【CN109609346A】一种基于磁珠法核酸提取的方法及设备【专利】

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202110127842.3(22)申请日 2021.01.29(71)申请人 济凡生物科技（北京）有限公司地址 100080 北京市海淀区紫雀路33号院3号楼3层3328(72)发明人 韩典霖　胡美丽　杨亮　(74)专利代理机构 北京知呱呱知识产权代理有限公司 11577代理人 彭伶俐(51)Int.Cl.C12N 15/10(2006.01)(54)发明名称一种基于磁珠的快速提取细菌核酸的试剂盒及提取方法(57)摘要本发明公开了一种基于磁珠的快速提取细菌核酸的试剂盒及提取方法。

所述试剂盒的试剂包括：裂解液、磁珠液、去蛋白漂洗液、去盐漂洗液和核酸洗脱液。

所述方法包括样本中加入磁珠液和裂解液裂解、漂洗液漂洗、核酸洗脱液洗脱后得细菌核酸。

本发明基于磁珠的快速提取细菌核酸的试剂盒提取操作简便，不含酚氯仿等有毒试剂，可实现手工操作，可整合各种自动化核酸提取仪，步骤简便，只需要加入样品，不需加蛋白酶K，即可自动提取获得核酸，在最大程度上简化了实验操作步骤和保证了实验人员的安全。

满足医院临床样本较多时对核酸提取速度和通量的需求和对核酸提取质量的要求；同时本发明的试剂盒毒性低、操作简便、样本通量高、核酸提取效果更佳。

权利要求书1页 说明书5页 附图1页CN 112680440 A 2021.04.20C N 112680440A1.一种基于磁珠的快速提取细菌核酸的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的试剂包括裂解液、磁珠液、去蛋白漂洗液、去盐漂洗液和核酸洗脱液。

2.根据权利要求1所述基于磁珠的快速提取细菌核酸的试剂盒，其特征在于，所述裂解液包括：3‑6mol/L胍盐、5‑20％十二烷基硫酸钠、20‑200mmol/L乙二胺四乙酸、10‑100mmol/L三羟甲基氨基甲烷、100‑1000mmol/L氯化钠、0.5％‑5％脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠和表面活性剂。

(10)申请公布号(43)申请公布日 (21)申请号 201410828555.5(22)申请日 2014.12.26C12N 15/10(2006.01)(71)申请人南京中科神光科技有限公司地址210038 江苏省南京市经济技术开发区兴和路18号(72)发明人王炜 孟庆海 李智洋 何农跃曲文静(74)专利代理机构北京中济纬天专利代理有限公司 11429代理人张晓霞(54)发明名称一种磁珠法提取细菌中核酸的试剂盒及提取方法(57)摘要一种磁珠法提取细菌中核酸的试剂盒及提取方法，包含组分为细菌裂解液、磁珠结合液、磁珠洗涤液和核酸洗脱液。

所述细菌裂解液含有十二烷基硫酸钠、乙二胺四乙酸、三羟甲基氨基甲烷和氯化钠；所述磁珠结合液含有聚乙二醇-8000和氯化钠；所述磁珠洗涤液含有乙醇；所述核酸洗脱液含有羟甲基氨基甲烷和乙二胺四乙酸；本发明的试剂盒中含有独特的细菌裂解液，对各种细菌均有较强的裂解作用；该试剂盒可以用于手工提取，也可以结合现在市售的核酸提取仪进行仪器提取，均能提取出纯度和浓度较高的细菌核酸。

(51)Int.Cl.(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书2页 说明书4页 附图1页(10)申请公布号CN 104450684 A (43)申请公布日2015.03.25C N 104450684A1.一种磁珠法提取细菌中核酸的试剂盒，所述试剂盒中的试剂含有以下组分：细菌裂解液、磁珠结合液、磁珠洗涤液和核酸洗脱液，其特征在于：所述细菌裂解液含有以下组分：十二烷基硫酸钠、乙二胺四乙酸、三羟甲基氨基甲烷和氯化钠；所述磁珠结合液含有以下组分：聚乙二醇-8000和氯化钠；所述磁珠洗涤液含有以下组分：乙醇；所述核酸洗脱液含有以下组分：三羟甲基氨基甲烷和乙二胺四乙酸。

2.根据权利要求1所述的磁珠法提取细菌中核酸的试剂盒，其特征在于：在所述磁珠结合液中，聚乙二醇-8000的浓度为20-30mmol/L，氯化钠的浓度为3mol/L。

