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果蝇唾腺染色体的几种染色方法比较双翅类昆虫如黑腹果蝇（Drosophila melanogaster）的唾腺染色体（Salivary chromosome）比普通染色体大的多，处于体细胞同源染色体的配对状态，是由于唾腺染色体经过多次复制而并不分开形成的，大约有1000～4000根染色体丝的拷贝，故又称为多线染色体（Poly－tene chromosome）。
它是观察染色体形态、研究染色体结构变异等的好材料。
制作果蝇唾腺染色体标本的染色方法一般有3种：醋酸洋红法、苯酚品红法和孚尔根（Feuglen）染色法（除此之外还有其他方法）、各种方法都有其自身的特点及适用的条件，因此没有1种染色方法是普遍适用完美无缺的。
现将3种常用方法的优缺点分述如下，并提出1个实用的永久封片制作方法。
一、醋酸洋红法洋红的常用浓度为0.5%～1.0%，醋酸常用浓度为45%～50%，一般现配挪用较好。
洋红是从胭脂虫（Coccrs cacti）的雌虫中提取的作为染料的提取物,提取物的品质因胭脂虫的种类而异，是一种混合物，其中具有染色活性的是洋红酸。
洋红酸是一种二元弱酸，如果溶于碱性溶液中，则具有酸性染料的性质，可使细胞质着色；如果溶于酸性溶液中，则具有磁性染料的性质，可使染色质（体）着色。
此法多用满架法，快速简便，为改进其染色效果，也可采用浸染法，并辅以火焰微热（即滴加醋酸洋红盖片后在酒精灯火焰上微热），增加本底清晰度，加大反差。
醋酸洋红的配制和染色都比较简中，对细胞穿透力较强，这是其主要优点，此外它对染色体和核仁均对染色，故也适用于减数分裂的细胞染色。
但其染色强度和分色效果不及其他染色剂，通常只作临时染色观察，不用于制作永久性装片。
也可以用醋酸地衣红替代洋红，这样细胞质着色较少，效果较好。
二、孚尔根染色法孚尔根染色法是常用于鉴别细胞中DNA的一种组织化学方法，细胞核经过温和的盐酸的水解作用（I mol HCI，60℃而破坏了脱氧核糖与嘌呤碱之间的糖苷键，这样嘌呤碱脱掉而使脱氧核糖的第1个碳原子上潜在的醛基获得自由状态。
实验二孚尔根染色法一、实验原理染色体是遗传物质的载体，它的主要化学成分是脱氧核糖核酸(DNA)，DNA系核苷酸的多聚体，核苷酸又由碱基脱氧核糖和磷酸所组成，当细胞经60℃、1mol·1-1HCl处理后，不仅使分生组织的细胞彼此分离，而且可以破坏核内DNA链上的嘌呤碱与脱氧核糖之间的糖苷键，嘌呤脱下，脱氧核糖上的醛基暴露，形成含醛基的无嘌呤结构物，醛基与希夫试剂反应显紫红色。
细胞中只有DNA才具有这种专一的孚尔根反应，因此所以根据紫红色出现的部位就可鉴定脱氧核糖核酸(DNA)的存在，并广泛应用于核及染色体的研究中。
二、实验目的学习和掌握孚尔根反应染色法，鉴定植物细胞核内染色体上DNA的存在。
三、实验材料、用具及药品1．材料：洋葱或大蒜的根尖2．用具显微镜、恒温水浴锅、温度计、镊子、解剖针、刀片、冰箱、温箱、天平、载玻片、盖玻片、吸水纸、吸管、烧杯、量筒、3．药品希夫氏试剂(无色碱性品红液)、漂洗液、1mol·1-1 HCl、45％醋酸等。
四、实验步骤1. 取材与固定：待大蒜根尖长1cm 时，于上午8时剪下根尖，经过预处理后投入卡诺固定液中固定2-24h。
固定后，保存在70%的酒精中，放入冰箱中冷藏供用。
2.水解试管1：取大蒜根尖数条，投入试管，先用清水洗3次，换1N HCl洗一次，倾去，换入预热60℃的1N HCl 浸没根尖，放入恒温水浴锅中在60±0.5℃下水解10分钟（视材料而定，水解时间可以从10分钟延长至30分钟）。
然后吸去热1N HCl，换入冷1N HCl洗一次，再用清水将根尖洗三次。
试管2（对照）取大蒜根尖数条，投入试管，先用清水洗3次，入预热60℃的蒸馏水浸没根尖，放入恒温水浴锅中在60±0.5℃下水解10分钟。
