盐酸小檗碱(提取品)检验原始记录

一、实验模块中草药提取与鉴定二、实验标题黄柏中盐酸小檗碱的提取分离与鉴定三、实验目的1. 了解黄柏中盐酸小檗碱的提取方法；2. 掌握盐酸小檗碱的分离纯化技术；3. 学习盐酸小檗碱的鉴定方法。

四、实验原理盐酸小檗碱是一种生物碱，具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤等药理作用。

黄柏是提取盐酸小檗碱的重要药材之一。

本实验采用乙醇回流提取法、盐析法分离纯化盐酸小檗碱，并通过紫外光谱法进行鉴定。

五、实验材料与仪器1. 实验材料：黄柏粉末、乙醇、盐酸、氯化钠、蒸馏水等；2. 实验仪器：索氏提取器、旋转蒸发仪、紫外可见分光光度计、分析天平、烧杯、漏斗、滤纸等。

六、实验步骤1. 乙醇回流提取法提取盐酸小檗碱（1）称取5.0g黄柏粉末，置于索氏提取器中；（2）加入50ml乙醇，回流提取1小时；（3）提取液过滤，收集滤液；（4）滤液浓缩至约10ml。

2. 盐析法分离纯化盐酸小檗碱（1）将浓缩液加入适量的氯化钠，使溶液中盐的浓度达到饱和；（2）充分搅拌，使盐酸小檗碱析出；（3）过滤，收集沉淀；（4）沉淀用蒸馏水洗涤，干燥，得盐酸小檗碱粗品。

3. 紫外光谱法鉴定盐酸小檗碱（1）取盐酸小檗碱粗品，用乙醇溶解，制成一定浓度的溶液；（2）用紫外可见分光光度计测定溶液的吸光度；（3）与标准品盐酸小檗碱的紫外光谱图进行对比，鉴定盐酸小檗碱。

七、实验结果与分析1. 乙醇回流提取法提取盐酸小檗碱：通过索氏提取器提取，得到盐酸小檗碱的提取液。

2. 盐析法分离纯化盐酸小檗碱：通过加入氯化钠使盐酸小檗碱析出，过滤、洗涤、干燥后得到盐酸小檗碱粗品。

3. 紫外光谱法鉴定盐酸小檗碱：通过紫外光谱法测定盐酸小檗碱的吸光度，与标准品盐酸小檗碱的紫外光谱图进行对比，鉴定结果为盐酸小檗碱。

八、实验结论1. 本实验采用乙醇回流提取法、盐析法成功提取分离黄柏中的盐酸小檗碱；2. 通过紫外光谱法鉴定，证明提取分离得到的化合物为盐酸小檗碱。

九、实验注意事项1. 提取过程中，注意控制回流时间和温度，以充分提取盐酸小檗碱；2. 分离纯化过程中，注意控制盐的浓度，使盐酸小檗碱充分析出；3. 鉴定过程中，注意紫外光谱仪的校准，以保证鉴定结果的准确性。

黄连中盐酸小檗碱的提取纯化及抑菌活性研究摘要黄连是一种常用的中药材，具有抗菌作用。

其中的盐酸小檗碱是其主要活性成分之一，具有广谱抑菌活性。

本研究旨在提取纯化黄连中的盐酸小檗碱，并探究其抑菌活性。

采用超声波提取法提取黄连中的活性成分，然后使用TLC和HPLC对提取物进行纯化。

通过红外光谱（IR）和质谱（MS）对纯化产物进行鉴定。

采用平板扩散法和微量平板法对盐酸小檗碱的抑菌活性进行评价。

实验结果表明，超声波提取法对黄连中的盐酸小檗碱具有高效的提取效果，提取物中的盐酸小檗碱含量较高。

TLC和HPLC纯化方法能够有效去除提取物中的杂质，提高盐酸小檗碱的纯度。

红外光谱和质谱结果表明，通过超声波提取和纯化得到的产物确实为盐酸小檗碱。

抑菌实验结果显示，盐酸小檗碱对多种常见病原菌具有一定的抑制效果，其抗菌活性与目前常用的抗菌药物相当。

本研究成功提取纯化了黄连中的盐酸小檗碱，并证明其具有一定的抑菌活性。

这为开发利用盐酸小檗碱作为抗菌剂提供了一定的理论和实验基础。

AbstractIn conclusion, this study successfully extracted and purified berberine hydrochloride from Huanglian, and demonstrated its antibacterial activity. This provides a theoretical and experimental basis for the development and utilization of berberine hydrochloride as an antibacterial agent.Keywords: Huanglian; berberine hydrochloride; extraction; purification; antibacterial activity。

盐酸小檗碱原始检验记录文件编号：第1 页共6页名称盐酸小檗碱规格批号包装生产单位供应单位检验项目检验依据检验仪器【性状】本品为本品在热水中（溶解），在水或乙醇中（微溶），在三氯甲烷中（极微溶解），在乙醚中（不溶）项目结论：【鉴别】（1）取本品约0.1g，加水10ml，缓缓加热溶解后，加氢氧化钠试液4滴，放冷（必要时滤过），加丙酮8滴，（应即发生浑浊）项目结论：（3）本品红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集320图一致）项目结论：（4）（2）取本品约5mg，加稀盐酸2ml，搅拌，加漂白粉少量，（应即显樱红色）项目结论：（4）本品约0.1g，加水20ml，缓缓加热溶解后，加硝酸0.5ml，冷却，放置10分钟，滤过，滤液（应显氯化物的鉴别（1）反应）项目结论：【检查】有关物质：照高效液相色谱法(通则0512)试验供试品溶液的色谱中，如有与药根碱峰和巴马汀峰保留一致的色谱峰，按外标法以峰面积计算，均不得过1.0%；其他杂质峰面积的和不得大于对照品溶注液中的小檗碱峰的面积(2.0%)。

