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布鲁氏菌病诊断的特异性实验室检查技术从可疑布病患者分离布鲁氏菌A1.1血培养A1.1.1 双相培养基培养 :无菌从可疑病人静脉取血液4-5mL,在酒精灯火焰附近将血液注入5-6支含双相培养基的中试管内，或 2-4 只含双相培基烧瓶中，轻轻混合倾斜，使被检血液分布在琼脂斜面上，置37℃温箱培养，如果怀疑病人是牛种布鲁氏菌感染时，应有一半标本置C02环境中培养，三天后观察结果，如未见布氏菌生长，可按上法再倾斜，使血液涂在琼脂斜面上，继续培养，每隔一天观察一次，如有可疑布鲁氏菌落，可用铅金耳勾出接种到琼脂试管培基，获得纯培养，进一步作布氏菌鉴定，血培养三十天仍不出菌，可定为阴性。
A1.1.2 接种未受精鸡卵法 :取新鲜鸡蛋两个，把鸡蛋放在固定架上，锐端向上，以腆酒和酒精依次消毒蛋壳，用眼科手术刀在顶部穿一小孔，用三厘米长注射针头将被检血液徐徐注入卵黄中，每个鸡蛋接种血液0.2mL，立即用灭菌石蜡将孔密封，置37℃温箱中培养，五天后把接种血液的鸡蛋无菌打开用灭菌的毛细管把接种血液部分的卵黄及蛋清吸出 0.5-0.6mL, 接种2-3支斜面培养基上，置37℃培养，2-3天观察一次，15天仍不见可疑菌落生长，定为阴性。
A1.2 骨髓培养用灭菌的导尿管将尿液导出放入灭菌容器中，为浓缩细菌，提高检出率，可在尿液中加入1%-3%的高价布鲁氏菌免疫血清，混合后，置37℃温箱2h,高速离心沉淀，取沉淀物0.5mL接种在选择性培基上培养，或注射豚鼠，用生物学法分离布鲁氏菌。
A1.3 其他病原材料培养由乳、脑脊液、关节液和滑囊液分离布鲁氏菌，将液体标本无菌地接种到琼脂斜面上，或培养平板上，涂布于培基表面，参照血培养法观察结果，15天仍无可疑菌生长，定为阴性。
A1.4 生物学分离布鲁氏菌法为了提高对布鲁氏菌的检出率和从污染的材料中分离布鲁氏菌，将被检材料(固体标本加灭菌的生理盐水研碾成浆液态)经皮下或腹腔注射豚鼠或小白鼠，豚鼠接种1mL，小鼠接种 0.5mL，接种豚鼠，即可观察血清-变态反应情况，又可作细菌分离培养，小鼠感染后二十天解剖取脏器培养，豚鼠接种后三十天解剖取脏器培养。
布鲁氏菌病实验室诊断技术作者：王勤来源：《湖北畜牧兽医》2018年第04期摘要：对实验室常用的几种布鲁氏菌病检测方法进行了分析，为实验室检测不同动物群体选择相应的诊断方法提供参考。
关键词：实验室；布鲁氏菌病；检测方法中图分类号：S858 文献标识码：B 文章编号：1007-273X（2018）04-0025-01布鲁氏菌病（简称布病）是一种危害性极大的传染性人兽共患病，在世界范围内广泛流行。
其主要临床症状为雌性动物流产、生育力下降，雄性动物睾丸炎，甚至不育，给畜牧业造成严重的损失。
1 病原学方法从疑似感染布病的个体中提取血液或其他样本，对样本处理后在选择培养基上培养，如有菌落生长则通过细菌染色、生化试验等方法鉴别是否为布鲁氏菌，该方法准确性高，但危险性高、操作难度大、分离时间长，对试验环境要求严格，需在特定试验条件下进行。
2 PCR技术随着分子生物学技术的发展和普及，可通过 PCR、荧光定量PCR以及环介导等温扩增（LAMP）等技术对布病进行诊断。
其中PCR技术具有特异性高、灵敏度好、操作较简单等优点，可用于鉴别不同种属的布鲁氏菌。
荧光定量PCR 技术相较于传统 PCR 技术具有灵敏度高、高通量和方便快捷等优势，但由于其引物和探针设计较为困难，且限制较多，对专业技术有较高要求。
