加州鲈诺卡菌病病原的分离与鉴定
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诺卡菌病页数:1
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放线菌与诺卡菌页数:15
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肺星形诺卡菌病继发血流感染1例页数:2
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诺卡菌属生物危害评估报告页数:3
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放线菌属与诺卡菌属页数:37
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加州鲈诺卡氏菌病的防治技术
节水质 ，每半 月一次，可 以很好地改善水质 。老方法是 每半月消毒一次，虽然可 以在一定程度上改善水质 ，但
根据 其 临 诊表 现 ，采 取 如下 的诊 疗 方法 ：
是消毒药都会有一些刺激性，会影响鱼 的正常生活 。
３ 内服保肝护胆 药物 为 了提 高养殖鱼类 的生长 ．
１ 改善 水质 环境 ．
７
＿囝匦 匠霉
旦塑 夔 旦
２ １年 ６ ０ ０ 月笔 者 成 功 诊治 了一例 水 体 轮 虫和 眼 虫 藻
鱼类摄食量减少，似吃非吃，呈麻痹摄食状 态，ｐ值为 Ｈ ９１ ． ，镜检眼虫藻为优势藻种 ，浮游生物组成单调；２ ２ 日按２ ０ 亩 ・ ０ 克／ 米沿池边及下风水域化水泼洒３ ％ ｂ ５ ＃ 草 净粉；２ 日上午８ 点化水泼洒复合Ｅ 菌溶液２ 千克。 ３ —９ Ｍ ５ ４５ ６ ． 月２ 曰池塘换黄河水０ ３ ． 米，５ ７ 月２ 曰一６ 曰 月１ 鱼类摄食量猛增 ，于是增大了投饵量 （ 曰饵率由过去的
３提 高 到６ ） ％ ％。
交替泛滥的病害 ，现将养殖概况、泛滥过程 、检查情 况、处理方法及分析总结等介绍给广大养殖户和水产技 术同仁 ，以供参考 、取长补短和共同提高。
一
、
养殖 概 况
养殖水面１亩 ，平均水深１ ５ ，池塘周围土质为 ２ ．米 黄粘土，底泥漆黑色，平均深度０７ ．米，配备３ 千瓦叶轮 式增氧机３ 台， 自动投 饵机 １ 台，水源为黄河水和机井 水，投喂 白配颗粒饲料 （ 鱼粉６ 、麸皮２％ ％ ９ 、酵母２％ ０、 豆粕１％ ６ 、棉粕１％ ｏ 、次粉１％ ５ 、预混料４ ） ０ 。平均亩放养 石 白鲢３ ０ ５ 尾，平均规格２ ０ 尾 ；花鲢２尾 ，平均规格 ０ 克／ ０ ５０ 尾；草鱼８ ０ （ ０ 克／ ０尾 规格７０ 尾 ，放４ ０ ０ 克／ ０ 尾；规格 ２０ 尾，放４ ０ ；黄河鲤４ ０ ，平均规格 １０ ０ 克／ ０ 尾） ０尾 ５ 克／
根据 其 临 诊表 现 ，采 取 如下 的诊 疗 方法 ：
是消毒药都会有一些刺激性，会影响鱼 的正常生活 。
３ 内服保肝护胆 药物 为 了提 高养殖鱼类 的生长 ．
１ 改善 水质 环境 ．
７
＿囝匦 匠霉
旦塑 夔 旦
２ １年 ６ ０ ０ 月笔 者 成 功 诊治 了一例 水 体 轮 虫和 眼 虫 藻
鱼类摄食量减少，似吃非吃，呈麻痹摄食状 态，ｐ值为 Ｈ ９１ ． ，镜检眼虫藻为优势藻种 ，浮游生物组成单调；２ ２ 日按２ ０ 亩 ・ ０ 克／ 米沿池边及下风水域化水泼洒３ ％ ｂ ５ ＃ 草 净粉；２ 日上午８ 点化水泼洒复合Ｅ 菌溶液２ 千克。 ３ —９ Ｍ ５ ４５ ６ ． 月２ 曰池塘换黄河水０ ３ ． 米，５ ７ 月２ 曰一６ 曰 月１ 鱼类摄食量猛增 ，于是增大了投饵量 （ 曰饵率由过去的
３提 高 到６ ） ％ ％。
交替泛滥的病害 ，现将养殖概况、泛滥过程 、检查情 况、处理方法及分析总结等介绍给广大养殖户和水产技 术同仁 ，以供参考 、取长补短和共同提高。
一
、
养殖 概 况
养殖水面１亩 ，平均水深１ ５ ，池塘周围土质为 ２ ．米 黄粘土，底泥漆黑色，平均深度０７ ．米，配备３ 千瓦叶轮 式增氧机３ 台， 自动投 饵机 １ 台，水源为黄河水和机井 水，投喂 白配颗粒饲料 （ 鱼粉６ 、麸皮２％ ％ ９ 、酵母２％ ０、 豆粕１％ ６ 、棉粕１％ ｏ 、次粉１％ ５ 、预混料４ ） ０ 。平均亩放养 石 白鲢３ ０ ５ 尾，平均规格２ ０ 尾 ；花鲢２尾 ，平均规格 ０ 克／ ０ ５０ 尾；草鱼８ ０ （ ０ 克／ ０尾 规格７０ 尾 ，放４ ０ ０ 克／ ０ 尾；规格 ２０ 尾，放４ ０ ；黄河鲤４ ０ ，平均规格 １０ ０ 克／ ０ 尾） ０尾 ５ 克／
大口黑鲈致死性结节病病原的分离、 鉴定及组织病理学观察
1.2 病原菌分离、培养和鉴定
选取濒死的患病大口黑鲈，用75%酒精棉球 对体表进行擦拭消毒后，无菌操作取皮肤溃疡 灶、鱼鳔腔积液和肝脏进行病原菌分离。利用 接种环划线接种至BHI固体培养基，28 °C恒温培 养3~7 d，从形态一致的优势菌群中挑取单个菌 落进一步纯化培养；将纯化培养的菌接种于 BHI液态培养基，28 °C恒温摇床振荡培养3~7 d， 观察菌液浑浊情况。
1 材料与方法
1.1 实验材料
患病大口黑鲈来源于四川邛崃某养殖场，
收稿日期：2018-10-18 修回日期：2019-04-09
资助项目：教育部“长江学者和创新团队发展计划”创新团队项目(IRT0848)；成都市农林科学院科研创新项目(2017-Y2500W-16)
通信作者：汪开毓，E-mail：kywang1955@
按照《常规细菌系统鉴定手册》的方法， 参照蒋依依等[4]提供的酶类产生、水解活性、单 一碳源利用以及生长温度等生理生化指标，用 生化鉴定管对分离的病原菌进行主要理化特性 检测。
