人外周血淋巴细胞微核测定

外周血淋巴细胞亚群检测方法引言淋巴细胞是免疫系统中的关键组成部分，负责抵御病原体入侵以及产生免疫应答。

人体外周血中的淋巴细胞亚群分布情况直接影响着人体免疫功能的正常运行。

深入了解外周血淋巴细胞亚群的检测方法对于疾病诊断、治疗以及免疫功能评估具有重要意义。

一、外周血淋巴细胞亚群的概念和功能淋巴细胞是一类在外周血液和淋巴组织中广泛存在的白细胞。

根据其表面标记分子的不同表达，可以将淋巴细胞分为T细胞、B细胞和自然杀伤细胞等亚群。

这些不同的亚群在免疫应答中具有不同的功能。

T细胞是最为重要的淋巴细胞亚群之一，主要分为CD4+T细胞和CD8+T细胞。

CD4+T细胞是调节免疫应答的关键细胞，其主要功能是识别并与抗原结合，然后释放细胞因子调节其他免疫细胞的活性。

CD8+T细胞则主要负责通过释放细胞毒素来杀伤被感染的细胞。

B细胞是淋巴细胞中的主要亚群之一，其主要功能是产生与抗原特异性结合的抗体，以此来中和病原体或形成免疫复合物。

自然杀伤细胞是一类专门对抗病毒感染和肿瘤细胞的细胞。

它能够直接杀伤感染或突变的细胞，并释放细胞毒素来诱导细胞凋亡。

二、1. 流式细胞术流式细胞术是目前应用最为广泛的淋巴细胞亚群检测方法之一。

该方法通过不同的抗体标记，能够区分不同的淋巴细胞亚群，并通过流式细胞仪进行检测和分析。

流式细胞术可以同时检测多种亚群的分布情况，并且能够进一步进行表型分析。

2. 免疫荧光染色免疫荧光染色是一种通过将荧光标记的抗体与细胞表面分子进行特异性结合的方法。

通过对不同亚群的细胞进行特异性的染色，可以通过显微镜观察到不同亚群的分布情况。

这种方法适用于对淋巴细胞亚群的定性分析。

3. 免疫酶标测定法免疫酶标测定法是一种通过将荧光或酶标记的抗体与细胞表面分子进行结合，并进行酶标反应来检测细胞表面分子的方法。

该方法适用于大规模的样本检测，并且可以通过测定酶标反应的强度来定量分析不同淋巴细胞亚群的含量。

三、外周血淋巴细胞亚群检测在疾病诊断和免疫功能评估中的应用1. 疾病诊断外周血淋巴细胞亚群的异常分布在许多疾病的诊断中具有重要作用。

人外周血淋巴细胞微核测定一、实验原理:人外周血淋巴细胞大都处于细胞周期的G 0期，在含有PHA 的培养基中进行体外培养后，原来处于G 0期的淋巴细胞可转化为淋巴母细胞，恢复分裂能力。

在细胞分裂过程中，由于化学物质或辐射作用影响，可以引起淋巴母细胞染色体损伤，致使染色体断裂，无着丝粒的染色体断片不能随染色体移动进入子细胞核，结果在细胞质中形成微核。

本试验是一种体外测试有害因子遗传毒性的方法，通过在人类外周血淋巴细胞体外培养过程中加入受试物，检测细胞微核情况来评价受试物的遗传毒性。

同时也成为检测致突变、致癌、致畸物质对机体遗传效应的一种重要手段。

二、验用品（1）器材：离心管、注射器、培养瓶（10ml ）、吸管、离心机、载玻片、冰箱、培养箱、恒温水浴箱。

（2）试剂：Giemsa 染液、pH6.8磷酸缓冲液、RPMI1640培养液、PHA 溶液、0.075mol ／L KCl溶液、甲醇:冰醋酸固定液（3）材料：人外周血、环磷酰胺溶液。

三、实验步骤1、按人类外周血染色体培养常规方法采血、接种，按组分别加入受试物（CP 终浓度100ug/ml）培养72小时，收获前不用加秋水仙素，收获标本，离心，去上清液。