以下各步骤两试管相同。
（水解是本实验成败的关键之一。
重要的是温度，应保持在60±0.5℃之间。
如果温度过高或时间过长，造成水解过度，醣与醛基之间的键被破坏，醛基流失到水解液中，反之，不能出现潜在的醛基，都不能呈现颜色反应。
中国海洋大学实验报告一、【实验目的】1、熟悉并掌握Feulgen反应的原理及其实验操作方法。
2、对细胞的免疫组化研究方法有一初步的认识。
3、对组织切片进行染色，并观察组织中的细胞核。
二、【实验原理】Feulgen反应（Feulgen reaction）是显示DNA的最典型的组织化学反应，是学者Feulgen和Rossenbeck在1924年首次发明出来的，简称为Feulgen法。
因对DNA的显示反应具有高度专一性，因此常常被用来显示细胞内DNA的分布情况。
自Feulgen等发明出显示DNA的Feulgen反应方法以来，其作用机制也久经研究和讨论，现已基本取得共识。
其具体反应原理是：标本经稀盐酸水解后，DNA分子中的嘌呤碱基被解离，从而在核糖的一端出现了醛基。
Schiff试剂中的无色品红可与醛基反应，形成含有醌基的化合物分子, 因醌基为发色团，故可呈现出紫红色。
也就是说, DNA经稀酸水解后产生的醛基，具有还原作用，可与无色品红结合形成紫红色化合物，从而显示出DNA的分布。
其反应机制如下图所示。
2HCl+Na2S2O5→2NaCl+SO2+H2SO3三、【实验用品】1、材料：香柏油5瓶，擦镜纸5本，镊子5把，盖玻片20片，用carnoy's固定液固定的肝脏和精巢切片20片。
2、试剂：（1）schiff氏试剂将0.5g碱性品红置入三角烧瓶内沸腾的蒸馏水中，时时摇动玻璃瓶，煮沸5min使之充分溶解，冷却至50℃时过滤，加入10ml 1mol/L HCl，冷至25℃时，加入0.5g偏重亚硫酸钠(Na2S2O3)无水亚硫酸钠(NaHSO3)，在室温冷暗处至少放置24h(有时需2~3天)，使其颜色退至淡黄色，密封瓶口，藏于暗处，最好保存于4℃冰箱中(可保存数月或更长时间)。
在使用前加入0.5g活性碳, 摇1min, 用粗滤纸过滤，滤液应为无色；若液体颜色变为粉红色，便不能再用。
（2）亚硫酸水(洗涤剂) 用200ml普通自来水(不要用蒸馏水, 以免引起误差)、10ml 10%的偏重亚硫酸钠水溶液和10ml 1mol/L HCl，三者在使用前混合，现用现配。
1．观察细胞内糖类的分布2．掌握糖类的染色方法及过碘酸雪夫反应原理二．实验原理：组织内的多糖、粘多糖及粘蛋白等都用PAS法来显示。
其化学基础是利用过碘酸的氧化作用。
过碘酸是一种强氧化剂，能破坏各种结构内的C-C键，若有1，2乙二醇基（CHOH-CHOH）存在，可变为二醛（CHO-CHO），然后与Schiff试剂反应，与Schiff 试剂生成紫红色反应物。
过碘酸较常用的氧化C-C键的试剂（KmnO4、H2CRO4、H2O2等）灵敏而优越，不再氧化所产生的醛基，与Schiff试剂生成紫色反应物以此得到定位。
三．实验仪器及药品：1.实验器材：显微镜，染色缸，盖玻片。
2实验药品：1%过碘酸，Schiff试剂，0.5%偏重亚硫酸钠溶液，纯酒精，95％酒精，二甲苯。
Schiff试剂的配制：蒸馏水100ml煮沸后取下，立即放入碱性品红使之溶。
冷却至50摄氏度时用滤纸过滤。
加偏重亚硫酸纳（或钾）（或亚硫酸氢盐）及1mol/L HCl 20ml。
避光放置18～24小时（室温）。
溶液变为草黄色。
然后加入300mg活性炭，用力摇动1分钟，过滤。
过滤后即得无色品红。
此液配就后，封严瓶塞，外包黑纸，贮于4摄氏度冰箱备用，用前升至室温。
3.实验材料：兔或鼠的肝、肾、心肌、骨胳肌、马铃薯。
四．实验步骤：1.石蜡切片到复水的步骤如石蜡切片的步骤。
2．0.5%~1%过碘酸水溶液浸泡约4min（不能过长）。
3．倒去过碘酸，注意组织别随之一起倒掉，加蒸馏水洗约1min。