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910514770.0(22)申请日 2019.06.14(71)申请人 迪佰(厦门)生物科技有限公司地址 361000 福建省厦门市海沧区翁角西路2074号生物医药产业园B13号楼第7层02单元(72)发明人 钟乾兴　肖江群　王保丹　(74)专利代理机构 北京超凡宏宇专利代理事务所(特殊普通合伙) 11463代理人 李双艳(51)Int.Cl.H01F 7/02(2006.01)H01F 41/02(2006.01)C12M 1/00(2006.01)C12M 1/42(2006.01)C12N 15/10(2006.01)(54)发明名称一种用于核酸提取的磁性材料、核酸提取装置以及核酸的提取方法(57)摘要本发明公开了一种用于核酸提取的磁性材料、核酸提取装置以及核酸的提取方法，涉及核酸提取技术领域。

一方面，在该提取装置中，磁性材料直接与吸附核酸的磁珠相接触，该磁性材料能够能显著加快吸附磁珠的效率，避免或减少磁珠在洗涤过程中的损失，从而提高核酸的提取量。

另一方面，该提取装置无需使用者购买外部磁场，在提高提取效率的情况下，有效降低提取成本。

权利要求书2页 说明书8页CN 110233020 A 2019.09.13C N 110233020A1.一种用于核酸提取的磁性材料，其特征在于，其包括磁性颗粒和包覆在所述磁性颗粒表面的表面处理层；优选地，所述表面处理层的材质选自二氧化硅、聚四氟乙烯、PSA以及PVC中的至少一种；优选地，所述表面处理层的厚度为10nm～1000μm；优选地，所述磁性材料的吸力为3000～6000高斯；优选地，所述磁性颗粒的形状为球形、圆柱形、长方体、正方体或类球形；优选地，所述磁性颗粒的尺寸为1～10mm。

2.一种用于核酸提取的磁性材料的制备方法，其特征在于，其包括：采用处理材料对磁性颗粒进行表面处理，在所述磁性颗粒的表面形成表面处理层；优选地，所述表面处理包括：对磁性颗粒进行包覆和/或化学修饰；优选地，所述处理材料选自二氧化硅、聚四氟乙烯、PSA以及PVC中的至少一种；优选地，所述表面处理层的厚度为10nm～1000μm；优选地，所述磁性材料的吸力为3000～6000高斯。

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202011571423.0(22)申请日 2020.12.27(71)申请人 长春晨裕生物医疗科技有限公司地址 130102 吉林省长春市北湖科技开发区盛北大街3333号北湖科技园产业一期B5栋(72)发明人 王旭　朱积宝　(51)Int.Cl.C12N 15/10(2006.01)C08B 37/08(2006.01)(54)发明名称一种磁珠法核酸提取液及其制备方法(57)摘要本发明公开了一种磁珠法核酸提取液及其制备方法。

该提取液包括改性的壳聚糖包覆的磁珠、结合液、洗涤液和洗脱液。

本发明的提取液中包括改性的壳聚糖包覆的磁珠。

通过对包裹磁珠的壳聚糖进行改性，得到的经过聚合氯化铝改性的壳聚糖包覆的磁珠可以显著提高对人全血基因组DNA的提取得率和纯度。

权利要求书2页 说明书6页CN 112646802 A 2021.04.13C N 112646802A1.一种磁珠法核酸提取液，其特征在于，包括改性的壳聚糖包覆的磁珠、结合液、洗涤液和洗脱液；所述改性的壳聚糖包覆的磁珠为经过聚合氯化铝改性的壳聚糖包覆的磁珠。

2.根据权利要求1所述的提取液，其特征在于，制备所述经过聚合氯化铝改性的壳聚糖的材料包括以下重量份的各组分：壳聚糖8‑10份、乙酸8‑10份、聚合氯化铝8‑10份、氯化钙1‑3份、水800‑1000份。

3.根据权利要求1或2所述的提取液，其特征在于，所述结合液为氯化钠和PEG6000的水溶液；优选地，所述结合液中氯化钠的浓度为1.5‑2.5M，PEG6000的浓度为8‑12wt％。

4.根据权利要求1‑3任一所述的提取液，其特征在于，所述洗涤液为乙醇水溶液，优选为60‑65v/v％的乙醇水溶液。

5.根据权利要求1‑4任一所述的提取液，其特征在于，所述洗脱液为TE缓冲液，其中，Tris‑HCl的浓度为10‑15mM，EDTA的浓度为1mM，pH为8.0‑8.5。

