粪便 病原菌的分离与鉴定

粪便中病原微生物的分离与鉴定二、实验目的1. 掌握粪便标本的采集、处理和病原微生物的分离方法。

2. 熟悉不同培养基的制备和使用，了解病原微生物的生物学特性。

3. 培养实验室操作技能，提高对医学微生物学基本原理的认识。

三、实验原理粪便中存在大量微生物，其中既有对人体有益的正常菌群，也有可能引起疾病的病原微生物。

通过特定的分离培养方法，可以将病原微生物从粪便中分离出来，并进行鉴定，从而为疾病的诊断和治疗提供依据。

四、实验材料与试剂1. 实验材料：新鲜粪便标本2. 试剂与仪器：- 牛奶琼脂培养基- 血琼脂培养基- 脱纤维蛋白血琼脂培养基- 碎琼脂培养基- 革兰氏染色液- 稀释液- 移液器- 灭菌镊子- 灭菌培养皿- 显微镜- 移菌环1. 标本采集：采集新鲜粪便标本，注意避免污染。

2. 标本处理：将粪便标本加入适量的稀释液中，充分混合均匀。

3. 分离培养：- 取适量稀释后的粪便标本，分别接种于牛奶琼脂培养基、血琼脂培养基和脱纤维蛋白血琼脂培养基上。

- 将培养皿置于37℃恒温培养箱中培养24-48小时。

4. 观察与记录：观察培养基上菌落生长情况，记录菌落特征。

5. 鉴定：- 对疑似病原菌进行革兰氏染色，观察菌体形态和染色特性。

- 根据菌落特征和染色结果，进行初步鉴定。

六、实验结果1. 牛奶琼脂培养基上观察到典型的金黄色葡萄球菌菌落，革兰氏染色呈阳性。

2. 血琼脂培养基上观察到典型的溶血性链球菌菌落，革兰氏染色呈阳性。

3. 脱纤维蛋白血琼脂培养基上观察到典型的大肠杆菌菌落，革兰氏染色呈阴性。

七、讨论与分析1. 本实验成功分离出金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌和大肠杆菌，表明粪便标本中存在这些病原微生物。

2. 金黄色葡萄球菌和溶血性链球菌均为革兰氏阳性菌，具有致病性，可能引起皮肤感染、呼吸道感染等疾病。

3. 大肠杆菌为革兰氏阴性菌，通常存在于人体肠道中，但在某些情况下也可能引起感染，如尿路感染、腹泻等。

4. 本实验结果表明，粪便分离培养是诊断肠道感染的重要手段，对于疾病的预防和治疗具有重要意义。

一、实训目的本次实训旨在使学生掌握粪便检测的基本原理、操作方法和注意事项，提高学生对粪便检测技术的实际操作能力，为今后从事相关领域工作打下坚实基础。

二、实训时间2021年X月X日至2021年X月X日三、实训地点XX大学医学检验技术实验室四、实训内容1. 粪便常规检测（1）目的：观察粪便的性状、颜色、气味等，初步判断患者是否存在消化系统疾病。

