溶菌酶
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溶菌酶溶菌酶溶菌酶( Lysozyme,E.C.3.2.17),全称为1,4-p -N -溶菌酶,又称为细胞壁溶解酶,是自然界普遍存在的一种酶,因其能溶解细菌细胞壁具有溶菌作用而得名。
(一)溶菌酶的结构及物理化学性质溶菌酶易溶于水,遇碱易破坏,不溶于丙酮、乙醚,是一种白色、无臭的结晶粉末。
相对分子质量为14.7ku,由129个氨基酸残基组成,碱性氨基酸残基及芳香族氨基酸如色氨酸残基的比例很高,含有4个二硫键,如图2 -24所示,其等电点为10~11。
在37℃条件下溶菌酶的生物学活性可保持6h,当温度较低时保持时间更长,利于溶菌酶在体内发挥作用。
禽蛋蛋清是溶菌酶的重要来源,蛋清溶菌酶的物理化学性质如表17 -1所示。
溶菌酶由两个区域组成,由一个长的α螺旋所联接,其二级结构大多是α螺旋。
N末端的区域( f40~80)由一些螺旋线组成,大多数是反平行的β折叠。
第二个区域由fl~39和f89~129氨基酸残基组成。
分子中的这两个区域被一个螺旋体(f87天冬氨酸- 114精氨酸)所分离,分子组成了内部疏水外部亲水的基本结构,对溶菌酶发挥抗菌功能起着巨大的作用。
表17 -1 蛋清溶菌酶的物理化学特性特性数值相对分子质量14 400亚基数 1氨基酸129等电点10.7二硫键数 4碳水化合物所占比例0E1%280nm 26.493℃时的D热值(每分钟破坏90%的活性)110酶活力的实验通过浑浊溶壁微球菌的细胞溶解(二)溶菌酶的来源溶菌酶在自然界中普遍存在,在人和许多哺乳动物的组织和分泌液中,均发现有溶菌酶存在,其物化性质基本相似,溶菌酶的来源如表17 -2所示。
溶菌酶主要分布于禽蛋和鸟类蛋清中,尤其是浓厚蛋白的系带膜状层中。
禽蛋中异常丰富,占整个蛋清中的 3.5%,鸡蛋蛋清是溶菌酶的主要商业来源。
表17 -2溶菌酶的来源溶菌酶的来源溶菌酶的含量鸡蛋清 2 500 ~ 3 500μg/mL鸭蛋清 1 000 ~ 1 300μg/mL鹅蛋清500 ~ 700μg/mL眼泪 3 000 ~5 000μg/mL人乳55~ 75 μg/mL牛奶10~ 15μg/mL脾脏50 ~ 160μg/kg胸腺60~ 80μg/kg胰腺20~ 35μg/kg花椰菜汁25~ 28μg/mL木瓜汁8~ 9μg/mL卷心菜汁7~8μg/mL(三)溶菌酶的溶菌机制溶菌酶是一种糖苷水解酶,专门作用于微生物细胞壁,可以破坏组成微生物细胞壁的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰葡萄糖胺之间的β-1,4-糖苷键,其作用机理见图17 -1。
内容1:溶菌酶简介1.1 溶菌酶溶菌酶(N-乙酰胞壁质聚糖水解酶,EC3.2.1.17)又称为胞壁质酶,是一种专门作用于微生物细胞壁的水解酶。
溶菌酶是由129个氨基酸构成的单纯碱性球蛋白,化学性质非常稳定。
溶菌酶存在在自然界中,溶菌酶普遍存在于鸟类、家禽的蛋清和哺乳动物的眼泪、唾液、血液、鼻涕、尿液、乳汁和组织细胞中(如肝、肾、淋巴组织、肠道等)。
从木瓜、芜青、大麦、无花果和卷心菜、萝卜等植物中也能分离出溶菌酶,其中以蛋清含量最高。
溶菌酶生理作用在生物体内溶菌酶具有抗菌消炎,抗病毒,增强机体免疫力的生理功能,还可激活血小板,改善组织局部血液循环障碍,分泌脓液,增强局部防卫功能,具有止血、消肿等作用。
它还可以作为一种宿主抵抗因子,对组织局部起保护作用2:溶菌酶的种类溶菌酶的研究最早是从尼科尔(Nicoile)1907年发表枯草杆菌溶解因子的报告开始的。
两年后,Laschtschenko指出:鸡卵白强烈抑菌作用是酶作用的结果。
1922年英国细菌学家弗莱明(Fleming)发现人的唾液、眼泪中存在这种能溶解细菌细胞壁的酶,因其具有溶菌作用,故命名为溶菌酶。
