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实验四 细菌的分离培养及培养性状的观察在细菌学检验中，细菌的分离培养是重要的基本技术之一。
从混杂微生物中获得单一菌株纯培养的方法称为分离；纯培养是指一株菌种或一个培养物中所有的细菌都是由一个细胞分裂、繁殖而产生的后代。
分离培养的目的在于从被检材料中，或者从污染的众多杂菌中分离出纯的病原菌。
细菌分离培养应先从被检材料或病料中分离培养单个菌落，然后钓取可疑菌落进行纯培养，再将纯培养物移植培养。
目的要求1．学习、掌握需氧菌和厌氧菌分离培养的基本要领和技术。
2．了解细菌的菌落形态及其在各种培养基上的培养性状。
3．了解培养性状对细菌鉴别的重要意义。
4．掌握钓菌、纯培养及移植技术。
操作步骤一．需氧性细菌分离培养法1. 平板划线分离法菌种被其他杂菌污染时或混合菌悬液常用平板划线法进行纯种分离，此法是借助将蘸有混合菌悬液的接种环在平板表面多方向连续划线，使混杂的微生物细胞在平板表面分散，经培养得到分散的由单个微生物细胞繁殖而成的菌落，从而达到纯化目的。
但划线分离的培养基必须事先倾倒好，需充分冷凝待平板稍干后才可使用；为便于划线，一般培养基不宜太薄，每皿约倾倒20 ml 培养基，培养基应厚薄均匀，平板表面光滑。
划线分离主要有连续划线法（图4-1）和分区划线法（图4-2）两种。
划线法示意图见图4-3。
（1）连续划线法以无菌操作用接种环直接取平板上待分离纯化的菌落。
将菌种点种在平板边缘一处，取出接种环，烧去多余菌体。
将接种环再次通过稍打开皿盖的缝隙伸入平板，在平板边缘空白处接触一下使接种环冷却，然后从接种细菌的部位在平板上自左向右轻轻划线，划线时平板面与接种环面成30～40度角，以手腕力量在平板表面轻巧滑动划线，接种环不要嵌入培养基内划破培养基，线条要平行密集，充分利用平板表面积，注意勿使前后两条线重叠。
划线完毕，关上皿盖。
灼烧接种环，待冷却后放置接种架上。
培 养皿倒置于适宜的恒温箱内培养。
培养后在划线平板上观察沿划线处长出的菌落形态，涂片镜检为纯种后再接种斜面。
一、实验目的1. 了解细菌的生长特性。
2. 掌握细菌分离培养的方法。
3. 培养出单一菌株，为后续的鉴定和研究提供基础。
二、实验原理细菌分离培养是指将混合菌落中的单一细菌分离出来，使其在无竞争的环境中独立生长。
常用的方法有均匀涂布法、斜坡涂布法和点式涂布法。
本实验采用均匀涂布法进行细菌分离培养。
三、实验材料1. 培养基：营养琼脂平板2. 细菌样本：土壤样本3. 仪器：无菌操作台、无菌镊子、无菌移液器、无菌接种环、酒精灯、培养箱等四、实验步骤1. 无菌操作：在无菌操作台中，将培养基平板倒置放置，待平板凝固。
2. 取样：用无菌镊子取少量土壤样本，放入无菌试管中。
3. 制备土壤悬液：向试管中加入适量无菌生理盐水，用无菌移液器充分振荡，使土壤样本充分悬浮。
4. 稀释：取适量土壤悬液，加入无菌生理盐水进行稀释，制备不同浓度的土壤悬液。
5. 接种：用无菌接种环蘸取稀释后的土壤悬液，均匀涂布在营养琼脂平板表面。
6. 培养：将涂布好的平板倒置放入培养箱，在适宜的温度下培养。
7. 观察结果：定期观察平板上的菌落生长情况，记录菌落特征。
五、实验结果与分析1. 观察到平板上有不同形态的菌落生长，说明土壤样本中存在多种细菌。
2. 通过观察菌落特征，如菌落大小、形状、颜色、边缘等，初步判断部分菌落可能为同一种细菌。
3. 对疑似同种细菌的菌落进行挑取，进行纯培养。
六、实验讨论1. 本实验采用均匀涂布法进行细菌分离培养，操作简单，易于观察菌落特征。
2. 在实验过程中，无菌操作至关重要，以免污染样本和培养基。
3. 细菌分离培养结果受多种因素影响，如培养基成分、培养条件等，需严格控制实验条件。
4. 通过本实验，掌握了细菌分离培养的基本方法，为后续的细菌鉴定和研究奠定了基础。
七、实验总结通过本次实验，我们了解了细菌的生长特性，掌握了细菌分离培养的方法，为后续的细菌鉴定和研究提供了基础。
在实验过程中，我们认识到无菌操作的重要性，以及实验条件对实验结果的影响。
细菌的分离与培养实验报告一、实验目的1、掌握细菌分离与培养的基本原理和方法。
2、学习并熟悉无菌操作技术。