LAMP可用于对奶、组织等样本的检测，具有操作方便、可视性强、特异性高和试验条件要求低等优点，其灵敏性可达10 pg/反应，且可以在普通水浴下完成反应，适于基层检测使用。
但是LAMP存在多重扩增较为困难，样本污染等问题，且对引物设计要求很高限制了该技术的进一步使用。
3 血清学检测方法3.1 虎红平板凝集试验（RBPT）BRPT是在平板上将30 μL抗原与30 μL血清样品混合，4 min内观察是否出现凝集来判定阴阳性，该法使用方便、结果判定简单、价格低廉，适用于各种家畜布病的田间筛选，在国际上广泛应用，但是特异性较差，易出现假阳性。
实验十一布氏杆菌病的检疫目的初步掌握布氏杆菌病的细菌学、血清学诊断及变态反应等检疫方法。
内容及方法家畜布氏杆菌病的检疫，即通过流行病学调查、临诊检查、细菌学检查、血清学诊断及变态反应等方法，检出畜群中的患畜。
实验诊断的材料可采取胎儿、胎衣、阴道分泌物、乳汁、血液、血清、动物尸体以及马的脓肿中脓汁等。
一、细菌学检查(一)染色检查病料以绒毛叶渗出液、胎儿的胃内容物及肺脏、阴道分泌物及脓肿中的脓汁，以及培养物等制成抹片，除用革兰氏染色法染色外，应用鉴别染色法进行显微镜检查。
布氏杆菌为球杆菌，0．5～0．7／lmX0．6一1．5pm，无鞭毛，不产生芽胞，不呈两极浓染，病料抹片呈密集菌丛，成对或单个排列，短链较少，革兰氏染色阴性。
它虽然不是抗酸性细菌，但可以抵抗脱色用的弱酸，例如0．5％乙酸。
这种特性结合布氏杆菌鉴别染色技术用于诊断有一定实际意义。
下面将列出两种较常用方法。
1．改良Ziehl-Neelsen氏法适于作胎膜和流产胎儿内容物染色之用。
流产数日内取阴道拭子制作抹片，也可用此法染色。
（1）抹片晾干，在火焰上固定。
(2)用Ziehl—Neelsen氏石炭酸复红原液的1：10稀释液染10～15min(原液为碱性复红1g，溶于10ml无水乙醇中，加入5％石炭酸溶液90m1)。
(3)水洗后，用0．5％乙酸脱色15～30s。
(4)充分水洗后，用1％美蓝复染20～60s。
(5)水洗、干燥、镜检。
布氏杆菌染成红色，背景为蓝色。
在胎膜抹片中经常看到布氏杆菌在染成蓝色的组织细胞中集结成团。
此法对诊断绵羊地方流行性流产，胎儿弯杆菌及其他传染病也有价值。
用此法染色时，胎儿弯杆菌和衣原体也染成红色，但可以从形态上区别。
2．改良Koster氏法(1)抹片自然干燥，用火焰固定。
(2)用新配制的番红(Safranin)和氢氧化钾混合液(番红饱和水溶液2份与lmol氢氧化钾5份混合)染lmin。
(3)水洗后，用0．1％硫酸脱色10s(或在10—20s内用0．1％硫酸处理两次)。
布病防治工作中检测制剂和技术的新动向【摘要】布病是一种由布氏杆菌引发的传染病，对人类和动物健康造成威胁。
布病的准确检测是预防和控制该病的关键。
目前现有的检测制剂和技术存在一定的局限性，需要不断改进和更新。
近年来，基因检测技术在布病检测中的应用取得了重要进展，为快速、准确地诊断提供了新途径。
新型免疫学检测技术、纳米技术、大数据分析以及仿生学技术也逐渐应用于布病的检测和防控工作中。
未来，布病防治工作中检测制剂和技术有望不断更新，提高检测的准确性和效率，为布病的防控工作提供更加有力的支持。
未来的研究方向应该集中在技术创新和多参数综合诊断上，以进一步提高布病检测的精准性和实用性。
【关键词】关键词：布病、防治、检测制剂、技术、基因检测、免疫学检测、纳米技术、大数据分析、仿生学技术、发展前景、研究方向1. 引言1.1 布病防治工作中检测制剂和技术的重要性布病是一种由布鲁氏菌引起的传染病，对人类和动物健康造成严重威胁。
在布病的预防和控制工作中，检测制剂和技术发挥着至关重要的作用。
