实验七+人体外周血淋巴细胞培养

人的外周血淋巴细胞培养及染色体制片方法、染色体组型分析一、实验背景1、Carnoy固定液：固定液的重要特性是能迅速穿透细胞，将其固定并维持染色体结构的完整性，还要能够增强染色体的嗜碱性，达到优良染色效果。

单纯的固定液一般难以达到这些要求，因此在实验中使用两种混合的固定液。

由于Carnoy首先使用的甲醇和冰乙酸混合液而称其为卡诺氏固定液。

Carnoy固定液（甲醇∶冰乙酸=3∶1）每次使用前需临时配制，长时间放置影响固定效果，固定时间15min至24h，冰箱、室温均可。

必要时可改变甲醇和冰乙酸的比例，冰乙酸比例增加，利于细胞膨胀、染色体铺展，但易导致细胞破裂、染色体散失。

2、低渗液（hypotonic solution）低渗液是指渗透压和离子强度均低于正常细胞生理条件的溶液，渗透压低于组织液，与外周血混在一起时，水分迅速进入细胞，使其膨胀，甚至破裂，获得分散良好的染色体分裂象。

常见的低渗液：水、低渗的柠檬酸钠或氯化钠、甘油磷酸钾（0.65mol/L）、氯化钾（0.075mol/L）等。

低渗效果取决于低渗液的化学组成、低渗的温度和处理时间。

低渗处理是凭借反渗透作用使细胞膨胀染色体铺展，同时可使黏附于染色体的核仁物质散开，以便能在一个平面上观察所有染色体形态。

实验室中一般选用0.075mol/L KCl为低渗液，其优点有：①染色体轮廓清楚，可染色性强，染色时间短。

②用于显带染色时能充分显示带型特点。

低渗处理为37℃，25～30min，以预实验条件为准。

2、肝素N-硫酸和艾杜糖醛酸含量较多的一种糖胺聚糖，由D-β-葡糖醛酸(或L-α-艾杜糖醛酸)和N-乙酰氨基葡糖形成重复二糖单位组成的多糖。

肝素是一种抗凝剂，是由二种多糖交替连接而成的多聚体，在体内外都有抗凝血作用。

2、PHA植物血凝素(Phytohaemagglutinin)是一种有丝分裂原，主要用于激活免疫细胞—淋巴细胞。

是一种干扰素诱导剂，不仅可以刺激机体产生白介素-2和干扰素；还可以刺激机体产生非特异性抗体。

人的外周血淋巴细胞培养及染色体制片方法、染色体组型分析人的外周血淋巴细胞培养及染色体制片方法、染色体组型分析一、实验背景1、Carnoy固定液：固定液的重要特性是能迅速穿透细胞，将其固定并维持染色体结构的完整性，还要能够增强染色体的嗜碱性，达到优良染色效果。

单纯的固定液一般难以达到这些要求，因此在实验中使用两种混合的固定液。

由于Carnoy首先使用的甲醇和冰乙酸混合液而称其为卡诺氏固定液。

Carnoy固定液（甲醇∶冰乙酸=3∶1）每次使用前需临时配制，长时间放置影响固定效果，固定时间15min至24h，冰箱、室温均可。

必要时可改变甲醇和冰乙酸的比例，冰乙酸比例增加，利于细胞膨胀、染色体铺展，但易导致细胞破裂、染色体散失。

2、低渗液（hypotonic solution）低渗液是指渗透压和离子强度均低于正常细胞生理条件的溶液，渗透压低于组织液，与外周血混在一起时，水分迅速进入细胞，使其膨胀，甚至破裂，获得分散良好的染色体分裂象。