检验者：复核者：产品名称：盐酸小檗碱批号：规格：第2 页共6页检验条件：色谱柱：C18柱（以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂ODS柱）柱号：E15XXXXXX 填料：Hypersil ODS 25µm 批号：柱长：150mm 管径：4.6mm 柱温：进样器：XX型进样器进样量：XXµl定量环流动相：0.01mol/L磷酸二氢铵溶液(用磷酸调pH值至2.8)-乙腈(75：25)，检测波长：345nm流速：压力：对照品溶液的制备方法精密称取盐酸药根碱对照品和盐酸巴马汀对照品适量，加流动相溶解并定量稀释成每1ml中约含0.1mg的溶液，分别作为对照品溶液(1)和(2)。

对照品溶液的制备精密称取盐酸药根碱对照品 g（中检所，批号：）和盐酸巴马汀对照品 g（中检所，批号：）分别置于ml、ml容量瓶中，加流动相溶解，摇匀，定容至刻度，分别作为对照品溶液(1)和(2)。

一、实验目的1. 熟悉盐酸小檗碱的提取、分离与鉴定方法；2. 掌握薄层色谱法、紫外光谱法等分析方法；3. 提高实验操作技能，培养实验思维。

二、实验原理盐酸小檗碱是从黄连、黄柏等植物中提取的一种生物碱，具有抗菌、抗炎、抗癌等药理作用。

本实验采用溶剂提取法、柱层析法等方法对盐酸小檗碱进行提取、分离，并通过薄层色谱法、紫外光谱法等对其进行鉴定。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：黄连、黄柏、盐酸小檗碱标准品；2. 实验仪器：电热恒温水浴锅、旋转蒸发仪、紫外分光光度计、薄层色谱仪、硅胶G薄层板、硅胶柱、微量注射器等。

四、实验方法与步骤1. 提取（1）将黄连、黄柏药材粉碎，过40目筛；（2）称取2g药材，加入20ml甲醇，超声提取30min；（3）过滤，滤液旋蒸浓缩至约1ml；（4）加入1ml盐酸溶液，搅拌，静置，沉淀完全后过滤，滤液即为粗提液。

2. 分离（1）将硅胶G加入适量甲醇，搅拌均匀，倒入玻璃层析柱中；（2）将粗提液加入层析柱中，用甲醇洗脱；（3）收集盐酸小檗碱洗脱液，旋蒸浓缩至约1ml；（4）加入1ml盐酸溶液，搅拌，静置，沉淀完全后过滤，滤液即为盐酸小檗碱精制品。

3. 鉴定（1）薄层色谱法：取盐酸小檗碱标准品和精制品适量，分别点于薄层板上，以氯仿为展开剂，展开后晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，于105℃加热显色，观察斑点颜色和位置；（2）紫外光谱法：取盐酸小檗碱标准品和精制品适量，分别用无水乙醇溶解，制成溶液，在紫外分光光度计上测定其在256nm处的吸光度。

五、实验结果与分析1. 薄层色谱法：盐酸小檗碱标准品和精制品在薄层板上形成相同颜色的斑点，且位置一致，证明精制品中含盐酸小檗碱。

2. 紫外光谱法：盐酸小檗碱标准品和精制品在256nm处的吸光度基本一致，证明精制品中含盐酸小檗碱。

六、实验结论本实验成功提取、分离了黄连、黄柏中的盐酸小檗碱，并通过薄层色谱法、紫外光谱法对其进行了鉴定，结果表明精制品中含盐酸小檗碱。

盐酸小檗碱的提取实验报告一、实验目的本次实验旨在从黄连中提取盐酸小檗碱，并对提取过程和结果进行分析和评估，以掌握盐酸小檗碱的提取方法和相关实验技能。

二、实验原理盐酸小檗碱是一种季铵型生物碱，能溶于水，较易溶于热水和热乙醇，难溶于乙醚、氯仿等有机溶剂。

本实验采用溶剂提取法，利用盐酸小檗碱在不同溶剂中的溶解性差异，将其从黄连中分离出来。

三、实验材料与仪器1、实验材料黄连（＿____g）、浓盐酸、乙醇（95%）、石灰乳等。

2、实验仪器电子天平、圆底烧瓶（＿____mL）、回流冷凝管、布氏漏斗、抽滤瓶、蒸发皿、玻璃棒、烧杯（＿____mL、＿____mL）、容量瓶（＿____mL）、移液管（＿____mL）、pH 试纸等。

四、实验步骤1、黄连的预处理将黄连粉碎，过_____目筛，备用。

2、提取称取_____g 黄连粉末，置于圆底烧瓶中，加入_____mL 95%乙醇，装上回流冷凝管，在水浴上加热回流_____小时。

回流结束后，趁热过滤，滤液置于烧杯中。

3、酸化向滤液中滴加浓盐酸，调节 pH 值至_____，此时有黄色沉淀析出。

4、过滤将上述混合液用布氏漏斗抽滤，得到黄色沉淀。

5、重结晶将沉淀用少量蒸馏水洗涤至中性，然后溶于适量热乙醇中，趁热过滤。

滤液放置冷却，使盐酸小檗碱结晶析出。

再次抽滤，得到盐酸小檗碱的结晶。

6、干燥将结晶置于干燥箱中，在_____℃下干燥至恒重，得到盐酸小檗碱成品。

五、实验结果与分析1、产量经过干燥后，得到盐酸小檗碱成品的质量为_____g。

2、纯度通过化学分析方法（如熔点测定、薄层色谱分析等），对所得盐酸小檗碱的纯度进行检测，结果表明其纯度为_____%。

3、结果分析（1）产量方面，影响盐酸小檗碱产量的因素可能包括黄连的质量、提取时间、乙醇用量等。

如果产量较低，可能是提取不完全，需要进一步优化实验条件。

（2）纯度方面，若纯度未达到预期，可能是在提取过程中引入了杂质，或者重结晶的操作不够完善。

盐酸小檗碱检验记录第一页【依据】中华人民共和国药典（年版二部）【性状】本品为结论：【鉴别】⑴取本品0.1g，加水10ml，缓缓加热溶解后，加氢氧化钠试液4滴，放冷，加丙酮8滴，（规定：即发生浑浊）结论：⑵取本品 g，加稀盐酸2ml，搅拌，加漂白粉少量，（规定：即显樱红色）结论：⑶取适量，置白瓷皿中，加硫酸1ml，5%加没食子酸的乙醇溶液5滴，置水浴上加热，（规定：即显翠绿色）结论：⑷本品的红外光谱应与对照的图谱（光谱集320图）一致。

