醋酸纤维素薄膜电泳法

醋酸纤维素薄膜电泳原理醋酸纤维素薄膜电泳是一种常见的电泳技术，它利用醋酸纤维素薄膜作为分离介质，将带电粒子在电场作用下进行分离。

其原理如下：1. 醋酸纤维素薄膜制备首先需要制备醋酸纤维素薄膜。

通常采用将醋酸纤维素溶解于有机溶剂中，然后涂布在玻璃板或硅片上，通过挥发有机溶剂使得溶液中的醋酸纤维素形成均匀的薄膜。

2. 薄膜上形成静电场接着，在制备好的醋酸纤维素薄膜上形成一个静电场。

通常使用高压直流电源将两个金属极板连接到两端，然后将极板放置在离玻璃板或硅片一定距离的位置上。

这样就可以在玻璃板或硅片表面形成一个强大的静电场。

3. 样品准备样品需要经过处理才能进行分离。

通常需要将样品溶解在缓冲液中，并加入适量的表面活性剂以保持样品的稳定性。

此外，还需要将样品进行染色以便于观察。

4. 样品注入将处理好的样品注入到醋酸纤维素薄膜上，让其在静电场作用下进行分离。

通常使用注射器或微量泵进行样品注入。

5. 分离过程在静电场作用下，带电粒子会受到电场力的作用，向着极板移动。

不同大小、不同电荷的粒子会受到不同的力，从而发生分离。

这个过程需要一定时间，通常需要几十分钟到几小时才能完成。

6. 结果分析通过观察醋酸纤维素薄膜上的色带可以得到分离结果。

不同大小、不同电荷的粒子会形成不同位置和形状的色带。

通过比对标准样品可以确定待测物质的种类和浓度。

总之，醋酸纤维素薄膜电泳是一种基于静电场作用下带电粒子分离原理的技术。

它具有高效、高灵敏度、高分辨率等优点，被广泛应用于生物学、化学、环境科学等领域。

各种蛋白质由于氨基酸组成、分子量、等电点 及形状不同，在电场中的迁移速度不同。 以醋酸纤维素薄膜为支持物，正常人血清在 pH8.6的缓冲体系中电泳，染色后可显示5条主 要区带。其中清蛋白的泳动速度最快，其余依 次为α1-、α2-、β-及γ-球蛋白。
三、实验材料
醋酸纤维薄膜（2×8 cm） 镊子
5. 放薄膜的时候毛面朝下，要注意放平，与 滤网充分接触，但不要接触点样端。 6. 电泳时应选择合适的电流强度，一般电流 强度为0.4～0.6mA/cm膜宽度。电流强度高， 则热效应高；电流过低，则样品泳动速度慢 且易扩散。
7. 操作过程为防止指纹污染，应戴手套。
采用醋酸纤维薄膜作为支持物的电泳方法称为 醋酸纤维素薄膜电泳。
醋酸纤维素薄膜具有均一的泡沫状的结构，厚 度约为120 μm，有很强的通透性，对分子移动 阻力很小，该法具有微量、快速、简便、分辨 力高，对样品无拖尾和吸附现象等优点。
本实验以醋酸纤维素为电泳支持物，分离各种 血清蛋白。
血清中各主要蛋白质的等电点均低于pH8.6， 在该缓冲液中均带负电荷，在电场中向正极移 动。血清中含有清蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白、 γ-球蛋白和各种脂蛋白等。
2. 点样时，应将薄膜表面多余的缓冲液用滤纸 吸去，以免引起样品扩散。但不宜太干，否则 样品不易进入膜内，造成点样起始点参差不起， 影响分离效果。
3. 点样时，点样不要过多，恰到好处，动作 要轻、稳，用力不能太大，以免损坏膜片或 印出凹陷影响电泳区带分离效果。 4. 醋酸纤维素薄膜电泳常选用pH8.6巴比妥－ 巴比妥钠缓冲液,其浓度为0.05～0.09 mol/L。 (选择何种浓度与样品和薄膜的厚薄有关。缓 冲液浓度过低，则区带泳动速度快区带扩散 变宽；缓冲液浓度过高，则区带泳动速度慢， 区带分布过于集中，不易分辨。)

