，背景红色混浊，显微镜下可观察到较多凝集细胞0没有可见的细胞凝集，呈均匀的红细胞悬液pH部分溶血：残留部分红细胞，液体出现透明澄清红色H完全溶血：未见红细胞，液体出现透明澄清红色mf混合外观凝集，部分红细胞形成较大凝块，周围是游离的红细胞试管法凝集强度为什么要使用标准凝集强度：✧操作标准化。
✧实验结果有回溯性。
✧保证不同实验室、不同工作人员对同一标本实验结果的一致性。
吸收放散试验表达弱A和弱B抗原的红细胞直接离心试验中不被抗-A、抗-B所凝集，但可以吸收相应的抗体。
可以通过将其吸收的抗体放散出来，并检测放散出来的抗体，以证明弱A或弱B抗原的存在。
✧吸收用RBC：盐水洗涤3次的待检压积RBC 1ml。
✧吸收用的抗血清：人源抗-A、抗-B。
✧将压积RBC和抗血清按等体积比例混合，在4℃孵育至少1小时，期间每隔15分钟混匀一次。
✧用冷盐水洗涤孵育后的细胞4-6次，得到压积RBC，加入等量盐水。
✧56℃水浴震荡10分钟，离心获得上清即为放散液。
✧用试剂红细胞检测放散液（人源抗体要做盐水介质和IAT）。
✧注意：一定要用O型红细胞做阴性对照。
巯基试剂消除自身凝集红细胞✧巯基试剂：DTT、2-Me✧巯基试剂可以裂解IgM抗体单体间的二硫键，用以消除冷自身抗体造成的红细胞的自发凝集，为血型检测提供不凝集的红细胞。
✧用盐水洗涤红细胞3遍并配成50%的悬液，加入等量的0.01M的DTT，37℃孵育30分钟，将细胞洗涤3遍后配成2-4%的悬液备用。
DTT处理自凝红细胞二RhD血型✧被检红细胞与抗-D试剂凝集者为RhD阳性，不凝集者为RhD阴性。
✧正常的RhD阳性：与IgM抗-D≥3+反应强度。
✧红细胞与IgM抗-D反应强度≦2+✧D变异型✧自身凝集红细胞✧抗-D引起的新生儿溶血病。
✧血液病致D抗原减弱✧直接抗人球蛋白强阳性红细胞D抗原分类D抗原的分类：根据D抗原的数量和表位不同，将D抗原分为以下3类：✧正常的D：与IgM抗-D≥3+反应强度。
✧D变异型：与IgM抗-D弱反应或阴性，需IgG抗-DIAT才能检出。
1.弱D（weak D）2.部分D（partialＤ）DEL型：只有吸收放散才能检出D。
IgM抗-D试剂✧对受血者只需用IgM抗-D试剂检测红细胞上是否有D抗原。
✧以输血为目的常规检测没有必要使用高效价的单克隆抗-D试剂及IgM+IgG单克隆抗-D试剂检测D变异型及对D阴性的标本进行确认试验，否则有不必要的风险。
因为：1. 必须设立一个凝集强度来区分正常D和D变异型，增大了误判的风险。
2. 用于献血者的抗-D试剂盐水介质离心能检出部分D变异型。
3. 如果DAT阳性，用IgG抗-D做IAT试验时将D阴性误判为D阳性。
切记：使用错误试剂的风险远远大于报告一个D变异型。
IgM+IgG抗-D试剂✧对初检为RhD阴性的献血者须进行RhD阴性确认试验，以确认其是RhD阴性还是D变异型。
✧D变异型红细胞与大多数抗-D试剂在盐水介质中弱凝集或不凝集，但与抗-D试剂孵育或在间接抗人球蛋白试验中发生凝集。
抗-D试剂三抗体筛选✧抗体筛选的目的是确定患者血清中是否存在有临床意义的抗体。
✧如果抗筛阳性，需要做抗体鉴定来确认有临床意义的抗体、最终选择合适的血液输注，同时提醒临床医生可能推迟提供配合的血液。
✧抗体筛选应该作为输血前检测的一部分，它提供了比交叉配血更为可靠和灵敏的检测抗体的方法（剂量效应等）。
✧抗体筛选或鉴定比交叉配血更敏感，认为：最严格的配血能配上就安全的认识是不全面的。
抗体鉴定✧患者抗体筛选阳性，如果时间允许，应做抗体鉴定并评估其临床意义，抗体鉴定结果应记录在患者病历中。
1. 鉴定抗体类型：IgM、IgG。
2. 鉴定抗体种类：同种抗体、自身抗体。
3. 鉴定抗体特异性:抗-？✧输血科工作人员可根据抗体鉴定的结果判断配血的相合率和选择最佳的交叉配血方法。
✧抗原检测的效率比盲配较高。
同种抗体✧同种抗体的结果须永久保存✧有剂量效应的抗体及一些弱抗体，与相应抗原纯合子反应、与杂合子不反应，配血相合不能保证输血安全性。