通过及时、准确地检测布鲁氏菌的存在，可以帮助医疗机构快速诊断病例、隔离患者、采取有效的治疗措施，从而有效遏制疫情蔓延。
检测制剂和技术是预防布病的第一道防线。
通过对患者、患畜和潜在感染源的筛查，可以及早发现病例、追踪疫情，并及时采取控制措施，避免疫情扩散。
检测制剂和技术是确诊布病的重要手段。
准确的检测结果可以为医生提供重要参考，帮助确定患者是否感染了布鲁氏菌，指导后续治疗方案的制定。
检测制剂和技术还可以用于评估防控效果。
通过监测检测结果的变化，可以及时调整防控策略，提高工作效率和效果。
检测制剂和技术在布病防治工作中起着不可替代的重要作用，其准确性和及时性直接影响到疫情控制的效果。
不断提高检测制剂和技术的水平，引进新的技术手段，对于布病防治工作具有重要意义。
1.2 现有检测制剂和技术的局限性现有检测制剂和技术在布病防治工作中虽然起到了一定的作用，但是也存在着一些局限性。
布鲁氏菌病检测技术布鲁氏菌病检测技术1.概况布鲁氏菌病(简称布病)，是由布鲁氏菌引起的一种人畜共患的传染病。
临床主要特征是母畜流产、乳腺炎、不育和各种组织(如睾丸、关节)的炎症。
人类感染布病后，病程长，反复发作，长期不愈。
布病几乎遍及世界各地。
凡有牲畜的地区都有布病流行。
据不完全统计，在160个国家和地区中就有123个国家和地区有布病发生。
我国多见于内蒙古、东北，西北等牧区。
在北方农区也有散发，常呈地地方性流行。
在不良环境，如抗生素的影响下，本菌易发生变异，通常变异形成的布鲁氏菌可在机体内长期存在。
该菌对热抵抗力不强，63℃经7～10 min可被杀死，在鲜乳中可存活2天到18个月，在冻肉中可存活14～47天，在干燥土壤和胎儿体内可分别存活37天和6个月。
对常用消毒药敏感，如0.1％升汞数分钟，1％来苏儿或2％福尔马林15 min可将其杀死。
日光下曝晒4 h 可杀死本菌。
人和多种动物对布鲁氏菌易感。
动物中羊、牛、猪的易感性最强。
母畜比公畜，成年畜比幼年畜发病多。
在母畜中，第一次妊娠母畜发病较多。
带菌动物，尤其是病畜、流产胎儿、胎衣是主要传染源。
消化道、呼吸道、生殖道是主要的感染途径，也可通过损伤的皮肤、粘膜等感染。
常呈地方性流行。
人主要通过皮肤、粘膜和呼吸道感染。
本病一年四季均可发病。
流行区在发病高峰季节(春末夏初)可呈点状暴发流行。
患病与职业有密切关系，如：兽医、畜牧工作者、屠宰工人、皮毛工等感染机会较高。
人类布鲁氏菌病的预防，首先要注意职业性感染，凡在动物养殖区、屠宰区、畜产品加工厂的工作者以及兽医、实验室工作人员等，必须严守防护制度(即穿着防护服装，做好消毒工作)，尤其在仔畜大批生产季节。
更要特别注意。
病畜乳肉食品必须灭菌后食用。
必要时可用疫苗接种，接种前应行变态反应试验。
阴性反应者才能接种。
2.实验室监测技术概述(据布鲁氏菌病防治技术规范)2.1检测方法血清学实验或细菌分离。
初筛试验选用虎红平板凝集试验(RBPT)或乳牛布病全乳环状试验(MRT)(见GB/T 18646)。
布鲁氏菌病实验室诊断技术及其适用性评析高明春1,2，王君伟 1,2（1.东北农业大学动物医学学院微生物与免疫学教研室，哈尔滨 150030；2.国家奶牛产业技术体系疾病控制功能室，北京 100193）摘 要：布鲁氏菌病严重阻碍我国养牛业的健康发展，控制乃至根除布病是世界范围内各布病负担国的共识。
本文就各种布鲁氏菌病实验室诊断技术及其在布病净化程序中的适用性加以客观评述，谨供布病防控工作者参考。
