生药学实验
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生药学实验指导生药学实验指导是生药学专业毕业生必须掌握的一项技能,它与其它科目的实验有不同之处,需要考虑到药物的安全性,正确使用实验仪器和技术,以及合理地规划实验过程。
生药学实验有以下几个主要方面:1.植物药材的鉴别和质量检验;2.药材的提取和纯化处理;3.对药物的生理药理效应进行测试。
在进行生药学实验前,需要了解并掌握以下资料:1.关于药材的基本知识,包括其植物学性状、化学成分和药理作用。
2.对实验器材和相关技术的熟练掌握,包括循环板、振荡器、离心机、液相色谱仪等。
3.实验前要有充足的实验前准备,包括准备好所需的试剂和养护工具、检查实验器具和设备是否正常工作。
在进行植物药材鉴别和质量检验时,需要对相应的标准有一定的了解,如国家食品卫生标准等。
同时还需学习使用显微镜的技能,能够根据药材的表面形态和内部结构进行判定。
在进行药材的提取和纯化处理时,需要了解药材和所需提取物的化学性质,如溶液的性质、酸碱度等,以便选择合适的溶剂和提取法。
而在进行药物的生理药理效应测试时,则需要掌握相关的实验技术和分析方法,如实验动物的选择、药物的剂量计算、实验前准备和后续数据处理等。
在生药学实验中,安全应该是首要考虑的问题,需要强调实验场地与工作环境的卫生和安全措施。
另外,实验时需要仔细阅读实验操作手册,遵守实验操作规程和实验室的安全操作规定,同时应有适当的实验长度、实验频率和实验负荷控制,以保护个人的健康与安全。
总的来说,生药学实验是在学习药物制剂和药物治疗方面非常重要的组成部分,是提供实践经验和知识的桥梁。
在实验中必须严格遵循相关的规程和操作规定,以确保实验的安全和有效性。
生药学实验报告实验报告: 生药学实验实验目的:1. 学习并掌握生药学实验的基本操作技术;2. 理解植物药物的提取原理和方法;3. 探索生物活性物质提取和鉴定的实验方法。
实验原理:本实验主要分为两部分:植物药物提取和生物活性物质鉴定。
1. 植物药物提取:植物药物提取是利用溶剂将植物中有效成分提取出来的过程。
常用的提取溶剂有乙醇、醋酸乙酯、氯仿等。
提取原理基于溶剂的选择性溶解能力,将植物中的活性成分分离出来。
2. 生物活性物质鉴定:生物活性物质鉴定是通过实验方法来检测和测定提取物中的活性成分的性质和活性。
常用的鉴定方法有色谱法、质谱法、生物效应测定法等。
通过这些方法可以确定药物的主要成分和其生物活性。
实验步骤:1. 植物药物提取:a. 准备植物材料,如中药材;b. 粉碎植物材料,使其更易于提取;c. 选择适当的溶剂,并将粉碎的植物材料浸泡于溶剂中;d. 采用适当的提取方法(如浸泡法、温泡法、回流法等)进行提取,提取时间和温度根据实际情况进行调整;e. 过滤提取液,获得提取物。
2. 生物活性物质鉴定:a. 提取物预处理:根据实验要求,对提取物进行必要的处理,如去除杂质、浓缩等;b. 色谱法鉴定:利用色谱技术(如薄层色谱、高效液相色谱等)对提取物进行分离和鉴定;c. 质谱法鉴定:利用质谱技术(如质谱仪)分析和鉴定提取物中的化合物;d. 生物效应测定法:通过进行生物学实验(如细胞毒性实验、抗菌实验等)来评估提取物的生物活性。
实验结果:根据实验步骤和鉴定方法,得到了提取物的鉴定结果。
可以根据色谱图、质谱图等来确定提取物中的主要成分和其生物活性。
实验结论:通过本实验,我们掌握了植物药物提取和生物活性物质鉴定的基本方法和技巧。
实验结果表明,所提取的植物药物中含有一定的活性成分,并且具有一定的生物活性。