1937年由Abraham与Robinson从卵蛋白中最先分离出晶体溶菌酶,此后人们在人和动物的多种组织、分泌液及某些植物、微生物中也发现了溶菌酶的存在。
根据来源不同,将溶菌酶分为三类(1)动物源溶菌酶⏹动物源溶菌酶包括鸡蛋清溶菌酶及人和哺乳动物溶菌酶。
⏹鸡蛋清溶菌酶是目前研究和应用最多的,在鸡蛋清中约含有3.5%左右的酶,分子量为14000,其等电点在pH10.8左右,最适效应温度在50℃,化学性质稳定,pH在1.2~11.3之间改变时对酶结构影响很小,pH在4~7范围内100℃处理1min仍有近100%的活力,在210℃条件下加热1.5h仍具有活性。
鸡蛋清溶菌酶在碱性环境条件下稳定性较差,分解G+细菌,但对G-细菌不起作用。
研究表明其它鸟类蛋清溶菌酶也是由129个氨基酸残基组成,但其排列顺序和鸡蛋清溶菌酶不同,并且活性部位也不相同。
溶菌酶的名词解释溶菌酶是一种存在于细菌、动物和植物等生物体内的酶类物质,具有分解细菌细胞壁的能力。
这种酶广泛存在于自然界中,对于维持生态平衡和机体免疫防御方面都起着重要作用。
在这篇文章中,我们将详细探讨溶菌酶的特性、功能和应用。
一、溶菌酶的特性溶菌酶是一种水解酶,主要通过水解β-1,4-糖苷键的酶解作用,切断细菌细胞壁的纤维素和肽聚糖链。
溶菌酶可以依据其作用对象分为两类:1)内源性溶菌酶:存在于许多生物体内,如人体分泌的唾液、眼泪、鼻涕中,以及动物和植物体内的细胞和体液中;2)外源性溶菌酶:来自于环境中,如一些细菌和真菌分泌的溶菌酶。
溶菌酶的分子量通常在10,000至20,000道尔顿之间,具有抗菌谱较广的特点。
它是一种相对稳定、热稳定性较好且在酸性条件下活性仍保持较高的酶类物质。
二、溶菌酶的功能溶菌酶在生物体内扮演着重要的角色,具有多种功能。
1)免疫防御:溶菌酶在机体免疫系统中起到重要的作用。
当细菌感染机体时,免疫细胞会释放溶菌酶来破坏细菌的细胞壁,从而抑制其生长和扩散。
这对于维持机体的免疫稳态具有至关重要的意义。
2)消化道健康:人体消化道中存在着多种细菌,其中一些是有益的菌群。
溶菌酶可以促进这些有益菌的生长和繁殖,维护消化道健康。
同时,它还能降低有害菌在消化道内的数量,减少感染和疾病的风险。
3)食品工业应用:由于溶菌酶对细菌具有特异性的杀菌作用,它在食品工业中具有广泛的应用前景。
比如,将溶菌酶应用于食品加工中,可以延长食品的保质期,改善产品的质量和卫生安全性。
三、溶菌酶的应用溶菌酶的研究和应用领域非常广泛,涉及生物医药、食品工业、环境科学等多个领域。
1)生物医药领域:溶菌酶已被广泛应用于临床医学中,特别是在抗生素研发和治疗上。
由于细菌在抗生素中产生耐药性的情况日益严重,溶菌酶作为一种具有独特杀菌作用的物质,被认为是改善抗生素疗效的有力补充。
此外,溶菌酶还可用于细菌感染的快速诊断和疗效评估。
2)食品工业领域:溶菌酶在食品加工过程中的应用正在得到重视。
高考溶菌酶常考知识点溶菌酶是一种可以破坏细菌细胞壁的酶类物质。
在高考生物考试中,溶菌酶是一个常见的知识点。
本文将介绍溶菌酶的基本概念、作用机理、应用领域以及相关实验方法。
一、溶菌酶的基本概念溶菌酶也被称为葡萄球菌溶菌酶,是一种能够裂解葡萄球菌细胞壁的酶类物质。
它主要存在于人类和动物体内的各种组织和分泌物中,是一种天然的防御机制。
溶菌酶是由细菌、真菌、植物和动物等生物体产生的一类酶,具有广泛的生物学活性。
二、溶菌酶的作用机理溶菌酶的作用机理主要是通过破坏细菌细胞壁而导致细菌死亡。
它能够降低细菌细胞壁的完整性,导致内部渗漏和细胞内容物外泄,最终导致细胞溶解。
在免疫防御中,溶菌酶可以识别病原菌细胞壁上的特定抗原,从而发挥抗菌作用。
三、溶菌酶的应用领域溶菌酶在医药领域具有广泛的应用价值。
首先,它可以作为一种抗菌剂用于治疗细菌感染性疾病。
其次,溶菌酶还可以作为一种重要的实验工具,用于细菌分子生物学研究中,如基因工程、DNA重组等领域。
此外,溶菌酶还广泛应用于食品工业、饲料工业、环境保护等领域。