关键词：布鲁氏菌病；实验室诊断技术；奶牛；肉牛布鲁氏菌病（布病）是一种公认的人畜共患传染病，人、畜布病均归因于6个陆生动物布鲁氏菌经典种中的5个种所致的感染，即人间布病全部源于动物布病，并且各国的研究表明消灭动物布病能够有效地从根本上减少人间布病。
近年，我国家畜布鲁氏菌病（布病）与人间布病暴发频繁，给畜牧业与人民健康带来了巨大损失，而控制及消除布病影响的一个前提是能够对布病动物进行有效的诊断。
国内外对布病系统性的研究有近150年的历史，期间开发了许多布病体外和体内诊断方法，这些诊断方法服务于不同的应用目的，例如：证实疫情发生、全国性普查、确诊、国际贸易检测以及“无布病”地区的布病监测等等，如何选择诊断策略取决于布病的流行状况及检测的目的[1～5]。
本文对新近探讨各种布病诊断方法的文献进行回顾，并评价其在净化程序中的适用性。
1 布鲁氏菌病概述布鲁氏菌病主要通过消化道、呼吸道、生殖道传播，也可通过损伤的皮肤、黏膜等感染，造成以生殖系统为主的多器官损伤。
牛群中暴发布病会导致大量怀孕母牛流产和奶产量降低，如发生流行，则会严重影响整个产业链。
布病还是公认危害最为严重的人畜共患病之一，人感染后反复发作，难以根治。
因此，世界上绝大多数“布病国家”积极开展了本国的布病根除计划，并且北美、中欧的几个国家及加拿大、日本、澳大利亚和新西兰等已确认根除了布病，取得“无布病国家”称号[6-8]。
布病最重要的临床表现是患畜在第一次怀孕期间流产，虽然通常怀孕母畜只流产一次，但在这些动物的生命周期中依然会保持感染状态。
布病检测工作实施方案一、背景。
布病是一种由布鲁氏菌引起的人畜共患病，对人畜健康造成严重威胁。
及时、准确地进行布病检测工作对于预防和控制疾病的传播至关重要。
因此，制定科学合理的布病检测工作实施方案对于保护人畜健康具有重要意义。
二、检测目标。
1. 确定疫情情况，通过对人畜进行检测，了解疫情的分布和传播情况，为疫情防控提供科学依据。
2. 保障食品安全，对从事畜牧业和相关行业的人员进行定期检测，确保食品安全，防止疾病通过食品传播。
3. 防止疫情扩散，及时发现病例，采取隔离措施，防止疾病扩散。
三、检测方法。
1. 人员检测，定期对从事畜牧业和相关行业的人员进行血清学检测，及时发现感染者。
2. 动物检测，对家畜、野生动物等进行血清学检测，发现携带病原体的动物，及时隔离治疗或淘汰。
3. 食品检测，对从事食品加工和销售的人员进行检测，确保食品安全。
四、检测流程。
1. 采样，对需要检测的人员、动物和食品进行采样，确保样本的准确性和代表性。
2. 检测，使用血清学检测方法进行样本检测，确保检测结果的准确性和可靠性。
3. 结果分析，对检测结果进行分析，及时发现感染者和携带者。
4. 处理措施，根据检测结果，采取相应的处理措施，如隔离治疗、淘汰携带者等。
五、检测管理。
1. 建立档案，对参与检测的人员、动物和食品建立档案，做好信息管理工作。
2. 设立检测点，在重点地区设立检测点，方便对人员、动物和食品进行检测。
3. 宣传教育，加强对人员、动物饲养者和相关行业从业人员的宣传教育工作，增强其对布病检测工作的重视和配合度。
六、检测评估。
1. 定期评估，对布病检测工作进行定期评估，发现问题及时纠正。
2. 数据分析，对检测数据进行分析，了解疫情的变化趋势，为下一步防控工作提供科学依据。
七、总结。
布病检测工作实施方案的制定对于预防和控制疾病的传播具有重要意义，需要全社会的共同努力和配合。
只有通过科学合理的检测方法和完善的管理措施，才能有效预防和控制布病的传播，保障人畜健康。
布鲁氏菌的血清学检测方法布鲁氏菌病（简称布病）是一种人兽共患的传染病，世界范围内流行。
布病给人造成了大量损失和痛苦。