实验总结:本实验通过实际操作,加深了对生药学的理论知识的理解,提高了实验技能。
同时,实验结果也对于植物药物的研究和开发具有一定的参考价值。
10药学——生药学实验教学大纲实验一显微标本片的制作及生药的水分含量测定一、实验目的1.掌握粉末制片法的步骤。
2.熟悉烘干法测定生药中水分含量。
二、实验材料、仪器及试剂水合氯醛液、甘油、苯酚1、醋酸、3%过氧化氢或次氯酸钠溶液三、实验内容与方法●粉末制片法1.蒸馏水装片法专门适用于观察淀粉粒。
挑取粉末适量,置载玻片中央,然后滴加蒸馏水1-2滴。
用牙签或解剖针拌匀,将镊子夹一干净盖玻片沿液面从左至右轻轻放下,多余试液用滤纸条吸去,保持装片干净,即得。
2.水合氯醛法挑取适量粉末置载玻片上,滴加水合氯醛液1-2滴,置酒精灯上加热,待液体渗入粉末内部,渐成透明状,试液因加热而渐渐挥干,再滴加水合氯醛液1-2滴,加热,透化,防止沸腾。
然后滴加稀甘油1-2滴,用解剖针将粉末混匀,用镊子夹干净盖玻片沿液面从左至右轻轻放下,液体受压而延展,充满盖玻片下方。
多余的试液用滤纸条吸去,保持装片干净,即得。
切忌用滤纸条在盖玻片上擦拭,补加液体时应在空隙的相对边缘参加,以防气泡产生。
颜色很深的粉末,可先进展脱色处理。
取待检粉末少许置小烧杯中或载玻片上,加少许3%过氧化氢溶液或次氯酸钠溶液,待颜色变浅后,除去液体。
或取粉末置烧杯中,参加适量水合氯醛在酒精灯上加热,除去液体,滴加稀甘油1-2滴,即得供观察用。
●烘干法测定丹参中水分含量1.原理:供试品在100-105℃下连续枯燥,挥发尽其中的水分,根据减失的重量,即可计算出供试品中的含水量〔%〕。
2.方法:取丹参供试品5g,平铺于枯燥恒重〔W0〕的扁形称量瓶中,厚度不超过5mm,精细称定重量W1,求出供试品重量Ws,翻开瓶盖,置恒温枯燥箱中,在100-105℃下连续枯燥5h,将瓶盖盖好,移至枯燥器中,冷却30分钟,精细称定重量,再在上述温度下枯燥1h,冷却,称重至连续两次称重的差异不超过5mg为止〔W2〕。
3.计算:水分含量=〔W1-W2〕/Ws4.结果判定将计算结果与药品标准的含水量限度〔13%〕比拟,假设低于或等于限度那么符合规定,否那么不符合规定。
《生药学》实验实验一根与根茎类生药(人参甘草当归贯众大黄黄连川芎)一、实验目的(一)掌握:人参甘平当归大黄黄连实验观察的各项鉴别特征:(二)掌握:三七高丽参西洋参川芎苍术白术的性状特点二、实验内容与方法:(一)观察人参腊叶标本,注意根及根茎特征,茎单一,掌状复叶轮生茎顶,注意小叶形态、叶片数目,植令几年,何种花序。
(二)性状鉴定1、甘草Radis Glyc yrrhiz ac,根呈圆柱形,表面红棕色,有横长皮孔,外皮有时呈鳞片状剥落,折断时有粉尘散出,断面纤维性、淡黄色、气微、味甜而特异。
2、人参Radix Ginseng 观察野山参的的外部形态特征,搞清什么是“雁脖芦”“枣核”“横短休”“铁线纹”“珍珠点”。
观察园参浸制标本,注意芦头,芦碗及主支根须根各部特征,比较生晒参、红参、糖参,高丽参性状特征。
注意生晒参断面,形成层环棕黄色有黄棕色点状树脂道,气特异,味甜,微苦。
3、当归Radix Angelicae Sinensis 根头及主根粗短,圆柱形表面黄棕色,有横向椭圆形皮孔。
质柔软,断面有棕色油点,形成层环棕色,有浓郁香气,味苦微甜。
4、三七根呈纺锤形表面黄或灰褐色(铜),顶端有茎根痕周围有痕状突起(狮子头)质坚硬(铁置)断面皮部有棕色树脂道斑点.注意与伪品三七的区别。
5、大黄Radix et Rhizoma Rhei 观察大黄生药性状判断根与根茎的区别点,注意形状、颜色、质地、星点所在部位。