（2）操作步骤：①观察粪便的性状、颜色、气味；②记录粪便的性状、颜色、气味；③判断是否存在消化系统疾病。

2. 粪便潜血试验（1）目的：检测粪便中是否有隐血，协助诊断消化系统疾病。

（2）操作步骤：①收集新鲜粪便样本；②按照试剂盒说明书进行操作；③观察结果，判断是否存在隐血。

3. 粪便培养（1）目的：分离、鉴定粪便中的病原菌，为临床诊断提供依据。

（2）操作步骤：①采集新鲜粪便样本；②进行无菌操作；③接种于相应培养基；④观察菌落生长情况，进行鉴定。

4. 粪便虫卵及虫卵抗原检测（1）目的：检测粪便中的虫卵及虫卵抗原，协助诊断肠道寄生虫感染。

（2）操作步骤：①采集新鲜粪便样本；②进行镜检；③观察虫卵及虫卵抗原，判断是否存在寄生虫感染。

五、实训结果与分析1. 粪便常规检测：通过观察粪便的性状、颜色、气味，初步判断患者是否存在消化系统疾病。

如发现粪便性状异常，应进一步检查。

2. 粪便潜血试验：通过检测粪便中的隐血，协助诊断消化系统疾病。

结果显示，部分患者存在隐血，提示可能存在消化系统疾病，需进一步检查。

3. 粪便培养：成功分离出部分病原菌，为临床诊断提供依据。

其中，部分患者培养出大肠杆菌、志贺菌等，提示可能存在肠道感染。

4. 粪便虫卵及虫卵抗原检测：通过镜检和抗原检测，成功诊断出部分患者存在寄生虫感染，如蛔虫、钩虫等。

六、实训总结通过本次实训，我们掌握了粪便检测的基本原理、操作方法和注意事项。

在实际操作过程中，我们学会了如何正确采集、处理粪便样本，并进行了粪便常规检测、潜血试验、培养及虫卵及虫卵抗原检测。

观察粪便中细菌的方法
观察粪便中细菌的方法主要包括以下步骤：
1. 样本采集：通常需要采集患者的粪便样本，可以检查粪便中是否存在细菌、寄生虫等，可以判断是否存在肠道感染。

2. 进行细菌培养：将粪便样本送至实验室进行细菌培养，以观察粪便中是否存在异常细菌。

3. 显微镜检查：将粪便样本制成涂片，在显微镜下观察细菌的形态、数量和分布情况。

4. 培养特性观察：观察细菌在培养基中的生长情况，包括菌落的形态、颜色、大小、边缘是否整齐等。

5. 生化试验：通过生化试验可以进一步确定粪便中细菌的种类和性质。

6. 药敏试验：通过药敏试验可以了解细菌对各种抗生素的敏感性和耐药性，为临床治疗提供参考。

通过以上步骤，可以观察粪便中细菌的数量、种类、生长情况等，有助于判断肠道疾病和选择合适的治疗方案。

粪便标本中粪便标本中所含细菌所含细菌所含细菌的检测的检测闫研（第一临床医学院临床医学五年制113200800100023）李梦婕（第一临床医学院临床医学五年制113200800100024）粪便标本中常见的病原菌有志贺氏菌属、致病性大肠杆菌、弧菌属、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、艰难梭菌等。

粪便标本中因各种正常菌群含量甚多，仅以染色性和形态无法分辨是否为病原菌，因此，粪便标本一般不作直接涂片检查，只有检查霍乱弧菌、结核杆菌、疑似葡萄球菌或艰难梭菌引起的伪膜性肠炎，以及菌群失调时，才做直接涂片检查。

1材料与方法1.1材料粪便标本，葡萄糖发酵微量管，乳糖发酵微量管，革兰氏染色液【结晶紫染色（第一液），芦戈氏碘液（第二液），95%酒精（第三液），稀释石炭酸复红（第四液）】，诊断血清，伊红美兰琼脂平板，斜面培养基，半固体培养基，肉汤培养基，接种环，接种针，打火机，油性笔，普通冰箱、冷藏室、隔水式电热恒温培养箱、奥林巴斯CX21型生物显微镜、1500W 电炉、蒸馏水、玻片缸、消毒液、1‰新洁而灭、天平、砝码、细菌干粉培养基、锥形瓶、量筒、试管筐、灭菌平皿、试管（棉塞）、刻度吸管、洗耳球、称量纸、硫酸纸、牛皮纸、橡皮筋。

1.2培养基的制备表1-1培养基的制备培养基称量（g）水量（ml）煮沸（次）分装（ml）备注（40人份）营养琼脂11.43004瓶，500ml 瓶，平板营养琼脂2.9753515支，中试管，斜面营养肉汤1.1501315支，小试管，液体半固体 1.5503315支，小试管，高层1.3细菌的分离和培养采用平板划线法从粪便标本中分离出病原菌。