1.5 人工感染实验
实验前随机选取3尾购自四川成都某水产养 殖场的健康大口黑鲈进行解剖，并取内脏组织 涂板以确定其有无细菌感染。实验鱼分为2组： 1个实验组、1个对照组，每组10尾。将分离纯化 的细菌接种于BHI液体培养基，28 °C培养7 d，
慢性炎性肉芽肿病变，其中脾脏病变最为严重。对菌株HSY-NS02进行药物敏感性实 验，结果显示，该菌对庆大霉素、新霉素和制霉菌素3种药物敏感，对其他18种药物耐 受，呈多重耐药性。
关键词: 大口黑鲈；诺卡氏菌；分离；鉴定；组织病理学
中图分类号: S 941.42
文献标志码: A
大口黑鲈(Micropterus salmoides)隶属鲈形目 (Perciformes)、太阳鱼科(Cehtrachidae)、黑鲈属 (Micropterus)，原产于美国[1]，于20世纪80年代引 进我国。近年来集约化养殖导致的大口黑鲈的 病害问题日益加剧，国内已报道多起细菌性病 原，包括嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)、 温和气单胞菌(A. sobria)、镰状镰刀菌(Fusarium fusarioides)、洋葱霍尔德菌(Burkhol cepacid)、 诺卡氏菌(Nocardia)、巨型球菌(Macrococcus caseolyticus)和维氏气单胞菌(A. veronii)，其中诺 卡氏菌对大口黑鲈危害最为突出，呈现发病时 间长、死亡率高、传染性强和反复感染的特点[2-9]， 主要症状为患病鱼体表及内脏器官出现广泛的 坏死性白色结节。
选取濒死的患病大口黑鲈，用75%酒精棉球 对体表进行擦拭消毒后，无菌操作取皮肤溃疡 灶、鱼鳔腔积液和肝脏进行病原菌分离。利用 接种环划线接种至BHI固体培养基，28 °C恒温培 养3~7 d，从形态一致的优势菌群中挑取单个菌 落进一步纯化培养；将纯化培养的菌接种于 BHI液态培养基，28 °C恒温摇床振荡培养3~7 d， 观察菌液浑浊情况。
1 材料与方法
1.1 实验材料
患病大口黑鲈来源于四川邛崃某养殖场，
收稿日期：2018-10-18 修回日期：2019-04-09
资助项目：教育部“长江学者和创新团队发展计划”创新团队项目(IRT0848)；成都市农林科学院科研创新项目(2017-Y2500W-16)
通信作者：汪开毓，E-mail：kywang1955@
按照《常规细菌系统鉴定手册》的方法， 参照蒋依依等[4]提供的酶类产生、水解活性、单 一碳源利用以及生长温度等生理生化指标，用 生化鉴定管对分离的病原菌进行主要理化特性 检测。
1.5 人工感染实验
实验前随机选取3尾购自四川成都某水产养 殖场的健康大口黑鲈进行解剖，并取内脏组织 涂板以确定其有无细菌感染。实验鱼分为2组： 1个实验组、1个对照组，每组10尾。将分离纯化 的细菌接种于BHI液体培养基，28 °C培养7 d，
慢性炎性肉芽肿病变，其中脾脏病变最为严重。对菌株HSY-NS02进行药物敏感性实 验，结果显示，该菌对庆大霉素、新霉素和制霉菌素3种药物敏感，对其他18种药物耐 受，呈多重耐药性。
关键词: 大口黑鲈；诺卡氏菌；分离；鉴定；组织病理学
中图分类号: S 941.42
文献标志码: A
大口黑鲈(Micropterus salmoides)隶属鲈形目 (Perciformes)、太阳鱼科(Cehtrachidae)、黑鲈属 (Micropterus)，原产于美国[1]，于20世纪80年代引 进我国。近年来集约化养殖导致的大口黑鲈的 病害问题日益加剧，国内已报道多起细菌性病 原，包括嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)、 温和气单胞菌(A. sobria)、镰状镰刀菌(Fusarium fusarioides)、洋葱霍尔德菌(Burkhol cepacid)、 诺卡氏菌(Nocardia)、巨型球菌(Macrococcus caseolyticus)和维氏气单胞菌(A. veronii)，其中诺 卡氏菌对大口黑鲈危害最为突出，呈现发病时 间长、死亡率高、传染性强和反复感染的特点[2-9]， 主要症状为患病鱼体表及内脏器官出现广泛的 坏死性白色结节。
鱼诺卡氏菌病的病因症状及防治
起 的 疖疮 ，剖开 疖 疮 流 出 白色 稍带 红 色 的 脓
液 ，内脏器官 如心脏 、脾脏 、肾脏 及鳔处 也有 白色 结节或 于鳃丝基部 形成乳 白色大结节 ，引 起 鳃循环 障碍后鳃丝呈 苍 白色 。感染 口诺 卡 氏
由于没 有乌鱼和 加州鲈对 各种抗菌 素药物
的药物代 谢动 力学资料 ，所 以 ，难 以确定准确 的用药 剂量和制 定科学 的给 药程序 。现在我 国 渔用 抗 菌素 药物 连续 使用 时 间为 ３ 天一 ５ 天 ，实 践证 明这 样 的用药 程序难 以彻底治愈 诺卡 氏菌 病 的。
节。
重 。该 病 的特 点 是潜 伏 期 长 ，其 病情 发 展 缓 慢 ，但是发 病率 和死亡率都较 高 。 自然发病率
可达到 ｌ ５ ％一 ３ ０ ％，严 重的达 到６ ０ ％以上 。养殖
乌鱼 、加 州鲈 患诺卡 氏菌病 后的死亡 率可高达
８ ０ ％以上 。因此 ，一旦 发现 养殖 鱼类有 诺卡 氏
病鱼有 时 出现拖 底症状 ，造 成鱼体腹部 和
尾部受 损溃烂 ，无 法吃食 ，瘦死 严重 ，解 剖可
菌病发生 ，应及 时治疗 ，治疗越 早 ，感 染数量 越少 ，治 愈率越 高 ，给养殖 生产所造 成的经济 损失也就会越小 。
鱼诺卡 氏菌病 的症状
发现各 脏器均存在 白点 ，肝肠 出现 白点一般认 为是 诺卡 氏菌病 ，发病 后期 主要症状表现 为鱼
Ｃ ＨＯ ＮＧＱ Ｉ ＮＧ Ｆ Ｉ Ｓ ＨＥ ＲＹ
鱼诺卡氏菌病的病 因症状及防治