四、溶菌酶相关的实验方法在研究溶菌酶时,有几种常用的实验方法可以用来检测其活性和测定其浓度。
首先是溶菌酶活性的检测,常用的方法有酶活性测定法和酒石酸盐凝胶电泳法。
其次是溶菌酶浓度的测定,常用的方法有比色法、生物学活性测定法和免疫学测定法。
五、总结通过对溶菌酶的基本概念、作用机理、应用领域和相关实验方法的介绍,可以看出溶菌酶在生物学领域中具有重要的研究和应用价值。
对于高考生物考试来说,了解溶菌酶的相关知识点,有助于理解细菌的抵抗机制以及抗菌药物的开发和应用。
同时,掌握溶菌酶相关实验方法,可以对细菌研究提供有力的实验手段。
本文对高考溶菌酶的常考知识点进行了概括性的介绍,希望对广大考生有所帮助。
在备考过程中,建议考生加强对溶菌酶相关知识的学习和理解,注重实验方法的掌握,提高解题能力和实验操作水平。
祝愿各位考生取得优异的成绩!。
高中生物溶菌酶知识点总结大全溶菌酶是一种在生物体中广泛存在的酶类,它在高中生物课程中占有重要地位,因为其在生物防御机制中的作用以及在科学研究中的应用。
本文将对溶菌酶的结构、功能、分类、生物学意义以及在工业和医学上的应用进行详细的总结。
一、溶菌酶的结构溶菌酶是一种基本不受糖基化影响的酶,其结构主要由氨基酸序列决定。
人类溶菌酶由130个氨基酸残基组成,具有一个明显的β-折叠结构。
这种结构使得溶菌酶能够紧密地结合到细菌细胞壁的多糖上,从而破坏细胞壁的结构完整性。
二、溶菌酶的功能溶菌酶的主要功能是作为生物体的防御机制,对抗外来细菌的侵袭。
它通过水解细菌细胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡萄糖之间的β-1,4-糖苷键,导致细胞壁破裂,细菌最终溶解死亡。
这种抗菌作用对于人体的免疫系统尤为重要,尤其是在皮肤和黏膜表面,溶菌酶能够帮助抵御病原体的入侵。
三、溶菌酶的分类根据溶菌酶的来源和特性,可以将溶菌酶分为几类:1. 鸡蛋溶菌酶:从鸡蛋清中提取,是最常用的溶菌酶之一。
2. 人类溶菌酶:存在于人的唾液、泪液和其他体液中,对维护人体健康起到重要作用。
3. 植物溶菌酶:在某些植物中也发现有溶菌酶的存在,如菠萝和木瓜。
4. 微生物溶菌酶:由某些微生物产生,用于对抗其他微生物。
四、生物学意义溶菌酶在生物体中具有重要的生物学意义。
首先,它是天然免疫系统的一部分,帮助生物体抵御细菌感染。
其次,溶菌酶还能够调节炎症反应,因为它能够影响免疫细胞的活性。
此外,溶菌酶的存在也能够帮助生物体清除死亡的细胞和细胞碎片,维持组织的健康状态。
五、工业和医学应用溶菌酶在工业和医学领域有着广泛的应用。
在工业上,溶菌酶可用于食品保鲜,防止食品变质和延长保质期。
在医学上,溶菌酶可用于治疗某些细菌感染,尤其是在对抗生素有耐药性的细菌面前,溶菌酶提供了另一种治疗选择。
此外,溶菌酶也被用于化妆品和清洁产品中,利用其抗菌特性来保持产品的卫生和安全性。
六、溶菌酶的提取和纯化溶菌酶的提取通常采用物理和化学方法相结合的方式。
溶菌酶配制
溶菌酶又称胞壁质酶或N-乙酰胞壁质聚糖水解酶,是一种能水解致病菌中黏多糖的碱性酶,是一种具杀菌作用的天然抗感染物质,具有抗菌、抗病毒、抗炎、增强抗生素疗效及加快组织恢复的作用。
那么你知道溶菌酶如何配制吗?下面介绍一下溶菌酶配置。
【材料】
1•无菌 PBS ( pH6.4 , 1/15mol/L ), 10×100 试管,试管架,无菌平皿,打孔器,微量加样器,分光光度计,水浴箱,温箱等。
【方法】
1. 菌液配制:将 PBS 加入枯草芽胞杆菌斜面,置室温5-10 分钟后制成菌悬液;在波长 640nm 处,测定菌悬液的浓度,并将菌液浓度调至透光率 30-40% 。
2. 溶菌酶配制:称取溶菌酶标准品,用 PBS 配成 1000 m g/ml ,置冰箱冻存,等使用时再稀释成 100m g/ml 、 50 m g/ml、 25 m g/ml和 10 m g/ml等详细规格。
以上就是溶菌酶的配置,注意一定要在无菌的情况下配置,否则会失败。