⑸取本品0.1g，加水20ml，缓缓加热溶解后，加硝酸0.5ml，冷却，放置10分钟，滤过，滤液加氨试液使成碱性，将析出的沉淀滤过除去，取滤液加硝酸使成酸性，滴加硝酸银试液，；分离，沉淀加氨试液，沉淀，再加硝酸，沉淀。

（规定：滴加硝酸银试液，即生成白色凝胶状沉淀；分离，沉淀加氨试液，沉淀即溶解，再加硝酸，沉淀复生成）结论：【检查】室温：相对湿度：氰化物取本品0.5g，依氰化物检查法第一法检查，取下碱性硫酸亚铁试纸，加三氯化铁试液与盐酸各 1滴，放置15分钟，试纸。

（规定：不得显绿色或蓝色）结论：有机腈取研细的本品 g，置25ml具塞锥形瓶中，加无水乙醚5ml，振摇5分钟，用垂熔漏斗（G5）滤过，用无水乙醚洗涤3~4次（每次2ml），合并滤液与洗液，浓缩至约0.5ml，作为供试品溶液，另取胡椒乙腈对照品 g，加氯仿制成每1ml中含0.1mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取对照品溶液10ul和全部供试品溶液，分别点于同一硅胶G(厚度0.5mm)薄层板上，以苯-冰醋酸（25:0.1)为展开剂，展开后,晾干,喷以5%钼酸铵硫酸溶液，在105℃加热10~20分钟，检视，供试品溶液在与对照品溶液所显主斑点的相应位置上，（规定：不得显杂质斑点）结论：干燥失重仪器：105℃干燥至恒重空称量瓶重：①g / g ；②g / g 精密称取样品：①样+瓶：②样+瓶：－瓶：－瓶：置105℃干燥5小时后，放置30分钟使至室温称定重量：①g ；②g检验人：复核人：年月日盐酸小檗碱检验记录单第二页减失重量：平均：%（规定：减失重量不得过12%）结论：炽灼残渣仪器：在500~600℃空坩埚恒重：①g / g ；②g / g精密称取样品：①样+坩埚：②样+坩埚：－坩埚：－坩埚：依炽灼残渣检查法将供试品炭化后，置500~600℃灰化30分钟后，降温至300℃后取出放置干燥器中放置30分钟使至室温，称定重量，再重复灰化直至恒重：①g / g ；②g / g减失重量：平均：%（规定：遗留残渣不得过0.1%）结论：重金属取炽灼残渣项下遗留的残渣，加硝酸0.5ml，蒸干，至氧化氮蒸气除尽后，放冷，加盐酸2ml，置水浴上蒸干后加水15ml，滴加氨试液至对酚酞指示液显中性，再加醋酸盐缓冲液（pH3.5） 2ml，微热溶解后，移置纳氏比色管中，加水稀释成25ml，另取配制供试液的试剂，置瓷皿中蒸干后，加醋酸盐缓冲液（pH3.5）2ml与水15ml，微热溶解后，移置纳氏比色管中，加标准铅溶液2ml,再用水稀释成25ml，放置2分钟同置白色纸上，自上向下透视，（规定：≤0.00002%）结论：【含量测定】置烧杯中，加沸水150ml，搅拌使盐酸小檗碱溶解，放冷，移入250ml量瓶中，精密加重铬酸钾滴定液（0.01667mol/L）50ml，加水至刻度，振摇5分钟，用干燥滤纸滤过，精密量取续滤液100ml,至250ml具塞锥形瓶中，加碘化钾2g，振摇使溶解，加盐酸溶液（1→2）10ml，密塞，摇匀，在暗处放置10分钟，用硫代硫酸钠滴定液（0.1mol/L）滴定，至近终点时，加淀粉指示液2ml,继续滴定至蓝色消失，溶液显亮绿色，并将滴定的结果用空白试验校正。

盐酸小檗碱片中间产品检验操作规程目的：为检验盐酸小檗碱片中间产品规定一个标准的程序，以便获得准确的实验数据。

范围：适用于盐酸小檗碱片中间产品的检验。

职责：检验员、检验室主任对本规程实施负责。

规程：1. 性状：本品为黄色片或糖衣片。

2. 鉴别：2.1 试剂与仪器2.1.1 氢氧化钠试液 2.1.2 丙酮2.1.3 漂白粉 2.1.4 硫酸，稀硫酸2.1.5 5%没食子酸的乙醇溶液 2.1.6 硝酸银试液、硝酸2.1.7 氨试液 2.1.8 研钵、刀片2.1.9 漏斗、漏斗架、滤纸 2.1.10烧杯、量筒2.1.11电子天平（万分之一克） 2.1.12 小型三用水箱2.1.13 移液管（2ml，1ml） 2.1.14 白瓷皿2.1.15 红外分光光度计 2.1.16 试管，滴定管2.2 项目与步骤2.2.1 取本品的细粉适量（约相当于盐酸小檗碱0.2g）,加水20ml，缓缓加热使盐酸小檗碱溶解，滤过，取滤液做以下鉴别试验：2.2.2 取本品的溶液10ml，置试管中，加氢氧化钠试液4滴，放冷，加丙酮8滴，即发生浑浊，为符合规定。

2.2.3 取本品的溶液0.5ml，置试管中，加稀盐酸2ml，搅拌，加漂白粉少量即显樱红色，为符合规定。

2.2.4 取本品的溶液0.2ml，置白瓷皿中，加硫酸1ml溶解后，加5%没食子酸的乙醇溶液5滴，置水浴上加热，即显翠绿色为符合规定。

2.2.5 取本品的细粉适量（约相当于盐酸小檗碱0.1g）,置烧杯中，加水20ml，缓缓加热溶解后，加硝酸0.5ml，冷却，放置10分钟，滤过，滤液显以下鉴别反应: 取滤液5ml，置试管中，加氨试液使成碱性，将析出的沉淀滤过除去，取滤液加硝酸使成酸性后，加硝酸银试液，即生成白色凝乳状沉淀，分离，沉淀加氨试液即溶解，再加硝酸，沉淀复生成为符合规定。