鱼诺 卡 氏菌病的流行与危害
结节病变 ，初期容 易于分枝杆菌 （ 鱼结核 病 ）
鱼诺卡 氏菌病是一种 传染病 ，是一种 典型 危 害严重 的慢 性细菌病 ，多发于 海水鱼和 淡水
加州鲈诺卡氏菌病的诊断和治疗案例
加州鲈诺卡氏菌病的诊断和治疗案例一、病原：诺卡氏菌二、主要症状：加州鲈发病后，根据病鱼的特征和病原的流行病学特征，可以简单判断此病。
1.病鱼在池塘表面慢游，患病个体反应迟钝，离群独游，食欲下降。
2.部分鱼鳃上有白色结节。
诺卡氏菌感染的患鱼在体表有鳃结节型和躯干结节型两类表现型。
①鳃结节型：在鳃丝基部形成乳白色的大型结节，鳃明显褪色。
②躯干结节型：在躯干部的皮下脂肪组织和肌肉发生溃疡，外观上呈大小不一、形状不规则的结节。
鱼体表出现白色或淡黄色结节，直径通常在0.5～2.0厘米。
3.病鱼烂身，体表损伤并溃烂出血，病灶在背鳍起始位置后侧的区域多见，烂身时从表皮向肌肉腐烂，呈现漏斗状腐烂，病灶常呈红色。
尾鳍有时也有溃烂出血。
4.肝常有白色或淡黄色结节，直径0.1～0.3厘米，肝脏受损、出血，胆变色、萎缩。
部分鱼脾、肾也可观察到结节。
因体内有结节，有些地区认为是内脏孢子虫。
肝胰脏切片中观察到小的“肉芽肿”、结节。
5.该病主要对造血系统(肝、脾、肾等)进行破坏。
从发病器官来看，发病最严重的都是与血液循环关系最为密切的器官，说明该菌很可能通过血液循环而到达各靶器官，然后在各组织器官中固着，逐渐繁殖而形成白色或淡黄色结节。
6.腹腔有结节。
在发病后期，在腹腔肌肉或粘膜上可见结节。
部分鱼随着病情加重，体表出现创伤，溃烂出血，鳍条有充血现象，伴有肛门红肿，腹部膨大，膨大的腹腔内有少量透明或淡黄色液体。
加州鲈诺卡氏案例一例基本情况：2017年6月3日，南海区沙头田心崔老板。
池塘面积7亩，水深2米。
一两左右每尾，一天死亡200条左右。
主要症状：鳃丝腐烂，鳃耙有白色结节，腹部，尾鳍基部及尾部有溃烂，肝脏有明显白斑结节。
治疗方案：1、消毒：盛典（3亩／瓶）+烂身消（1.5亩／瓶）；2、内服：盛弗康3包+均克2包+盐酸多西环素2包+肽酶激安3包，拌5包料（40斤每包），连喂7天。
治疗效果：治疗第3天，死亡量从200多条降到50多条；7天后零星死亡，建议内服“三黄+肽酶激安”保肝护胆，增强免疫力。
加州鲈诺卡氏菌病现场诊治
，体表 出现 创伤 ，溃 烂 出血 ， 鳍条有 充血现 象，伴有肛 门红肿 ，腹 部膨大 ，膨 大 的腹腔
内有少量透 明或淡黄色液体 。 常观 察到 的现 象是上述 第 １ 、２ 、３ 、４ 、７ 特 征 ，出现 第３ 、４ 特征基本就可 以判断为诺卡 氏菌病 。
＠ 精博苣栏 加州鲈诺卡 氏菌病现场诊治
叶桂 阳 张 华 王 玉群 ２ １ ２ ４ ０ ０ ；
广州精博 生物技 术有限 公司 协 办
咨询热线 ： ０ ２ ０ — ８ １ ６ １ １ ７ ２ ８ ８ １ ６ １ ０ ５ ７ ５
（ １ ． 江 苏句容 市水 利农机 局 ，江 苏 句容
２ ． 广州精博生物技术有限公 司，广东 广州 ５ １ ０ ３ ８ ５ ）
丝上有可能 出现变 白的现 象。
四川省 德阳市近年 来加州鲈 养殖面积 扩大 ， 已形成规
模效应 。四川市场 对加州鲈 的认可 、加州鲈养殖 的赚钱 效
３ ． 病鱼 烂身 ，严 重影响产 品商品性 。体表有损 伤并溃
病池塘吃料 多、体肥 的鱼先死 。 ４ ． 选择好 的冰鲜产 品 。选 择新鲜 、洁净的冰 鲜鱼进 行 饲喂 ，腐 烂的鱼 不能投喂 。尽量投喂淡 水冰鲜产 品，最好
二 、加州鲈诺卡 氏菌病现场诊治
加州 鲈发病 后 ，根 据病鱼 的特 征和病 原的流 行病学特 征，可 以简单判断病 因。 １ ． 病鱼在 池塘表面 漫游 ，患病个体 反应迟钝 ，离群独
诺 卡 氏菌 病 的现 场 诊 治 。
现漏 斗状腐烂 ，管道样伤 口，肌 肉腐 烂呈褐色 ，伤 口周边
红色或底部红色 。尾鳍有时也有溃烂 出血 。
德 阳 当地 的加 州鲈 养殖 ，一 般是 一年 一次 成鱼 养殖 。 苗种 从广东购入后 ，在 成都新津等地 标粗 ，上一年 １ ２ 月至 当年 ２ 月放苗 ，当年 ７ —８ 月成鱼 上市 。苗种 投喂 以饲 料 ＋ 鱼 浆＋水蚯蚓 投喂为主 ，养成期 投喂 以海 水冰鲜 为主 。加 州 鲈诺卡 氏菌病在 当地 每年 ４月份开始 高发 ，原 因是 ：合 适 的发病水温 ：诺卡 氏菌生长较 慢 ，大量摄 食海 水冰 鲜产 品、水蚯蚓后 ，细 菌从进入体 内到发病 需要 一段 时间。 因诺 卡 氏菌病 病 程慢 、养 殖户 没有 定期检 查 的习惯 、 发 病前期无 症状或症状 不 明显、潜伏时 间长等 ，当鱼发生 死 亡时 ，已感染多 时 。而养 殖从业者等 到鱼类 出现一定数 量 的死亡时才引起重视 。６ 月份 到当地现场诊 治，很多加州 鲈 池塘 已经 错过最 佳治疗 时间 ，治疗难 度很大 ，且有较 大 损失。
内有少量透 明或淡黄色液体 。 常观 察到 的现 象是上述 第 １ 、２ 、３ 、４ 、７ 特 征 ，出现 第３ 、４ 特征基本就可 以判断为诺卡 氏菌病 。
＠ 精博苣栏 加州鲈诺卡 氏菌病现场诊治
叶桂 阳 张 华 王 玉群 ２ １ ２ ４ ０ ０ ；
广州精博 生物技 术有限 公司 协 办
咨询热线 ： ０ ２ ０ — ８ １ ６ １ １ ７ ２ ８ ８ １ ６ １ ０ ５ ７ ５
（ １ ． 江 苏句容 市水 利农机 局 ，江 苏 句容
２ ． 广州精博生物技术有限公 司，广东 广州 ５ １ ０ ３ ８ ５ ）
丝上有可能 出现变 白的现 象。
四川省 德阳市近年 来加州鲈 养殖面积 扩大 ， 已形成规
模效应 。四川市场 对加州鲈 的认可 、加州鲈养殖 的赚钱 效
３ ． 病鱼 烂身 ，严 重影响产 品商品性 。体表有损 伤并溃