1922年,英国细菌学家Fleming发现人的唾液、眼泪中存在有溶解细菌细胞壁的酶,因其具有溶菌用,故命名为溶菌酶。
溶菌酶广泛地分布于自然界中,在人的组织及分泌物中可以找到,动物组织中也有,以鸡蛋清中含量最多。
其他植物组织及微生物细胞中也存在[1]。
它是由动物特定细胞内的核糖体上合成的一种蛋白酶,分泌到细胞外杀死细菌的。
它存在于卵清、唾液等生物分泌液中,催化细菌细胞壁肽聚糖N-乙酰氨基葡糖与N-乙酰胞壁酸之间的1,4-β-糖苷键水解的酶。
它可以溶解掉细菌的细胞壁,杀死细菌。
由于溶菌酶能够选择性地分解微生物的细胞壁,并且自身没有毒害,因此作为一种天然、安全的杀菌剂和防腐剂,在食品工业、医药制剂、日用化工等行业被普遍重视。
随着开发和应用研究的进一步深入,溶菌酶的发展前景将会十分广阔。
下面主要陈述溶菌酶的一些基本情况及其在食品工业中的应用。
在食品工业中,溶菌酶是无毒的蛋白质,能选择性地使目标微生物细胞壁溶解而使其失去生理活性,而食品中的其他营养成分几乎不会造成任何损失。
因此,它可以安全地替代有害人体健康的化学防腐剂(如苯甲酸及其钠盐等),以达到延长食品货架期的目的,是一种很好的天然防腐剂。
现已广泛应用于水产品、肉食品、蛋糕、清酒、料酒及饮料中的防腐。
1 溶菌酶的分类溶菌酶按其所作用的微生物不同分两大类,即细菌细胞壁溶菌酶和真菌细胞壁溶菌酶。
真菌细胞壁溶菌酶包括酵母菌细胞壁溶解酶和霉菌细胞壁溶解酶。
1.1 细菌溶菌酶细菌溶菌酶通常可分为三大类:N-乙酰氨基己糖苷酶,它催化水解肽聚糖中糖骨架中的β(1→4)糖苷键;N-乙酰胞壁酰-丙氨酸酰胺酶,它催化裂解肽聚糖中糖基与肽基;内肽酶,它催化裂解肽聚糖肽桥中的肽键。
1.2 真菌溶菌酶真菌溶菌酶主要包括几丁质酶和β-葡聚糖酶。
1.2.1 几丁质酶虽然一些外几丁质酶(exochitinases;EC3.2.1.30)也表现出抗真菌的特性,但抗真菌的几丁质酶主要是内几丁质酶(endochitinases;EC3.2.1.14)。
溶菌酶的检测方法
溶菌酶(lysozyme)是一种能够破坏细菌细胞壁的酶。
以下是一种常用的溶菌酶检测方法:
1. 直接检测法:将待检测溶菌酶样品加到含有适宜浓度的细菌悬浮液中,观察是否有菌落溶解现象。
溶菌酶能够使细菌细胞壁破裂,导致菌落的溶解。
2. 比色法:使用一个富含胞菌的琼脂平板,将待检测溶菌酶样品滴在琼脂平板上并孵育。
溶菌酶会溶解菌落,形成透明的区域。
通过比较孵育前后孔的大小,可以判断溶菌酶的活性。
3. 比浊法:使用涉及胞菌的悬浊液,加入待测溶菌酶样品并在一定时间内孵育。
溶菌酶的作用使细菌细胞溶解,悬浊液逐渐变清,通过浊度的减少来判断溶菌酶的活性。
4. 酶联免疫吸附试验(ELISA):使用溶菌酶特异性抗体涂覆在微孔板上,然后将待测溶菌酶样品加入孔中,溶菌酶与抗体结合。
再加入与溶菌酶反应的底物和发色剂,通过检测发色强度来测定溶菌酶的浓度。
这些方法都是常用的溶菌酶检测方法,具体选择哪种方法取决于实验的需要和条件。
高中溶菌酶知识点总结一、溶菌酶的结构和功能1. 溶菌酶的结构溶菌酶是一种酶类蛋白质,其主要由氨基酸组成。
它的分子结构通常呈现出球状或者棒状,具有一定的空间构象。
溶菌酶的分子结构决定了其在水溶液中的活性和作用方式。
2. 溶菌酶的功能溶菌酶的主要功能是溶解细菌细胞壁。
细菌的细胞壁主要由肽聚糖和脂多糖构成,溶菌酶可以在特定的酶活性和pH条件下,将细菌细胞壁中的肽聚糖和脂多糖降解成小分子物质,使细菌细胞失去保护作用而死亡。
3. 溶菌酶的作用机制溶菌酶作用的主要机制是通过其对细菌细胞壁的特异性降解作用。
当细菌受到感染或者侵袭时,生物体内的溶菌酶会针对特定种类的细菌细胞壁进行降解,从而消灭或抑制细菌的生长和繁殖。
二、溶菌酶在生物防御系统中的作用1. 溶菌酶对抗微生物感染在生物体的免疫系统中,溶菌酶是一种重要的抗菌蛋白质。
它可以通过溶解细菌细胞壁的方式直接杀死细菌,起到预防和抵抗感染的作用。