血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳一、实验目的1. 掌握醋酸薄膜电泳的原理及操作。

2. 定量测定人血清中各种蛋白质的相对百分含量。

二、原理采用醋酸纤维薄膜为支持物的电泳方法, 叫做醋酸纤维素薄膜电泳。

醋酸纤维素, 是纤维素的羟基乙酰化所形成的纤维素醋酸酯。

将它溶于有机溶剂（如: 丙酮、氯仿、氯乙烯、乙酸乙酯等）后, 涂抹成均匀的薄膜则成为醋酸纤维素薄膜。

该膜具有均一的泡沫状的结构, 有强渗透性, 厚度约为120μm。

醋酸纤维素薄膜电泳是近年来推广的一种新技术。

它具有微量、快速、简便、分辨力高、对样品无拖尾和吸附现象等优点。

该技术已广泛应用于血清蛋白、糖蛋白、脂蛋白、结合球蛋白、同功酶的分离和测定等方面。

目前, 醋酸纤维薄膜电泳趋向于代替纸电泳。

三、操作方法一、仪器和薄膜的准备1. 醋酸纤维素薄膜的润湿的选择: 将薄膜小心地放入盛有缓冲液的培养皿内, 使它漂浮在液面。

若迅速润湿, 整条薄膜色泽深浅一致, 则表明薄膜质地均匀；若润湿时, 薄膜上出现深浅不一的条纹或斑点等, 则为薄厚不匀的薄膜。

实验中应选用质地均匀的薄膜。

因为, 纤维素薄膜的质量对电泳的结果影响很大。

例如, 膜厚薄不均可以造成区带歪扭不齐、各区带界限不情、背景脱色困难、实验结果难于重复等现象。

将选用的薄膜用镊子轻压, 使它全部浸入缓冲液内, 待膜完全浸透（约半小时）后取出, 夹在清洁的滤纸中间, 轻轻吸去多余的缓冲液, 同时分辨出光泽面和无光泽面。

2．制作“滤纸桥”：剪裁尽寸合适的滤纸条。

取双层附着在电泳槽的支架上, 使它的一端与支架的前沿对齐, 而另一端浸入电泳槽的缓冲液内。

然后, 用缓冲液将滤纸全部润湿并驱除气泡, 使滤纸紧贴在支架上, 即为“滤纸桥”。

按照同样的方法, 在另一个电泳槽的支架上制作相同的“滤纸桥”。

二、点样在薄膜无光泽的一面点样。

点样区距负极端1.5㎝处。

点样时, 先用血色素吸管将2～3微升的血清均匀地涂在点样器表面, 再用点样器“印”在薄膜的点样区内（见图4－1）。

醋酸纤维素薄膜电泳
醋酸纤维素薄膜电泳是一种高效、快速和准确的分离和鉴定分子的技术。

这种技术被广泛应用于生物化学、医学、环境科学等领域。

醋酸纤维素薄膜电泳是一种基于毛细管电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳的分离技术。

该技术将醋酸纤维素质地的薄膜作为分离介质，样品通过电泳移动分离在薄膜的表面。

这种技术具有高分辨率、高灵敏度、高通量和半制备规模的优点。

醋酸纤维素薄膜电泳技术的应用范围广泛，包括但不限于以下方面：
1、蛋白质分离和鉴定。

醋酸纤维素薄膜电泳技术可以对蛋白质进行高分辨率的分离和鉴定，对于寻找新的蛋白质、筛选生物标志物和新药物的作用非常重要。

2、核酸分离和鉴定。

醋酸纤维素薄膜电泳技术还可以高效地分离和纯化核酸，对于对基因筛选和遗传学研究非常重要。

3、药物分析和质量控制。

对于药物制剂的分析和质量控制，醋酸纤维素薄膜电泳技术可以快速准确地检测出药物中的有效成分和有害成分。

4、环境分析。

醋酸纤维素薄膜电泳技术也可以用于环境分析，例如分析水体中的有机物和无机物质。

在应用这种技术时，需要注意以下几点：
1、选择合适的样品前处理方法，以保证样品的纯度和完整性。

2、选择合适的运行条件，如电场强度、分离介质pH值、电泳时间等，以获得最佳的分离效果。

3、选择合适的检测方法，如荧光检测、吸收光谱检测等，以达到最优的检测灵敏度和选择性。

总之，醋酸纤维素薄膜电泳技术在生物化学、医学、环境科学等领域中具有广泛的应用前景。

我们需要不断地探索和创新，以推动这种技术的发展和应用。

血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验结果讨论及注意事项血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验是一种常见的蛋白质分离和分析方法。