病池塘吃料 多、体肥 的鱼先死 。 ４ ． 选择好 的冰鲜产 品 。选 择新鲜 、洁净的冰 鲜鱼进 行 饲喂 ，腐 烂的鱼 不能投喂 。尽量投喂淡 水冰鲜产 品，最好
二 、加州鲈诺卡 氏菌病现场诊治
加州 鲈发病 后 ，根 据病鱼 的特 征和病 原的流 行病学特 征，可 以简单判断病 因。 １ ． 病鱼在 池塘表面 漫游 ，患病个体 反应迟钝 ，离群独
诺 卡 氏菌 病 的现 场 诊 治 。
现漏 斗状腐烂 ，管道样伤 口，肌 肉腐 烂呈褐色 ，伤 口周边
红色或底部红色 。尾鳍有时也有溃烂 出血 。
德 阳 当地 的加 州鲈 养殖 ，一 般是 一年 一次 成鱼 养殖 。 苗种 从广东购入后 ，在 成都新津等地 标粗 ，上一年 １ ２ 月至 当年 ２ 月放苗 ，当年 ７ —８ 月成鱼 上市 。苗种 投喂 以饲 料 ＋ 鱼 浆＋水蚯蚓 投喂为主 ，养成期 投喂 以海 水冰鲜 为主 。加 州 鲈诺卡 氏菌病在 当地 每年 ４月份开始 高发 ，原 因是 ：合 适 的发病水温 ：诺卡 氏菌生长较 慢 ，大量摄 食海 水冰 鲜产 品、水蚯蚓后 ，细 菌从进入体 内到发病 需要 一段 时间。 因诺 卡 氏菌病 病 程慢 、养 殖户 没有 定期检 查 的习惯 、 发 病前期无 症状或症状 不 明显、潜伏时 间长等 ，当鱼发生 死 亡时 ，已感染多 时 。而养 殖从业者等 到鱼类 出现一定数 量 的死亡时才引起重视 。６ 月份 到当地现场诊 治，很多加州 鲈 池塘 已经 错过最 佳治疗 时间 ，治疗难 度很大 ，且有较 大 损失。
加州鲈常见疾病的防治
主要症状 ：腹腔解 剖可 见肝脏 、。 肾脏 及 心 包 膜 布 满 白
色 结节 。
防 治 方 法 ：全 池 泼 洒 聚 维 酮 碘 溶 液 。 同 时 每 １ ０ 千 克饲
起 到一 定的帮助 。
一
料 加 氟尔 康 １ ０ ０ 克 ＋三 黄散 ４ ０ ０克 ＋金肝 胆 ２ ０ ０克混 饲 内
春达专栏
春 达
加 州 鲈 常 见 疾 病 的 防 治
姚 友锋 邱 军 强 王松 刚
泰州市春达动物药业饲料有限公司 协办
咨询 热线 ： ０ ５ ２ ３ — ８ ３ ６ １ １ ８ ９ ０
（ １ ． 兴化市钓鱼镇衣服 中心，江苏 兴化 海
２ ２ ５ ７ ６ １ ；２ ． 上海海洋大学，上 ２ ２ ５ ７ ６ ３ ）
４ ． 杯 体 虫病
主要症 状 ：虫体 寄生于 鱼类 的皮肤 、鳃 、鳍 条 。特 别
是 寄生 于苗种养殖期 ，患病鱼游动缓慢 ，呼吸 困难 。
防治方法 ：用特效 纤虫净 ２ ０ ￣２ ５ 毫升／ （ 亩・ 米） ， 稀 释 ２ ０ ０ ０ 倍 全池泼洒。 二 、细 菌性 疾 病
１ ． 细 菌性 败血 症
食量 下 降或 鱼不安 静的现 象，镜检可 确诊此 病 。鱼种 培育
阶段可 寄生 于体 表或鳃等部位 。
防治方法 ：用车指特 杀 １ ５ ０ ￣２ ０ ０克 ／ （ 亩・ 米） ， 加 水 稀
释２ ０ ０ ０ 倍后全池均 匀泼洒，配合力神 ３ Ｏ 毫升／ （ 亩・ 米） 一 同
混合使 用，效果更佳 。
病” 。鱼 经常在摄食过程 中忽然抽筋 打转 死亡 。③ 臀鳍基部 及肛 门充血 ，鳔 内有大量 的黄色蜡样分泌物 。
一例加州鲈诺卡氏菌病的诊治实例
一例加州鲈诺卡氏菌病的诊治实例加州鲈学名大口黑鲈，是原产于北美洲的一种典型温水肉食性鱼类，在上世纪80年代引入中国。
加州鲈适应能力强、生长速度快、养殖效益高，且肉多刺少，为我国主要养殖经济鱼类之一。
近几年随着人工配合饲料技术的不断突破，加州鲈在我国的养殖面积和养殖范围逐年增加。
在引进的初期，加州鲈养殖病害较少，但随着养殖密度越来越高，加州鲈的病害也日益增多，其中诺卡氏菌病就是加州鲈的主要病害之一。
一、加州鲈引进背景及养殖现状加州鲈原产于美国密西西比河，是一种生长迅速、抗病力强、肉质鲜美的名贵鱼类。
后通过引种，现已遍布美国、加拿大等水域。
我国在上世纪70年代于台湾引种。
在1983年引入广东地区，1985年突破人工繁殖，逐渐在全国范围内推广开来。
无论是池塘单养还是混养，都能带来巨大的经济效益。
是大力推广的优良养殖品种。
加州鲈诺卡氏菌病是加州鲈养殖过程中很常见的一种疾病，诺卡氏菌是一中条件致病菌，流行季节较长，在4月至11月均有发病，发病高峰在6月至10月，水温在15至32℃均可流行，水温在25℃~28℃时发病最为严重。
诺卡氏菌感染鱼体后，会导致鱼类抵抗力进一步下降，引发多种继发性感染。
一旦感染诺卡氏菌，死亡率极高。
二、加州鲈诺卡氏菌病诊治实例2020年6月，湖北省宜昌市一加州鲈高位池塘养殖场养殖的加州鲈出现死亡病例。
一开始，加州鲈出现摄食量减少甚至不摄食的现象，病鱼离群在塘边缓慢游动，且死亡量并不大，养殖户使用过聚维酮碘等消毒，没有得到太大改善。
随后，加州鲈死亡量逐渐增多，最多时一天死亡60多尾。
笔者到现场进行了实地诊断，将病鱼带回实验室检测，提出了一套治疗方案。
经过一个疗程治疗后，疾病得到有效控制。
下面将诊治经验分享给广大养殖户，以期提供参考借鉴。
（一）养殖情况该养殖场位于湖北省宜昌市，为高位池塘养殖加州鲈。
养殖用水为抽调的水库水体，池塘配有水车式增氧机和叶轮式增氧机，池底还配有微孔增氧设施，水色呈现暗绿色，有少量浮膜。
乌江网箱养殖加州鲈鱼致病病原的分离与鉴定-论文
Ａ ｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ： Ｉ ｎ ｏ ｒ ｄ ｅ ｒ ｔ ｏ ｓ ｔ ｕ ｄ ｙ ｔ ｈ ｅ ｐ ａ ｔ ｈ ｏ ｇ ｅ ｎ ｏ ｆ ｉ ｎ ｆ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｕ ｓ Ｍ ．ｓ ａ ｌ ｍｏ ｎ ｉ ｄ ｅ ｓ ｃ ｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ｅ ｄ ｉ ｎ ｎ ｅ ｔ ｃ ａ ｇ ｅ ｉ ｎ Ｗｕ ｊ ｉ ａ ｎ ｇ