溶菌酶在吞噬细胞和粒细胞等免疫细胞中起着重要的作用,可以帮助这些细胞识别和清除各种外来的病原体。
2. 溶菌酶在炎症反应中的作用当生物体受到外伤或感染时,免疫系统会产生炎症反应,溶菌酶参与其中。
溶菌酶可以通过促进炎症反应的进行,从而加速伤口愈合和抗菌作用,保护机体免受病原菌的侵害。
3. 溶菌酶对营养物质的释放在生物体内,溶菌酶还可以通过溶解细菌细胞壁的方式帮助其吸收营养物质。
当溶菌酶降解细菌细胞壁时,会释放出一些营养物质,供生物体吸收和利用,起到促进生长和维持健康的作用。
三、与溶菌酶相关的重要概念和应用1. 溶菌酶的调节机制溶菌酶的活性受到多种因素的影响,包括pH值、温度、离子强度等。
不同种类的溶菌酶对这些因素的适应性也有所不同。
因此,对溶菌酶的调节和控制是生物体内免疫系统正常运作的重要保障。
2. 溶菌酶在医药和生物技术中的应用由于溶菌酶具有一定的抗菌作用和对细胞壁的特异性降解能力,因此在医药和生物技术领域有着广泛的应用。
例如,溶菌酶可以作为一种抗菌药物用于治疗细菌感染的疾病;在生物技术中,溶菌酶可以用于细胞壁的降解和细胞的裂解,有助于分离和提取细胞内的蛋白质和核酸。
溶菌酶作用机制
溶菌酶是一种专门作用于微生物细胞壁的水解酶。
它作用于N一乙酰氨基葡萄糖胺和N一乙酰胞壁酸之间的B一1,4糖苷键,能使某些细菌细胞中粘多糖成分分解。
因而具有溶菌能力。
溶菌酶具有破坏细菌细胞壁结构的功能,处理革兰氏阳性细菌可得到原生质体。
溶菌酶是一种无毒、无副作用的蛋白质,又具有一定的溶菌作用,因此可用作食品防腐剂。
盐析法
实验原理:高浓度的中性盐溶液中存在着大量的带电荷的盐离子,它们能中和生物分子表面的电荷,使之得以稳定的双电层受损,从而破坏分子外围的水化层;另外,大量盐离子自身的水合作用降低了自由水的浓度,从另一方面压缩了水化层的浓度,降低了它的亲水性,从而沉淀析出。
1、将预处理的蛋清倾人烧杯中,边搅拌边加入蛋白质5%的食盐粉末,促使氯化钠细粉及时溶解,以避免局部浓度过高或沉淀于容器底部,否则会引起蛋白质的变性而产生大量的白色沉淀.
2、溶解后再用0.1mol/L的NaOH溶液调节pH9.5-pH10.0。
置于4℃环境中,数天后即有溶菌酶结晶出现,将酶晶体过滤,收集结晶沉淀粉,用丙酮脱水,真空干燥即为粗产品。
3、将制得的粗品用pH4.6的醋酸溶解,然后让酶液静置24小时。
4、过滤除去不溶物,收集滤液并量出体积,按每100毫升液体加5毫克NaCl的比例加入,然后用0.1mol/L的NaOH溶液缓慢地将其pH值调节到10.8后,低温下静置结晶。
为加速结晶过程可向酶液中加入溶菌酶晶种,待结晶完全后再倾去上清液,用布氏漏过滤可得溶菌酶结晶。
如纯度不高,可重复操作提纯,直至达到所需的纯度为止,结晶于30—40℃得溶菌酶产品。
溶菌酶反应条件摘要:一、溶菌酶简介1.溶菌酶的定义2.溶菌酶在生物体中的作用二、溶菌酶反应条件1.溶菌酶的激活条件2.溶菌酶的最适反应温度3.溶菌酶的最适反应pH 值4.溶菌酶的抑制剂三、溶菌酶的应用1.溶菌酶在医学领域的应用2.溶菌酶在食品工业中的应用3.溶菌酶在环境保护中的应用正文:溶菌酶是一种能够分解细菌细胞壁的蛋白质,具有抗菌、消炎、抗病毒等生物活性。
溶菌酶广泛存在于动植物和微生物中,在生物体中起到防御病原微生物的作用。
本文将详细介绍溶菌酶的反应条件及其在多个领域的应用。
首先,溶菌酶的激活条件与其来源和种类密切相关。
一般来说,溶菌酶需要在特定的激活剂作用下才能发挥活性。
例如,人类的眼泪中含有溶菌酶,可以迅速破坏细菌的细胞壁,从而具有抗菌作用。
此外,一些植物、动物和微生物产生的溶菌酶也需要在适当的条件下才能激活。
其次,溶菌酶的最适反应温度和pH 值对其活性有很大影响。
不同种类的溶菌酶的最适反应温度和pH 值有所差异,但一般来说,溶菌酶在接近中性(pH 6.5-7.5)的条件下活性最高。
最适反应温度则因溶菌酶来源不同而有所差异,一般在37℃左右。