这种方法基于蛋白质在电场中的迁移速度差异，可以实现对蛋白质的定性和定量分析。

在进行这种实验时，需要注意一些实验操作步骤和技巧，以确保实验结果的准确性和可靠性。

实验步骤1.准备样品：从血清中提取要分析的蛋白质样品。

可使用丙酮、醋酸等溶液进行样品的处理和稀释。

2.制备凝胶：将醋酸纤维素膜在磁盘上进行切割，将膜放入电泳槽中，加入足够的电泳缓冲液。

3.电泳条件：确定好电泳槽内电泳缓冲液的pH值和离子浓度，根据蛋白质的性质确定最佳的电泳条件，如电场强度、电泳时间等。

4.上样：在预定位置上样，可使用微量注射器将样品滴于凝胶表面。

5.打开电源：连接电极，通电进行电泳。

电泳时间根据分析的需要进行调整。

6.固定凝胶：停止电泳后，将凝胶取出，固定和染色。

7.分析：在透明胶支架上对凝胶进行扫描，记录下蛋白质的电泳迁移图像。

实验结果讨论：1.蛋白质的分离：根据电泳上样区域蛋白质的迁移速率和位置，可以对样品中的蛋白质进行定性和定量分析。

根据蛋白质之间的迁移时间差异，可以推测出它们在电场中的相对电荷、分子大小和电泳迁移速率等信息。

2.蛋白质的鉴定：可以通过与已知蛋白质标准品的电泳迁移对照来鉴定样品中蛋白质的种类和含量。

也可以通过进一步的染色技术，如银染、荧光染色等，增强或显示蛋白质带的清晰度，从而更准确地分析样品中蛋白质的种类和富集。

3.实验重复性和稳定性：为了保证实验结果的可靠性，一般需要对实验进行多次重复操作，计算其平均值和标准差。

同时也需要控制实验条件的稳定性，包括电泳缓冲液的配制、电场强度的控制、电泳时间的准确计时等。

确保实验操作的一致性可以降低测定误差。

注意事项：1.实验操作：操作时需佩戴手套，避免样品受到外界污染，减少实验误差。

仔细熟悉实验步骤和操作要求，确保操作正确。

2.样品制备：样品提取和制备过程中需要严格控制温度、pH值和时间等因素，以保证样品质量的一致性。

清蛋白 前清蛋白
制备。
临床意义：
白蛋白：主要在肝脏合成，所以与肝脏疾患密切相关。
α球蛋白的增加与发热有关，与炎症有关。 β球蛋白增加常伴随血中脂质的增加。
γ球蛋白含有抗体成分，在许多慢性感染、免疫性疾病中有异常。
例如：多发性骨髓瘤病人在β球蛋白与γ球蛋白之间出现一个尖峰：M蛋白
肝硬化病人γ球蛋白增加，白蛋白降低。
红蛋白、球蛋白、脂蛋白、糖蛋白、甲胎 蛋白、类固醇及同工酶等。它具有简单快
-球蛋白
-球蛋白
速、对蛋白质样品吸附极少，无“拖尾”
现象，染色后蛋白质区带更清晰等优点， 电渗作用虽然较高但很均一 ，不影响样
品的分离效果。不足之处是分辨率比聚丙
烯酰胺凝胶电泳低，由于薄膜厚度小（约 10～100μm），样品用量很少，不适于
思考题
P2：1、2、3
预习：实验五、六
• 凝胶层析分离蛋白质混合物的原理？何谓分子筛
效应？ DNS—氨基酸的双向聚酰胺薄膜层析中，各种氨 基酸是怎样得到分离？
•
血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳
——根据迁移率分离
操作步骤
标记 用铅笔在薄膜无光泽面(毛面)一端2cm处
轻画一细线 ，并在右上角做好标记。
浸泡 将醋酸纤维素薄膜毛面向下，在缓冲溶液中浸泡，使其充分浸透。 点样
用镊子将薄膜置于滤纸上，吸收多余的液体(不要太干），利用载玻片 一侧蘸取样品，45度角于毛面细线处点样。
(有效长度)
设：混合物中有A、B两物质：
• 物质A在电场中移动的距离为: dA= AVt/l
物质B的移动距离为：dB= BVt/l 则两物质移动距离之差为： Δd=(dA-dB)=(A-B)Vt/l 即：物质A、B能否分离取决于两者的迁移率

醋酸纤维素薄膜电泳法
试剂（1)巴比妥缓冲液(pH8.6) 称取巴比妥2.76g、巴比妥钠15.45g，加水溶解使成1000ml。

（2)氨基黑染色液称取氨基黑10B 0.5g，溶于甲醇50ml、冰醋酸10ml及水40ml的混合液中。

（3)漂洗液量取乙醇45ml、冰醋酸5ml及水50ml，混匀。

（4)透明液量取冰醋酸25ml、无水乙醇75ml，混匀。

测定法取醋酸纤维素薄膜，裁成2cm×8cm膜条，将无光泽面向下，浸入巴比妥缓冲液(pH8.6)中,待完全浸透，取出夹于滤纸中，轻轻吸去多余的缓冲液后，将膜条无光泽面向上，置含巴比妥缓冲液(pH8.6)的电泳槽架上，通过滤纸桥浸入巴比妥缓冲液(pH8.6)中。

于膜条上距负极端2cm处，条状滴加蛋白含量约5％的供试品溶液2～3μl,在0.4～0.6mA/cm［总电流量=电流量(mA/cm)×每条膜的宽度（cm）×膜条数］电流条件下电泳；同时取新鲜人血清作对照，电泳时间以白蛋白与丙种球蛋白之间的电泳展开距离约2cm为宜。