红， 肠 道 出血 。
１ ． １ ． ２ 健 康 加 州 鲈 鱼 健 康 加 州 鲈 鱼 共 计 １ ６ ０ 尾 。于 ２ ０ １ ２年 ５ 月 取 于乌江 偏 岩河养 殖 场 网箱 ， 体 长１ ０ － － ￣ １ ５ ｃ ｍ， 体重 ３ ０ ￣５ ０ ｇ ， 取 于乌 江偏 岩 河 养殖 场 网箱 ， 用 于 回接感 染试 验 。
贵州农业科学
２ ０ １ ４ ， ４ ２ （ ５ ） ： １ ５ Ｏ ～１ ５ ３
Ｇｕｉ ｚ ｈ ｏｕ Ａｇｒ ｉ ｃ ｕ ｌ ｔ ｕｒ ａ ｌ Ｓｃ ｉ ｅ ｎｃ ｅ ｓ
［ 文章 编 号 ］ １ ０ ０ １ — ３ ６ ０ １ （ ２ ０ １ ４ ） ０ ５ — ０ ２ ８ ２ — ０ １ ５ ０ — ０ ４
乌江网箱养殖加州鲈鱼致病病 原的分离与鉴定
魏 志 琴 ，杨 秀 荣 ，曾燕 玲 ，宋 培 勇
（ 遵 义 师 范学 院 生 命 科 学 学 院 ， 贵州 遵义 ５ ６ ３ ０ ０ ２ ）
［ 摘 要］为探 明乌 江网箱 养 殖加 州鲈 鱼 的致病 病原 ， 采 用 营养琼 脂培 养基 分 离纯化 ， 用传统 分 类和 １ ６ Ｓ ｒ Ｒ ＮＡ基 因序列分析 方法， 对其进行 了分 离与鉴定 。结果表明 ： 共分 离出 ４个菌株 （ Ｉ ～Ｉ Ｖ ） ， 各 菌株 均扩增 出 １ 条约 １ ５ ０ ０ ｂ ｐ片段 ， 与 目的片段 大小一致 ； 菌株Ｉ 和菌株Ⅱ 为溶酪 巨球 菌（ Ｍａ ｃ ｒ ｏ ｃ ｏ ｃ ｃ ｕ ｓ ｃ ａ ｓ ｅ ｏ ｌ ｙ ｔ ｉ ｃ ｕ ｓ ） ， 菌株 Ⅲ为 鲁氏不动杆 菌（ Ａｃ ｉ ｎ ｅ ｔ ｏ ｂ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｌ ｗ ｏ 厂 ＝ ｉ ） ， 菌株Ⅳ为西伯利亚微小杆菌（ Ｅ ｘ ｉ ｇ ｕ ｏ ｂ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ｕ ｍ ｓ ｉ ｂ ｉ ｒ ｉ ｃ ｕ ｍ） 。经 回接 感染试 验 ， ４株细 菌均
鲈鱼病毒性疾病病原体的检测与鉴定
步骤 （1）制作病体鱼的组织切片并固定 （2）第一步，用已知未标记的抗体（待检标本）加到已知抗原（待检 标本）标本上，在湿盒中37℃保温30min，使抗原抗体充分结合。洗 涤，除去未结合的抗体。 （3）加上荧光标记的抗球蛋白抗体或抗IgG、IgM 抗体（通常为荧光标 记的对应二抗）。如果第一步发生了抗原抗体反应，标记的荧光标记 二抗就会和已结合抗原的抗体进一步结合，从而可鉴定被检测抗原。
显微和超微观察
核酸扩增技术
核酸杂交技术是一种分子生物学的标准技 术，用于检测DNA或RNA分子的特定序列 （靶序列）。PCR技术具有特异、敏感、 高效、快速、简便、重复性好等优点。 PCR由变性—退火——延伸三个基本反应 步骤构成。目的是：在试管中将所要研究 的鲈鱼病变组织的基因或DNA片段在数小 时内扩增足量的DNA，再进行分析研究和 检测鉴定。目前已成功进行了鱼类细胞淋 巴囊肿病毒的检测。
淡水鲈鱼具有生长快、适应性广、抗病 能力强、肉质鲜美等特点，深受人们欢迎。 我国沿海均有分布，资源丰富，虽然，鲈 鱼抗病能力较强，自然条件下不易患病。 但人工高密度养殖因其生存环境及空间发 生很大变化，稍有不慎极易造成疾病，尤 其是病毒性疾病，危害极大。
鲈鱼常患的病毒性疾病有：
•
鲈鱼淋巴囊肿病
•
鲈鱼病毒性出血性败血症
间接荧光法
该方法分为两步：获取单克隆抗体、间接荧光法的检测和鉴定 获取单克隆抗体的步骤： （1）抗原制备
1.取病体鱼的病变细胞或组织 2.将样品制成组织匀浆，反复冻融三次，选择适当转速进行差速离心 或密度梯度离心的方法进行纯化 3.进行灭活处理 （2）将待测抗原注射到小鼠体内（免疫动物）； （3）免疫脾细胞和骨髓瘤细胞的制备、细胞融合； （5）杂交瘤细胞的选择培养、筛选； （7）杂交瘤细胞的克隆化及单克隆抗体的大量制备。
显微和超微观察
核酸扩增技术
核酸杂交技术是一种分子生物学的标准技 术，用于检测DNA或RNA分子的特定序列 （靶序列）。PCR技术具有特异、敏感、 高效、快速、简便、重复性好等优点。 PCR由变性—退火——延伸三个基本反应 步骤构成。目的是：在试管中将所要研究 的鲈鱼病变组织的基因或DNA片段在数小 时内扩增足量的DNA，再进行分析研究和 检测鉴定。目前已成功进行了鱼类细胞淋 巴囊肿病毒的检测。
淡水鲈鱼具有生长快、适应性广、抗病 能力强、肉质鲜美等特点，深受人们欢迎。 我国沿海均有分布，资源丰富，虽然，鲈 鱼抗病能力较强，自然条件下不易患病。 但人工高密度养殖因其生存环境及空间发 生很大变化，稍有不慎极易造成疾病，尤 其是病毒性疾病，危害极大。
鲈鱼常患的病毒性疾病有：
•
鲈鱼淋巴囊肿病
•
鲈鱼病毒性出血性败血症
间接荧光法
该方法分为两步：获取单克隆抗体、间接荧光法的检测和鉴定 获取单克隆抗体的步骤： （1）抗原制备
1.取病体鱼的病变细胞或组织 2.将样品制成组织匀浆，反复冻融三次，选择适当转速进行差速离心 或密度梯度离心的方法进行纯化 3.进行灭活处理 （2）将待测抗原注射到小鼠体内（免疫动物）； （3）免疫脾细胞和骨髓瘤细胞的制备、细胞融合； （5）杂交瘤细胞的选择培养、筛选； （7）杂交瘤细胞的克隆化及单克隆抗体的大量制备。
乌江网箱养殖患病加州鲈鱼的细菌分离鉴定与回复感染
将纯化后的平板取 出， 对所得 的几个菌株 先进行菌落 形 态观察 ， 然后再进行革兰氏染色、 观察。
ｉ ． ４ 细 茵 的 生理 生 化 鉴 定
繁， 给加州 鲈鱼养殖造成 了很大的经济损失 ， 导致有的养殖户