将培养皿倒置，37℃培养24小时后观察结果。

1.4细菌纯培养1.4.1挑选单菌落粪便标本在伊红美蓝平板上用接种环挑去选择平板上相同的菌落数多的、典型的、容易挑取的单菌落进行接种。

1.4.2斜面接种法在斜面培养基上线自底部向上拉一线，在自下而轻轻的做蜿蜒连续划线进行接种。

脓汁和粪便标本中病原菌的检测（作者：bibi）目的从脓汁和粪便标本中分离、培养和检测病原体。

方法培养基的制备、消毒和灭菌，细菌的分离与培养，细菌群体和个体形态特征的观察，细菌生化反应鉴定。

结果脓汁标本形成黄、白两种颜色菌落，均为革兰氏阳性菌，均对青霉素和链霉素敏感；粪便标本形成紫黑和粉红色两种菌落，均为革兰氏阴性菌，对青霉素不敏感，对链霉素敏感。

四种细菌均对广谱抗菌素庆大霉素敏感。

关键词：脓汁粪便微生物细菌菌落生化鉴定药敏试验引言：常见的化脓性病原菌有葡萄球菌、链球菌、淋球菌、脑膜炎球菌、肺炎链球菌、结核杆菌、假单胞菌、流感杆菌等。

浓汁标本在做细菌分离培养的同时，均须直接涂片检查，观察是否有典型形态的菌体，芽孢有无，为临床提供最初的诊治依据。

粪便标本中常见的病原菌有志贺氏菌属、致病性大肠杆菌属、弧菌属、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、艰难梭菌等。

粪便标本中常含有很多杂菌，应根据检验目的菌的不同而选择培养基（如SS、伊红美蓝平板、碱性蛋白胨水），尽可能抑制杂菌，以利于病原菌的检出。

这次实验我们从浓汁标本中检出的是金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌，从粪便标本中检出的是大肠埃希菌、痢疾志贺菌。

更重要的是我们了解了，医学微生物学主要的研究方法和手段，掌握了微生物试验的基本技能和基本原理，树立了牢固的无菌观念。

同时培养学生自学能力、科学思维能力、动手能力和表达能力。

培养学生从临床标本中分离细菌以查找与疾病有关的病原体，为临床治疗预后调查提供一定的价值1.实验器材：接种针、接种环、油性笔、打火机、试管架、普通冰箱、冷藏室、隔水式电热恒温培养箱、奥林巴斯 CX21型生物显微镜、1500W电炉、蒸馏水、玻片缸、消毒液、1‰新洁而灭、天平、砝码、细菌干粉培养基、锥形瓶、量筒、试管筐、糖发酵管、灭菌平皿、试管（棉塞）、刻度吸管、洗耳球、称量纸、硫酸纸、牛皮纸、橡皮筋、尺子2.实验方法：2.1培养基的制备、消毒和灭菌培养基制备的一般程序：①调配→溶化→矫正pH →分装→灭菌→检定→保存。

粪便中病原菌的分离培养与鉴定[摘要]目的：从粪便中分离、培养和检测病原菌，对于临床治疗及预后调查有一定的价值。

粪便标本中常见的病原菌有志贺氏菌属、致病性大肠杆菌、弧菌属、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等，各种正常菌群含量甚多，仅以染色性和形态无法分辨是否为病原菌。

此次我们主要分离培养并鉴定粪便标本中的大肠埃希菌和痢疾志贺菌[3]。

方法：本文利用伊红美蓝平板培养后的菌落特征，再提纯培养细菌进行革兰染色镜检、动力实验、生化反应。

可鉴定粪便标本中的病原菌。

[关键词]革兰染色大肠埃希菌志贺菌分离培养鉴定1.实验材料与仪器1.1标本：粪便标本1.2培养基：普通琼脂平板、伊红美蓝平板、营养琼脂斜面培养基、营养肉汤液体培养基、半固体琼脂培养基1.3试剂：细菌干粉培养基革兰染色法[1]试剂【结晶紫、碘酒、95%乙醇、稀释复红】、糖发酵管【乳糖、葡萄糖】、褔氏志贺菌诊断血清。