有特殊香气、味苦。
6、黄连Rhizoma Coptidis 味连呈簇状分枝,表面棕褐色,节密生,结节状隆起起,部分节间平滑,称“过桥”,断面皮部暗棕色,木部金黄色,味极苦,比较雅连、云连、味连的不同点。
7、川芎Rhizoma Chuanxiong 结节状团块,注意隆起的轮节,瘤状根痕,断面颜色特征,气浓香而特异,味苦辛。
8、观察绵马贯众、苍术、白术的性状特色,比较苍术、白术二者异同点,注意多种贯众叶柄维管束的数目及排列方式。
《生药学实验》教学大纲一、课程基本信息课程编号:215113007913中文名称:生药学实验英文名称:Pharmakognosie适用专业:药学专业课程类别:专业必修课开课时间:第5学期总学时:24总学分:1学分二、课程简介生药学实验是药学专业学生学习生药过程中理论联系实践的重要课程,通过实验课能使学生掌握生药常规的鉴别方法与操作技能,增强学生对单味生药的感性知识,课程涵盖了生药的性状与显微特征观察、理化鉴别、质量分析等多个方面。
本课共授课30学时,授课时间半学期,共6次实验。
三、相关课程的衔接与相关课程的前后续关系。
预修课程:药用植物学实验并修课程:天然药物化学实验四、教学的目的、要求与方法(一)教学目的实验是教学过程中强化学生理论课知识、培养学生动手能力不可缺少的教学环节。
通过本实验课程的学习,重点培养学生掌握生药鉴定的一般程序和方法,熟悉各类药材的鉴别特征,加强学生对生药学基本概念的理解,使学生掌握并具有较为熟练的生药实验操作技能及研究思维能力,为药学专业学生准确识别与鉴定生药、制定质量标准、开发资源及新药研究打下较为坚实的基础。
(二)教学要求1.掌握生药鉴定的基本方法和技能。
2.掌握40种常用药材的性状特征、显微特征和理化特征。
3.了解30种常用药材的性状特征和显微特征。
4. 熟悉中药品质评价的基本程序。
(三)教学方法教学方法以实验课堂实验教学为主,综合运用探讨式教学、多媒体教学、参观实践等教学方法。
授课内容分为掌握、熟悉、了解等三个层次。
实验课要求学生在老师的指导下,独立动手操作,独立完成实验内容。
五、教学内容及学时分配实验(一)显微测量和菌类、裸子植物类、部分双子叶植物类药材的性状及显微鉴定(4学时)1.显微制片、显微观察方法2.显微测量、药材组织简图和粉末显微图绘制3.部分药材的性状与显微鉴定本章的重点和难点:制片技术、绘图技术与显微测量技术、显微观察方法;重点药材的性状和显微特征。
生药学实验目录前言实验一生药的显微鉴定技术实验二生药的水分、灰分和浸出物测定实验三色谱法在生药鉴定中的应用实验四气相色谱法的应用及挥发油含量测定实验五液相色谱法的应用及蒽醌类成分的含量测定实验六光谱法在生药鉴定中的应用实验七滴定法测定生药中生物碱的含量实验八根类生药鉴定实验九根茎类生药鉴定实验十茎木类、皮类、叶类生药鉴定实验十一花、果实、种子类生药鉴定实验十二全草类生药的鉴定实验十三动物类生药的鉴定实验十四矿物类生药的鉴定实验十五中成药的显微鉴定实验十六未知生药粉末鉴定实验十七设计性实验药材质量标准的制定附生药学实验中常用试剂的制备及使用前言一、生药学实验的目的与要求生药学是药学专业教学计划中的一门专业必修课程。
本实验指导是根据生药学教学大纲要求编写的,实验内容大致包括下面几方面:1、各类生药性状鉴别及其原植物的外形特征观察;2、生药的显微特征与显微化学反应;3、生药化学成分的定性与定量分析。
生药学是一门综合性的应用学科,实验工作在本门课程中占有主要地位。
不通过认真的、全面系统地实验及技术操作训练,就不可能学好本门课程。