2、低渗：加入0.075mol ／L KCl溶液4m1。

混匀后放入37℃恒温水浴箱中低渗处理10分钟。

低渗时间可根据预实验中细胞完整程度进行调整。

3、预固定：低渗结束后加入甲醇·冰乙酸（3:1）固定液lml ，混匀后离心（1000rpm ）5分钟。

4、固定：弃上清液，加入5ml 固定液，混匀后离心（1000rpm ）5分钟。

弃上清液，留沉淀物。

可按本方法再固定一次。

5、滴片：加入少量固定液混匀成细胞悬液，滴片。

6、染色：用Giemsa 染液染色10分钟。

自来水细水冲洗后，晾干。

7、观察与计数：先以低倍镜、高倍镜粗检，选择细胞分散均匀，染色良好的区域，转到油镜下观察转化的淋巴细胞，进行微核的观察和计数。

中国肿瘤生物治疗杂志 h ttp ://www.b i o t her .o rg Ch i n J Cancer B i other ,O ct .2010,V o.l 17,N o .5DO I :10.3872/j .iss n.1007-385X .2010.05.011#临床研究#白血病患者外周血淋巴细胞微核分析鱼丽莉1,王子妍1,李 娟1,宋玮玮2,赵 丽1(1.兰州大学第一医院中心实验室,甘肃兰州730000;2.兰州军区总医院血液科,甘肃兰州730050)[摘 要]目的:应用微核分析技术检测初诊白血病患者的遗传损伤。

方法:应用细胞周期阻断法检测54例初诊白血病患者(C M L 11例,AM L -M 17例,AM L -M 26例,AM L -M 34例,AM L -M 42例,AM L -M 54例,AM L -M 62例,ALL 18例)和30例健康人外周血,以微核率(m i cronucleus rate ,M NR )、微核细胞率(m i cronucleus cell rate ,M CR )、核芽(nuclear bud ,Bud)率、核质桥(nucleop l as m i c br i dge ,NPB)率、核分裂指数(nuc l eus di v ision i ndex,ND I)、凋亡细胞(apopto ti c cell s ,A C)率结合染色体中期分析、融合基因和基因重排检测作为染色体损伤指标分析初诊白血病患者的遗传损伤。

结果:54例初诊白血病患者外周血的M NR [(17.368?1.305)jvs (7.368?0.844)j ]、M CR [(15.418?1.212)jvs (5.887?1.101)j ]、Bud 率[(8.142?01132)%vs (0.404?0.404)%]、NPB 率[(5.724?0.874)%vs (0.034?0.034)%]、N D I[(1.722?0.062)%vs (2.282?01324)%]、AC 率[(2.167?0.333)%vs (0.167?0.667)%]、异常染色体检出率(24.00%)、融合基因或基因重排阳性率(18.00%)均明显异于健康人(P <0.05或P <0.01)。

氯霉素作业者外周血淋巴细胞微核测定
胡永兰
【期刊名称】《化工劳动保护：工业卫生与职业病分册》
【年(卷),期】1989(010)002
【摘要】本文对氯霉素作业者的外周血淋巴细胞微核率进行了测定。

结果显示,氯霉素作业者外周血液淋巴细胞微核率和微核阳性检出率均高于对照组。

经统计学处理,两者均有显著性差异(P<0.05)。

提示氯霉素有致染色体损伤之可能。

【总页数】2页(P52-53)
【作者】胡永兰
【作者单位】无
【正文语种】中文
【中图分类】R135.1
【相关文献】
1.苯作业者外周血淋巴细胞微核率的观察 [J], 李伟;詹晓平;陆凯南
2.200例放射工作人员外周血微核淋巴细胞率和淋巴细胞微核率检测分析 [J], 杨锡成
3.锰作业者外周血淋巴细胞微核率的观察 [J], 周玮;王艳红
4.苯作业者外周血淋巴细胞微核率的观察 [J], 李伯灵
5.汞对作业者外周血淋巴细胞微核率的影响 [J], 闫莉;周宁;庞新侠;张红斌;徐栋;王春燕
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微核细胞率micronucleus frequency，在CB法微核试验中指1000个双核细胞中含有微核的细胞数。

外周血淋巴细胞微核率测定外周血淋巴细胞微核率测定作为对职业性放射性工作者所受辐射损伤的评价是一项非常有意义的指标，亦列为我国慢性放射病诊断的重要检测指标之一。

健康成人外周血淋巴细胞微核细胞率正常值范围为0-6‰,均值为1.2‰,微核微核（micronucleus, 简称MCN），也叫卫星核，是真核类生物细胞中的一种异常结构，是染色体畸变在间期细胞中的一种表现形式。

微核往往是各种理化因子，如辐射、化学药剂对分裂细胞作用而产生的。

在细胞间期，微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外，大小应在主核1/3以下。

微核的折光率及细胞化学反应性质和主核一样，也具合成DNA的能力。

一般认为微核是由有丝分裂后期丧失着丝粒的染色体断片产生的。

有实验证明，整条染色体或几条染色体也能形成微核。

这些断片或染色体在分裂过程中行动滞后，在分裂末期不能进入主核，便形成了主核之外的核块。

当子细胞进入下一次分裂间期时，它们便浓缩成主核之外的小核，即形成了微核。

已经证实，微核率的大小是和作用因子的剂量或辐射累积效应呈正相关，这一点与染色体畸变的情况一样。

所以许多人认为可用简易的周期微核计数来代替繁杂的中期畸变染色体计数。

由于大量新的化合物的合成，原子能的应用，各种各样工业废物的排出等都存在污染环境的可能性，欲了解这些因素对机体潜在的遗传危害，需要有一套高度灵敏，技术简单易行的测试系统来监测环境的变化。