电泳完毕，将膜条取下浸于氨基黑或丽春红染色液中，2～3分钟后，用漂洗液浸洗数次，直至脱去底色为止。

将洗净并完全干燥的膜条浸于透明液中，待全部浸透后，取出平铺于洁净的玻板上，干燥后即成透明薄膜，可供测定纯度和作标本长期保存。

将干燥的醋酸纤维素薄膜用色谱扫描仪采用反射（未透明薄膜）或透射（已透明薄膜）方式在记录器上自动绘出各蛋白组分曲线图，以人血清作对照，按峰面积计算各蛋白组分的含量(%)。

附注：采用全自动电泳仪操作时，参考仪器使用说明书进行。

醋酸纤维素薄膜电泳实验报告引言：薄膜电泳是一种常用的分离和分析技术，它在生物医学、环境科学等领域得到广泛应用。

本实验旨在研究醋酸纤维素薄膜电泳的原理、操作步骤以及其在分离和分析中的应用。

一、醋酸纤维素薄膜电泳的原理醋酸纤维素薄膜电泳是利用醋酸纤维素薄膜作为分离介质，通过电泳电流的作用将待测物质分离出来的一种技术。

醋酸纤维素薄膜具有良好的电泳分离性能和化学稳定性，能够有效地分离样品中的离子或分子。

二、实验操作步骤1. 制备醋酸纤维素薄膜：将醋酸纤维素溶解于醋酸乙酯中，制备成一定浓度的醋酸纤维素溶液。

然后将溶液滴在玻璃基板上，待其自然干燥形成薄膜。

2. 准备电泳缓冲液：按照实验要求，配置适当浓度和pH值的电泳缓冲液。

3. 将待测样品加入电泳缓冲液中，并进行样品处理。

4. 将制备好的醋酸纤维素薄膜放置在电泳槽中，注入电泳缓冲液。

5. 将带电样品加入电泳槽中，通过施加电场，使样品在醋酸纤维素薄膜上进行电泳分离。

6. 根据实验要求，确定分离时间，停止电泳，取出醋酸纤维素薄膜。

7. 对分离的样品进行染色或检测，得到分离结果。

三、醋酸纤维素薄膜电泳的应用醋酸纤维素薄膜电泳在生物医学、环境科学等领域具有广泛的应用价值。

1. 生物医学应用：醋酸纤维素薄膜电泳可用于分离和检测生物样品中的蛋白质、核酸等生物大分子，对于研究基因表达、疾病诊断等具有重要意义。

2. 环境科学应用：醋酸纤维素薄膜电泳可用于水质和大气污染物的分析，能够对污染物进行快速、高效的分离和测定，为环境监测和治理提供了有效手段。

3. 食品安全应用：醋酸纤维素薄膜电泳可用于食品中有害物质的检测和分离，如农药残留、重金属等，为食品安全保障提供了技术支持。

结论：醋酸纤维素薄膜电泳是一种重要的分离和分析技术，具有广泛的应用前景。

本实验通过制备醋酸纤维素薄膜，利用电泳原理对待测样品进行分离和分析，研究了醋酸纤维素薄膜电泳的操作步骤及应用。

该技术在生物医学、环境科学和食品安全等领域具有重要意义，能够为相关领域的研究和实践提供有效的技术支持。

血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳，是一种分析和测定蛋白质的方法。

下面将介绍一些相关的参考内容，以帮助您更深入了解这一方法。

1. 应用和原理血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳（SER-PAGE）是一种常用的蛋白质电泳分析方法，可以用于分离和检测血清蛋白及其亚类。