4．Schiff试剂浸泡15min。
注意避光处理，将其放在抽屉里，且Schiff试剂别沾到其他地方。
5．15min后，从抽屉中拿出载玻片，用亚硫酸盐溶液浸泡三次，共6min6．将载玻片放在自来水冲洗5min。
并用胶头滴管挡住组织切片。
7．蒸馏水浸泡1min。
8．倒掉蒸馏水，滴加苏木精复染胞核约7min。
9．流水洗5min。
滴加一滴蒸馏水，盖上盖玻片，吸干玻片外的蒸馏水，放在显微镜下进行镜检。
实验九 孚尔根反应（Feulgen Reaction）Feulgen反应（Feulgen reaction）是显示DNA的最典型的组织化学反应，是学者Feulgen和Rossenbeck 在1924年首次发明出来的，简称为Feulgen法。
因对DNA的显示反应具有高度专一性，因此常常被用来显示细胞内DNA的分布情况。
实验目的1. 熟悉并掌握Feulgen反应的原理及其实验操作方法2. 对细胞的免疫组化研究方法有一初步的认识实验原理自Feulgen等发明出显示DNA的Feulgen反应方法以来，其作用机制也久经研究和讨论，现已基本取得共识。
其具体反应原理是，标本经稀盐酸水解后，DNA分子中的嘌呤碱基被解离，从而在核糖的一端出现了醛基。
Schiff试剂中的无色品红可与醛基反应，形成含有醌基的化合物分子, 因醌基为发色团，故可呈现出紫红色。
也就是说, DNA经稀酸水解后产生的醛基，具有还原作用，可与无色品红结合形成紫红色化合物，从而显示出DNA的分布。
其反应机制如下图所示。
2HCl+Na2S2O5→2NaCl+SO2+H2SO3实验用品一、材料 香柏油5瓶，擦镜纸5本，镊子5把，盖玻片20片，用carnoy's固定液固定的肝脏和精巢切片20片。
二、试剂1. schiff氏试剂将0.5g碱性品红置入三角烧瓶内沸腾的蒸馏水中，时时摇动玻璃瓶，煮沸5min 使之充分溶解，冷却至50℃时过滤，加入10ml 1mol/L HCl，冷至25℃时，加入0.5g偏重亚硫酸钠(Na2S2O3)无水亚硫酸钠(NaHSO3)，在室温冷暗处至少放置24h(有时需2~3天)，使其颜色退至淡黄色，密封瓶口，藏于暗处，最好保存于4℃冰箱中(可保存数月或更长时间)。
在使用前加入0.5g活性碳, 摇1min, 用粗滤纸过滤，滤液应为无色；若液体颜色变为粉红色，便不能再用。
2. 亚硫酸水(洗涤剂) 用200ml普通自来水(不要用蒸馏水, 以免引起误差)、10ml 10%的偏重亚硫酸钠水溶液和10ml 1mol/L HCl，三者在使用前混合，现用现配。
期末实验孚尔根染色法和植物染色体标本的制备207.12.1 6.结果与分析6.1结果（1）孚尔根染色结果图1.洋葱根尖分生区孚尔根DNA染色结果（10×10倍）图2.洋葱根尖分生区孚尔根DNA染色结果（10×40倍）①结果描述：在光学显微镜下，洋葱根尖细胞被均匀地压成了单层细胞，细胞分布较为均匀，变形细胞较少。
DNA成功被染上紫色，染色较深，视野背景为白色无红色颗粒较为清晰，视野中无气泡。
处于分裂时期的细胞约占10％，分裂期的细胞染色体染色较深，而分裂间期的染色较浅，中间有1-3个白斑为核仁。
②结果评价：较成功③结果分析：在物镜10倍观察下可以清晰反映出压片的结果与染色的情况。
在压片前要注意用亚硫酸水把染液冲洗干净，防止背景一片红，不利于观察，压片时先把根尖捣碎，防止细胞堆积；在压片时要固定好盖玻片防止盖玻片与载玻片之间发生摩擦，防止细胞变形，同时也要注意力度的把握和敲击的方向，垂直敲打，且从中间到边缘。
染色的时间要足够长，这是我实验时制作的第二张装片，染色时间为18min,第一张为10min，染色较浅，不利于观察。
视野中，由于分裂期的染色质高度螺旋为染色体，DNA浓度较高，所以分裂期的染色体染色较深，而分裂间期的细胞，DNA分裂较为均匀，所以染色较为均匀且相对浅，中间的白斑为核仁，因为核仁中主要为rRNA，所以不被染成紫色。