常见的低渗液：水、低渗的柠檬酸钠或氯化钠、甘油磷酸钾（0.65mol/L）、氯化钾（0.075mol/L）等。

低渗效果取决于低渗液的化学组成、低渗的温度和处理时间。

低渗处理是凭借反渗透作用使细胞膨胀染色体铺展，同时可使黏附于染色体的核仁物质散开，以便能在一个平面上观察所有染色体形态。

实验室中一般选用0.075mol/L KCl为低渗液，其优点有：①染色体轮廓清楚，可染色性强，染色时间短。

②用于显带染色时能充分显示带型特点。

低渗处理为37℃，25～30min，以预实验条件为准。

2、肝素N-硫酸和艾杜糖醛酸含量较多的一种糖胺聚糖，由D-β-葡糖醛酸(或L-α-艾杜糖醛酸)和N-乙酰氨基葡糖形成重复二糖单位组成的多糖。

肝素是一种抗凝剂，是由二种多糖交替连接而成的多聚体，在体内外都有抗凝血作用。

2、PHA植物血凝素(Phytohaemagglutinin)是一种有丝分裂原，主要用于激活免疫细胞—淋巴细胞。

外周血淋巴细胞培养与染色体核型分析一、实验目的（1）、熟悉淋巴细胞体外培养原理。

（2）、掌握人体微量血液体外培养技术。

（3）、通过本次实验掌握制备染色体标本的方法。

（4）、观察人类染色体的形态，并计数、配对、分类和绘图。

（5）、培养学生的自主能力，锻炼学生的动手操作能力。

二、实验原理外周血液中的小淋巴细胞几乎都处在G1期（或Go期）一般情况下是不再分裂的在培养液中加入植物凝血素 (PAH) 时这种小淋巴细胞受刺激转化成为淋巴母细胞随后进入有丝分裂。

这样经过短期培养秋水仙素的处理低渗和固定就可获得大量的有丝分裂细胞。

本方法已为临床医学、病毒学、药理学、遗传毒理学等方面广泛应用。

细胞培养是在体外模拟体内的生理环境，培养从机体中取出的细胞，并使之生存和生长的技术为细胞培养技术。

要使细胞能在体外长期生长，必须满足两个基本要求：一是供给细胞存活所必需的条件，如适量的水、无机盐、氨基酸、维生素、葡萄糖及其有关的生长因子、氧气、适宜的温度，注意外环境酸碱度和渗透压的调节。

二是严格控制无菌条件。

染色体是组成细胞核的基本物质, 是基因的载体。

人类细胞遗传学研究的主要对象是染色体。

本实验采用了微量全血培养技术，既方便又节省人力物力。

在正常情况下, 人外周血中是没有分裂相的, 只有在异常情况下才能发现。

植物血细胞凝集素(PHA) 是人类淋巴细胞有丝分裂的刺激剂,在 PHA 作用下, 原处于 G0期的淋巴细胞转化为淋巴母细胞, 进而进行有丝分裂。

利用 PHA 这一特性, 淋巴细胞经过含有 PHA 培养液培养, 在体外便可获得丰富的含有丝分裂的生长活跃的细胞群体, 终止分裂中期的淋巴细胞, 经过短期培养，秋水仙素的处理，低渗和固定，就可获得大量的中期有丝分裂细胞。

最后经空气干燥法制片，便可得到质量较好的染色体标本。

即可得到所需的人体染色体图形。

染色体组型，又称核型，是指将动物、植物、真菌等的某一个体或某一分类群（亚种、种、属等）的体细胞内的整套染色体，按它们相对恒定的特征排列起来的图像。

实验七+⼈体外周⾎淋巴细胞培养实验五⼈的外周⾎淋巴细胞培养⼀、实验原理外周⾎液中的⼩淋巴细胞，⼏乎都处在G1期(或Go期)，⼀般情况下是不再分裂的，在培养液中加⼊植物凝⾎素(PAH) 时，这种⼩淋巴细胞受刺激转化成为淋巴母细胞，随后进⼊有丝分裂。

这样经过短期培养，秋⽔仙素的处理，低渗和固定，就可获得⼤量的有丝分裂细胞。

本⽅法已为临床医学、病毒学，药理学、遗传毒理学等⽅⾯⼴泛应⽤。

⼆、实验⽬的掌握⼈体微量⾎液体外培养、制备染⾊体标本的⽅法。

三、实验材料⼈的外周⾎。

四、实验器具和药品1．⽤具: 2毫升灭菌注射器，离⼼管，吸管，试管架，量筒，培养瓶，试剂瓶，酒精灯，烧杯，载玻⽚，切⽚盒，天平，离⼼机，恒温培养箱，显微镜。

2．器⽫的清洗和消毒玻璃器⽫在使⽤前，均应⽤肥皂⽔洗刷，清⽔冲净，烘⼲后浸泡在洗液中⾄少2h，再⽤流⽔冲洗，烘⼲待消毒。

将已洗净、烘⼲的玻璃器⽫装⼊铝盒或⽤纸包装，放⼊⼲燥消毒箱内；150℃1h。

隔离⾐、⼝罩。

橡⽪塞，注射⽤针筒等则⽤⾼温⾼压消毒(15磅15min)。

3．药品(1) RPMI“1640”培养基：称取“1640”粉末10.5克，⽤1000ml的双蒸⽔溶解，如溶液出现混浊或难以溶解时，可⽤⼲冰或CO2⽓体处理，如pH值降⾄6.0时，则可溶解⽽透明。

