《检验仪器分析》第10章 免疫分析

免疫学反应原理单扩散琼脂糖凝胶平板→打孔→点加样本→孵育(过夜) →观察沉淀线可以定性，也可以定量应用：检测抗原抗体。

如免疫球蛋白测定双扩散琼脂糖凝胶平板→打孔(两两对应)→点加样本及对应抗原或抗体→孵育(过夜) →观察沉淀线一般用于定性，也可观察抗原抗体有无交叉反应。

如抗原抗体的鉴定免疫沉淀在试管中加入抗原及抗体，混匀后孵育，观察沉淀的出现环状沉淀：毛细管内进行。

如链球菌的血清学分型对流电泳操作类似于双扩散。

但在两侧施加电场，以加快免疫反应的速度。

适用于抗原抗体检测。

如乙肝表面抗原的检测火箭电泳类似于单扩散，但外加了电场，孔内所加抗原向一特定方向迁移，且迁移沉淀线的长度与抗原的浓度成正比，故可以定量。

如甲胎蛋白的检测。

血球凝集试验将抗体或抗原结合在动物红血球（羊、牛、兔等）上（致敏），当致敏的红血球与相应抗原或抗体相遇时，发生肉眼可见的凝集。

也可制备反向血凝或血凝抑制试验。

血球在致敏前需要进行处理（鞣化），使之不易破坏，也更容易致敏。

如乙肝表面抗原的检测：成本低廉，检测灵敏度也高。

乳胶凝集原理同血球凝集试验，但致敏的是乳胶颗粒，且试剂更易保存。

如细菌抗原的快速检测试剂。

补体结合试验在抗原抗体反应的体系中加入新鲜制备的补体（豚鼠）以及指示系统（红细胞），当有相应的抗原抗体存在并发生反应时，激活补体，红细胞溶解。

若加入与人体的被测抗体相竞争的抗体时，被测抗体消耗掉大量抗原，而无能与指示系统中的抗体反应的抗原剩余，补体不被激活，红血球不被溶解：补体结合抑制试验。

如抗链O检测金标记试验以胶体金致敏抗原，当遇相应抗体时，与之结合并吸附在支持介质上，浓集后形成可见的红色。

一般用于快速试验，卡片式的反应体系方便易用。

但敏感性和特异性不足。

也有用胶体硒的。

如表面抗原、抗HIV等免疫斑点试验原理与金标记法类似，但标记的是酶，在抗原抗体结合后，标记在上面的酶可催化随后加入的显色系统，以出现黑色斑点为阳性。

免疫印迹先将微生物抗原电泳分离，再通过免疫转印技术将琼脂上的抗原转染到硝酸纤维膜上并固定（可裁成小条供多个检测用）。

免疫分析技术和相关仪器4.1．酶免疫分析仪4.1.1酶免疫分析技术的分类酶免疫分析(enzyme immunoassay，EIA) 是目前临床应用最多的一类免疫分析技术，可分为非均相(或异相)酶免疫测定和均相酶免疫测定两种方法。

均相酶免疫分析法（homogeneous enzyme immunoassay，HEI）均相酶免疫分析主要有酶扩大免疫测定技术和克隆酶供体免疫测定两种方法。

非均相酶免疫分析法（heterogeneous enzyme immunoassay）常用的酶免疫分析法多为非均相法，又可分为液相酶免疫法和固相酶免疫法两种，以后者最常用，称为酶联免疫吸附测定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）。

ELISA是临床上最常用的免疫分析方法，目前常用的酶免疫分析仪都是基于ELISA技术，称为酶免疫分析仪。

4.1.2酶免疫分析仪的类型、工作原理及基本结构根据仪器结构和自动化程度, 针对固相支持物的不同（如微孔板、试管、小珠、磁微粒等）作为吸附免疫试剂的载体，因而设计成不同的酶免疫分析仪，其基本工作原理就是分光光度法，在光电比色计或分光光度计的基础上根据ELISA技术的特点而设计。