✧随着时间的推移，有些抗体会减弱甚至无法检出，配血相合，输血后会引起免疫记忆细胞在短时间产生大量抗体，引起溶血性输血反应。
✧对于同种抗体，每次输血都应选择无对应抗原的红细胞成分，而非仅配血相合。
抗体筛选的技术✧患者血浆＋筛选细胞✧患者血浆＋自身细胞（自身对照）自身对照无须作为抗体筛检的一部分。
抗体筛选阳性，应做患者自身细胞对照，这有助于识别高频抗原的抗体还是自身抗体。
✧方法：LISS-IAT法（低离子强度盐溶液-间接抗人球蛋白试验）由于它的速度快、灵敏度和特异性高，被公认为检测有临床意义抗体的最适合方法。
✧LISS-IAT法可以检测IgG抗体和37℃有反应性的IgM抗体。
✧LISS-IAT法（试管法、 LISS/Coombs卡）。
筛选细胞✧ 3%✧ 0.8%抗人球蛋白卡（LISS/Coombs卡）✧凝胶✧ 玻璃珠抗人球蛋白试剂✧多特异抗-IgG+C3d✧单特异抗-IgG抗体筛选抗体筛选：存在血浆干扰时应选择试管LISS-IAT法；存在自身抗体时选择盐水介质-IAT法。
LISS-IAT：2滴血清（血浆）、1滴2-4%的红细胞，加2-4滴LISS液后混匀，37℃孵育15分钟，离心观察细胞的凝集、溶血情况，用生理盐水洗涤3遍后倾倒上清液，控干，加2滴抗人球蛋白试剂后混匀，1000g离心15s后判读结果。
盐水介质-IAT：2滴血清（血浆）、1滴2-4%的红细胞，37℃孵育45-60分钟，离心观察细胞的凝集、溶血情况，生理盐水洗涤3遍后倾倒上清液，控干，加2滴抗人球蛋白试剂后混匀，1000g离心15s后判读结果。
可以将细胞配成0.8%的悬液，加50ul到LISS/Coombs卡中，直接离心判读结果。
特别注意：抗人球蛋白试剂凝聚胺✧试管中加入2滴血清（血浆）和1滴2%-4%红细胞悬液，混匀。
✧以1000g离心15秒，观察结果。
如果阴性则继续试验；如果阳性，需分析原因排除干扰后继续后续试验（此处发现并处理冷凝集素）。
✧加0.6-1mlLIM试剂，混匀后室温放置1分钟。
✧加入2滴Polybrene试剂，混匀后立即以1000g离心15秒，弃去试管中液体，轻摇试管，肉眼判断红细胞凝集情况。
如果有凝集出现则继续操作，如果没有凝集出现则该试验无效。
✧加入2滴重悬液，轻摇试管，肉眼观察结果。
✧结果判定：1分钟内凝集消失为聚凝胺试验阴性，1分钟内凝集不消失为聚凝胺试验阳性。
✧对于可疑的弱阳性结果，可用生理盐水洗涤3遍后，加2滴抗人球蛋白试剂，离心后判读结果。
四交叉配血✧抗体筛选阴性：LISS/Coombs卡、凝聚胺法。
✧如患者血浆中有（或既往曾有）临床可能有意义的红细胞抗体，必须使用间接抗人球蛋白法进行 交叉配血。
1.同种抗体： LISS/Coombs卡（选择没有抗体对应抗原的红细胞成分）。
注意：IgM抗体，应加做试管盐水离心法。
2.自身抗体：经典-IAT法。
3.同种抗体+自身抗体：经典-IAT法（选择没有抗体对应抗原的红细胞成分）。
抗人球蛋白卡VS凝聚胺抗体筛选阴性两种方法交叉配血结果不一致✧按那种方法的结果发血？✧以抗人球蛋白卡为准吗？怎么办？找原因！找原因！！找原因！！！抗人球蛋白卡VS凝聚胺凝聚胺法配血不合、LISS/Coombs卡配血相合✧37度无反应性的IgM抗体（同种抗体、冷自身抗体）✧凝聚胺能检出而抗人球法漏检的抗体LISS/Coombs卡配血不合、凝聚胺法配血相合凝聚胺法会漏检抗体，交叉配血结果以LISS/Coombs卡为准。
抗体筛选阴性、LISS/Coombs 卡配血不合✧ 献血者DAT 阳性。
✧ 新生儿血清中存在母体的IgG 抗-A/B 抗体。
✧ 患者曾接受ABO 不相合造血干细胞移植。
✧ 患者3个月内曾接受ABO 同型的实体器官移植，由于供者淋巴细胞产生的IgG 型抗-A 及抗-B 。
✧ 患者血清中有针对进口筛选细胞没有但亚洲人有的抗原的抗体，如抗-Mi a 、抗-Mur 、抗-Di a 。
✧ 静脉丙球中的血型抗体。