每1000ml溶液加NaHCO，1.0－1.2g，以⼲冰或CO2⽓体校正pH⾄7.0－7.2。

⽴即以5号或6号细菌漏⽃过滤灭菌，分装待⽤。

(2) 肝素：作为抗凝剂使⽤。

称取该粉末160mg(每mg含126U)，⽤40ml的⽣理盐⽔溶解，此溶液的浓度为每ml 500U。

⾼压消毒8磅15min。

(3) 秋⽔仙素：作为有丝分裂的阻⽌剂，它能改变细胞质的粘度；抑制细胞分裂时纺锤体形成，使细胞分裂停留在中期。

称取秋⽔仙素4mg，⽤100ml⽣理盐⽔溶解，⽤6号细菌漏⽃过滤，然后放⼊冰箱4℃保存。

使⽤时⽤1ml注射器吸取该溶液0。

05－0.1ml加⼊5ml的培养物中，其最终浓度为0.4—0.8ug／ml。

人的外周血淋巴细胞培养摘要：正常情况下哺乳动物的外周血中没有分裂相，这是由于外周血中的小淋巴细胞大多处于G0期。

但在一定条件下，外周血中的小淋巴细胞受刺激转化成淋巴母细胞，随后进入有丝分裂。

本实验介绍人外周血淋巴细胞的培养方法，染色体标本的制备和正常人染色体的组型分析。

[1]关键词：外周血淋巴细胞低渗处理空气干燥法染色体组型分析前言：人体外周血细胞培养是制备染色体标本的常用方法。

此方法取材方便，用血量少，操作简便。

1960年Nowell和Morhead验证，使红细胞凝集从而能分离出白细胞的植物凝集素（phytohaemagglutinin，PHA）是人和其他动物淋巴细胞的有丝分裂的刺激剂。

在PHA的作用下，原来处于G0期的淋巴细胞转换为淋巴母细胞，进而进行有丝分裂。

这样经过短期培养，以秋水仙素或其衍生物秋水仙胺进行处理，经过低渗和固定，就可获得大量的处于有丝分裂时期的细胞[2]，因为秋水仙素(或秋水酰胺)可通过干扰微管组装而抑制纺锤丝形成，使细胞分裂顺利进入后期而停滞于中期，从而可在短期积累大量最适于进行染色体分中期分裂相。

此外，秋水仙素还能使染色单体缩短、分开，使染色体呈现明显形而利于辨认。

淋巴细胞经过培养以后，形成了体外活跃生长的细胞群体，经过空气干燥法制片。

所谓空气干燥法，实际上是将细胞经过秋水仙素—低渗处理—充分的固定—滴片等步骤之后再载玻片上得到染色体制片的技术。

有时，有人把滴片的步骤叫做染色体分散，也有人把这一步和随后的干燥称为空气干燥法。

“空气干燥”就是滴片后，不加热或任何处理，使载玻片在室温中自然干燥的方法。

[3]淋巴细胞的培养已成为制备染色体的最主要的方法。

因为该法材料便宜易得，对同一个体可进行连续观察，并可得到优良的染色体制片。

各种因素的作用效应（如病毒、电离辐射、化学试剂等）可在淋巴细胞的培养条件下进行观察，从而可进行多种在体无法进行的研究。

本方法已在临床医学、病毒学、药理学、遗传毒理学等方面广泛应用。

第四大组实验方案外周血淋巴细胞培养及染色体标本制备，染色体组型分析一、实验目的1.了解动物细胞培养的方法。

2.掌握人体外周血淋巴细胞培养与染色体标本制备。

3.学会对人类染色体的组型分析。

二、实验原理所谓外周血培养即是将外周血接种在适当的培养物中加入适量的秋水仙素，使纺锤体微管解聚，这样细胞停留在中期，可以获得大量的分裂细胞。

经过短期的培养后，用低渗盐溶液（一般是0.075mol/L的KCl）处理细胞，使细胞胀大而不破裂使最后的子染色体充分散开，滴片后再以空气干燥法制片，可获得质量较好的染色体标本。