其原理是基于蛋白质在电场中的迁移速率与其电荷质量比有关。

在薄膜电泳中，蛋白质样品在醋酸纤维素薄膜上进行电泳分离，然后通过染色等方法进行定量或定性分析。

2. 薄膜电泳装置和操作步骤薄膜电泳装置包括电源、原电极、测电极、薄膜和样品槽。

操作步骤通常包括制备样品和电解液，加载样品和电解液到薄膜中，接通电源，进行电泳分离，然后进行染色和分析。

3. 应用领域SER-PAGE广泛应用于生物化学、生物医药和临床诊断等领域。

在生物化学中，SER-PAGE可用于研究蛋白质结构与功能的关系。

在生物医药中，SER-PAGE可用于血清蛋白分析、监测蛋白质药物的纯度和一致性。

在临床诊断中，SER-PAGE可用于检测血清中的异常蛋白质，辅助癌症、心脏和免疫系统相关疾病的诊断。

4. SER-PAGE与其他电泳方法的比较相比较传统的PAGE方法，SER-PAGE具有操作简单、不需要注入胶、迁移速度快等优点。

与SDS-PAGE相比，SER-PAGE适用于纯化量较小的样品，并且对样品中的蛋白质亚基分离效果更好。

与凝胶电泳相比，SER-PAGE不需要特殊仪器设备，成本较低。

5. 发展趋势与进展SER-PAGE作为一种传统的电泳技术，仍在不断发展和改进。

比如，一些新的薄膜材料和成像技术的引入，使得分离和检测的灵敏度得到提高。

同时，一些研究也在调整电解液组成和pH值，以优化蛋白质的分离和迁移。

总结起来，血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳是一种广泛应用于蛋白质分离和分析的方法。

通过了解其原理、操作步骤和应用领域，可以更好地理解和应用这一技术。

随着技术的不断进步和改进，SER-PAGE有望在生物化学、生物医药和临床诊断等领域发挥更大的作用。

醋酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白原理和实验方法一、原理醋酸纤维薄膜电泳是用醋酸纤维素薄膜作为支持物的电泳方法。

带电颗粒在电场力作用下，向着与其电性相反的电极移动的现象称为电泳。

由于各种蛋白质都有特定的等电点，如将蛋白质置于pH值低于其等电点的溶液中，则蛋白质将带正电荷而向负极移动。

反之，则向正极移动。

因为蛋白质分子在电场中移动的速度与其带电量、分子的形状及大小有关，所以，可用电泳法将不同的蛋白质分离开来。

血清中含有多种蛋白质，它们的等电点都在pH 7.5以下。

将血清放于pH 8.6的缓冲液电泳时，所有的血清蛋白都带有负电荷，在电场中将向正极移动。

由于各种血清蛋白在相同pH时所带电荷数量不等，分子颗粒大小不一，因而泳动速度不同，经电泳被分离开来。

血清蛋白质的等电点和分子量见下表。

本实验以醋酸纤维素薄膜（简称CAM）为支持物分离血清中的不同蛋白质。

它是一种良好的呈均一泡沫状疏松薄膜，厚约120μm具有一定的吸水性。

二、实验材料、仪器及试剂1．材料：健康人血清或鸡血清2．仪器：电泳仪电泳槽3．试剂：（1）醋酸纤维素薄膜；（2）pH8.6 巴比妥缓冲液（离子强度0.06～0.07）：取巴比妥0.83克，巴比妥钠6.38克，加蒸馏水加热溶解后，定容至500ml。

（3）染色液：取氨基黑10 B 0.5克，溶于50ml甲醇中，再加冰醋酸10ml，蒸馏水40ml混匀。

（4）漂洗液：95%乙醇4.5ml，冰醋酸 5ml，蒸馏水50ml混合。

（5）透明液：95%乙醇80ml，冰醋酸20ml混合。

三、实验方法1．准备薄膜：将切割整齐的2.5×6cm的薄膜条，浸入巴比妥缓冲液中浸透后，取出，用吸水纸吸去多余缓冲液。

2．点样：仔细辩认薄膜的粗糙面与光滑面，在粗糙面距离薄膜一端1.5cm处，用铅笔轻轻划一条直线。

用玻棒蘸上血清样品，涂于盖玻片边缘处（边缘长度应比膜条宽度窄），将此边缘按压在直线上。

注意：样品应点在薄膜的粗糙面一侧。

• 4. 染色
取出纤维薄膜——放于培养皿染色液中染 色10min.
• 5. 漂洗
取出纤维薄膜——放在漂洗液中漂洗数 次——漂洗到可见色带清晰的电泳图谱。
• 6. 定量测定
• 2 点样：
• 取出2块载玻片——分别滴一滴血清蛋 白A和血清蛋白B——然后用盖玻片的平边 取样（注意均匀）——然后轻轻的在纤维 薄膜的铅笔横线上点样（注意要轻）
• 3 电泳：
• 在电泳槽中搭建好滤纸桥——倒入缓冲 液（注意两边液面高度一致）——将纤维 薄膜架于桥上（点样端靠近负极，点样面 朝下）——接好导线——调节电泳仪参 数——电泳30min
• 醋酸纤维薄膜电泳是用醋酸纤维薄 膜作为支持物的电泳方法。
• 醋酸纤维薄膜由二乙酸纤维素制成，ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ它具有均一的泡沫样的结构，有强渗透 性，对分子移动无阻力，作为区带电泳 的支持物进行蛋白电泳有简便、快速、 样品用量少，应用范围广，分离清晰， 没有吸附现象等优点。
二 实验步骤
• 1. 浸泡
用镊子取醋酸纤维薄膜1张——分别 光泽面和粗糙面——然后在粗糙面离 边缘2cm处用铅笔轻轻的画一条与边 缘平行的直线（为了点样方便）—— 然后将薄膜放在巴比妥缓冲液中浸泡 20min——用镊子取出纤维薄膜——y 用滤纸吸干——平置于载玻片上（粗 糙面朝上）