1.4仪器：接种环、接种针、酒精灯、试管架、恒温培养箱、显微镜、蒸馏水、玻片缸、消毒液、1‰新洁尔灭、灭菌平皿、刻度吸管、吸水纸、橡皮筋。

2.实验过程2.1细菌的分离与培养细菌分离培养：伊红美蓝平板分区划线分离（5区）。

无菌操作取粪便标本于固体平板培养基上，采用分区画线分离法培养细菌。

于37℃培养24小时，从而分离出单个菌落。

2.2细菌群体生长特征的观察观察形成菌落的大小、形状、边缘、表面、色素。

粪便标本在伊红美蓝平板上，有紫黑色、淡粉红色两种菌落。

紫黑色菌落具有金属光泽、大而隆起、不透明，菌落直径2～3mm。

淡粉红色菌落，半透明，直径1～2mm。

2.3细菌纯培养粪便标本在伊红蓝平板上，有紫黑色，粉红色两种菌落。

分别挑选这两种菌落在斜面培养基上接种标记，在37℃培养24h。

2.3.1斜面接种法选择平板上相同的菌落数多的、典型的、容易挑取的单菌落在平皿底部玻璃上，画个大圈选择菌落，右手拿接种环通过火焰烧灼灭菌，再用灭菌的接种环套住菌落，轻刮取菌，将其伸入代接斜面试管底部，轻轻向上划线，接接种环退出斜面试管，再用火焰烧管口，并在火焰边将试管塞塞上，观察斜面培养基。

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模拟粪便中伤寒沙门菌的分离与鉴定肠杆菌科（Enterobacteriaceae）细菌是一大群生物学性状相似的革兰阴性杆菌，常寄居于人及动物的肠道内，亦存在于土壤、水和腐物中[1]。

多数是非致病菌或条件致病菌，少数为致病菌。

其生物学性状相似，但生化反应，抗原构造有差异，故可据此将它们进行分类、鉴定。

粪便中肠道菌的分离与鉴定对于临床病原学诊断具有重要意义。

1.材料与方法1.1 材料1.1.1模拟粪便、普通琼脂平板培养基、SS平板培养基、葡萄糖微量发酵管、乳糖微量发酵管、尿素酶微量管、醋酸铅培养基微量管、蛋白胨水培养基、吲哚试剂、半固体培养基、伤寒诊断血清、37℃恒温培养箱等。

1.2 方法1.2.1细菌分离培养取模拟粪便标本分区划种于SS平板培养基，置37℃培养箱培养18~24h后，观察结果，并对分离所获的菌落的细菌进一步鉴定。

1.2.2 细菌的生化反应挑取可疑菌落（无色菌落）的细菌，分别接种于葡萄糖微量发酵管、乳糖微量发酵管、尿素酶微量发酵管、醋酸铅培养基微量管、蛋白胨水培养基、半固体培养基，置37℃培养箱培养18~24h后观察结果。

1.2.3 血清学鉴定取伤寒诊断血清和生理盐水滴于玻片上，再取可疑菌分别与伤寒诊断血清和生理盐水混匀，观察有无凝集现象。

2.结果2.1细菌分离培养 SS平板上分离出两种不同性状菌落，一种为圆形、凸起、湿润、边缘整齐、表面光滑的无色透明菌落，直径约1~2mm，另一种为圆形凸起、湿润、边缘整齐、表面光滑的红色菌落，直径约2~3mm。

2.2 细菌生化反应和血清学鉴定所分到的两种不同性状菌落的生化反应、动力学试验、血清学鉴定结果见表1表1可疑菌的生化反应、动力试验和血清学检查结果双糖铁葡萄糖乳糖尿素 H2S 靛基质动力血清学可疑菌—/+ H2S+ + —— + — + +3.结果分析和讨论在肠杆菌科中，志贺菌、沙门菌等致病菌不发酵乳糖，其他大部分非致病肠道杆菌可分解乳糖，故在SS平板上无色半透明小菌落为可疑致病菌落[2]。