第十二页,共46页。
第二节 化学发光剂和标记技术
第十三页,共46页。
一、化学发光剂
在化学发光反响中参与能量转移并最终以发射光子的形式释放能量的化合物,称为化学发光剂或发光底物。
第十四页,共46页。
能作为化学发光剂的条件: ①发光的量子产率高;
②它的物理-化学特性要与被标记或测定的 物质相匹配;
4. N-羟基琥珀酰亚胺活化法
第二十七页,共46页。
影响标记的因素
1.发光剂的选择
2.被标记蛋白质的性质 3.标记方法的选择
4.原料比
5.标记率 6.温度 7.纯化与保存
第二十八页,共46页。
第三节 化学发光免疫分析的类型
第二十九页,共46页。
一、直接化学发光免疫分析
用吖啶酯直接标记抗体(抗原),与待测标本中相应的 抗原(抗体)发生免疫反响后,形成固相包被抗体-待测 抗原-吖啶酯标记抗体复合物,这时只需参加氧化剂 〔H2O2〕和NaOH使成碱性环境,吖啶酯在不需要催 化剂的情况下分解、发光 。
第二十二页,共46页。
2.AMPPD
〔3-(2‘-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3“-磷酰氧基)苯-1,2-二氧杂环丁烷〕〕
第二十三页,共46页。
二、发光剂的标记技术
1. 碳二亚胺〔EDC〕缩合法
第二十四页,共46页。
2. 过碘酸钠氧化法
第二十五页,共46页。
3.重氮盐偶联法
第二十六页,共46页。
发光
磁微粒技术
磁微粒形式图
特点
抗原和抗体结合与未结合部分的易 别离
第三十二页,共46页。
Y
二、化学发光酶免疫分析
化学发光酶免疫分析〔chemiluminescence enzyme immunoassay,CLEIA〕是用参与催化某一化学发光反响的酶如辣根过氧 化物酶〔HRP〕或碱性磷酸酶(ALP)来标记抗原或抗体,在与待测标本中相 应的抗原(抗体)发生免疫反响后,形成固相包被抗体-待测抗原-酶标记抗体 复合物,经洗涤后,参加底物(发光剂),酶催化和分解底物发光,由光量子 阅读系统接收,光电倍增管将光信号转变为电信号并加以放大,再把它们传 送至计算机数据处理系统,计算出测定物的浓度。