3. 检查:3.1 试剂与仪器3.1.1 纯化水3.1.2 量管（1000ml）3.1.3 移液管（5ml，2ml）3.1.4 容量瓶（25ml）3.1.5 过滤器、滤膜、滤纸 3.1.6 注射器3.1.7 紫外分光光度计 3.1.8 ZRS-4智能溶出度试验仪3.1.9 片剂脆碎仪 3.1.10 试管、烧杯3.1.11 电子天平（万分之一克） 3.1.12研钵3.1.13 吹风机3.2项目与步骤3.2.1 溶出度：取本品6片，照溶出度测定法（SOP-QC-331-00）以水1000ml 为溶剂，转速为每分钟120转，依法操作，经45分钟时，取溶液5ml 滤过，取续滤液2ml，置25量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，照分光光度法（SOP-QC-301-00）在263nm波长处测定吸收度，按C20H18ClNO4·2H2O的吸收系数（E1%1cm）为724计算出每片的溶出量；限度为大标示量的70%为符合规定。

实验七黄连中盐酸小檗碱的提取分离及鉴定黄连为毛茛科黄连属植物黄连（coptis chinensis Eraneh）、三角叶黄连（coptis deltoidca C．Ycheng et Hsiao）或云连（coptiteetoidesC.Y.cheng）的干燥根茎。

黄连具有清热燥湿、清心除烦，泻火解毒的功效。

黄连的有效成分主要是生物碱，已分离出的主要生物碱有小檗碱（berberine）、掌叶防己碱（palmatine）、黄连碱（jatrorrhizine）等。

其中小檗碱含量最高，可达10%左右，是以盐酸盐的状态存在于黄连中。

小檗碱有很强的抗菌作用，已广泛地应用于临床，掌叶防己碱也作药用，其抗菌性能和小檗碱相似。

[目的要求]1．学习和掌握水溶性生物碱的提取方法。

2．学习和掌握生物碱的柱色谱分离方法。

3．学习和掌握生物碱的化学检识及薄层色谱的鉴定方法。

[实验原理]小檗碱为黄色针状结晶，mp为145℃，游离的小檗碱能缓缓溶于水（1：20）及乙醇中（1：100），易溶于热水及热醇，难溶于乙醚，石油醚、苯、三氯甲烷等有机溶剂，其盐在水中溶解度很小，尤其是盐酸盐。

盐酸盐为l：500，枸橼酸盐1：125，酸性硫酸盐1：100，硫酸盐l：30，但在热水中都比较容易溶解。

小檗碱常以季铵碱形式存在，碱性强（pka11.53），能溶于水中，其水溶液有三种互变形式。

O ONHCHOOOOCH3OCH3季铵式（红棕色）醇式（黄色）醛式（黄色）N+OOOCH33小檗碱（黄连素）掌叶防己碱又称巴马亭，为黄色结晶，溶于水、乙醇、几乎不溶于三氯甲烷、乙醚等有机溶剂。

盐酸掌叶防已碱为黄色针状结晶，并有强烈的黄色荧光。

易溶于热水或热乙醇，在冷水中的溶解度也比盐酸小檗碱大。

N+H3COH3COOCH3OCH3掌叶防己碱本实验是利用小檗碱和掌叶防己碱的硫酸盐在水中溶解度大的性质，用硫酸水提取出来总生物碱，再利用其盐酸盐难溶于水及盐析作用，使生物碱盐析出，以除去水溶性杂质。

实验十 黄连中盐酸小檗碱的提取分离与检识（一）目的要求学习提取精制和检识黄连中的小檗碱，通过实验要求：1．掌握小檗碱的结构特点和理化性质。

2．熟悉浸渍法、盐析法、结晶法和薄层色谱法的基本操作过程及注意事项。

3．了解盐酸小檗碱的检识方法。

（二）主要化学成分的结构及性质黄连为毛茛科植物黄连Coptis chinensis Franch.、三角叶黄连Coptis deltoidea C.Y.Cheng et Hsiao 、峨嵋野连Coptis omeiensis (Chen)C.Y.Cheng 或云连Coptis teeta Wall.的根茎。

黄连的根状茎含多种生物碱，主要为小檗碱（黄连素），约5％～8％，其次为黄连碱、甲基黄连碱、掌叶防己碱、药根碱、木兰碱等。

叶含小檗碱1.49％。

小檗碱(berberine)：分子式(C 20H 18NO 4)＋，分子量336.37。

系季铵生物碱。

游离小檗碱为黄色针状结晶（乙醚），mp.145℃，能缓缓溶于冷水（1∶20），可溶于冷乙醇（1∶100），易溶于热水或热乙醇，难溶于丙酮、氯仿、苯，几乎不溶于石油醚。

盐酸小檗碱(C 20H 17NO 4·HCl ·2H 2O)，为黄色结晶，微溶于冷水（1∶500），易溶于沸水，几乎不溶于冷乙醇、氯仿和乙醚。

硫酸小檗碱( (C 20H 18NO 4)2·SO 4·3H 2O)，溶于水（1∶30），溶于乙醇。

重硫酸小檗碱(C 20H 18NO 4·HSO 4)为黄色结晶或粉末，溶于水（1∶150），微溶于乙醚。

N OCH 3OCH 3OO +N +HOCH 3O HO CH 3O CH 3CH 3小檗碱 木兰碱（三）实验原理根据小檗碱的盐酸盐在水中溶解度小，而小檗碱的硫酸盐水中溶解度较大。

因此，从植物原料中提取小檗碱时常用稀硫酸水溶液浸泡或渗漉，然后向提取液中加入10％的食盐，在盐析的同时，也提供了氯离子，使其硫酸盐转变为氯化小檗碱（即盐酸小檗碱）而析出。