A B C DE F G HI J K LM N O P图2.洋葱根尖分生区孚尔根DNA染色有丝分裂过程（10×40倍）①结果描述：A间期:DNA均匀分部于细胞核中，核仁明显，为透明发亮圆形，可见1—3个。
B-E前期：细胞核膨大，染色质缩短变粗，晚前期（D、E）核仁、核膜消失。
F-G中期：染色体缩短变粗，形成姐妹染色单体，整齐排列与赤道板上。
H-L后期：着丝粒分裂，姐妹染色单体分离，分别移向细胞两极。
M-P末期：染色体解旋为染色质，核仁核膜重新出现，细胞中间形成细胞板。
课程名称：细胞生物学指导老师：成绩：__________________实验名称：孚尔根染色同组学生姓名：一、实验目的和要求（必填）二、实验内容和原理（必填）三、实验材料与试剂（必填）四、实验器材与仪器（必填）五、操作方法和实验步骤（必填）六、实验数据记录和处理七、实验结果与分析（必填）八、讨论、心得一、实验目的1.以Feulgen染色法为例学习细胞化学方法检测细胞核DNA的原理和方法；2.观察DNA在细胞内的分布。
二、实验原理孚尔根反应分为水解和显色两个步骤。
在水解过程中，细胞中DNA经1N60℃盐酸水解后，DNA双螺旋结构中的嘌呤与脱氧核糖之间的连接打开，使脱氧核糖的第一碳原子上形成游离的醛基，这些醛基与Schiff氏试剂作用，形成紫红色的三苯甲烷衍生物。
Schiff试剂是由碱性品红和偏重亚硫酸钠相作用，形成无色的品红液，当无色品红与醛基结合形成紫红色的化合物。
紫红色的产生，是由于反应产物的分子内含有醌基，醌基是一个发色基团，所以具有颜色。
因此凡有DNA的地方，都能显示紫红色。
但是，细胞中除了DNA酸解会产生醛基之外，多糖等物质也会产生醛基，此外细胞中可能还有自由醛基，但多糖的醛基不会再该反应条件下裸露，而且自由醛基可被盐酸消除；此外，细胞中的RNA也不被染色。
目前认为，RNA的N-糖苷键较为稳定，在孚尔根反应的酸解条件下，其嘌呤碱基不会易被脱去。
故只有DNA不完全水解出来的醛基才能与Schiff试剂反应生成紫红色产物；由于线粒体，叶绿体的结构原因，内部的DNA也不被染色。
从而，孚尔根反应时对细胞中核DNA高度专一的一种检测手段。
材料不经过水解或预先用热的三氯醋酸或DNA酶处理，得到的反应是阴性的，从而证明了Feulgen反应的专一性。
三、实验材料与试剂器材：显微镜、盖玻片、染色缸、眼科剪、解剖刀、镊子、水浴锅试剂：Schiff试剂，亚硫酸水溶液，1mol/L HCl，5%三氯醋酸材料：洋葱鳞茎四、实验步骤1.撕取小块洋葱内表皮，放入10mL预热的60°C的1mol/L HCl中温育水解8-10分钟。
实验10孚尔根（Feulgen）反应
一、实验目的
掌握孚尔根（Feulgen）反应的原理和方法，观察了解DNA在细胞内的分布。
二、实验用具
洋葱内表皮，显微镜、染色缸、剪刀、镊子、培养皿等；1M HCl、希夫试剂、亚硫酸水溶液等。
三、原理
孚尔根反应是Feulgen和Rosserbeck于1924年发现的,是鉴定细胞内DNA特殊有效的方法。
其原理一般认为：稀酸（1M HCl,60℃)水解DNA，打开DNA分子上嘌呤碱和脱氧核糖连接的键，从而使脱氧核糖中的醛基释放出来，然后再与希夫试剂（Schiff试剂，无色品红）反应，由于醛基的氧化作用，使之与无色品红结合成紫红色的化合物。
细胞内凡有DNA的地方都呈阳性反应。
四、操作过程
1、将洋葱鳞茎内表皮放在1mol/l的HCl中，加热到60℃水解8-10分钟。
2、蒸馏水水洗3次。
3、入希夫试剂染色30分钟。
4、亚硫酸水溶液洗3次，每次1分钟。
5、水洗5分钟。
6、将鳞茎内表皮放在载玻片上，盖好盖玻片，用吸水纸吸去玻片上多余的溶液，置显微镜下检查，细胞内凡有DNA的地方都呈阳性反应（玫瑰红色）。
五、实验结果
绘图示Feulgen反应的结果即细胞内DNA的分布。