包括：微孔板固相酶免疫测定仪器国际上微孔板式ELISA使用的载体为96孔板，采用直接对微板孔测定吸光度（A）的比色计。

(1) 酶标仪酶标仪也称为ELISA测读仪（ELISA reader）,有单通道和多通道两种类型。

自动型多通道酶标仪有多个光束和多个光电检测器，检测速度快。

如8通道的仪器，设有8条光束（或8个光源）、8个检测器和8个放大器。

多通道酶标仪的检测速度较快。

酶标仪的工作原理与主要结构和光电比色计几乎完全相同（见图16-1）。

既可以使用和分光光度计相同的单色器，也可以使用干涉滤光片来获单色光，此时将滤光片置于微孔板的前、后的效果是一样的。

图16-1 酶标仪工作原理酶标仪的工作原理和光路与普通光电比色计的不同之处在于（见图16-2）：比色液的容器不是比色皿，而是用塑料微孔板；酶标仪以垂直光束通过微孔板中的待测液；酶标仪通常使用光密度OD来表示吸光度。

2016 第二十章免疫检验自动化仪器分析一、A11、免疫比浊测定中，导致钩状现象的主要原因是A、抗体过量B、抗体亲和力差C、抗原分子量偏大D、抗原含量超出检测范围E、体系中离子强度小2、免疫浊度试验的基本原则是A、体系中保持抗原过量B、体系中保持抗体过量C、体系中合适的离子强度D、体系中合适的pHE、必要时可加入增浊剂3、发光物吖啶酯标记的化学发光反应体系应在何种环境中进行A、酸性B、碱性C、中性D、酸性或中性E、碱性或中性4、电化学发光免疫分析（ECUA）常采用的标记物是A、吖啶酿B、ALPC、HRPD、三联吡啶钌E、三丙胺5、前临床治疗药物监测最常采用的方法为A、FPIAB、荧光酶免疫分析C、TRFIAD、ELISAE、免疫比浊分析6、化学发光免疫分析中直接参与发光反应的标记物主要是A、吖啶酯类标记物B、三联吡啶钌标记物C、二氧乙烷标记物D、鲁米诺标记物E、碱性磷酸酶标记物7、下列有关时间分辨荧光免疫测定的叙述中，错误的是A、以镧系螯合物作为荧光标记物B、镧系螯合物具有超短荧光寿命的特点C、可以有效地消除非特异性自然本底荧光的干扰D、在荧光分析的基础上发展起来的E、灵敏度较普通荧光素标记抗体技术高8、电化学发光免疫分析临床应用广泛，在日常工作中一般不用于检测A、肿瘤标记物B、甲状腺激素C、病毒标记物D、血药浓度E、免疫球蛋白9、发光物吖啶酯标记的化学发光反应体系应在何种环境中进行A、酸性B、碱性C、中性D、酸性或中性E、碱性或中性10、吖啶酯作为发光剂的化学发光免疫测定中，叙述错误的是A、氧化反应不需要催化剂B、发光迅速C、反应的本底低D、在酸性环境下进行E、试剂稳定性好11、化学发光的基本原理是发光物由于A、在一定波长激发光照射下发光B、在化学反应中获得能量而发光C、在电子激发态时发光D、在电子激发态返回基态时释光放能量而发光E、某物在化学反应中生成发光物而发光二、B1、A.吖啶酯类B.鲁米诺C.三联吡啶钌D.HRPE.AP<1> 、电化学发光免疫测定中常用的发光底物为A、B、C、D、E、<2> 、化学发光标记免疫测定中常用的发光底物为A、B、C、D、E、<3> 、化学发光酶免疫测定中常用的发光底物为A、B、C、D、E、答案部分一、A11、【正确答案】 D【答案解析】抗体量不足、抗原量过高是导致钩状现象的主要原因。

检验科免疫学常见检测与分析方法为了满足你的要求，我将按照“检验科免疫学常见检测与分析方法”的格式来书写文章。

以下是文章的正文：检验科免疫学常见检测与分析方法免疫学是研究机体免疫系统结构、功能及其介导的免疫反应的科学。

在检验科中，免疫学检测和分析方法广泛应用于疾病诊断、药物研发和医学研究等领域。

本文将介绍免疫学常见检测与分析方法，包括间接免疫荧光法、酶联免疫吸附法、流式细胞术和酶联免疫斑点法。

一、间接免疫荧光法间接免疫荧光法是一种检测抗体和抗原相互作用的方法，其原理是利用荧光素标记的二抗结合到已与目标抗原结合的抗体上，通过荧光显微镜观察荧光标记的二抗与抗原结合的情况。