黄柏中盐酸小檗碱的提取与检识朱彬彬(药学系药监班)【摘要】小檗碱常以季铵碱的形式存在，碱性强，能溶于水，但因黄柏中富含粘液质，且粘液质溶于水，形成粘稠的浆状，影响以后的实验操作，所以首先用石灰乳沉淀粘液质。

其后，用水自黄柏中提取小檗碱。

利用盐酸小檗碱几乎不溶于水的性质，可加盐酸，将游离小檗碱转化为盐酸小檗碱沉淀析出【关键词】黄柏小檗碱提取【引言】综合运用渗漉,盐析,重结晶,柱色谱等提取分离纯化的方法,实现对黄柏中小檗碱的提取分离【材料】抽滤泵，电炉，石棉网，天平，展开槽，渗漉筒，布氏漏斗，抽滤瓶，色谱柱，微量进样器，滤纸，铁架台，万能夹，棉花，培养皿，玻璃棒，橡皮管，滴管，硅胶-G薄层板，量筒，1000ml具塞三角瓶，100ml烧杯两只【方法】粗提：取黄柏粗粉40g＋0.3％11dH2SO4水300ml→搅拌30分钟，超声提取10分钟，静置过夜→脱脂棉过滤→得滤液＋石灰水调PH至12，静置30分钟→脱脂棉过滤→得滤液＋浓盐酸调PH至2.0，加入滤液量的10％的氯化钠溶解，静置过夜→抽滤→得到盐酸小檗碱粗品。

精制:盐酸小檗碱粗品＋40ml蒸馏水→加热溶解，趁热抽滤→得到滤液→冷却至400c以下后＋浓盐酸调PH至2.0，静置30分钟，析晶完全，抽滤→得到沉淀→用蒸馏水水洗至中性，得到盐酸小檗碱精品检识:①浓HNO3试验:取小檗碱少许，加2ml稀硫酸，溶解后加浓硝酸数滴，观察颜色变化②丙酮试验:取小檗碱少许，加3ml水，加热溶解后加NaOH试液2d,观察颜色变化→放冷后加丙酮4d ，振摇，观察并记录现象③薄层色谱法试样:自制盐酸小檗碱乙醇溶液点两个标记①②对照品:盐酸小檗碱对照乙醇溶液点两个点展开剂:正丁醇:冰醋酸:水(4:1:1)12ml【结果】1.浓硝酸试验:颜色由黄色变成红棕色，说明黄柏中含有盐酸小檗碱2.丙酮试验:出现浑浊，产生黄色沉淀，说明黄柏中中含有盐酸小檗碱3.薄层色谱法:如图所示【结论】比移值早规定范围内，判断其符合标准。

黄莲鉴定实验报告篇一：实验黄连中小檗碱的提取、精制和鉴定实验四黄连中小檗碱的提取、精制和鉴定一、概述黄连系毛茛科黄连属植物黄连（coptis chinensis Eranch.）的干燥根茎。

黄连具有清热燥湿、清心除烦，泻火解毒的功效。

黄连的有效成分主要是生物碱，已分离出的主要生物碱有小檗碱（berberine）、掌叶防己碱（palmatine）、黄连碱（jatrorrhizine）等。

小檗碱有很强的抗菌作用，已广泛地应用于临床。

主要化学成分的结构及理化性质：小檗碱为黄色针状结晶，mp为154℃，游离的小檗碱能缓缓溶于水（1：20）及乙醇中（1：100），易溶于热水及热醇，难溶于乙醚，石油醚、苯、三氯甲烷等有机溶剂，其盐在水中溶解度很小，尤其是盐酸盐。

盐酸盐为l：500，枸橼酸盐1：125，酸性硫酸盐1：100，硫酸盐l：30，但在热水中都比较容易溶解。

小檗碱常以季铵碱形式存在，碱性强（pka11.53），能溶于水中，其水溶液有三种互变形式。

NHCHOOCH333OCH3季铵式（红棕色）醇式（黄色）醛式（黄色）N+OCH3OCH3小檗碱（黄连素）二、实验部分（一）实验目的1、掌握小檗碱的结构特点和理化性质，以及一般的提取精制方法。

2、掌握旋转蒸发仪的使用。

3、熟悉盐酸小檗碱的色谱鉴定和定性鉴定方法。

（二）实验原理1、提取原理：小檗碱为异喹啉类小檗碱，结构中的氮原子以季铵盐形式存在，显一定程度的亲水性，因此游离小檗碱能溶与水(1:20)及乙醇(1:100)，热水或热乙醇中易溶，不溶于乙醚、氯仿、苯等有机溶剂。

盐酸小檗碱在沸水中溶解，在冷水中析出。

2、分离原理：小檗碱与酸所成的盐在水中的溶解度不尽相同，如硫酸小檗碱为(1:30)，酸性硫酸小檗碱为(1:100)，枸橼酸小檗碱为(1:125)，而盐酸小檗碱为(1:500)。

本实验就是据游离小檗碱在水和乙醇中的溶解度较大，而其盐酸盐难溶于水的性质进行提取和精制的。

盐酸小檗碱的提取、精制及检识小檗碱又称黄连素，是在高等植物中散布比较普遍的、有明显生理活性的化学成份。

要紧存在于黄连、黄柏、三颗针等中草药中。

小檗碱具有显著的抗微生物、抗原虫的作用，临床用其盐酸盐（即盐酸黄连素）医治细菌性感染如痢疾、急性肠胃炎、呼吸道感染等症。

黄连为毛茛科黄连属植物黄连（Coptis chinensis Franch.），三角叶黄连（ . Cheng et Hsiao ）或云连（ ）的根茎，含有小檗碱(1)、巴马汀(2)、黄连碱(3)、甲基黄连碱(4)、药根碱(5)等生物碱，其中以小檗碱含量最高，可达10%左右，小檗碱以盐酸盐的形式存在于黄连中。