通过生药学实验,使学生达到以下要求:1、掌握生药鉴定的各种方法和操作技术;2、熟悉各种生药的形成特征及原植物的特征,能正确地进行鉴定;3、了解生药鉴定用的各种仪器的构造,并学会其使用方法;4、进一步理解和巩固生药学理论知识;5、培养正确的科学态度和工作作风二、实验前的准备工作实验内容的安排是与课堂讲授密切配合的,因此,要求同学在实验前作好准备工作:1、根据实验进度表,复习与本次实验有关的课堂讲授内容或教材上有关章节内容。
2、仔细阅读每次实验内容,要求弄清实验的原理与方法,并对每次实验的思考题试作解答;3、对每次实验的整个内容,做好顺序及时间上的安排,以使实验时不忙乱,不拖拉,按时完成实验;4、准备好铅笔HB橡皮、直尺、报告纸等自备实验用品。
三、实验1、遵守实验室规则,保持实验室安排;2、实验开始前,教师进行讲解和提问时,应当注意听讲,并作必要的记录;3、实验时应根据具体内容有计划地安排时间,有条不紊地进行实验;4、实验要认真,观察要仔细,观察与思考相结合,做到手、眼、脑并用;5、实验过程中,应当随时将观察到的现象,测量或称量数据,计算结果、推论及结论等写在报告纸上。
生药学实验名目前言实验一生药的显微鉴定技术实验二生药的水分、灰分和浸出物测定实验三色谱法在生药鉴定中的应用实验四气相色谱法的应用及挥发油含量测定实验五液相色谱法的应用及蒽醌类成分的含量测定实验六光谱法在生药鉴定中的应用实验七滴定法测定生药中生物碱的含量实验八根类生药鉴定实验九根茎类生药鉴定实验十茎木类、皮类、叶类生药鉴定实验十一花、果实、种子类生药鉴定实验十二全草类生药的鉴定实验十三动物类生药的鉴定实验十四矿物类生药的鉴定实验十五中成药的显微鉴定实验十六未知生药粉末鉴定实验十七设计性实验药材质量标准的制定附生药学实验中常用试剂的制备及使用前言一、生药学实验的目的与要求生药学是药学专业教学打算中的一门专业必修课程。
本实验指导是依照生药学教学大纲要求编写的,实验内容大致包括下面几方面:1、各类生药性状鉴别及其原植物的外形特点观看;2、生药的显微特点与显微化学反应;3、生药化学成分的定性与定量分析。
生药学是一门综合性的应用学科,实验工作在本门课程中占有要紧地位。
不通过认确实、全面系统地实验及技术操作训练,就不可能学好本门课程。
通过生药学实验,使学生达到以下要求:1、把握生药鉴定的各种方法和操作技术;2、熟悉各种生药的形成特点及原植物的特点,能正确地进行鉴定;3、了解生药鉴定用的各种仪器的构造,并学会其使用方法;4、进一步明白得和巩固生药学理论知识;5、培养正确的科学态度和工作作风二、实验前的预备工作实验内容的安排是与课堂讲授紧密配合的,因此,要求同学在实验前作好预备工作:1、依照实验进度表,复习与本次实验有关的课堂讲授内容或教材上有关章节内容。
2、认真阅读每次实验内容,要求弄清实验的原理与方法,并对每次实验的摸索题试作解答;3、对每次实验的整个内容,做好顺序及时刻上的安排,以使实验时不忙乱,不拖拉,按时完成实验;4、预备好铅笔HB橡皮、直尺、报告纸等自备实验用品。
三、实验1、遵守实验室规那么,保持实验室安排;2、实验开始前,教师进行讲解和提问时,应当注意听讲,并作必要的记录;3、实验时应依照具体内容有打算地安排时刻,有条不紊地进行实验;4、实验要认真,观看要认真,观看与摸索相结合,做到手、眼、脑并用;5、实验过程中,应当随时将观看到的现象,测量或称量数据,运算结果、推论及结论等写在报告纸上。