然而,溶菌酶的活性受到某些物质的影响。
这些物质被称为溶菌酶抑制剂,可以抑制溶菌酶的活性。
例如,黏多糖和多糖类物质可以与溶菌酶结合,降低其抗菌能力。
因此,在实际应用中需要考虑溶菌酶抑制剂的影响,以保证溶菌酶的稳定性和生物活性。
溶菌酶在多个领域有广泛的应用。
在医学领域,溶菌酶被用于治疗各种感染性疾病,如皮肤感染、咽喉炎等。
在食品工业中,溶菌酶可以作为天然的防腐剂,延长食品的保质期。
此外,溶菌酶还在环境保护方面发挥作用,如降解水体中的有机污染物等。
总之,溶菌酶作为一种具有广泛生物活性的蛋白质,其反应条件对活性有很大影响。
溶菌酶的研究进展溶菌酶概述溶菌酶,也称为裂解素,是一种在细菌、真菌、动物和植物中都存在的水解酶。
它们可以降解细胞墙材料,使细胞变为裸露状态。
溶菌酶广泛应用于医学、食品和制药等领域。
溶菌酶的来源溶菌酶存在于多种微生物和真菌中,如链球菌、金黄色葡萄球菌、葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、支原体和放线菌等。
通过培养和发酵技术,可以大规模制备纯净的溶菌酶。
此外,许多动植物也拥有溶菌酶,如人类唾液中的溶菌酶可以消化细菌、口腔扁桃体中的溶菌酶可以抵御病毒和细菌。
植物中的溶菌酶则是一种抗病毒和抗真菌的重要保护因子。
溶菌酶的作用溶菌酶的主要作用是降解细胞壁,使细胞膜完整性受到破坏,导致细胞死亡。
此外,溶菌酶也能辅助免疫反应,促进抗菌作用,调节免疫细胞的活动,增强自身的抵抗力。
在食品和制药领域,溶菌酶可以作为肉制品厌氧菌的灭菌方法,促进乳制品中的凝乳和定型,同时也可用于生产肝素和生物制剂等。
溶菌酶的研究进展溶菌酶研究的重点在于其抗菌作用和免疫调节作用。
近年来,溶菌酶的研究进展主要集中在以下两个方面。
溶菌酶与细菌感染溶菌酶可以降解细菌细胞壁,对于抗菌作用具有重要的意义。
近年来,科学家发现溶菌酶与多种细菌感染相关联,如肺炎球菌感染、链球菌感染等。
溶菌酶的研究有助于了解病原菌与免疫细胞之间的互动机制,为治疗细菌感染提供新的思路。
溶菌酶的免疫调节作用溶菌酶不仅有着明显的抗菌作用,还可以调节免疫细胞的活动,增强自身的抵抗力。
最新研究发现,溶菌酶还具有降低过敏反应和抗肿瘤等作用,将为临床治疗提供新的方向。
,溶菌酶具有广泛的应用价值和研究前景。
通过深入研究溶菌酶的结构、功能和作用机制,可为疾病的治疗和疫苗的研发提供新的思路,并推动溶菌酶在医药和食品等领域的应用。
溶菌酶溶菌酶(lysozyme)又称胞壁质酶(muramidase)或N-乙酰胞壁质聚糖水解酶(N-acetylmuramide glycanohydrlase),是一种能水解致病菌中黏多糖的碱性酶。
主要通过破坏细胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡糖之间的β-1,4糖苷键,使细胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽,导致细胞壁破裂内容物逸出而使细菌溶解。
溶菌酶还可与带负电荷的病毒蛋白直接结合,与DNA、RNA、脱辅基蛋白形成复盐,使病毒失活。
因此,该酶具有抗菌、消炎、抗病毒等作用。
1简介中文名称:溶菌酶中文同义词:脆壁质酶;鸡蛋白;胞壁质酶(N-乙酰胞壁质聚糖水解酶);溶菌酶(鸡蛋清)英文名称:Lysozyme,简称LZM英文同义词:REDUCED LYSOZYME,WATERSOLUBLE;MUCOPEPTIDE-GLYCOHYDROLASE;MUCOPEPTIDE GLYCOLHYDROLASE;MUCOPEPTIDEN-ACETYLMURAMOYLHYDROLASE;MUCOPEPTIDEN-ACETYLMURAMOYLHYDROLASE GRADE III;MUCOPEPTIDEN-ACETYLMURAMOYLHYDROLASE GRADE VI:CHLORIDE;MURAMIDASE;MURAMIDASE GRADE III[1]CAS号:12650-88-3EINECS号:235-747-3[2]分子式:无分子量:14000左右EINECS号:235-747-3相关类别:发酵剂;Enzymes;酶;生化试剂;生物化学品。