这种方法具有高灵敏度、高特异性和高分辨率的优点，因此被广泛应用于疾病的早期诊断和研究中。

二、酶联免疫吸附法酶联免疫吸附法（ELISA）是一种常用的免疫学检测方法，用于检测抗体或抗原的存在和浓度。

该方法利用酶和底物的反应产生可见的颜色变化，从而判断目标物的存在和数量。

ELISA方法具有操作简单、灵敏度高和可扩展性强的特点，被广泛应用于病原微生物的检测、药物筛选和免疫学研究中。

三、流式细胞术流式细胞术是一种光学技术，用于分析和计数悬浮在流动液体中的细胞。

该方法通过染色和荧光素标记的抗体等实验步骤，通过流式细胞仪实时检测细胞的形态、大小、荧光强度等特征，从而实现对细胞种类和状态的分析。

流式细胞术在免疫学研究和临床诊断中的应用广泛，如检测白细胞亚群、免疫球蛋白等。

四、酶联免疫斑点法酶联免疫斑点法（ELISPOT）是一种高灵敏度、高特异性的单细胞分析技术，用于检测细胞产生的蛋白质分子。

该方法通过将待检细胞分泌的蛋白质与荧光素标记的抗体结合，通过荧光显微镜观察形成的颗粒斑点。

ELISPOT方法被广泛应用于评估免疫细胞的功能和活性，例如检测细胞因子的分泌和细胞毒性。

总结：免疫学在检验科中的检测和分析方法多种多样，包括间接免疫荧光法、酶联免疫吸附法、流式细胞术和酶联免疫斑点法。

第十一章临床免疫检验仪器一、名词解释1.酶免疫分析技术：利用酶的高效催化和放大作用与特异性免疫反应结合而建立的一种标记免疫技术。

2.均相酶免疫分析法：检测过程中抗原抗体反应后，无需分离结合和游离的酶标记物，直接根据反应前后酶活性的改变进行待检物质测定的分析方法。

3.非均相酶免疫分析法：在酶免疫测定中，抗原抗体反应达到平衡后，需分离游离的和与抗原(或抗体)结合形成复合物的酶标记物，然后对经酶催化的底物显色程度进行测定，再推算出样品中待测抗原(或抗体)含量的分析方法。

4.发光免疫分析技术：利用化学发光现象，根据物质发光的不同特征，即辐射光波长、发光的光子数，与产生辐射的物质分子的结构常数、构型、数量等密切相关，通过受激分子发射的光谱、发光衰减常数、发光方向等来判断分子的属性及发光强度进而判断物质的量的免疫分析技术。

5.免疫浊度检测：将液相内的沉淀试验与现代光学仪器和自动分析技术相结合的一项分析技术。

6.放射免疫分析技术：以放射性核素为标记物的标记免疫分析技术。

7.非均相荧光免疫测定法：抗原抗体反应后，先把Ab*Ag 与Ab*分离，然后测定Ab*Ag 或A b*中的标记物的量，从而推算出标本中的A g 量的方法。

8.均相荧光免疫测定法：抗原抗体反应后，Ab*Ag 中的标记物失去荧光特性，不需进行A b*Ag 与A b*的分离直接测定游离的A b*量，从而推算出标本中的A g 量的方法。

9.闪烁体：是将核辐射能激发分子转化成可探测闪光的荧光物质。

常用的有有机闪烁体、无机闪烁体和特殊闪烁体等。

10.时间分辨荧光免疫分析：时间分辨荧光免疫测定是用镧系稀土元素及其螯合物(如 Eu3+螯合物) 作为示踪物标记抗原、抗体、核酸探针等物质，检测标本中的相应抗原或抗体的荧光免疫测定技术。

11.化学发光免疫技术：在检测化学反应中，某些化学基团被氧化后形成激发态，并在返回基态的同时发射一定波长的光子。

仪器利用这种化学基团标记在免疫分析的抗原或抗体上所建立起来的免疫分析为化学发光免疫分析。