人类外周血细胞几乎都处于G0期和G1期，一般情况不分裂，但在离体培养中，经PHA（植物血球凝集素）刺激后，可转变成可分裂的转化细胞。

核型是指一个细胞内的整套染色体按照一定的顺序排列起来所构成的图像。

通常是将显微摄影得到的染色体照片剪贴而成。

正常的核型能代表个体的核型。

组型是以模式图的方式表示，它是通过多许多细胞染色体的测量取其平均值制成的，是理想的、模式化的染色体组成，代表一物种染色体组型的特征。

染色体的特征以中期最为显著，所以一般都都分析中期分裂相，根据染色体着丝粒位置的不同，可将染色体分为中部着丝粒染色体（m），亚中部着丝粒染色体（sm），亚端部着丝粒染色体（st），端部着丝粒染色体（t）。

对任何一个染色体的基本形态，重要参数有3个：1.相对长度，指单个染色体长度与包括X与Y染色体在内的单倍染色体总长之比，用百分率表示。

2.臂指数，指长臂同短臂的比率。

按Levan（1964）的划分标准，臂指数在1.0~1.7之间的称中部着丝粒染色体；臂指数在1.7~3.0之间称亚中部着丝粒染色体；臂指数在3.0~7.0之间称亚端部着丝粒染色体；臂指数在大于7.0者称端部着丝粒染色体3.着丝粒指数，指短臂占该染色体长度的比，用百分率表示。

他决定着丝粒饿相对位置。

按Levan（1964）的划分标准，着丝粒指数在50%~37.5%之间称中部着丝粒染色体；指数在37.5%~25.0%之间称亚中部着丝粒染色体；指数在25.0%~12.5%之间称亚端部着丝粒染色体；指数在12.5%~0.0%之间者称端部着丝粒染色体。

人的外周血淋巴细胞培养摘要：各种生物的染色体数目是恒定的。

大多数高等动植物是二倍体，每一个体细胞含有两组同样的染色体。

染色体是显微镜下可见细胞有丝分裂过程中出现的结构。

通过本实验掌握人体微量血液体外培养制备染色体标本的方法并学习对人外周血淋巴细胞进行核型分析。

人外周血中的淋巴细胞几乎都在G1期或G0期是不分裂的。

当在离体培养条件下加入植物凝血素（PHA），淋巴细胞受刺激转化为淋巴母细胞，使其恢复增殖能力，随后进入有丝分裂。

经过短期培养，秋水仙素的处理，低渗和固定，就可获得大量的有丝分裂细胞，从而进行核型分析。

通过实验发现：人类每个体细胞有46条染色体，22对常染色体和一对性染色体，男子是46，XY；女子是46，XX。

该方法已为临床医学、病毒学、药理遗传毒理学等方面的广泛应用。

关键词：染色体有丝分裂人的外周血淋巴细胞核型分析要使细胞在体外长期生存，必须模拟体内环境，共给细胞存活所必需的条件。

如供给适量的水、无机盐、氨基酸、维生素、葡萄糖以及有关的生长因子；氧气及适宜的温度；注意调节其外环境的酸碱度（pH）与渗透压；以及为排除细胞代谢产物的危害，保持良好适宜的外环境而进行必需的传代等等。

所有这一切条件与操作都要保持在无菌条件下进行。

外周血淋巴细胞是不能增殖的分化细胞群，在体外无菌培养条件下，若于培养基中植物凝集素(PHA)则可刺激处于G期的淋巴细胞转化为淋巴母细胞，重新有丝分裂的能力，经一段时间的培养即可获得大量分裂期细胞以供染色体分析。