分子结构图:2性质储存条件:2-8°Cform:powdercolor:white危险品标志B安全说明23-24/25-22WGK Germany3RTECS号OL5989850F3-10白色或微白色冻干粉,溶于水,不溶于乙醚和丙酮,pI为11.0-11.35,最适pH 值6.5。
稳定性:酸性介质中可稳定存在,碱性介质中易失活;96℃,pH值为3条件下,15min后活力保持87%。
抑制剂:有碘、咪唑和吲哚衍生物、表面活性剂(十二烷基硫酸钠、醇类和碳链不少于12的脂肪酸)。
1%水溶液在281.5nm处的吸光系数为26.4。
通过水解细菌细胞壁的肽聚糖来溶菌。
酶反应:Micrococcus luteus或Micrococcus lysodeikticus菌悬浮液═溶菌并澄清。
用途:用于生化研究,临床上用于急慢性咽喉炎、扁平苔癣、扁平疣等疾病的治疗。
以蛋清为原料,在pH6.5条件下用弱酸性阳离子交换树脂732吸附后,再用硫酸铵洗脱,经透析后冷冻干燥得产品。
4制备溶菌酶是采用生物工程技术进行克隆、提取而制取,它是一种天然酶,安全绿色的添加剂,无抗药性。
该酶广泛存在于人体多种组织中,鸟类和家禽的蛋清、哺乳动物的泪、唾液、血浆、尿、乳汁等体液以及微生物中也含此酶,其中以蛋清含量最为丰富。
从鸡蛋清中提取分离的溶菌酶是由18种129个氨基酸残基构成的单一肽链。
它富含碱性氨基酸,有4对二硫键维持酶构型,是一种碱性蛋白质,其N端为赖氨酸,C端为亮氨酸。
可分解溶壁微球菌、巨大芽孢杆菌、黄色八叠球菌等革兰阳性菌。
溶菌酶在等电点以下较广泛的pH值范围内,分子带正电荷,可吸附于弱酸性阳离子交换树脂上,洗脱后盐析,可得溶菌酶沉淀,再进行精制可得成品。
蛋清吸附↓724树脂洗涤↓缓冲液洗脱↓硫酸铵溶液盐析透析去碱性蛋白↓Na OH冻干溶菌酶冻干粉沉淀干燥溶菌酶在5~10℃下,将新鲜蛋清540kg加入到已处理好的80kg 724树脂中,搅拌吸附6h,在0~5℃静置过夜。
倾出上层蛋清,树脂离心甩干,用蒸馏水反复洗去黏附的卵蛋白,然后将树脂装入柱内,用0?15mol/L、pH=6?5磷酸缓冲溶液约150L洗涤树脂,再用约600L的10%硫酸铵溶液洗脱,收集洗脱液。
洗脱液中加硫酸铵,使最终含硫酸铵量为40%,有白色沉淀生成,冷处放置过夜。
虹吸上层清液,沉淀吸滤抽干,再用1倍蒸馏水溶解沉淀呈稀糊状,然后装入透析袋,在约5℃的条件下,对蒸馏水透析24h左右,中间换水2~3次。
离心去除沉淀,沉淀再用少量水洗一次,洗液与离心液合并。
再往透析清液中慢慢加入1mol/L 氢氧化钠溶液,同时不断搅拌,使pH值上升到8?0~9?0,如有白色沉淀,即离心除去。
然后用3mol/L盐酸调pH=5?0,冷冻干燥,即得白色片状溶菌酶。
也可将离心液用3mol/L盐酸调pH=3?5,在搅拌下缓慢加入5%的固体氯化钠,在约5℃的温度下静置48h,离心,沉淀用0℃丙酮洗涤,干燥,即得溶菌酶。
1.溶菌酶是很稳定的蛋白质,有较强的抗热性。
蛋清溶菌酶是C型,是已知的最耐热的酶;2.溶菌酶不会因为有机溶剂的处理而失活,当转移到水溶液中时,溶菌酶的活力可全部恢复;3.溶菌酶可被冷冻或干燥处理,且活力稳定;4.溶菌酶适宜pH5.3~6.4,可用于低酸性食品防腐;5.溶菌酶生产成本较低;6.溶菌酶的抗菌谱较广,不仅局限于G+ 菌,对部分G­ 菌也有抑制效果;7.溶菌酶作为防腐剂安全性高。
溶菌酶是一种天然蛋白质,1992年FAO/WTO 的食品添加剂协会已经认定溶菌酶在食品中应用是安全的。
6应用医学应用可作为一种具有杀菌作用的天然抗感染物质。
有抗菌、抗病毒、止血、消肿止痛及加快组织恢复功能等作用。