生药学实验报告篇一:生药学实验报告一北京电大《生药学》实验报告一生药学性状鉴别与显微鉴别实验地点▁▁▁▁▁▁▁姓名▁▁▁▁▁▁▁▁时间▁▁▁▁▁▁▁学号▁▁▁▁▁▁▁▁得分▁▁▁▁▁▁▁教师签名▁▁▁▁▁▁▁▁1.记录下列中药的来源并观察其性状特征绵马贯众麻黄黄连五味子肉桂板蓝根当归川芎柴胡黄芩天花粉麦冬2.记录下列中药的显微横切面特征黄连甘草1人参麦冬3.记录下列中药的显微粉末特征麻黄大黄甘草人参2篇二:生药学实验报告二北京电大《生药学》实验报告二生药学理化鉴别实验地点▁▁▁▁▁▁▁姓名▁▁▁▁▁▁▁▁时间▁▁▁▁▁▁▁学号▁▁▁▁▁▁▁▁得分▁▁▁▁▁▁▁教师签名▁▁▁▁▁▁▁▁请按下列中药理化鉴别方法的操作进行实验,观察实验现象并做记录。
1.大黄的鉴定:取大黄粉末少许,置载玻片上,玻片两端各放短木棍一小段。
另取一洁净载玻片,置于小棍上,注意勿触及下面粉末。
然后放在置于三角架上的铁纱网上的小心加热(勿使粉末炭化)至玻片上有升华物凝结为止。
取下盖片,使升华物面向上,放置于显微镜下观察,观察实验现象并做记录。
再滴加碱液,观察此晶体遇碱液的实验现象并做记录。
2.黄连的鉴定(1)取黄连粉末少许置于载玻片上,滴加稀盐酸1滴,镜检,观察实验现象并做记录。
(2)另取黄连粉末少许,滴加30%硝酸1滴,镜检,观察实验现象并做记录。
(3)取黄连饮片置于紫外光灯下照射,观察实验现象并做记录。
3.黄芩的鉴定取黄芩粉末1g ,置50ml锥形瓶中,加乙醇10ml,温浸15分钟,滤过。
(1)取滤液1ml,加10%醋酸铅试液2~3滴,观察实验现象并做记录。
4.甘草的鉴定取甘草粉末少量置白瓷板上,加80%硫酸溶液数滴,观察实验现象并做记录。
(2)取滤液1ml,加镁粉少量与盐酸3~4滴,观察实验现象并做记录。
篇三:药学大实验报告药学实验报告班级:生物制药1101姓名:刘翠婷学号:UXX12717华中科技大学乙酰水杨酸的合成一、实验目的1. 掌握由酸酐作为酰基化试剂和醇反应制备酯的方法2. 巩固普通蒸馏、抽滤、重结晶等基本操作3. 学习应用显微镜熔点仪测定熔点的方法。
植物细胞的结构紫色洋葱细胞碘化铋钾的配制:直接用碘化铋钾0.85g,加冰醋酸10ml与水40ml溶解后,摇匀,即得。
水合氯醛的配制:稀甘油配制:稀碘液配制:碘-碘化钾溶液配制:临时装片的制作方法操作步骤口诀:擦、滴、取、展、盖、染、吸。
1、准备擦——用洁净的纱布把载玻片和盖玻片擦拭干净滴——把载玻片放在实验台上,用吸管在载玻片上滴一滴蒸馏水2、制片取(撕、刮、切、挑)——用镊子从洋葱鳞片叶内表皮上撕取一小块方形透明薄膜放(展、抹)——将撕下的洋葱鳞片叶内表皮浸入载玻片上的水滴中,用镊子轻轻展平盖——用镊子轻夹盖玻片的一边,使盖玻片另一边先接触载玻片上的水滴,而后慢慢地把盖玻片轻轻盖在材料上,尽量避免气泡产生。
如有气泡,可用镊子从盖玻片的一侧掀起,然后再慢慢重新盖上。
如有水溢出盖玻片,用吸水纸吸干净3、染色染——滴一滴染液(中性红试液、碘化钾试液)在盖玻片一侧,用吸水纸在另一侧吸引,直至染液浸润到标本的全部,如有染液溢出,用吸水纸吸干净洋葱内表皮细胞注意识别下列各部分:(1)细胞壁为植物细胞所特有。
为细胞的最外层,比较透明。
调节细调焦螺旋可见两细胞间实际上为三层;两侧为相邻两个细胞的细胞壁;中间是两个细胞共有的胞间层。
(2)细胞质:为无色透明的胶状物,紧贴在细胞壁以内,被中央大液泡挤成一薄层,仅细胞两端较明显。
(3)细胞核:埋在细胞质内;贴近细胞侧壁的只见其窄蔺,呈扁圆形,贴在上、下整的可见其宽面,呈球形。
仔细观察,可见包在细胞核外面的核膜,细胞核内有1—3个发亮的颗粒,即核仁。
(有的细胞看不见细胞核是因为该细胞被撕破,只剩一半了)(4)液泡:位于细胞中央,占细胞体积的大部分,由于澈泡内充满细胞液;所以比细胞质更透明。