想养而不敢养殖加州鲈鱼 ， 因此 ， 加州鲈鱼病害的防治显得十 分迫切 。
菌分离纯化 方法 进行分 离 ， 对 分离 所得 菌株 采用 １ ６ Ｓ ｒ Ｒ Ｎ Ａ 基 因序列测定 ， 将测 序结果输入 国际基 因数据库 ， 通过 同源性
验、 生化试验等传统微生物学方法进行初步鉴别 ， 然后选择不
同菌株进行分子生物学鉴定 。
１ ． ５ 基 因组 Ｄ Ｎ Ａ 的提 取 、 １ ６ Ｓ ｒ Ｒ Ｎ Ａ基 因的扩增、 测 序 及 数
个体病症相似 。其 中 ２尾加州鲈鱼病症 为烂鳃 、 烂鳍 ， 体表发
红； ４尾加州鲈鱼病症为烂鳃 、 烂鳍， 体表 、 肠发红 ， 肠道 出血 。 １ ． ２ 细 菌的分 离
１ ． ６ ． ３ 感 染加州鲈鱼
用于 回复感 染的健康加 州鲈鱼取于
乌江偏岩河养殖场 网箱 ， 体长 １ ０～１ ５ ｃ ｍ， 体重 ３ Ｏ～ ５ ０ ｇ ， 每组
对所得菌株进行糖发酵试验 （ 蛋 白胨水培养基 ） 、 柠檬 酸
盐试验 （ 柠檬 酸盐 培 养基 ） 、 硝 酸 盐还 原试 验 （ 硝 酸盐 培 养
目前 ， ｒ Ｒ Ｎ Ａ与 ｒ Ｄ Ｎ Ａ作 为分子指标广泛应用于 细菌 遗传
特征和分子差异研究 。大量 已知细菌的 ｒ Ｒ Ｎ Ａ基 因数 据已
杨 秀荣， 曾燕玲 ， 魏志琴
（ 遵义师范学院生命科学学 院／ 贵州省赤水河流域植物资源保 护与应用研究特色重点实验室 ， 贵州遵义 ５ ６ ３ ０ ０ ２ ）
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ｄａｌ ｕ． （Ｚ ６ ３ ， ｏａｄａｖｃｉｉ （ ３ ９ ７ ， ｉ ｚａ ｏ ３ ９ ０） Ｎ ｃｒｉ ａｃ Ｚ ６ ２ ） ｎ
ｉ ｌ ｅ ｈｎ ．Ｉ ｉ ｓ ｄ ，ａｓ ａ ｆ ｏａｄａ（ ｅｉ ｅ ｓＮ ０ ０ ２ ）ｗ ｓｉ ｌｔ ｏ ｉ ｓ ａ ｄｉ Ｃ ｉ ｏｔ ｎ ａ ｎｔ ｓ ｔ ｙ ｔ ｉ ｏ ｃｒｉ ｄｓ ｎ ｄ ａ Ｈ ９ ６ ７ ａ ｓ ａｅ ｆ ｍ ｄｓ ｈ ｕ ｒｎ Ｎ ｇ ｏ ｄｒ —
ａ ｍｐｉｉ ｉ ｃ ｌ ｎ． ｌ
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ｃ ｌｒ ｍｐ ｅ ｉｏ ，ｓ ｅ ｔ ｍｙ ｉ ｈ ｏ ａ ｈ ｎ ｃ ｌ ｔ ｐ ｏ ｃｎ，ｋ ｎ ｍｙ ｉ ｎ ｔ ｃ ｃｉ ｅ ｕ ｉｈ ｒ ｓｓ ｎ ｏ ｓ ｌ ｈ ｍｅｈ ｘ ｚ ｌ ｎ ｒ ａ ａ ｃｎ ａ ｄ ｔ ｒ ｙ ｌ ，ｂ ｔｈ ｇ ｅ ｉ ａ ｔ ｕ ｐ ａ ｔ ０ ａ ｏｅ ａ ｄ ｅ ａ ｎ ｔ ｔ
ｏ Ｂ ｃｎ ｏ∥Ｓｈｏ ｏ Ｌ ｅ ｃ ｎｅ，ｕ ａ ｓ ｎ ｅ ｉ ， ｕｎｚｏ １２５ Ｃ ｉ ） ｆ ｉ ｏｔ ｌ ｃｏｌ ｆ ｉ ｉ ｃｓＳｎＹ ｔ ｅ Ｕ ｉ ｒｔ Ｇ ａｇｈｕ５０７ ，ｈ ａ ｏ ｒ ｆＳ ｅ — ｎ ｖ ｓｙ ｎ
Ａｂ ｔ ａ ｔ Ｎｏ ａ ｄ ｏ ｉ ｉ ａ ｃ ｍｍｅ ｃａｌ ｍｐ ｒａ ｔ ｉ ａ ｅ ｉ ｕ ｔ ｒ ｄ ｌ ｒ ｅ ｕ ｈ ｂ ｓ ｈ ｎ ，ｃ ｕ ｉ ｇ ｓｒ ｃ ： ｃ ｒ ｉｓｓ ｓ ｏ ｒ ｉ ｌ ｉ ｏ ｔｎ ｓ ｓ ｎ ｃ ｌ ｅ ｇ ｍｏ ｔ ａ ｓｉ Ｃ ｉ ａ ａ ｓｎ ｙ ｄ ｅ ｕ ａ ｎ
菌 的基本特征相符。回归感染试 验证 实菌株 Ｎ ０ ０ ２ Ｈ ９６ ７即为 引起此次 加州 鲈结节病 的病原 菌。对该 菌株 的 １Ｓ ６ ｒＮ Ｄ Ａ进行了扩增和序列 分析 发现 ，该 菌株 与诺 卡菌 属细 菌 的亲缘关 系较 近 ，且 与鲕鱼诺 氏菌 ｓｒ ｌ Ｃ ｅ ｏ ａＪ Ｍ ｉｅ ３６ ３ ０的 １ Ｓｒ Ｎ ６ Ａ序列同源性最 高 ，达到 ９ ． ％。综 合上述试 验结果 ，我们将加州 鲈结节病 的病原 菌鉴定为 鲫 Ｄ ９９ 鱼诺卡菌 。为了指导该病 的防控 ，还对 该病原 菌做 了一 系列 药敏试 验 ，结果 显示 ，该菌 株对氯 霉素 、链霉 素 、 卡那霉素 、四环素等抗生素敏感 ，但对磺胺类和氨苄青霉素有耐药性 。
—
—
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００ ５ ．０
图 ５ 基于 １Ｓ Ｒ Ａ基 因序列同源性构建的系统发 育树 ６ Ｎ ｒ
Ｆ ｇ ５ Ｐ ｙｏ ｅ ｅｉ ｒ ｅｏ ｏ ａ ｄａ ｂ ｓ ｄ ｏ ｉ ｈ ｌｇ ｎ ｔ ｔｅ ｆＮ ｃ ｒ ｉ ａ ｅ ｎ ， ｃ １ Ｓ ｒ ＮＡ ｓ ｑ ｅ ｃ ｏ ｌｇ ６ Ｒ ｅ ｕ ｎ ｅ ｈ ｍｏｏ ｙ
ｄ ｕ ｅ ｓｔ ｉ ｅ ｔ ｒ ｇ ｓ ｎ ｉ ｖ ｔ ｔｓ ｉ ｙ
收 稿 日期 ：２ １ — ４—１ ０１ ０ ８
基金项 目：广东省省级财政鱼病 防治专项资金资助项 目 （ 粤财农 ［０ ０ ４ ） ２ １ ］３７ 作者简介 ：蒋依依 （ ９ ５年生） １８ ，女 ，硕士 ；通讯作者 ：李安兴 ；Ｅｍａ ：ｌ ｎｉｇ ａ ．ｙｕ ｅｕ ｃ － ｉ ｉ ｘｎ＠ｍ ｉ ｓｓ． ｄ． ｎ ｌ ａ ｌ
ｃ ｒｉ ， ｎ ａ ｉｈｒ ｄｎｉ ｉ ｏａｄａｓｒ ｌｅ Ｃ ３ ０ （ ９ ９ ） ａｅ ｎｍ ｒｈ ｌ ｉ ｌ ａｄａ ａｄｈｄａ ｇ ｅ ｅｔｙ ｔ Ｎ ｃｒｉ ｉ ａ Ｍ ３ ６ ９ ． ％ ．Ｂ ｓｄｏ ｏｐ ｏｏ ｃ ， ｈ ｉ ｔｗ ｈ ｅｏ Ｊ ｇ ａ
图 中所用 各菌 株 １Ｓｒ Ｎ ６ Ｄ Ａ序 列号 分别 为 ：Ｎ ｃｒｉ ｏａｄａ
ｓｒ ｌｅ （Ｄ ６９ １ 。 Ｎ ｃｒｉ ｏ ｔ ｉ ｃｖ ｒｍ ｅｏ ｉａ Ｑ ５９ ５） ｏａｄａ ｔｉ ｓ ａｉ ｕ ｉｄ — ａ
（ Ｑ ５９２ ， ｏａｄａｃ ｓ ｓａ （３９９ ， ｏａ－ Ｄ ６９ １ ） Ｎ ｃｒｉ ｒ ｓ ｔ ｅ Ｚ７８ ） Ｎ ｃｒ ａｏｒ