秋水仙素(或秋水酰胺)可通过干扰微管组装而抑制纺锤丝形成，使细胞分裂顺利进入后期而停滞于中期，从而可在短期内积累大量最适于进行染色体分中期分裂相。

此外，秋水仙素还能使染色单体缩短、分开，使染色体呈现明显从而利于辨认。

每一个体细胞含有两组染色体组，一组来自父方，一组来自母方，用2n表示。

其中与性别直接有关的染色体，即性染色体，可以不成对。

每一个配子带有一组染色体叫做单倍体，用n表示，两性配子结合后，具有两组染色体，成为二倍体的体细胞。

人体外周血淋巴细胞培养范文摘要人体外周血液的小淋巴细胞，通常它们都处于G O和G1期，一般情况下是不再分裂的。

但在体外给予一定药物刺激时（如加入植物凝血素PHA），可使血液中的小淋巴细胞受到刺激转变为淋巴细胞，随后进行有丝分裂。

这样经过66～72小时短期培养，秋水仙素处理，低渗处理和固定，就可获得大量有丝分裂的细胞。

这种外周血培养方法是在1960年由Moorhead等人所建立的，已在临床医学、病毒学、药理学、遗传毒理学等方面得到了广泛的应用。

本实验介绍人体外周血淋巴细胞悬浮培养法，人染色体标本的制备和核型分析法。

关键字人外周血淋巴细胞秋水仙素Abstract S mall lymphocytes of human peripheral blood, which are usually in the G O and G1 period，are no longer divided. But if Small lymphocytes are given certain drug stimuli (such as adding lectin PHA ) in vitro, which can make small lymphocytes stimulated into lymphocytes, followed by mitosis. So after small lymphocytes are cultured about 66 ~ 72 hours, handled by colchicine, low permeability and fixed, we can get a great deal of mitotic cell. This peripheral blood culture methods are set by Moorhead in 1960，Which has been widely applied In clinical medicine, pharmacology, toxicology, virology. This experiment will introduce the culture method of small lymphocytes of human peripheral blood, preparation of human chromosomes and the analysis of karyotype.Keywords lymphocytes of human peripheral blood colchicine引言细胞培养技术指的是细胞在体外条件下的生长，在培养过程中细胞不再形成组织（动物）。

人体外周血淋巴细胞培养与染色体组型分析一、实验背景：人类染色体组型分析是将人的一个体细胞有丝分裂中期的染色体，在技术的基础上，按照染色体的大小和形态特征（主要根据着丝点位置），对染色体进行分组、排队和配对。

这对于探索人类遗传病的发病机理，探讨动物和植物的起源，以及物种间的亲缘关系等都具有重要意义。

通过对人类染色体组型进行分析，可以初步学会对染色体进行分析的方法。

二、实验原理1、细胞培养是在体外模拟体内的生理环境，培养从机体中取出的细胞，并使之生存和生长的技术为细胞培养技术。

要使细胞能在体外长期生长，必须满足两个基本要求：一是供给细胞存活所必需的条件，如适量的水、无机盐、氨基酸、维生素、葡萄糖及其有关的生长因子、氧气、适宜的温度，注意外环境酸碱度和渗透压的调节。

二是严格控制无菌条件。

2、染色体是组成细胞核的基本物质, 是基因的载体。

人类细胞遗传学研究的主要对象是染色体。

本实验采用了微量全血培养技术，既方便又节省人力物力。

在正常情况下, 人外周血中是没有分裂相的, 只有在异常情况下才能发现。

植物血细胞凝集素(PHA) 是人类淋巴细胞有丝分裂的刺激剂,在 PHA 作用下, 原处于 G0期的淋巴细胞转化为淋巴母细胞, 进而进行有丝分裂。

利用 PHA 这一特性, 淋巴细胞经过含有 PHA 培养液培养, 在体外便可获得丰富的含有丝分裂的生长活跃的细胞群体, 终止分裂中期的淋巴细胞, 经过短期培养，秋水仙素的处理，低渗和固定，就可获得大量的中期有丝分裂细胞。

最后经空气干燥法制片，便可得到质量较好的染色体标本。

即可得到所需的人体染色体图形。

染色体组型，又称核型，是指将动物、植物、真菌等的某一个体或某一分类群（亚种、种、属等）的体细胞内的整套染色体，按它们相对恒定的特征排列起来的图像。

核型模式图，是指将一个染色体组的全部染色体逐个按其特征绘制下来，再按长短、形态等特征排列起来的图像。

染色体组型分析就是通过对染色体标本和其照片进行测量、对比分析、配对、分组、排列，对各染色体的形态进行分析。

人的外周血淋巴细胞培养摘要：在正常情况下，人外周血淋巴细胞是没有分裂相的，只有在异常情况下才能发现。

植物血球凝集素（PHA）是人类淋巴细胞有丝分裂的刺激剂，在PHA作用下，源出于G0期的淋巴细胞转化为淋巴母细胞，进而进行有丝分裂。

利用PHA的这一特性，淋巴细胞经过含有PHA培养液培养，在体外便可获得丰富的含有丝分裂的生长活跃的细胞群体，终止分裂中期的淋巴细胞便可得到所需要的人体染色体图形。