实验操作
1. 电泳槽的准备
电泳槽有两个互相隔离的槽，各自装有缓冲 液，接不同的电极，红色为正极，黑色为负极。 每个槽上都有一根可移动的横杆，滤纸的一头搭 在横杆上，另一头浸入缓冲液中，形成了滤纸桥。 点好样的醋酸纤维薄膜就搭在滤纸桥上。
2. 醋酸纤维素薄膜的润湿 将醋酸纤维素薄膜完全浸泡于缓冲液中约30min后，用镊子小
样面朝下），另一端平贴在阳极端支架上(见下图)。要
求薄膜紧贴滤纸桥并绷直，中间不能下垂。
连接好电泳仪。在室温下电泳，打开电源开关，调节电 流强度0.3mA/cm膜宽度电泳时间约为1h。电泳后，关闭 电泳仪切断电源。
5.染色： 电泳完毕后将薄膜取下, 放在含氨基黑10B染色液的培养皿中
浸泡5-10min。（染色液回收）
心夹住薄膜一端，放在折叠的滤纸中，并用滤纸吸干表面液体。 3.点样 把膜条铺在玻璃板上（无光泽面朝上），将点样器在血清中 沾一下（量薄薄一层为好），再在膜条一端1.5-2cm处轻轻水平
地落下并随即提起，这样即在膜条上点上了细条状的血清样品。
此步是实验的关键。
4.电泳
将点样端的薄膜平贴在阴极电泳槽支架的滤纸桥上（点
蛋白含量（100%）=A/A总X100%
（2）待薄膜完全干燥后，浸入透明液中约10-20min，取出，平贴
于干净玻璃片上，干燥，即得背景透明的电泳图谱，可用光密
度计测定各蛋白斑点。此图谱可长期保存。
注意事项
1、薄膜的浸润与选膜是电泳成败的关键之一。 2、点样时，应将薄膜表面多余的缓冲液用滤纸吸去，吸水量以
思考题
1、比较醋酸纤维薄膜电泳与纸电泳的异同点。 2、指出醋酸纤维薄膜用作电泳的支持物有何特点?
不干不湿为宜。
3、点样时，动作要轻、稳，用力不能太大，以免损坏膜 片或印

实验目的掌握醋酸纤维素薄膜电泳法分离血清蛋白的原理和方法。

二、实验原理蛋白质是两性电解质。

在pH值小于其等电点的溶液中，蛋白质为正离子，在电场中向阴极移动；在pH值大于其等电点的溶液中，蛋白质为负离子，在电场中向阳极移动。

血清中含有数种蛋白质，它们所具有的可解离基团不同，在同一pH的溶液中，所带净电荷不同，故可利用电泳法将它们分离。

血清中含有白蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白等，各种蛋白质由于氨基酸祖坟、立体构象、相对分子质量、等电点及形状不同，在电场中迁移速度不同。

由表可知，血清中5种蛋白质的等电点大部分低于pH值7.0，所以在pH8.6的缓冲液中，它们都电离成负离子，在电场中向阳极移动。

蛋白质名称等电点相对分子质量白蛋白 4.88 69000α1-球蛋白 5.06 200000α2-球蛋白 5.06 300000β-球蛋白 5.12 90000~150000γ-球蛋白 6.85~7.50 156000~300000在一定范围内，蛋白质的含量与结合的染料量成正比，故可将蛋白质区带剪下，分别用0.4mol/L NaOH溶液浸洗下来，进行比色，测定其相对含量。

也可以将染色后的薄膜直接用光密度计扫描，测定其相对含量。

肾病、弥漫性肝损害、肝硬化、原发性肝癌、多发性骨髓瘤、慢性炎症、妊娠等都可以使白蛋白下降。

肾病时α1、α2、β球蛋白升高，γ-球蛋白降低。

肝硬化时α2、β-球蛋白降低，而α1、γ-球蛋白升高。

三、实验器材1、醋酸纤维薄膜（2cm*8cm，厚度120μm）2、人血清；3、烧杯及培养皿数只；4、点样器；5、竹镊子；6、玻璃棒；7、电吹风；8、试管六只；9、恒温水浴锅；10、电泳槽；11、直流稳压电泳仪；12、剪刀四、实验试剂1. 电极缓冲液: 巴比妥-巴比妥钠缓冲液（可重复使用，隔一星期过滤一次）：，分别称取巴比妥钠12.76g和巴比妥1.66g溶解于1000ml蒸馏水中。