７ ９
水 解 七 叶苷 明 胶
＋ ＋ ＋
淀粉
酪蛋 白
黄嘌呤
酪 氨 酸 一
注 ：“＋” 为 阳性 ，“一” 为阴性
表 ２ 菌株 Ｎ ０ ０ ２ Ｈ ９６ ７感染健康加州鲈试验结果
Ｔ ｂｅ ２ Ｅ ｐ ｒｍｅ ｔｌｉｆ ｃｉｎ ｆｌｒ ｅ ｕ ｈ ａ ｌ ｘ ｓｒ ｉ Ｈ０ ０ ２ ａ ｓｗｉ ｉｏａ ｅ ｔａｎ Ｎ ９ ６ ７ ｈ
ＪＡ ｉｉ ＩＹ ｎ ｅ ，Ｚ Ｉ ＮＧ Ｙｙ ，Ｌ ａ ｗ ｉ ＨＯＵ Ｓ ｍｉｇ，Ｌ Ａｎ ｉｇ ｕ ｎ Ｉ ｘｎ
Ｋ ｙ ａｏ ｔｙ ｏ Ａ ｕｔ ｒ ｕｔＳｆ ｙ ｆ ｉ ｓ ｆ ｄｃｔｎｆ ｔｅ ｅ ｂｒｏ ｅ ｂｒ ｏ ｒ ｑａｃＰ ｄｃ ａ ｔ ｏ Ｍｎ ｔ ｏ Ｅ ｕａｏ ｝Ｓ ｔ Ｋ ｙＬ ｏ ｔ ｙ Ｌ ａ ｒｆ ｉ ｏ ｓ ｅ ｉｒ ｙ ｉ ａ ａ ａ ｒ
ｆ ｄ ａ ｃ ｒ ｉ ｅｉｌａ Ａｎｉ ｃｏ ｉｌｓ ｓｅ ｔ ｉ ｔ ａｓｙ ｓ ｏ ｄ ｔａ ｈｓ ｓｒｉ ｓ ｓｓ ｅ ｔ ｌ ｏ ｉ ｓ Ｎｏａｄａ ｓｒ ｅ ． ｅ ｏ ｔ ｍｉｒｂａ ｕ ｃ ｐｉ ｌｙ ｓａ ｈ ｗｅ ｈ ｔｔｉ ｔ ｎ ｗａ ｕ ｃ ｐｉ ｅ ｔ ｂ ｉ ａ ｂ
ｅ ｓ ｄ ｌｒ ｅ ｕ ｈ ｂ ｓ ｅ ｒ ｄ ｉ ａ ｈ ｉ ｕ ｎ ｄ ｎ ．Ｔ ｅｂ ｃｅ ａ ａ ｐ ａ ｅ ｒ ｍ— ｏ ｉ ｖ ，ｂ ａ —ｉ ｅ ｏ ａ ｅ ａ ｇ ｍｏ ｔ ａ ｓｒ ａ ｅ ｎ Ｎ ｎ ａ ，Ｇ ａ ｇ ｏ ｇ ｈ ａ ｔｒ ｐ ｅ ｒ ｄ Ｇ ａ ｐ ｓ ｉ ｅ ｅ ｄ ｌ ｒ ｉ ｔ ｋ
第５ １卷
２１ ０ ２年
第 １期
１ 月
中山大学学报 （ 自然科学版 ）
Ａ Ｔ Ｓ ＩＮ Ｉ Ｒ Ｍ Ｎ Ｔ Ｒ ＬＵ Ｕ Ｉ Ｅ ＳＴ ＴＳ Ｓ Ｎ Ａ Ｓ Ｎ Ｃ Ａ ＣＥ ＴＡ Ｕ Ａ Ｕ Ａ Ｉ Ｍ Ｎ Ｖ Ｒ ＩＡ Ｉ Ｕ Ｙ Ｔ Ｅ Ｉ
Ｖｏ． Ｎｏ １５１ ．１
注 ：“ ”为 自然组未作任何处理 一
ｃｒｉ ｆａｏｏｅ （ ４ ７ ４） ｏａｄ ｒｎｖｌ ｓ ａｄａｌ ｖｒｚ ａ Ｚ ６ ５ ，Ｎ ｃｒｉ ｔ ｓａ ｎｉ ａ ａ ｅ ｓ （ ３ ９ ６） ｏａｄａ ｂａｉｅｓ （ ３ ９ ５） ｏａ－ Ｚ ６ ２ ，Ｎ ｃｒｉ ｒｓｉ ｉ Ｚ ６ ３ ，Ｎ ｃｒ ｌｎ ｓ ｄａ ｆ ｒ ｎ ａ （Ｚ ６ ３ ） Ｎ ｃｒｉ ａｔ ｏ ｓ ｉ ａｃ ｉ ｉｃ ３ ９ ６ ， ｏａｄａ ｓ ｒｉ ｅ ｄ （ ３ ９ ４ ， ｏａｄａｓｌｏ ｉ ｄ （ ４ ７ ０ Ｚ ６ ３ ） Ｎ ｃｒｉ ａｍ ｎｃ ａ Ｚ ６ ５ ） ｉ ２ ６ 药 物敏 感试验 ．
ｌｎ ｏ ｇ，ｓｅ ｄ ｒ ｉｌｍｅ ｔｕ ｏ ｓｉ ｈ ｐ ｓ ｈｅ ｔａ ｉｉｎ ｌｐ ｙ ｉｌ ｇｃ ｌａ ｄ ｂ ｏ ｈ ｍｉ ａ ｔ ｏ ｓｓ ｏ ｄ ｌ ｎ ｅ ，ｆ ａ ｎ ｏ ｓｒ ｄ ｎ ｓ ａ ｅ ．Ｔ ｒ ｄ ｔｏ ａ ｈ ｓｏｏ ｉａ ｎ ｉ ｃ ｅ ｃ ｌｍｅｈ ｄ ｈ ｗｅ ｔ ａ ｓ ｆｔ ｅ ｐ ｅ ｔｐｅ ｆｓｒ ｉ ｈ ｔｍｏ ｔｏ ｈ ｈ ｎｏｙ ｓ ｏ ｔａｎ ＮＨ０ ０６ ７ ｗｅ ｅ ｓｍｉ ｒｔ ｃ ｒ ａ． Ｐｈ ｌ ｇ ｎ ｎ ｌｓｓ ｗｉｈ １ ９ ２ ｒ ｉ ｌ ｏ Ｎｏ ａ ｄｉ ａ ｙｏ ｅ ｙ ａ ａ ｙ ｉ ｔ ６Ｓ ｒ ＤＮＡ ｈ ｗｅ ｈａ ｈ ｔａｎ ＮＨ０ ０６ ７ ｗａ ｒ ｎ ｈ ｄ ｉ ｔ ｈｅ ｓ ｍｅ ｃｕｓｅ ｓｔ ｔｏ ｔ ｅ ｐｅ ｉｓｏ — ｓ ｏ ｄ ｔ ｔｔ ｅ ｓｒ ｉ ９ ２ ｓｂ ａ ｃ ｅ ｎ ｏ ｔ ａ ｌ ｔｒａ ｈａ ｆｏｈ ｒｓ ｃ ｅ ｆＮｏ
Ｊｎ ２ １ ａ． ０２
加州鲈诺卡菌病病原 的分离与鉴定
蒋依依 ，李 言伟 ，周素明 ，李安兴
（ 中山大学水产品安全教育部重点 实验室∥生物防治国家重点实验 室∥生命科学学院，
广 东 广 州 ５ ０７ ） １２ ５
摘 要 ：加州鲈是我国南方的重要经济鱼类养殖品种，但近年病害问题十分突出。诺卡菌已成为危害加州鲈健
康 养殖 的重要病原 ， 目前对该病原菌的分离鉴定及种属类 型 的研究 尚未见 报道 。国 内首 次从患病 加州 鲈体 内分
离得到诺 卡 菌 ，并 最 终 确 定 了 其 病 原 种 类 是 鲕 鱼 诺 卡 菌 Ｎ ｃｒｉ ｓ ｉ ｅ。从 患 病 加 州 鲈 内 分 离 到 菌 株 ｏａｄａ ｅｏ ａ ｒｌ Ｎ ０ ０ ２ ，镜检发现该菌为革兰氏阳性 的分 支状杆菌 。生理 生化鉴定结果表 明分离菌株 与诺卡菌 属 Ｎ ｃｒｉ Ｈ ９ ６７ ｏａｄａ细
第 １ 期
蒋依依 等 ： 加州鲈诺 卡菌病病原 的分离与鉴定 表 １ 菌株 Ｎ ００２ 和参照菌株的生理生化特征 Ｈ ９６７
Ｔ ｂ ｅ １ Ｐ ｙ ｉｌｇ ｃ ｌａ ｄ ｂｏ ｈ ｍｉａ ｈ ｒｃ ｅｉｔ ｓｏ ｏａｅ ｔ ｉ ａ ｌ ｈ ｓ ｏ ｉａ ｎ ｉｃ ｅ ｃ ｃ ａａ ｔ ｒ ｉ ｆｉ ｌｔｄ ｓ ａ ｎ ＮＨ０ ０ ２ ｎ ｅｅ ｅ ｃ ｔ ｉ ｓ ｏ ｌ ｓｃ ｓ ｒ ９ ６ ７ ａ ｄ ｒ ｆｒ ｎ ｅ ｓｒ ｎ ａ
ｐ ｙ ｉ ｌｇｃ ｌ ｉ ｃ ｅ ｃ ｌ ｒ ｐ ｒ ｅ ｎ ｈ ｌ ｇ ｎ ｔ ｎ ｌｓｓ ｈ ｌ ｍｅ ｔ ｕ ｏ ａ ｔｒａ ａ ｄ ｎ ｉ ｈ ｓ ｏ ｉ ａ ，ｂ ｏ ｈ ｍｉａ ｏ ｅ ｔ ｓａ ｄ ｐ ｙ ｏ ｅ ｅｉ ａ ａｙ ｉ ，ｔ ｅｆ ａ ｎ ｏ ｓｒ ｄ ｂ ｃｅ ｌｗ ｓｉ ｅ ｔ ｏ ｐ ｉ ｃ ｉ ｉ －
ｉ ｌ ｅ ｈｎ ．Ｉ ｉ ｓ ｄ ，ａｓ ａ ｆ ｏａｄａ（ ｅｉ ｅ ｓＮ ０ ０ ２ ）ｗ ｓｉ ｌｔ ｏ ｉ ｓ ａ ｄｉ Ｃ ｉ ｏｔ ｎ ａ ｎｔ ｓ ｔ ｙ ｔ ｉ ｏ ｃｒｉ ｄｓ ｎ ｄ ａ Ｈ ９ ６ ７ ａ ｓ ａｅ ｆ ｍ ｄｓ ｈ ｕ ｒｎ Ｎ ｇ ｏ ｄｒ —