本实验具有用血量少，操作简单等优点[1]。

关键词：外周血淋巴细胞染色体秋水仙素双抗前言：通过本实验掌握人体外周血离体培养制备染色体标本的方法。

人外周血中的小淋巴细胞几乎都在G1期或G0期，一般情况下是不分裂的。

当在离体培养条件下加入植物凝血素（PHA），小淋巴细胞受刺激转化为淋巴母细胞，随后进入有丝分裂。

经过短期培养，秋水仙素的处理，低渗和固定，就可获得大量的有丝分裂细胞。

细胞遗传学组织培养技术为人类染色体的研究提供了条件。

技术突破主要在于：(1）人体外周血淋巴细胞培养和PHA的应用。

PHA 是从菜豆种子中提取出来的，大量的PHA具有凝血作用。

如果适合，可刺激细胞转为母细胞，从而进行有丝分裂。

(2）秋水仙素的应用。

秋水仙素可阻断纺缍体截止于中期，使染色体个体大，结构清晰，缩短适度，细胞质粘度降低。

(3）低渗处理（水或0.075mlKcl）使红细胞胀破，白细胞胀大，染色体空间变大，易伸展，便于观察[2]。

1设备和药品1.1设备低温冷冻离心机；离心管；精密pH试纸；恒温培养箱；恒温水浴锅；棉花；毛细管；玻璃棒；烧杯；载玻片；培养瓶；采血针；冰柜1.2药品RPMI“1640”粉末；NaHCO3粉末；肝素；秋水仙素；植物凝血素（PHA）；青霉素；链霉素；姬姆萨粉末；0.1mol/L磷酸缓冲液；生理盐水；KCl低渗液；蒸馏水；纯甘油；甲醇；酒精2方法2.1药品制备2.1.1 RPMI“1640”培养基：是一种综合培养基，称取“1640”粉末1.05g,用100mL的蒸馏水溶解，如溶液出现浑浊或难以溶解时，可用干冰或CO2处理，如pH值降至6.0时，则可溶解而透明。

西南大学《细胞生物学自主实验》课程论文论文题目：人体外周血淋巴细胞培养与染色体核型分析学院：生命科学学院专业：生物科学年级班级：2010级5班校区编码：北区姓名：陈建坤二零一二年十二月四日人体外周血淋巴细胞培养与染色体核型分析【摘要】：染色体是遗传物质的载体，它具有贮存和传递DNA、控制基因活动和调整基因重组的作用。

本文着重介绍通过对人体外周血淋巴细胞培养与染色体核型分析，初步了解到对人体外周血淋巴细胞培养方法与人类体细胞染色体核型分析的方法。

该实验采用人工离体培养的方法，采集人体外周血淋巴细胞，在加有植物血球凝集素（PHA，刺激小淋巴细胞转化为淋巴母细胞而进行有丝分裂）的培养基中培养。

经过（72±2）恒温培养，秋水仙素处理、低渗和固定，获得大量有丝分裂中期细胞。

最后经过空气干燥法制片，对人体外周血淋巴细胞进行染色体核型分析。

【关键字】：人体外周血淋巴细胞染色体核型人工离体培养一．引言:染色体是遗传物质的载体，它具有贮存和传递DNA、控制基因活动和调整基因重组的作用。

人类染色体核型分析是将人的一个体细胞有丝分裂中期的染色体，在技术的基础上，按照染色体的大小和形态特征（主要根据着丝点位置），对染色体进行分组、排队和配对。

这对于探索人类遗传病的发病机理，探讨动物和植物的起源，以及物种间的亲缘关系等都具有重要意义。

直到上世纪50年代，科学家对染色体本身的细致深入研究才成为可能。

染色体组型分析是细胞遗传学研究的基本方法，是研究物种演化、分类以及染色体结构、形态与功能之间，人类G显带核型图谱关系所不可缺少的重要手段。

1952年徐道觉用低渗法使细胞膨胀，使染色体充分分散开来。

1956年，Tjio等用秋水仙素使细胞分裂固定在分裂中期，增加了细胞分裂相。

之后，有科学家建立了人体外周血培养法，使得染色体取材变得更加容易，大大推动了人类对染色体的研究。

二．人体外周血淋巴细胞培养与染色体核型分析1.实验依据：.细胞培养是在体外模拟体内的生理环境，培养从机体中取出的细胞，并使之生存和生长的技术为细胞培养技术。

人外周血淋巴细胞微核测定一、实验原理:人外周血淋巴细胞大都处于细胞周期的G 0期，在含有PHA 的培养基中进行体外培养后，原来处于G 0期的淋巴细胞可转化为淋巴母细胞，恢复分裂能力。

在细胞分裂过程中，由于化学物质或辐射作用影响，可以引起淋巴母细胞染色体损伤，致使染色体断裂，无着丝粒的染色体断片不能随染色体移动进入子细胞核，结果在细胞质中形成微核。