2. 染色液（可重复使用，使用后回收）：取氨基黑10B 0.5g溶于100ml SDS-PAGE 电泳脱色液中。

醋酸纤维素薄膜电泳法分离血清蛋白
相关识
血清蛋白
蛋白质名称
白蛋白 α1－球蛋白 α2－球蛋白 β－球蛋白 γ－球蛋白
等电点（ 等电点（pI） 4.8 5.06 5.06 5.12 85~7 6.85 7.5
相对分子质量/ 相对分子质量/Mr
69000 200000 300000 90000~150000 90000 156000~300000
薄膜的准备 电泳槽的准备 点样 电泳 染色与漂洗脱色 透明 定量
五、实验结果与讨论
对电泳区带结果进行分析讨论。 对电泳区带结果进行分析讨论。 测出血清蛋白各组分值。 测出血清蛋白各组分值。
醋酸纤维素薄膜
醋酸纤维素（二乙酸纤维素） 醋酸纤维素（二乙酸纤维素）薄膜具有匀一 的泡沫状结构，渗透性强，对分子移动无阻力， 的泡沫状结构，渗透性强，对分子移动无阻力， 用它作区带电泳的支持物，具有用样量少， 用它作区带电泳的支持物，具有用样量少，分离 清晰，无吸附作用。目前可用于血清蛋白、 清晰，无吸附作用。目前可用于血清蛋白、脂蛋 糖蛋白、酶的分离和免疫电泳等方面。 白、糖蛋白、酶的分离和免疫电泳等方面。 醋酸纤维素薄膜经1,4－二氧六环、透明液 醋酸纤维素薄膜经1,4－二氧六环、 1,4 或液体石蜡处理即透明， 或液体石蜡处理即透明，因而可得背景为无色的 电泳图谱。 电泳图谱。
一、实验目的
掌握醋酸纤维薄膜电泳法分离蛋白质的原理和 方法。 方法。
二、实验原理
血清中含有数种蛋白质，它们所具有的可解离基不同， 血清中含有数种蛋白质，它们所具有的可解离基不同， 各种蛋白质由于氨基酸组分、立体构象、 各种蛋白质由于氨基酸组分、立体构象、相对分子质 等电点及形状不同，在同一pH的溶液中， pH的溶液中 量、等电点及形状不同，在同一pH的溶液中，所带净 电荷也不同，因此，在电场中迁移速度不同。 电荷也不同，因此，在电场中迁移速度不同。在同一 pH的溶液中 所带净电荷不同， 的溶液中， pH的溶液中，所带净电荷不同，因此在电场中移动速 度不同，故可利用电泳法将它们分离。 度不同，故可利用电泳法将它们分离。 染色后可显示五条区带。 染色后可显示五条区带。 色泽浸出后， 590nm处比色， nm处比色 色泽浸出后，在590nm处比色，以空白膜条洗出液为空 白调零，测定各管的吸光度，可进行定量测定。 白调零，测定各管的吸光度，可进行定量测定。

血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验报告引言：血清蛋白质是构成血浆中主要蛋白质的一类物质，对于人体的健康状况具有重要的指示作用。

醋酸纤维素薄膜电泳技术是一种常用的分离和检测血清蛋白质的方法。

本实验旨在探究血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳的原理、操作步骤以及实验结果的分析和讨论。

一、实验原理血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳是一种基于电荷和大小的分离技术。

首先，将血清样品与醋酸盐缓冲液混合，并加载到预制的醋酸纤维素薄膜中。

然后，将电泳槽中的电源接通，利用电场作用使蛋白质在薄膜上移动。

不同的蛋白质根据其分子量和电荷大小的不同，在电场作用下向阳极或阴极方向移动，从而实现蛋白质的分离。

二、实验步骤1. 准备工作：将醋酸纤维素薄膜剪成适当的大小，并在电泳槽中放置好阳极和阴极。

2. 样品制备：取适量的血清样品，加入醋酸盐缓冲液，并充分混合。

3. 样品加载：将样品缓冲液混合物加载到醋酸纤维素薄膜中，并确保完全覆盖薄膜表面。

4. 电泳条件设置：根据实验需要，设置适当的电场强度和电泳时间。

5. 开始电泳：将电泳槽连接电源，开启电源使电泳进行。

6. 实验结束：根据设定的电泳时间，关闭电源，取出醋酸纤维素薄膜。

三、实验结果分析和讨论通过血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验，可以观察到不同蛋白质在薄膜上的迁移情况。

根据迁移距离和迁移速度，可以初步判断不同蛋白质的分子量和电荷大小。

在实验中，我们可以根据薄膜上不同蛋白质的迁移位置，进行进一步的分析和鉴定。

血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳还可以用于检测某些疾病的诊断。

例如，肝功能异常时，血清中白蛋白和球蛋白的比例会发生变化，通过血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳可以明确出现异常的蛋白质成分，为临床诊断提供重要依据。