目前制药工业提取小檗碱主要以三颗针为原料。

三颗针来源于小檗科小檗属（Berberis ）多种植物，其根皮含生物碱约2%，要紧含小檗碱、小檗胺、药根碱、巴马汀等生物碱。

N +OH £-R 1O OR 4OR 3R 2OR 5R 1 R 2 R 3 R 4 R 5CH 3 CH 3 HCH 3 CH 3 CH 3 CH 3 H H CH 3 H CH 3 CH 3 CH 3 HCH 212345CH 2CH 2CH 2CH 2小檗碱 (Berberine)属异喹啉类生物碱，自水和乙醇中结晶出来的小檗碱为黄色长针状结晶，含5个结晶水，在100℃干燥时即失去结晶水，转为棕黄色，加热至110℃时，其颜色加深变暗色。

℃至160℃即分解。

N HH 3NO CH 3O CH 3O HONHH 3COC H 3小檗胺小檗碱有三种互变异构体：其中以季铵碱式结构状态最稳固，能够离子化呈强碱性，用过量的氢氧化钾处置小檗碱盐类时，可转变成醇式叔胺碱和醛式仲铵碱，季铵碱式小檗碱可离子化，故有必然亲水性，因此，游离小檗碱能缓缓溶于水，在热水及热乙醇中易溶，而在冷乙醇中溶解度为1：100，但难溶于苯、氯仿、丙酮等溶剂。

醇式和醛式小檗碱那么具有一样生物碱的通性，难溶于水，易溶于有机溶剂。

万方数据药物研究Ｔｈｅｍｅｄｉｃｉｎｅｓｔｕｄｙ中国民族民￥ｕ１医药Ｃｈｉｎｅｓｅｊｏｕｍａｌｏｆｅｔｈｎｏｍｅｄｉｃｉｎｅａｎｄｅｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃｙ·３３·０．７３５。

Ｉｔ＂＝０．９９９８。

结果表明盐酸小檗碱在２．１５—２１．５ｐ，ｇ·ｌＩｌｌ。

范围内线性关系良好。

图１盐酸小檗碱对照品图２盐酸小檗碱保留时间为２．８ｍｉｎ１．３．５．２精密度实验精密吸取盐酸小檗碱对照品溶液１０止，测定峰面积，重复进样５次，求得盐酸小檗碱峰面积ＲＳＤ＝０．５２％。

１．３．５．３稳定性试验于０，４，８，１２，２４ｈ分别吸取盐酸小檗碱对照液、样品液各１０山测定，盐酸小檗碱对照品峰面积ＲＳＤ＝０．６３％，样品液峰面积ＲＳＤ＝１．５４％，说明２４ｈ内稳定性良好。

１．３．５．４重复性试验分别取同一样品５份，按供试品溶液的制备的方法和测定方法进行测定，盐酸小檗碱峰面积积分值的ＲＳＤ＝１．８７％，表明本试验方法重复性良好。

１．３．５．５加样回收率试验取已知含量的供试品，分别加入一定量的盐酸小檗碱对照品，按含量测定项下操作，结果见表１，平均回收率为９９．００％，符合要求。

衰１盐酸小檗碱的回收率试验２结果分别精密吸取样品溶液和对照品溶液各ｌＯ止，注入液相色谱仪，测定，对照品及样品色谱图见图ｌ，２，（图中横坐标为保留时向，纵坐标为峰高），结果见表２。

裹２盐酸小檗碱的含量测定结果３讨论３．１本试验测定三颗针提取物中盐酸小檗碱的平均含量为１５．４０％，由于三颗针来源广泛，采收季节不同、部位不同，均会对其提取物中盐酸小檗碱含量有影响拍１，我们按８５％规定下限，因此，规定该提取物中盐酸小檗碱含量不低于１３．１％。

３．２比较甲醇，水，磷酸不同用量和流动相不同ｐＨ值对盐酸小檗碱的保留时间及其相邻峰分离度的影响。

结果表明甲醇一水一磷酸（２５：７５：０．２），保留时间适当分离效果较好，与其它方法相比，该方法所采用的流动相具有简便，柱污染小，分离度好的优点。

1．目的：建立盐酸小檗碱检验操作规程，保证检验人员操作规范化、标准化，确保公司产品质量。

2 范围：本规程适用于生产用原料药盐酸小檗碱的检验。

3．责任：质量部、QC检验员、QC主管、QA主管。

4．执行标准：《中国药典》2010年版一部第639页、TL-YL-170-1。

5．内容：5.1性状本品为黄色结晶性粉末；无臭，味极苦。

本品在热水中溶解，在水或乙醇中微溶，在氯仿中极微溶解，在乙醚中不溶。

5.2鉴别5.2.1 取本品约0.1g，加水10ml，缓缓加热溶解后，加氢氧化钠试液4 滴，放冷（必要时滤过），加丙酮8 滴，即发生浑浊。

5.2.2取本品约5mg ，加稀盐酸2ml ，搅拌，加漂白粉少量，即显樱红色。

5.2.3本品的红处光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集320图）一致。

5.2.4取本品约0.1g，加水20ml，缓缓加热溶解后，加硝酸0.5ml ，冷却，放置10分钟，滤过，滤液显氯化物的鉴别(1) 反应（SOP-ZL-TZ001-1）。

5.3检查5.3.1有关物质取本品适量，精密称定，加流动相溶解并定量稀释制成每1ml 中含1mg 的溶液，作为供试品溶液另取盐酸药根碱对照品和盐酸巴马汀对照品适量，精密称定，加流动相溶解并定量稀释制成每1ml 中各含0.1mg的溶液，分别作为对照品溶液（1）和（2）；精密量取供试品溶液2ml和对照品溶液（1）和（2）各10ml。

置100ml量瓶中，用流动相稀释对刻度，摇匀，作为对品溶液；取对照品溶液（2）1ml，用供试品溶液稀释至10ml，摇匀，作为系统适用性试验溶液。

照高效液相色谱法（SOP-ZL-TZ016-1）试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.01mol/L磷酸二氢铵溶液（用磷酸调解PH值至2.8）-乙腈（75：25）为流动相；检测波长为345nm。

取系统适用性试验溶液10μl，注入液相色谱仪，巴马汀峰与小檗碱峰间的分离度应符合要求。

另取对照溶液10μl，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使小檗碱色谱峰的峰高约为满量程的25%。