本试验是一种体外测试有害因子遗传毒性的方法，通过在人类外周血淋巴细胞体外培养过程中加入受试物，检测细胞微核情况来评价受试物的遗传毒性。

同时也成为检测致突变、致癌、致畸物质对机体遗传效应的一种重要手段。

二、验用品（1）器材：离心管、注射器、培养瓶（10ml ）、吸管、离心机、载玻片、冰箱、培养箱、恒温水浴箱。

（2）试剂：Giemsa 染液、pH6.8磷酸缓冲液、RPMI1640培养液、PHA 溶液、0.075mol ／L KCl溶液、甲醇:冰醋酸固定液（3）材料：人外周血、环磷酰胺溶液。

三、实验步骤1、按人类外周血染色体培养常规方法采血、接种，按组分别加入受试物（CP 终浓度100ug/ml）培养72小时，收获前不用加秋水仙素，收获标本，离心，去上清液。

2、低渗：加入0.075mol ／L KCl溶液4m1。

混匀后放入37℃恒温水浴箱中低渗处理10分钟。

低渗时间可根据预实验中细胞完整程度进行调整。

3、预固定：低渗结束后加入甲醇·冰乙酸（3:1）固定液lml ，混匀后离心（1000rpm ）5分钟。

4、固定：弃上清液，加入5ml 固定液，混匀后离心（1000rpm ）5分钟。

弃上清液，留沉淀物。

可按本方法再固定一次。

5、滴片：加入少量固定液混匀成细胞悬液，滴片。

6、染色：用Giemsa 染液染色10分钟。

自来水细水冲洗后，晾干。

7、观察与计数：先以低倍镜、高倍镜粗检，选择细胞分散均匀，染色良好的区域，转到油镜下观察转化的淋巴细胞，进行微核的观察和计数。

外周血淋巴细胞培养的原理《外周血淋巴细胞培养的原理，我可太有话说啦》嘿，你要是跟我提外周血淋巴细胞培养的原理，那我可就来精神了。

这事儿啊，就像种小植物似的，可有趣了。

咱先说说这外周血淋巴细胞是啥。

这就好比是一群小小的“士兵”在我们身体的血液这个“大战场”里巡逻呢。

它们个儿小小的，但是作用可大了。

有一回啊，我去医院抽血，看到那细细的针头扎进胳膊里，血就那么流出来了，当时就想，这里面可藏着好多淋巴细胞这些小宝贝呢。

那怎么培养它们呢？首先得有个合适的环境，就像咱们人住房子得挑舒服的地儿一样。

这个环境啊，有专门的培养液，那培养液就像是为淋巴细胞特制的“营养粥”。

里面有各种各样的营养成分，像氨基酸啊，葡萄糖啊啥的。

我记得我有次看实验员在准备培养液的时候，那瓶瓶罐罐的可多了。

他拿着小量杯，小心翼翼地量着各种东西，那认真的样子就像在做一件超级精细的艺术品。

然后呢，还得调节好温度和酸碱度。

温度就像是给淋巴细胞盖的被子，不能太热也不能太冷。

就像咱人一样，太热了会出汗难受，太冷了就会冻得打哆嗦。

酸碱度也很重要，要是太酸或者太碱了，淋巴细胞就像住在一个充满怪味的房子里，肯定不乐意生长了。

我曾经不小心把一滴酸液滴到了一个测试酸碱度的试纸上，那试纸一下子就变了颜色，可明显了，这就说明酸碱度变化对环境影响可大了。

接着就是让淋巴细胞在这个舒适的环境里开始分裂繁殖啦。

这就像是小细胞们开始生小宝宝一样。

它们会从一个变成两个，两个变成四个，慢慢地越来越多。

在这个过程中，它们会进行一系列复杂的变化，就像小魔法一样。

我在显微镜下看过一次淋巴细胞的样子，小小的、圆圆的，在培养液里慢悠悠地晃悠着，当时就觉得它们可真神奇。

而且啊，为了让它们长得更好，有时候还得加点刺激物呢。

这刺激物就像是给淋巴细胞的一个小鼓励，告诉它们：“嘿，小细胞们，加油生长呀！”不过这刺激物可不能乱加，就像给人吃药得按照剂量来一样。

你看，外周血淋巴细胞培养就是这么一回事儿。

西南大学《细胞生物学自主实验》课程论文论文题目：人体外周血淋巴细胞培养与染色体核型分析学院：生命科学学院专业：生物科学年级班级：2010级5班校区编码：北区学号：2228姓名：陈建坤二零一二年十二月四日人体外周血淋巴细胞培养与染色体核型分析10级生科5班3组陈建坤学号：2228【摘要】：染色体是遗传物质的载体，它具有贮存和传递DNA、控制基因活动和调整基因重组的作用。