ａ ｍｐｉｉ ｉ ｃ ｌ ｎ． ｌ
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菌 的基本特征相符。回归感染试 验证 实菌株 Ｎ ０ ０ ２ Ｈ ９６ ７即为 引起此次 加州 鲈结节病 的病原 菌。对该 菌株 的 １Ｓ ６ ｒＮ Ｄ Ａ进行了扩增和序列 分析 发现 ，该 菌株 与诺 卡菌 属细 菌 的亲缘关 系较 近 ，且 与鲕鱼诺 氏菌 ｓｒ ｌ Ｃ ｅ ｏ ａＪ Ｍ ｉｅ ３６ ３ ０的 １ Ｓｒ Ｎ ６ Ａ序列同源性最 高 ，达到 ９ ． ％。综 合上述试 验结果 ，我们将加州 鲈结节病 的病原 菌鉴定为 鲫 Ｄ ９９ 鱼诺卡菌 。为了指导该病 的防控 ，还对 该病原 菌做 了一 系列 药敏试 验 ，结果 显示 ，该菌 株对氯 霉素 、链霉 素 、 卡那霉素 、四环素等抗生素敏感 ，但对磺胺类和氨苄青霉素有耐药性 。
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００ ５ ．０
图 ５ 基于 １Ｓ Ｒ Ａ基 因序列同源性构建的系统发 育树 ６ Ｎ ｒ
Ｆ ｇ ５ Ｐ ｙｏ ｅ ｅｉ ｒ ｅｏ ｏ ａ ｄａ ｂ ｓ ｄ ｏ ｉ ｈ ｌｇ ｎ ｔ ｔｅ ｆＮ ｃ ｒ ｉ ａ ｅ ｎ ， ｃ １ Ｓ ｒ ＮＡ ｓ ｑ ｅ ｃ ｏ ｌｇ ６ Ｒ ｅ ｕ ｎ ｅ ｈ ｍｏｏ ｙ
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收 稿 日期 ：２ １ — ４—１ ０１ ０ ８
基金项 目：广东省省级财政鱼病 防治专项资金资助项 目 （ 粤财农 ［０ ０ ４ ） ２ １ ］３７ 作者简介 ：蒋依依 （ ９ ５年生） １８ ，女 ，硕士 ；通讯作者 ：李安兴 ；Ｅｍａ ：ｌ ｎｉｇ ａ ．ｙｕ ｅｕ ｃ － ｉ ｉ ｘｎ＠ｍ ｉ ｓｓ． ｄ． ｎ ｌ ａ ｌ
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图 中所用 各菌 株 １Ｓｒ Ｎ ６ Ｄ Ａ序 列号 分别 为 ：Ｎ ｃｒｉ ｏａｄａ
ｓｒ ｌｅ （Ｄ ６９ １ 。 Ｎ ｃｒｉ ｏ ｔ ｉ ｃｖ ｒｍ ｅｏ ｉａ Ｑ ５９ ５） ｏａｄａ ｔｉ ｓ ａｉ ｕ ｉｄ — ａ
（ Ｑ ５９２ ， ｏａｄａｃ ｓ ｓａ （３９９ ， ｏａ－ Ｄ ６９ １ ） Ｎ ｃｒｉ ｒ ｓ ｔ ｅ Ｚ７８ ） Ｎ ｃｒ ａｏｒ
７ ９
水 解 七 叶苷 明 胶
＋ ＋ ＋
淀粉
酪蛋 白
黄嘌呤
酪 氨 酸 一
注 ：“＋” 为 阳性 ，“一” 为阴性
表 ２ 菌株 Ｎ ０ ０ ２ Ｈ ９６ ７感染健康加州鲈试验结果
Ｔ ｂｅ ２ Ｅ ｐ ｒｍｅ ｔｌｉｆ ｃｉｎ ｆｌｒ ｅ ｕ ｈ ａ ｌ ｘ ｓｒ ｉ Ｈ０ ０ ２ ａ ｓｗｉ ｉｏａ ｅ ｔａｎ Ｎ ９ ６ ７ ｈ
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第５ １卷
２１ ０ ２年
第 １期
１ 月
中山大学学报 （ 自然科学版 ）
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Ｖｏ． Ｎｏ １５１ ．１
注 ：“ ”为 自然组未作任何处理 一
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ｌｎ ｏ ｇ，ｓｅ ｄ ｒ ｉｌｍｅ ｔｕ ｏ ｓｉ ｈ ｐ ｓ ｈｅ ｔａ ｉｉｎ ｌｐ ｙ ｉｌ ｇｃ ｌａ ｄ ｂ ｏ ｈ ｍｉ ａ ｔ ｏ ｓｓ ｏ ｄ ｌ ｎ ｅ ，ｆ ａ ｎ ｏ ｓｒ ｄ ｎ ｓ ａ ｅ ．Ｔ ｒ ｄ ｔｏ ａ ｈ ｓｏｏ ｉａ ｎ ｉ ｃ ｅ ｃ ｌｍｅｈ ｄ ｈ ｗｅ ｔ ａ ｓ ｆｔ ｅ ｐ ｅ ｔｐｅ ｆｓｒ ｉ ｈ ｔｍｏ ｔｏ ｈ ｈ ｎｏｙ ｓ ｏ ｔａｎ ＮＨ０ ０６ ７ ｗｅ ｅ ｓｍｉ ｒｔ ｃ ｒ ａ． Ｐｈ ｌ ｇ ｎ ｎ ｌｓｓ ｗｉｈ １ ９ ２ ｒ ｉ ｌ ｏ Ｎｏ ａ ｄｉ ａ ｙｏ ｅ ｙ ａ ａ ｙ ｉ ｔ ６Ｓ ｒ ＤＮＡ ｈ ｗｅ ｈａ ｈ ｔａｎ ＮＨ０ ０６ ７ ｗａ ｒ ｎ ｈ ｄ ｉ ｔ ｈｅ ｓ ｍｅ ｃｕｓｅ ｓｔ ｔｏ ｔ ｅ ｐｅ ｉｓｏ — ｓ ｏ ｄ ｔ ｔｔ ｅ ｓｒ ｉ ９ ２ ｓｂ ａ ｃ ｅ ｎ ｏ ｔ ａ ｌ ｔｒａ ｈａ ｆｏｈ ｒｓ ｃ ｅ ｆＮｏ
Ｊｎ ２ １ ａ． ０２
加州鲈诺卡菌病病原 的分离与鉴定
蒋依依 ，李 言伟 ，周素明 ，李安兴
（ 中山大学水产品安全教育部重点 实验室∥生物防治国家重点实验 室∥生命科学学院，
广 东 广 州 ５ ０７ ） １２ ５
摘 要 ：加州鲈是我国南方的重要经济鱼类养殖品种，但近年病害问题十分突出。诺卡菌已成为危害加州鲈健
康 养殖 的重要病原 ， 目前对该病原菌的分离鉴定及种属类 型 的研究 尚未见 报道 。国 内首 次从患病 加州 鲈体 内分
离得到诺 卡 菌 ，并 最 终 确 定 了 其 病 原 种 类 是 鲕 鱼 诺 卡 菌 Ｎ ｃｒｉ ｓ ｉ ｅ。从 患 病 加 州 鲈 内 分 离 到 菌 株 ｏａｄａ ｅｏ ａ ｒｌ Ｎ ０ ０ ２ ，镜检发现该菌为革兰氏阳性 的分 支状杆菌 。生理 生化鉴定结果表 明分离菌株 与诺卡菌 属 Ｎ ｃｒｉ Ｈ ９ ６７ ｏａｄａ细
第 １ 期
蒋依依 等 ： 加州鲈诺 卡菌病病原 的分离与鉴定 表 １ 菌株 Ｎ ００２ 和参照菌株的生理生化特征 Ｈ ９６７
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