只有真核类的测试系统更能直接推测诱变物质对人类或其它高等生物的遗传危害，在这方面，微核测试是一种比较理想的方法。

目前国内外不少部门已把微核测试用于辐射损伤、辐射防护、化学诱变剂、新药试验、食品添加剂的安全评价，以及染色体遗传疾病和癌症前期诊断等各个方面。

70年代初，Matter和Schmid首先用啮齿类动物骨髓细胞微核率来测定疑有诱变活力的化合物，建立了微核测定法。

口腔颌面部肿瘤患者外周血淋巴细胞微核的检测沐旭升;周宏远【期刊名称】《华西口腔医学杂志》【年(卷),期】1991(9)1【摘要】本文采用微量血培养法测定了43例口腔颌面部肿瘤及癌前病变患者外周血淋巴细胞微核,检出率为100%。

口腔颌面部恶性肿瘤、癌前病变及良性肿瘤患者外周血淋巴细胞微核率分别为14.07±3.98‰、12±1.414‰和8.64±2.098‰,与对照组(5.95±1.91‰)比较有非常显著差异(P<0.005)。

恶性肿瘤与良性肿瘤患者外周血微核率差异亦有高度显著性(P<0.005)。

恶性肿瘤患者微核淋巴细胞的多微核淋巴细胞出现率在7.89%,明显高于良性肿瘤患者的2.48%和正常人的2.4%(P<0.05)。

结果提示外周血淋巴细胞微核的检测可作为口腔颌面部癌肿辅助诊断和估计预后的指标;口腔颌面部肿瘤的发生与染色体畸变可能有密切的关系。

【总页数】4页(P39-42)【作者】沐旭升;周宏远【作者单位】不详;不详【正文语种】中文【中图分类】R739.810.4【相关文献】1.口腔颌面部肿瘤患者外周血淋巴细胞微核的测定 [J], 李世勇;赵瑞力2.食管癌患者放射治疗前后外周血淋巴细胞染色体畸变率和微核率的检测及临床意义 [J], 于雷;王铁君;王剑锋;刘丽波;鞠桂芝3.200例放射工作人员外周血微核淋巴细胞率和淋巴细胞微核率检测分析 [J], 杨锡成4.200例放射工作人员外周血微核淋巴细胞率和淋巴细胞微核率检测分析 [J], 杨锡成5.检测癌症患者外周血淋巴细胞微核率和核仁组成区的意义 [J], 邹亚超;李国亮因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

口腔颌面部肿瘤患者外周血淋巴细胞微核的测定
李世勇;赵瑞力
【期刊名称】《现代口腔医学杂志》
【年(卷),期】1995(009)003
【摘要】采用直接离心涂片法对４０例口腔颌面部肿瘤患者和１０名健康人的外
周血淋巴细胞微核率进行测定。

肿瘤患者微核率（‰）为７．６８±２．７０，
其中恶性肿瘤组为８．６８±２．３６，良性肿瘤组为５．３３±１．９２；健康
人为１．６０±０．９７。

经统计学处理，肿瘤组与对照组，恶性肿瘤与良性肿瘤，恶性肿瘤与对照组，良性肿瘤与对照组之间淋巴细胞微核率均有显著性差异（Ｐ〈０．０１）。

提示肿瘤患者染色体畸变明显高于健康人，
【总页数】2页(P132-133)
【作者】李世勇;赵瑞力
【作者单位】不详;不详
【正文语种】中文
【中图分类】R739.802
【相关文献】
1.口腔颌面部肿瘤患者外周血淋巴细胞粘附分子（CD44）测定的初步研究 [J], 常健;韩月献;尹格平;黄迪炎
2.口腔颌面部肿瘤患者外周血淋巴细胞微核的检测 [J], 沐旭升;周宏远
3.淋巴瘤患者外周血大颗粒淋巴细胞及淋巴细胞微核的分析 [J], 黄平;李季蓉;才秀莲
4.肺癌患者外周血淋巴细胞微核测定 [J], 欧阳贵;谢金魁
5.43例门脉性肝硬化(失代偿期)患者外周血淋巴细胞微核测定 [J], 张煜华;王俊杰;连润生
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