植物细胞后含物1.观察马铃薯淀粉粒淀粉粒在形成时,先从一个点(脐点)开始,向外层层沉积,形成许多同心的层次——层纹(直链淀粉和支链淀粉交替沉积而成)。
切取马铃薯一小块,用刀片刮少许混浊液,置于载玻片上,或用马铃薯块直接涂片,加蒸馏水一滴,盖上盖玻片。
生药学实验目录前言实验一生药的显微鉴定技术实验二生药的水分、灰分和浸出物测定实验三色谱法在生药鉴定中的应用实验四气相色谱法的应用及挥发油含量测定实验五液相色谱法的应用及蒽醌类成分的含量测定实验六光谱法在生药鉴定中的应用实验七滴定法测定生药中生物碱的含量实验八根类生药鉴定实验九根茎类生药鉴定实验十茎木类、皮类、叶类生药鉴定实验十一花、果实、种子类生药鉴定实验十二全草类生药的鉴定实验十三动物类生药的鉴定实验十四矿物类生药的鉴定实验十五中成药的显微鉴定实验十六未知生药粉末鉴定实验十七设计性实验药材质量标准的制定附生药学实验中常用试剂的制备及使用前言一、生药学实验的目的与要求生药学是药学专业教学计划中的一门专业必修课程。
本实验指导是根据生药学教学大纲要求编写的,实验内容大致包括下面几方面:1、各类生药性状鉴别及其原植物的外形特征观察;2、生药的显微特征与显微化学反应;3、生药化学成分的定性与定量分析。
生药学是一门综合性的应用学科,实验工作在本门课程中占有主要地位。
不通过认真的、全面系统地实验及技术操作训练,就不可能学好本门课程。
通过生药学实验,使学生达到以下要求:1、掌握生药鉴定的各种方法和操作技术;2、熟悉各种生药的形成特征及原植物的特征,能正确地进行鉴定;3、了解生药鉴定用的各种仪器的构造,并学会其使用方法;4、进一步理解和巩固生药学理论知识;5、培养正确的科学态度和工作作风二、实验前的准备工作实验内容的安排是与课堂讲授密切配合的,因此,要求同学在实验前作好准备工作:1、根据实验进度表,复习与本次实验有关的课堂讲授内容或教材上有关章节内容。
2、仔细阅读每次实验内容,要求弄清实验的原理与方法,并对每次实验的思考题试作解答;3、对每次实验的整个内容,做好顺序及时间上的安排,以使实验时不忙乱,不拖拉,按时完成实验;4、准备好铅笔HB橡皮、直尺、报告纸等自备实验用品。
三、实验1、遵守实验室规则,保持实验室安排;2、实验开始前,教师进行讲解和提问时,应当注意听讲,并作必要的记录;3、实验时应根据具体内容有计划地安排时间,有条不紊地进行实验;4、实验要认真,观察要仔细,观察与思考相结合,做到手、眼、脑并用;5、实验过程中,应当随时将观察到的现象,测量或称量数据,计算结果、推论及结论等写在报告纸上。
应当养成能随时作出准确、清楚、整齐的记录而不需要重抄的良好习惯;6、实验台上应随时保持整洁,非实验必要的物品一律不许放在实验台上或试剂架上;7、酒精灯用后,应及时熄灭,应用水浴时,应注意保持其中有水,切勿使烧干,纸屑、废物应放入污物缸内。
四、实验结束时的要求1、按时交实验报告2、把实验仪器试剂等放回指定位置。
发给每人保管的器材可放在抽屉内,擦净台面。
3、值日生负责最后扫实验室地面、台面,擦净黑板及其他指定工作。
污物缸内废物垃圾应及时清除。
4、植日生最后应认真检查水笼头,电源是否关好。
离开实验室应关好门窗。
实验一生药的显微鉴定技术一、目的要求1.掌握徒手制片、粉末制片、表面制片和解离制片方法。
2.掌握生物显微镜使用及显微绘图技术。
3.掌握显微测微尺的校正和使用方法。
4.掌握描绘器的使用方法。
二、仪器、试剂1.仪器生物显微镜、酒精灯、盖玻片、载玻片、镊子、解剖针、擦镜纸、吸水纸、火柴、绘图铅笔(HB、2H、4H)、直尺和擦皮,以上是每次实验必备品。