实验三黄连中盐酸小檗碱的提取分离与鉴定小檗碱又称黄连素，是在高等植物中分布比较广泛的、有明显生理活性的化学成分。

主要存在于黄连、黄柏、三颗针等中草药中。

小檗碱具有显著的抗微生物、抗原虫的作用，临床用其盐酸盐（即盐酸黄连素）治疗细菌性感染如痢疾、急性肠胃炎、呼吸道感染等症。

黄连为毛茛科黄连属植物黄连（Coptis chinensis Franch。

），三角叶黄连（C。

deltoidea C。

Y。

Cheng et Hsiao）或云连（C。

teetoides C。

Y。

Cheng）的根茎，含有小檗碱(1)、巴马汀(2)、黄连碱(3)、甲基黄连碱(4)、药根碱(5)等生物碱，其中以小檗碱含量最高，可达10%左右，小檗碱以盐酸盐的形式存在于黄连中。

目前制药工业提取小檗碱主要以三颗针为原料。

三颗针来源于小檗科小檗属（Berberis）多种植物，其根皮含生物碱约2%，主要含小檗碱、小檗胺、药根碱、巴马汀等生物碱。

R1 R2 R3 R4 R51R1OR2OR5£-OR3OR4+3 CH3 HCH2CH3 CH3 CH3 CH3 HCH2CH2CH2CH23H CH3 CH3 CH3 H2345小檗碱 (Berberine)属异喹啉类生物碱，自水和乙醇中结晶出来的小檗碱为黄色长针状结晶，含5个结晶水，在100℃干燥时即失去结晶水，转为棕黄色，加热至110℃时，其颜色加深变暗色。

Mp.145℃至160℃即分解。

OCH3H3NHOCH3OH小檗胺H3COHCH3游离小檗碱能缓缓溶于水，在热水及热乙醇中易溶，而在冷乙醇中溶解度为1：100，但难溶于苯、氯仿、丙酮等溶剂。

醇式和醛式小檗碱则具有一般生物碱的通性，难溶于水，易溶于有机溶剂。

小檗碱的盐类除中性硫酸盐、磷酸盐外，一般在水中的溶解度均较小。

小檗碱及其盐类在水、乙醇中的溶解度如下表：小檗碱还能与苯、氯仿、丙酮等溶剂结合成分子缩合物，有完好的结晶状态，可作为小檗碱的识别之用。

盐酸小檗碱检验操作程序目的：建立一个盐酸小檗碱检验操作程序,以规范操作。

范围：适用于盐酸小檗碱的质量检验。

责任人：化验员、QA检查员。

程序：检验依据：《中国药典》2010版二部第639页和企业标准。

简述：本品为5，6-二氢-9，10-二甲氧苯并[g]-1，3-苯并二氧戊环[5，6-α]喹嗪盐酸盐二水合物。

1、性状：本品为黄色结晶性粉末；无臭，味极苦。

本品在热水中溶解，在水中或乙醇中微溶，在三氯甲烷中极微溶解，在乙醚中不溶。

2、鉴别2.1、仪器与用具：天平、电炉、移液管、红外分光光度计、量筒、试管。

2.2、试剂：氢氧化钠试液、漂白粉、稀盐酸、丙酮、硝酸、硫酸、5%没食子酸的乙醇溶液。

2.3、操作，加水10ml，缓缓加热溶解后，加氢氧化钠试液4滴，放冷（必要时滤过），加丙酮8滴，即发生浑浊。

，加稀盐酸2ml，搅拌，加漂白粉少量，即显樱红色。

，加水20ml，缓缓加热溶解后，加硝酸0.5ml，冷却，放置10分钟，滤过，滤液显氯化物的鉴别反应。

，加稀硝酸使成酸性后，滴加硝酸银试液，即生成白色凝乳状沉淀；分离，沉淀加氨试液即溶解，再加稀硝酸酸化后，沉淀复生成。

如供试品为生物碱或其他有机碱的盐酸盐，须先加氨试液使成碱性，将析出的沉淀滤过除去，取滤液进行试验。

，置试管中，加等量的二氧化锰，混匀，加硫酸湿润，缓缓加热，即发生氯气，能使用水湿润的碘化钾淀粉试纸显蓝色。

3、检查3.1、有关物质：取本品适量，精密称定，加流动相溶解并定量稀释制成每1ml中含1mg的溶液，作为供试品溶液；另取盐酸药根碱对照品和盐酸巴马汀对照品适量，精密称定，加流动相溶解并定量稀释制成每1ml中含0.1mg的溶液，分别作为对照溶液（1）和（2）；精密量取供试品溶液2ml和对照品溶液（1）和（2）各10ml，置100ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液；取对照品溶液（2）1ml，用供试品溶液稀释至10ml，摇匀，作为系统适用性试验溶液。

公司盐酸小檗碱片检验记录第 一 页【依据】 中华人民共和国药典（ 年版二部）【性状】 本品为 。

结论：【鉴别】 取本品的细粉适量（约相当于盐酸小檗碱0.1g ），加水10ml ，缓缓加热使盐酸小檗碱 溶解，滤过，取滤液，做以下试验:⑴ 取适量，加氢氧化钠试液4滴，放冷,过滤，加丙酮8滴， 。

（规定：应即发生浑浊） 结论：⑵ 取适量，加稀盐酸2ml ，搅拌，加漂白粉少量， 。

（规定：应即显樱红色） 结论：⑶ 取适量，置白瓷皿中，加硫酸1ml ，5%加没食子酸的乙醇溶液5滴， 置水浴上 加热， 。

（规定：应即显翠绿色） 结论：⑸ 取适量，加硝酸0.5ml ，冷却，放置10分钟，滤过，加氨试液使成碱性，将析出 的沉淀滤过出去，取滤液加硝酸使成酸性后，加硝酸银试液， 。

分离，沉淀加氨试液， ，再加硝酸， 。

（规定：应即生成白色凝胶状沉淀；分离，沉淀加氨试液即溶解，再加硝酸，沉淀 复生成） 结论： 【检查】 室温: 相对湿度: 溶出度 仪器：智能溶出检查仪 紫外分光光度仪照溶出度测定法第一法。