3、观察细菌在不同培养基上的生长特性。
二、实验原理细菌在自然界中广泛存在，通常以混合群体的形式存在。
为了研究某一种细菌的特性，需要将其从混合菌群中分离出来，并在适宜的条件下进行培养。
本实验采用平板划线法和稀释涂布平板法进行细菌的分离，利用不同的培养基为细菌提供生长所需的营养物质，使其能够生长繁殖形成单个菌落，从而达到分离和纯化的目的。
三、实验材料与设备1、样品：土壤、污水等。
2、培养基：牛肉膏蛋白胨培养基、高氏一号培养基、马丁氏培养基等。
3、试剂：无菌水、75%酒精、碘酒等。
4、仪器设备：超净工作台、恒温培养箱、高压蒸汽灭菌锅、移液器、接种环、酒精灯等。
四、实验步骤（一）无菌操作准备1、开启超净工作台的紫外灯，照射 20 30 分钟，关闭紫外灯，打开风机，通风 10 分钟左右。
2、用 75%酒精擦拭超净工作台台面和双手。
（二）样品处理1、称取 10g 土壤样品，放入装有 90ml 无菌水的三角瓶中，充分振荡，制成 10⁻¹浓度的土壤悬液。
2、用移液器吸取 1ml 10⁻¹浓度的土壤悬液，加入装有 9ml 无菌水的试管中，充分混匀，制成 10⁻²浓度的土壤悬液。
依次类推，制成10⁻³、10⁻⁴、10⁻⁵等不同浓度的土壤悬液。
（三）平板划线法分离细菌1、点燃酒精灯，在酒精灯旁将接种环在火焰上灼烧灭菌，冷却后蘸取 10⁻³浓度的土壤悬液，在牛肉膏蛋白胨培养基平板上进行划线。
2、划线的方式可以采用连续划线法或分区划线法。
连续划线法是从平板的一端开始，连续作紧密的波浪式划线，直至平板的另一端；分区划线法是将平板分成四个区域，每次划线都从上次划线的末端开始，使细菌逐渐被分散和稀释。
3、划线完成后，将平板倒置，放入 37℃恒温培养箱中培养 24 48 小时。
一、实验目的1. 掌握细菌分离培养的基本原理和方法。
2. 学会使用平板划线法分离纯种细菌。
3. 了解细菌在固体培养基上的生长特征。
二、实验原理细菌分离培养是指从含有多种细菌的混合物中，通过特定的方法将所需细菌分离出来，形成纯培养的过程。
常用的分离方法有平板划线法、稀释涂布平板法等。
平板划线法是一种简便、常用的分离方法，其原理是通过接种环在琼脂平板上划线，使菌液逐渐稀释，从而使单个细菌生长成单个菌落，便于分离纯种细菌。
三、实验材料1. 菌种：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌等。
2. 培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、普通琼脂平板、肉汤培养基、半固体培养基、斜面培养基。
3. 工具：接种环、接种针、酒精灯、无菌镊子、无菌移液器、无菌吸管、无菌培养皿、恒温培养箱等。
四、实验方法1. 平板划线法分离纯种细菌（1）将金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌分别接种于牛肉膏蛋白胨琼脂培养基平板上，用接种环在平板上划线。
（2）将划线平板倒置，放入恒温培养箱中培养。
（3）观察菌落生长情况，挑取单个菌落，接种于新的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基平板上，重复划线分离。
2. 细菌在固体培养基上的生长特征观察（1）将金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌分别接种于牛肉膏蛋白胨琼脂培养基平板上，用接种环在平板上划线。
（2）将划线平板倒置，放入恒温培养箱中培养。
（3）观察菌落生长情况，记录菌落特征，如菌落大小、形状、颜色、边缘等。
五、实验结果与分析1. 平板划线法分离纯种细菌经过平板划线分离，金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌均成功分离出纯种细菌。
2. 细菌在固体培养基上的生长特征观察金黄色葡萄球菌菌落呈金黄色，边缘整齐，表面光滑；大肠杆菌菌落呈无色或淡黄色，边缘整齐，表面光滑；枯草芽孢杆菌菌落呈白色，边缘不整齐，表面有皱纹。
六、实验讨论1. 平板划线法是一种常用的分离纯种细菌的方法，其原理是利用接种环在琼脂平板上划线，使菌液逐渐稀释，从而使单个细菌生长成单个菌落。