另需单面刀片或剃刀、烧杯、试管、目镜测微尺、载台测微尺、显微描绘器、绘图板、恒温水浴锅、量筒、粉碎机。
2.试剂稀甘油、水、水合氯醛试液、甘油醋酸试液、间苯三酚试液、浓盐酸、10%铬酸、浓硝酸、10%硝酸、氯酸钾、5%~15%的氢氧化钾溶液。
三、实验材料制作徒手切片和表面制片,可选用新鲜药材;制作粉末片,选用干燥药材的粉末,如:甘草、虎杖、麦冬、当归等。
四)、实验内容1.生物显微镜的使用生物显微镜由光学部分和机械部分组成。
光学部分包括成像系统——目镜和物镜,照明系统——聚光器、可变光栏和反射镜。
物镜将标本作第一次放大,目镜将第一次放大的像作第二次放大,两者相乘即是观察到的放大倍数。
机械部分包括镜座、镜臂、镜筒、载物台、粗细调节手轮及推动器或压夹。
使用生物显微镜时,利用反射镜将外来光线导入聚光镜中,由聚光镜将光线会聚在标本上,用光栏调节光线强度。
观察时视野范围内应均匀明亮,先用低倍镜观察,如需要放大,可将目的物调至视野中央,然后转换成高倍镜,仔细观察。
(1)低倍镜的操作法:1)将显微镜放置离桌缘约10cm处,镜臂应靠近胸前。
2)对光。
上升聚光镜到载物台水平,打开光栏至最大限度,再将低倍镜转至镜筒的正下方,使对准载物台上的透光孔(转动时,听到“得”一声,即已对正)然后用二手转动反光镜,同时从接目镜向下看,直至镜中出现一明亮而均匀的视野为止。
3)装片。
将欲观察的标本片从镜前方横置于载物台上,(注意盖玻片应向上)使标本对准透光孔的中央。
4)调节焦距。
从侧面注视接物镜与标本片之间的距离,向外旋转粗调节手轮,使镜筒慢慢下降,直至物镜几乎与标本片相接触,但切勿触及标本片,以免造成镜头与标本片的损坏。
自目镜向下观察,同时向内旋转粗调节手轮,使物镜慢慢上升,直至在视野中看到清楚的物象为止。
若标本不在视野中,则慢慢移动标本片,使之适中,看到物象后,用压片夹固定制片,再转动细调节手轮,并调节光线,直到看到最清楚的物象为止,注意在显微镜中看到的是实物倒象。
如果观察过程中发现清晰的图像逐渐模糊,说明调节手轮失灵,应进行检修。
(2)高倍镜的操作法:应先在低倍镜下选择物像,移至视野中心,换转高倍镜,应能看到欲观察之物象,用细调节手轮使之图象清晰。
更换高倍镜时如出现镜头触及载玻片现象,则要检查标本切片是否放反,或高低倍镜是否配套。
高倍镜头观察物象时,只能用细调节手轮调节焦距。
(3)使用显微镜注意点:1)取拿显微镜时,必须一手握住镜臂,一手托住镜座,轻取轻放,防止因撞击使镜头内各组透镜脱胶而影响观察的清晰度。
2)每次观察标本片时,必须先用低倍镜观察,看清物象后,再换高倍镜。
3)要注意保持显微镜的干燥和清洁,使用前后,均需将显微镜擦干净,注意镜头要用擦镜纸或绸巾单向擦拂,切勿用手、手帕或纸片等去擦,观察临时制片时,要防止水分或药液外溢以致沾污镜头及其他部分。
2.显微制片法(1)徒手制片法:系用刀片或徒手切片器将材料切成薄片,可在显微镜下观察组织构造、细胞特征的制片法,新鲜材料应除净泥砂,干燥材料需浸软后切片。
本方法简便快速,能保持植物体原有结构的真像、色彩和内含物,适合于临时制片观察或显微化学实验,其缺点是切片较厚且厚薄不均一,不适合长期保存。
1)取材、固定与切片:选择已软化的中药材适当部位,切割成长2~3cm的小段,用拇指及食指和中指夹住材料,下端用无名指托住,另手持刀片,自左向右移动手腕,牵曳切片,动作要轻而快,力求切片薄而完整,操作时材料的断面与刀口须经常用水湿润。
对于叶片或柔软的材料,需用稍坚固而易切的胡萝卜、马铃薯或实心大通草等将材料夹住进行切片。