本文着重介绍通过对人体外周血淋巴细胞培养与染色体核型分析，初步了解到对人体外周血淋巴细胞培养方法与人类体细胞染色体核型分析的方法。

该实验采用人工离体培养的方法，采集人体外周血淋巴细胞，在加有植物血球凝集素（PHA，刺激小淋巴细胞转化为淋巴母细胞而进行有丝分裂）的培养基中培养。

经过（72±2）恒温培养，秋水仙素处理、低渗和固定，获得大量有丝分裂中期细胞。

最后经过空气干燥法制片，对人体外周血淋巴细胞进行染色体核型分析。

【关键字】：人体外周血淋巴细胞染色体核型人工离体培养一．引言:染色体是遗传物质的载体，它具有贮存和传递DNA、控制基因活动和调整基因重组的作用。

人类染色体核型分析是将人的一个体细胞有丝分裂中期的染色体，在技术的基础上，按照染色体的大小和形态特征（主要根据着丝点位置），对染色体进行分组、排队和配对。

这对于探索人类遗传病的发病机理，探讨动物和植物的起源，以及物种间的亲缘关系等都具有重要意义。

直到上世纪50年代，科学家对染色体本身的细致深入研究才成为可能。

染色体组型分析是细胞遗传学研究的基本方法，是研究物种演化、分类以及染色体结构、形态与功能之间，人类G显带核型图谱关系所不可缺少的重要手段。

1952年徐道觉用低渗法使细胞膨胀，使染色体充分分散开来。

1956年，Tjio等用秋水仙素使细胞分裂固定在分裂中期，增加了细胞分裂相。

之后，有科学家建立了人体外周血培养法，使得染色体取材变得更加容易，大大推动了人类对染色体的研究。

二．人体外周血淋巴细胞培养与染色体核型分析1.实验依据：1.1.细胞培养是在体外模拟体内的生理环境，培养从机体中取出的细胞，并使之生存和生长的技术为细胞培养技术。

人体外周血淋巴细胞培养与染色体制备[适用对象] 生物工程专业[实验学时] 6学时一、实验目的1、了解动物细胞培养的方法。

2、掌握人体外周血淋巴细胞培养与染色体标本制备。

二、实验原理所谓外周血培养即是将外周血接种在适当的培培养物中加入适量的秋水仙素，使纺锤体微管解聚，这样细胞停留在中期，可以获得大量的分裂细胞。

用低渗盐溶液（一般是0.075mol/L的KCl）处理，使其中的红细胞及分裂相细胞膜和一部分细胞质除去，最后以气干法制片，可获得较好的染色体养基中进行培养。

人类外周血细胞本来是终末分化细胞，一般没有分裂能力，但经PHA（植物血球凝集素）或ConA等药物刺激后，转变成可分裂的转化细胞。

向标本。

三、仪器设备显微镜，离心机，水浴箱，温箱，锥形离心管，毛细滴管，量简，烧杯，培养瓶，冷湿载玻片，玻片架，注射器，碘酒和酒精棉球，酒精灯，定时钟，天平。

四、相关知识点（一）细胞培养技术1、在体外模拟体内的生理环境，培养从机体中取出的细胞，并使之生存和生长的技术为细胞培养技术。

由于体外培养的细胞缺乏机体抗感染功能，所以在一切操作中要努力做到最大限度的无菌，防止污染。

2、无菌操作的要领和要求1）培养前准备为做好培养前用品的充分准备工作，根据实验内容的要求收集好已消毒的所需用品，清点无误后置于超净工作台内，这样可避免操作开始后由于用品不全、往反取物而增加污染机会。

2）超净工作台消毒打开紫外线杀菌灯照射消毒20-30分钟，然后关闭紫外灯打开风机，流入的空气是经过除菌板过滤的空气，工作台内可保持无菌环境。

为防止培养细胞和培养液等受到紫外线照射，消毒前应予先放在带盖容器内或在操作时随手携入。

3）洗手操作时因整个前臂要伸入超净工作台内，所以洗手时，一定要洗刷到肘部，然后用0.2% 新洁尔灭擦洗或用75%酒精棉球擦试。

4）火焰消毒在超净工作台无菌环境中操作时，首先要点燃酒精灯，此后一切操作如安装吸管橡皮头、打开或加盖瓶塞、使用吸管等都要经过火焰烧灼，或在近火焰处进行。