近年由于布病的散发病例的增多，患者多无明确接触史，临床症状又不典型，因此其实验室检测至关重要。
目前布氏菌的实验室检测主要分三类：布氏菌细菌学检测、血清学检测和分子生物学检测。
细菌学检测周期长、阳性率低、感染风险高等特点，分子生物学对仪器、人员、技术的要求较高使得这两类技术在临床诊断应用上不是很普遍，应用最多的还是布氏菌的血清学检测。
本文现就布氏菌的血清学的检测进行如下综述。
布氏菌血清学方法可以分为：凝集法、补体结合法、酶联免疫吸附试验法、荧光偏振法、胶体金层析法等。
其中凝集法是通过特异性抗体与颗粒性抗原结合产生凝集的血清学实验，现应用最多的为虎红平板凝集实验、试管凝集实验、二巯基乙醇试管凝集实验、抗人球蛋白抗体实验等。
虎红平板凝集实验（RBPA）其抗原系用抗原性良好的牛种布氏菌株在适宜培养基上培养收获菌体, 经加热灭活, 离心后用虎红染料染色, 悬浮于乳酸缓冲液（PH3.6-3.7）制成。
它能抑制非特异性反应的IgM和增强特异性IgG 的活性, 其反应敏感稳定, 特异性优于试管凝集实验。
因此PBPA在很多国家推广使用, 是我国常规的诊断方法之一。
RBPA操作简单，不需要大型精密的仪器，适合基层医疗机构和检测点应用。
因有很高的灵敏性且能在短时间内完成，RBPA常用于初筛实验。
其有很高的准确性，特别是当检测1:4稀释血清标本阳性时其诊断的特异性更高【1】。
但RBPA也有局限性，纤维蛋白原可与虎红染料发生非特异性结合形成假阳性【2】，急性病人早期，体内产生的抗体以IgM为主，RBPA可能检测为阴性。
试管凝集实验(SAT)又称莱特试验是1897年由Wright发明，其方法简便，特异性强，可半定量检布鲁氏菌抗体滴度，因此有很高的诊断价值，至今在临床上广泛使用。
我国布病诊断标准中当SAT滴度≥1：100可确诊是活动性布病。
牛羊布病平板凝集试验一、试验原理：该试验又称为板式孟加拉红平板凝集试验，由于所用的抗原是酸性（PH3.6--3.9）带色的抗原，该抗原与被检血清作用时能抑制血清中的IgMl类抗体的凝集活性，检查出的抗体是IgG类，因此提高了该项反应的特异性。
血清的制备一、血清制备将血液采集与无抗凝的离心管中，温室静置30分钟，3000r/min l离心5--10min,吸出血清（切勿吸出红细胞成分），分装备用。
要保存的血清则分离后装入离心管与-- 2 0 ℃的冰箱内保存。
二、虎平平板凝集试验（RBPT）将玻璃板清洗干净，划成50个方格（横10x纵5），每格4cm X 4 c m.每一格下再划1cm宽的小格，各格标上被检血清号，每一横行做两份待检血清。
在各方格中加入相应的被检血清 3 0 ul,,然后再其旁加入30ul虎红平板凝集抗原，用牙签搅动被检血清和抗原使之均匀混合，形成直径约2cm的液区。
轻微摇动，置室温条件下（2 0 ℃），4min内观察结果，同时设阳性血清和阳性血清对照。
方法二、在载玻片上加抗原30UL，加入30UL被检测血清，混匀。
在5min内观察结果，轻摇载玻片，出现凝集颗粒为阳性，否则为阴性。
三、结果观察当阴性血清对照不出现凝集（—），阳性血清对照出现凝集（+），方可对代检血清进行判定。
待检血清在4min,内出现肉眼可见凝集现象者判为阳性（+），无凝集现象，呈均匀粉红色者判为阴性（—）四、注意RBPT 操作简单、反应迅速，且对试验条件要求不高，但特异性不高，易受试验温度和凝集时间等因素的影响，不易准确判定结果。
应用此法所得的阳性检出率为70%，较SAT(试管凝集试验) ELISA（酶联免疫吸附试验）低。
该方法主要用于初筛，对其阳性者，还必须经SAT检测为阳性后才能最终判定为阳性。