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910466639.1(22)申请日 2019.05.30(71)申请人 苏州海狸生物医学工程有限公司地址 215123 江苏省苏州市工业园区星湖街218号生物纳米园A6楼101室(72)发明人 任辉　张雨婕　(74)专利代理机构 苏州华博知识产权代理有限公司 32232代理人 何蔚(51)Int.Cl.B01J 20/10(2006.01)B01J 20/28(2006.01)C12N 15/10(2006.01)B01J 20/30(2006.01)(54)发明名称一种用于核酸提取的羟基纳米磁珠及其制备方法(57)摘要本发明公开了一种用于核酸提取的羟基纳米磁珠，以超顺磁性氧化铁纳米磁珠为内核，二氧化硅为外壳得到羟基纳米磁珠核壳结构；本发明提出了一种用于核酸提取的羟基纳米磁珠及其制备方法，其工艺流程操作简便，原料成本低，降低了生产成本。

权利要求书1页 说明书4页 附图1页CN 112007605 A 2020.12.01C N 112007605A1.一种用于核酸提取的羟基纳米磁珠，其特征在于，以超顺磁性氧化铁纳米磁珠为内核，二氧化硅为外壳得到羟基纳米磁珠核壳结构。

2.根据权利要求1所述的用于核酸提取的羟基纳米磁珠，其特征在于，二氧化硅外壳的厚度通过超顺磁性氧化铁纳米磁珠和正硅酸乙酯的用量比例进行调节。

3.一种用于核酸提取的羟基纳米磁珠的制备方法，其特征在于，包括：超顺磁性氧化铁纳米磁珠的制备方法和羟基纳米磁珠的制备方法，超顺磁性氧化铁纳米磁珠的制备方法包括以下步骤：1)将六水合氯化铁溶解在乙二醇内配置成铁元素前驱体溶液；2)按顺序向铁元素前驱体溶液内加入无水柠檬酸三钠和乙酸钠，得到混合溶液；3)将所得混合溶液转移至聚四氟乙烯内衬中，并密封加盖；4)将聚四氟乙烯内衬放置于金属反应釜中密封，金属反应釜放入烘箱中反应；5)反应结束后，将所得产物分别用乙醇和纯化水洗涤至少10次以上，即得超顺磁性氧化铁纳米磁珠。

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202011573630.X(22)申请日 2020.12.25(71)申请人 陈美玲地址 310000 浙江省杭州市下沙高教园区2号大街浙江理工大学11号楼(72)发明人 陈美玲　张晓蕾　(51)Int.Cl.B01J 20/06(2006.01)B01J 20/28(2006.01)B01J 20/30(2006.01)C12N 15/10(2006.01)(54)发明名称一种核酸提取磁珠的制备方法及应用(57)摘要一种核酸提取磁珠的制备方法，包括以下步骤：步骤一，纳米磁性氧化物MnFe 2O 4的制备；步骤二，核酸提取磁珠的制备。

本发明核酸提取磁珠的制备方法，采用化学共沉淀法制备纳米磁性氧化物MnFe 2O 4，利用超声辅助溶胶‑凝胶法制备核酸提取磁珠，工艺简单，操作简便，适用于批量化生产。

权利要求书1页 说明书5页 附图1页CN 112588255 A 2021.04.02C N 112588255A1.一种核酸提取磁珠的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一，纳米磁性氧化物MnFe 2O 4的制备：在反应瓶中，加入三氯化铁六水合物、氯化锰四水合物和乙二醇，剧烈搅拌使其溶解，加入三氟乙酸钠与聚(4‑苯乙烯磺酸‑共聚‑马来酸)钠盐，使其完全溶解形成均匀混合物，在剧烈搅拌的条件下，逐滴缓慢加入氨水，直至产生沉淀，之后超声30min，将反应瓶放入到高温反应炉中，升温到190℃，反应6小时。

反应结束后，用磁性较强的磁铁通过磁分离得到纳米磁性氧化物MnFe 2O 4，用去离子水和乙醇超声清洗三次，得到纯净产物，最后在80℃下干燥8小时，即可得到纳米磁性氧化物MnFe 2O 4；步骤二，核酸提取磁珠的制备：将步骤一所制的纳米磁性氧化物MnFe 2O 4分散到无水乙醇中超声处理15‑30分钟后，加入分散剂，搅拌均匀后加入氨水调节混合液的pH到10，缓慢滴加正硅酸乙酯，控制反应温度在60‑80℃，反应3小时，磁分离后，用三氟乙酸调节pH到中性，并在80℃下超声30分钟，得到含三氟乙酸的磁微珠，洗涤干燥后即可得到核酸提取磁珠。