实验中需要注意的是，样品的制备和加载过程要尽量避免氧化、污染和杂质的引入，以保证实验结果的准确性。

此外，在设置电泳条件时，应根据样品特性和实验目的进行合理选择，以获得最佳的分离效果。

结论：血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳是一种常用的分离和检测血清蛋白质的方法。

血清蛋白醋酸纤维薄膜 电泳
电泳技术 血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳
电泳技术
电泳技术主要用于物质性质的 研究、种类的鉴定、分离纯化、纯 度的分析等实验研究工作中，已成 为生物化学、分子生物学、医学、 药学、农业、食品、卫生、环保等 学科不可缺少的重要的分离分析手 段。
一、电泳技术的原理
电泳是指在外加电场的作用下， 带电的物质向其所带电荷相反的电极 方向移动的现象。各种物质由于所带 净电荷的种类和数目不同，因而在电 场中的迁移方向和速度不同，从而可 以对物质进行分离、分析和鉴定。
1．带电粒子在电场中移动时，受到两种力 的作用。第一种是电场产生的作用力F1， 它能使带电粒子移动。F1的大小与粒子所 带静电荷q及电场强度E成正比。第二种是 移动的带电粒子与溶液介质之间产生的摩 擦力F2，它可以阻止带电粒子的移动。F2 的大小与带电粒子的摩擦系数f及运动速度v 成正比。 F1 = q· E F2 = f· v
缓冲溶液应选用使分离的物质稳定，而且不 与其发生反应的体系。缓冲液的pH直接影响分子 的解离和带电性质、状态，因而会影响迁移率和 分离效果。缓冲液的离子强度应在0.05～ 0.10mol/L间为宜，过低，产热少，电泳快，区带 明显扩散；过高，区带尖锐，泳动距离短，产热 多。离子强度可用μ表示。（配动图）
4、定量 将吸干的膜条放入干燥箱中，烤干后， 放入盛有透明液的培养皿中让其充分浸透， 用镊子将其取出，迅速平整的将膜条贴敷 于载玻片上，让其自然透明，再将透明的 膜条连带载玻片一同放入光密度计或凝胶 成像系统中进行定量分析，
1、正常值：白蛋白 α1球蛋白 α2球蛋白 57~72% 2~ 5% 4~ 9%
一、原理 以醋酸纤维薄膜为支持物，浸入 ph8.6的缓冲液后吸去多余液体。将微 量血清点于膜上，经电泳后，将薄膜 置染色液中使蛋白质固定并染色，洗 去多于染料。将膜条烘干，再将其用 透明液进行透明处理。用光密度计或 凝胶成像系统进行成分分析比较。

醋酸纤维素薄膜电泳指导醋酸纤维素薄膜电泳是一种常用的分离和纯化生物大分子的方法。

本文将对醋酸纤维素薄膜电泳的操作步骤进行详细介绍，并提供实验指导。

一、实验材料准备1. 醋酸纤维素薄膜：可准备自制醋酸纤维素薄膜或购买商用的醋酸纤维素薄膜。

2. 缓冲液：根据需要选择适当的缓冲液，常用的有Tris缓冲液、磷酸盐缓冲液等。

3. 模版DNA：准备需要分离和纯化的DNA样品。

4. 电泳仪和电源：确保电泳仪和电源的正常工作。

二、膜制备1. 制备醋酸纤维素溶液：将适量醋酸纤维素加入足够的乙醇中，并充分搅拌溶解。

2. 漏斗滴膜：将制备好的醋酸纤维素溶液倒入装有膜模的漏斗中，边转动漏斗边滴膜于预处理过的载玻片上，使其均匀涂布在玻片上。

3. 干燥膜：将滴膜后的载玻片在通风处自然干燥，确保膜完全干燥后再进行下一步操作。

三、电泳条件设定1. 调节电泳仪：按照电泳仪的设备说明书正确设置电泳仪的参数，如电压、时间等。

2. 准备缓冲液：根据实验需要选择合适的缓冲液，并按照比例配置好缓冲液。

3. 进行预电泳：将准备好的醋酸纤维素薄膜浸入缓冲液中，进行预电泳处理。

四、样品处理和装载1. DNA片段制备：将目标DNA打断成合适的片段大小，并使用聚丙烯酰胺凝胶电泳分析确认打断效果。

2. 样品加载：将制备好的DNA样品加载到醋酸纤维素薄膜上，可采用直接加载或间接加载的方式。

五、电泳操作1. 启动电泳：将装有DNA样品的醋酸纤维素薄膜浸入缓冲液中，确保电泳液覆盖薄膜，并启动电源。

2. 电泳过程：根据需求设定合适的电源参数，进行电泳分离。

注意观察电泳过程，确保电泳效果和样品分离。

3. 停止电泳：根据实验需要设定合适的电泳时间，完成电泳后断开电源。

六、薄膜处理和分析1. 取出薄膜：将电泳结束的薄膜小心取出，避免扭曲或损坏。

2. 染色处理：可根据需要选择合适的染色方法染色薄膜上的DNA 样品，如乙锐亮绿、溴化乙锭等染料。

3. 分析结果：使用合适的分析工具，如UV-Vis分光光度计、荧光成像仪等，对薄膜上的DNA样品进行定量或定性分析。