徒手切片器切片:将适当长度的材料夹入切片器上口外,旋转螺丝将材料固定紧,材料略露出圆盘平面,然后将切片刀或剃刀平放在圆盘上,自左向右平拉切片,同时转动切片器下端的升降调节轮,使材料上升,以利切片。
2)装片:将切好的薄片,用毛笔小心地移入盛有清水的培养皿中浸泡,取载玻片滴加甘油或试液,用镊子或毛笔将切片移于其上,再滴一滴甘油于片上,加上盖玻片,即可作临时制片观察;也可将薄片滴加水合氯醛液加热透化,再滴加稀甘油,加上盖玻片后进行观察。
加盖玻片时,应尽量避免产生气泡。
(2)粉末制片法:将药材研粉,过筛(50-80目)后制片。
此法是鉴定中药材最常用的方法之一,简便快速,主要鉴别细胞的形态特征。
特别坚硬的药材可用锉刀将其锉成粉末。
取粉末少许,置于洁净的载玻片上,滴加1~2滴蒸馏水或甘油醋酸试液,加上盖玻片,置显微镜下,可观察细胞中的不溶性物质如淀粉粒、脂肪油滴、色素颗粒等。
如要观察细胞的形态特征,则应采用滴加水合氯醛加热透化后装片,以除去细胞中的淀粉、油脂等,增加细胞壁的折光率,从而使细胞的形态更加清晰。
为防止水合氯醛结晶析出,水合氯醛透化后应滴加甘油,盖上盖玻片,擦净溢出液即可观察。
(3)表面制片法:多用于对叶片、果实或草本植物茎表皮组织的观察,可观察到表皮细胞形态、气孔类型、毛茸特征和着生情况等。
通常用眼科镊子夹住叶片或果实等的表面,轻轻撕取其表皮层置于载玻片上的水、甘油或水合氯醛试液内,注意其上表面朝上方,加盖盖玻片,置显微镜下进行观察。
(4)解离制片法:系利用化学试剂使植物体的细胞与细胞间的中层物质溶解,细胞相互分离的方法。
适用于研究细胞的立体形态结构,尤其适宜观察导管、管胞、石细胞和纤维等增厚壁的状况。
欲解离的材料,需先切割成2mm的薄片。
根据选用解离的试剂不同分:1)氢氧化钾解离法:适用于柔软的植物材料。
将切割好的材料置于坩埚中,加5%氢氧化钾溶液适量,加热至用玻棒挤压能离散为止。
如离析的材料稍硬,可用6%~10%氢氧化钾液加热使之离析,尚可更换一次试液。
待材料能被轻压离散时,倾去碱液,用水洗至中性,即可取所需部位加稀甘油制片观察。
用氢氧化钾溶液能逐渐除去细胞中的淀粉、蛋白质、油脂及色素,其作用较水合氯醛强,并能使细胞膨胀,若作用时间较长,能使纤维性组织解离,并可引起薄壁组织的破坏和变形。
所以加热处理时间不宜太长。
2)硝酸-铬酸离析法:适用于木质化组织,如木材、根、茎、树皮等材料,将材料放入坩埚或试管中,加10%硝酸与10%铬酸的等量混合液,其量为材料的20倍,放置浸渍的时间,视材料的性质而异,一般为1~2日或更长的时间。
也可以采用加温的办法来缩短浸渍时间,以材料用玻棒轻压,可以离散为度,然后用水洗至中性,即可制片观察。
硝酸和铬酸均为强氧化剂,解离速度较快,如解离柔软较嫩的材料,应注意掌握时间,经硝酸、铬酸解离的材料,草酸钙、碳酸钙结晶及淀粉粒、脂肪油等均已消失。
3)氯酸钾法:本法适用于坚硬的材料,如木类及某些果实、种子坚硬的果皮、种皮等,将材料置坩埚或小烧杯中,加50%硝酸试液约5ml及氯酸钾粉少量,缓缓加热至沸,当气泡渐少时,再及时加入少量的氯酸钾,以维持气泡稳定产生(约15~20分钟),至材料能分离开时,倾去试液,加水洗涤数次,即可制片观察。
采用此解离法制片需在通风处进行,以防氯气中毒。
3.显微测微尺的使用显微测微尺是用来测量显微镜下所见物体长度、大小的标尺,包括镜台测微尺和目镜测微尺。
镜台测微尺为一特制的载玻片,在载玻片的中央封有lmm 长的小尺,精确分成10大格,每大格又分10小格,共100小格,每小格长度为0.0lmm,即10μm(图1-2)。
标尺的外围有一小黑环,便于在显微镜下寻找标尺。