专利名称：一种采用磁珠从样品中提取并纯化核酸的方法专利类型：发明专利
发明人：戴立忠,熊晓燕
申请号：CN200910307632.1
申请日：20090924
公开号：CN101665785A
公开日：
20100310
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：一种采用磁珠从样品中提取并纯化核酸的方法，其包括以下步骤：(1)磁珠处理：以肽－寡核苷酸修饰磁珠；(2)细胞裂解：将含有靶核酸的待分离样品加入离心管中，再加入裂解液裂解细胞；
(3)核酸吸附：向溶液中加入经肽－寡核苷酸修饰的磁珠，核酸被磁珠表面吸附；将离心管置于磁性分离器，磁珠吸附于试管壁；(4)去除杂质：加入水相缓冲液，对表面吸附有核酸并附着于试管壁的磁珠进行洗涤，将磁珠上的其他杂质冲洗分离；(5)核酸回收：吸附在磁珠表面的核酸直接作为PCR扩增的模板，或者加入洗脱缓冲液，使吸附在磁珠表面的核酸分子释放进入缓冲液，用于下游实验。

本发明方法所用磁珠可置于4℃或－20℃保存，且运输方便，吸附效率高，价格较低。

使用本发明方法提取并纯化的核酸，应用范围广泛。

申请人：戴立忠
地址：410205 湖南省长沙市岳麓区桐梓坡西路198号
国籍：CN
代理机构：长沙星耀专利事务所
代理人：宁星耀
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专利名称：一种基于磁珠靶向富集目标基因的核酸提取方法及其应用
专利类型：发明专利
发明人：陈瑞,周叙全,章成,陈杰
申请号：CN202011134827.3
申请日：20201021
公开号：CN112226489A
公开日：
20210115
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明提供一种基于磁珠靶向富集目标基因的核酸提取方法及其应用，尤其是在重组酶等温扩增中的应用。

所述核酸提取方法包括如下步骤：所述捕获探针包括顺次连接的启动子和与目标基因互补的核苷酸，并在所述捕获探针的5′末端修饰氨基或羧基；通过氨基羧基缩合反应将磁珠与所述捕获探针相连，得到捕获磁珠；将所述捕获磁珠、样本裂解液与待测样本混合，加热后洗涤，得到结合目标基因的捕获磁珠。

所得捕获磁珠可以加入等温扩增或常规PCR扩增反应液进行扩增检测。

本发明中携带启动子的捕获探针显著提高了检测灵敏度，联合重组酶等温扩增技术，能够解决高浓度背景核酸抑制等温扩增反应的问题，解决重组酶等温扩增的实际应用问题。

申请人：深圳百纳心致生命科学有限公司
地址：518118 广东省深圳市坪山区坑梓街道金辉路14号深圳市生物医药创新产业园区10号楼502号
国籍：CN
代理机构：北京品源专利代理有限公司
代理人：巩克栋
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核酸提取用磁珠及其制备方法、用于磁珠法核酸提取的试剂
盒与流程
本发明涉及核酸提取用磁珠及其制备方法、用于磁珠法核酸提取的试剂盒与流程。

所述磁珠的制备方法包括：将适量的硅烷交联剂加入磁性颗粒溶液中，使磁性颗粒表面形成一层交联硅烷膜；再将适量的氨基硅烷偶联剂加入交联后的磁性颗粒溶液中进行偶联反应，以获得表面带有氨基官能团的磁珠。

所述试剂盒包括上述制备的磁珠和其他核酸提取所需试剂，可用于从血液、组织、细胞等样品中高效、快速地提取核酸。

所述流程为：将样品加入试剂盒中，与磁珠反应并形成磁珠-核酸复合体；利用磁力吸附复合体，将复合体从混合物中分离出来；洗涤磁珠-核酸复合体，去除杂质；最后用适量的洗脱液将核酸从磁珠-核酸复合体中洗脱出来。

该发明具有操作简单、高效、快速、可复现性好等优点，适用于生命科学研究、临床检测等领域，具有广泛的应用前景。

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