取本品，以水1000ml 为溶剂，转速为每分钟120转，依法操 作,经45分钟时，取溶液5ml ，滤过，取续滤液2ml ，置25ml 量瓶中，加水稀释至刻 度，摇匀，照分光光度法，在263nm 波长处测定吸收度，按C 20H 18ClNO 4·2H 2O 的吸 收系数（E）为724计算出每片的溶出量。

测得吸收度为：A 1： ； A 2： ； A 3 ： ； A 4 ： ； A 5： ； A 6： ； 计 算：检验员： 复核员： 年 月 日⑷　×10×12500377×100×100%＝ %⑴ ×10×12500377×100×100%＝ %⑵　×10×12500377×100×100%＝ %⑶　×10×12500377×100×100%＝ %⑸ ×10×12500377×100×100%＝ %⑹　×10×12500377×100×100%＝ %第 二 页(规定:限量为标示量的70%) 结论: 【含量测定】 仪器：分析天平 紫外分光光度仪样品与对照品 取本品20片，除去包衣后精密称定: 20片+纸:—纸：平均片重： g/片 研细，精密称取：① ②－） －）置100ml 量瓶中，加沸水适量使溶解，并稀释到刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液 5ml ，置50ml 量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液⑴、⑵。

实验七黄连中盐酸小檗碱的提取分离及鉴定黄连为毛茛科黄连属植物黄连（coptis chinensis Eraneh）、三角叶黄连（coptis deltoidca C．Ycheng et Hsiao）或云连（coptiteetoidesC.Y.cheng）的干燥根茎。

黄连具有清热燥湿、清心除烦，泻火解毒的功效。

黄连的有效成分主要是生物碱，已分离出的主要生物碱有小檗碱（berberine）、掌叶防己碱（palmatine）、黄连碱（jatrorrhizine）等。

其中小檗碱含量最高，可达10%左右，是以盐酸盐的状态存在于黄连中。

小檗碱有很强的抗菌作用，已广泛地应用于临床，掌叶防己碱也作药用，其抗菌性能和小檗碱相似。

[目的要求]1．学习和掌握水溶性生物碱的提取方法。

2．学习和掌握生物碱的柱色谱分离方法。

3．学习和掌握生物碱的化学检识及薄层色谱的鉴定方法。

[实验原理]小檗碱为黄色针状结晶，mp为145℃，游离的小檗碱能缓缓溶于水（1：20）及乙醇中（1：100），易溶于热水及热醇，难溶于乙醚，石油醚、苯、三氯甲烷等有机溶剂，其盐在水中溶解度很小，尤其是盐酸盐。

盐酸盐为l：500，枸橼酸盐1：125，酸性硫酸盐1：100，硫酸盐l：30，但在热水中都比较容易溶解。

小檗碱常以季铵碱形式存在，碱性强（pka11.53），能溶于水中，其水溶液有三种互变形式。

CHOOCH333季铵式（红棕色）醇式（黄色）醛式（黄色）OCH3N+OCH33小檗碱（黄连素）掌叶防己碱又称巴马亭，为黄色结晶，溶于水、乙醇、几乎不溶于三氯甲烷、乙醚等有机溶剂。

盐酸掌叶防已碱为黄色针状结晶，并有强烈的黄色荧光。

易溶于热水或热乙醇，在冷水中的溶解度也比盐酸小檗碱大。

H3COH3COOCH3OCH3掌叶防己碱本实验是利用小檗碱和掌叶防己碱的硫酸盐在水中溶解度大的性质，用硫酸水提取出来总生物碱，再利用其盐酸盐难溶于水及盐析作用，使生物碱盐析出，以除去水溶性杂质。

盐酸小檗碱的提取、精制及检识小檗碱又称黄连素,是在高等植物中分布比较广泛的、有明显生理活性的化学成分。

主要存在于黄连、黄柏、三颗针等中草药中。

小檗碱具有显著的抗微生物、抗原虫的作用，临床用其盐酸盐(即盐酸黄连素）治疗细菌性感染如痢疾、急性肠胃炎、呼吸道感染等症.黄连为毛茛科黄连属植物黄连（Coptis chinensis Franch.),三角叶黄连(C 。

deltoidea C 。

Y 。

Cheng et Hsiao)或云连（C 。

teetoides C 。

Y 。

Cheng ）的根茎,含有小檗碱（1)、巴马汀(2）、黄连碱（3）、甲基黄连碱（4)、药根碱（5）等生物碱，其中以小檗碱含量最高，可达10％左右，小檗碱以盐酸盐的形式存在于黄连中。

目前制药工业提取小檗碱主要以三颗针为原料。

三颗针来源于小檗科小檗属（Berberis)多种植物，其根皮含生物碱约2%，主要含小檗碱、小檗胺、药根碱、巴马汀等生物碱。

N +OH £-R 1O OR 4OR 3R 2OR 5R 1 R 2 R 3 R 4 R 5CH 3 CH 3 HCH 3 CH 3 CH 3 CH 3 H H CH 3 H CH 3 CH 3 CH 3 HCH 212345CH 2CH 2CH 2CH 2小檗碱 （Berberine)属异喹啉类生物碱,自水和乙醇中结晶出来的小檗碱为黄色长针状结晶，含5个结晶水，在100℃干燥时即失去结晶水，转为棕黄色,加热至110℃时,其颜色加深变暗色。

Mp 。

145℃至160℃即分解。

N HH 3NO CH 3O CH 3O O HON HH 3COC H 3小檗胺小檗碱有三种互变异构体：其中以季铵碱式结构状态最稳定,可以离子化呈强碱性,用过量的氢氧化钾处理小檗碱盐类时，可转变为醇式叔胺碱和醛式仲铵碱,季铵碱式小檗碱可离子化，故有一定亲水性，因此,游离小檗碱能缓缓溶于水,在热水及热乙醇中易溶,而在冷乙醇中溶解度为1：100，但难溶于苯、氯仿、丙酮等溶剂。