临床用于慢性鼻炎、急慢性咽喉炎、口腔溃疡、水痘、带状疱疹和扁平疣等。
也可与抗菌药物合用治疗各种细菌和病毒感染。
口服和肌注均有效。
口服,3~5片/次(肠溶片含10mg),3次/日。
口含,1片/次(口含片含20mg),4~6次/日。
外用:以1%~2%溶液滴注、涂擦或直接喷粉。
肌注,50mg~100mg/次,1~2次/日。
滴眼:用2%溶液。
副作用偶有较轻的过敏反应。
氯化溶菌酶医疗效果更广,有浓痰分散、出血抑制、组织修复、消炎镇痛、抗过滤性病毒等作用,因而用氯化溶菌酶的制药有消炎消痔、治感冒、皮肤病及眼、鼻、喉等用药.食品应用可作为防腐剂,它的主要功用是水解细菌细胞壁,在细胞内,则对吞噬后的病原菌起破坏作用.该酶对革兰氏阳性菌中的枯草杆菌、耐辐射微球菌有分解作用。
对大肠杆菌、普通变形菌和副溶血性弧菌等革兰氏阴性菌也有一定程度溶解作用,其最有效浓度为0.05%。
与植酸、聚合磷酸盐、甘氨酸等配合使用,可提高其防腐效果。
应用领域1.溶菌酶是一种无毒、无副作用的蛋白质,又具有一定的溶菌作用,因此可用作天然的食品防腐剂。
现已广泛应用于水产品、肉食品、蛋糕、清酒、料酒及饮料中的防腐;还可以添入乳粉中,使牛乳人乳化,以抑制肠道中腐败微生物的生存,同时直接或间接地促进肠道中双歧杆菌的增殖。
2.溶菌酶作为一种存在于人体正常体液及组织中的非特异性免疫因素,具有多种药理作用,它具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤的功效,目前医用溶菌酶其适应症为出血、血尿、血痰和鼻炎等。
3.溶菌酶具有破坏细菌细胞壁结构的功能,以此酶处理G+细菌得到原生质体,因此,溶菌酶是基因工程、细胞工程中细胞融合操作必不可少的工具酶。
7机理溶菌酶能有效地水解细菌细胞壁的肽聚糖,其水解位点是N-乙酰胞壁酸(NAM)的1位碳原子和N-乙酰葡萄糖胺(NAG)的4位碳原子间的β-1.4糖苷键。
肽聚糖是细菌细胞壁的主要成份,它是由NAM、NAG和肽“尾”(一般是4个氨基酸)组成,NAM 与NAG通过β-1.4糖苷键相连,肽“尾”则是通过D-乳酰羧基连在NAM的第3位碳原子上,肽尾之间通过肽“桥”(肽键或少数几个氨基酸)连接,NAM、NAG、肽“尾”与肽“桥”共同组成了肽聚糖的多层网状结构,作为细胞壁的骨架,上述结构中的任何化学键断裂,皆能导致细菌细胞壁的损伤。
对于革兰氏阳性菌(G+),如藤黄微球菌、枯草杆菌或溶壁微球菌等,与革兰氏阴性菌(G-),如大肠杆菌、变形杆菌、痢疾杆菌、肺炎杆菌等,其细胞壁中肽聚糖含量不同,G+细菌细胞壁几乎全部由肽聚糖组成,而G-细菌只有内壁层为肽聚糖,因此,溶菌酶对于破坏G+细菌的细胞壁较G-细菌强。
8使用鸡蛋清溶菌酶作为溶菌酶类的典型代表,是一种稳定的蛋白质,其最适pH为4-6.5,最适温度为35℃,酶的最适添加量必须按照具体生产情况而定。
9储存建议在阴凉干燥的环境下避光保存,储存温度:零度以下。
贮藏过久或贮藏条件不利,会使酶活不同程度的降低;如温度湿度过高,则需要在使用时适当的增加使用量。
10举例尿液中含量尿溶菌酶原理溶菌酶来自单核细胞、中性粒细胞,是一种能溶解某些细菌的酶类。
可酵解革兰阳性球菌壁上的乙酰氨基多糖成分,使细胞壁破裂。
其分子量为14000万~15000,可从肾小球基底膜滤出,90%以上可被肾小管重吸收,所以尿液中很少或无溶菌酶。
用一种细菌悬液作为基质,加入待测标本后保温一定时间,如标本中含溶菌酶,则细菌被溶解,细菌悬液浊度下降或变清,可用光电比浊法测其浊度变化,或用平皿法测定其溶菌圈的大小。
尿溶菌酶参考值尿液中浓度为0~2mg/L。
临床意义①肾小管疾病:如炎症、中毒时,因肾小管损害,重吸收减少,尿溶菌酶升高;②判断预后:急性肾小管坏死时,尿溶菌酶升高,若逐渐升高并持续不下降,小管功能恢复较差。
慢性肾炎、慢性肾衰竭时,尿溶菌酶也升高;③急性单核细胞白血病时,血清溶菌酶含量增加,超过肾小管重吸收的能力,尿内溶菌酶可升高。