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一株鸡传染性支气管炎病毒的分离鉴定及S1基因分析谢蟾龙;杨傲冰;尚书文;林德锐【摘要】广西某种鸡场一株IBV,命名为GXJLZ6/150707,对其进行鸡胚发育分析,并测定S1全基因序列.结果显示,鸡胚出现蜷缩胚或发育不良等病理现象.S1基因序列分析发现,分离株GXJLZ6/150707与疫苗株4/91等793/B型毒株为相同的基因来源,与腺胃型毒株LX4型毒株亲缘性较近,氨基酸相似性为94.8％;与经典肾型疫苗毒株D274、Gray、澳大利亚T株和Mass型经典呼吸型疫苗毒株H52、H120和W93株等亲缘性较远,氨基酸相似性为65.7～85.6％.考虑到该种鸡场长期使用活疫苗ND+H120+4/91的情况,因此推测,分离毒株GXJLZ6/150707可能是一种嵌合病毒,即H120等Mass型疫苗毒株与4/91疫苗毒发生重组后形成的新型病毒.本研究结果可为IBV的防控工作和疫苗株的选择提供科学依据.【期刊名称】《广东畜牧兽医科技》【年(卷),期】2018(043)003【总页数】5页(P29-33)【关键词】传染性支气管炎;分离;鉴定;S1基因分析【作者】谢蟾龙;杨傲冰;尚书文;林德锐【作者单位】广东永顺生物制药股份有限公司,广东广州 511356;广东永顺生物制药股份有限公司,广东广州 511356;广东永顺生物制药股份有限公司,广东广州511356;广东永顺生物制药股份有限公司,广东广州 511356【正文语种】中文【中图分类】S852.65+7鸡传染性支气管炎（IB）是由传染性支气管炎病毒（IBV）引起的高度接触性、急性传染病，以气管啰音、咳嗽和打喷嚏为特征。
可引起料肉比降低、肉鸡品质受损、产蛋量下降和蛋的品质下降等，给养殖业造成严重的经济损失［1，2］。
IBV也能在输卵管复制。
成年鸡感染后产蛋量会下降10～50%或更多，同时畸形蛋数量增多，蛋壳色泽发生改变。
感染鸡群的产蛋率一般不能再恢复到正常水平。
鸡传染性支气管炎病毒的分离鉴定及S1基因序列分析的开题报告一、研究背景及意义鸡传染性支气管炎（Infectious bronchitis，简称IB）是一种由禽传染性支气管炎病毒（Infectious bronchitis virus，IBV）引起的高度传染性呼吸道疾病，其主要临床表现为呼吸困难、鸡冠、眼睛和面部水肿、排泄物增多或减少等，对鸡的健康和养殖业的经济效益造成了很大的损失。
目前，虽然IBV可以通过疫苗预防和控制，但疫苗种类较多，不同毒株的疫苗保护效果不同，到目前为止，还没有一种完全有效的IBV疫苗，为了更好地预防和控制IBV感染，必须进一步深入研究IBV，对其分子特性和病理机理进行深入探究。
二、研究内容及目标本研究旨在通过分离IBV病毒，对其进行鉴定，并分析其S1基因序列，以期更深入地了解IBV的分子特性和病理机理，进而为研究和控制IBV感染提供科学依据和理论支持。
具体研究内容包括以下三个方面：1. 鸡传染性支气管炎病毒的分离鉴定：本研究将从感染鸡的上呼吸道样本中提取IBV病毒，并通过细胞培养等方法进行纯化和鉴定，确定其毒株类型。
2. S1基因的PCR扩增和测序：本研究将采用PCR技术扩增IBV病毒S1基因序列，并进行测序，获取其S1基因序列。
3. S1基因序列分析：通过对IBV病毒S1基因序列进行分析，包括启动子、终止密码子、保守位点和可变位点等，在比较其与其他IBV序列差异的基础上，研究IBV病毒的分子特性和病理机理。
三、研究方法1. 实验材料：IBV感染鸡的上呼吸道样本、细胞培养液等。
2. 实验方法：（1）IBV病毒分离鉴定：将感染鸡的上呼吸道样本进行稀释后，接种于鸡胚蛋并进行细胞培养，使用酶联免疫吸附试验（ELISA）和逆转录PCR等方法对样本中IBV病毒进行鉴定。
（2）S1基因PCR扩增和测序：采用PCR技术，合成适合的引物，对IBV病毒中的S1基因进行扩增，经过聚合酶扩增反应、纯化等步骤后，得到S1基因的PCR产物，将其进行测序。
2011-2012年鸡传染性支气管炎病毒的分离鉴定及S1基因序列分析的开题报告【题目】2011-2012年鸡传染性支气管炎病毒的分离鉴定及S1基因序列分析【研究背景】传染性支气管炎是一种由传染性支气管炎病毒引起的家禽呼吸道疾病，能够导致家禽呼吸道炎症和肺部病变。
该疾病对家禽养殖业造成了重大威胁，尤其是在冬季和春季高发期间，其致死率和感染率较高，给养殖业造成了较大的经济损失。
为了更好地控制和管理传染性支气管炎，对2011-2012年鸡传染性支气管炎病毒进行分离鉴定和S1基因序列分析是非常必要的。
【研究目的】本研究旨在对2011-2012年鸡传染性支气管炎病毒进行分离鉴定，并通过S1基因序列分析，探究病毒的分布情况、遗传特征等方面的内容，为传染性支气管炎的防治和管理提供基础资料。
【研究内容】本研究将采用细胞培养和RT-PCR技术对2011-2012年鸡传染性支气管炎病毒进行分离鉴定，同时对其S1基因进行PCR扩增、克隆测序和分析，了解病毒的遗传特征、分布情况等方面的内容。
【研究方法】采用点滴法进行鸡传染性支气管炎病毒的分离培养，并通过RT-PCR技术对病毒进行鉴定。
使用PCR扩增技术对病毒S1基因进行扩增，克隆到载体上，然后进行测序。
通过序列比对和系统进化分析，探究鸡传染性支气管炎病毒的分布情况、遗传特征等方面的内容。
【预期结果】本研究将对2011-2012年鸡传染性支气管炎病毒进行分离鉴定和S1基因序列分析，明确病毒的分布情况和遗传特征，为传染性支气管炎的防治和管理提供基础数据和理论支持。
【研究意义】随着我国畜禽养殖技术的进步和养殖规模的扩大，传染性支气管炎对家禽养殖业的危害越来越大。
本研究将为传染性支气管炎的防治和管理提供基础资料和理论支持，探究病毒的分布、遗传特征等方面的内容，为科学防控这一疾病提供借鉴。
鸡传染性支气管炎病毒中国分离株S1基因的序列分析陈峰;周庆丰;廖秋生;吴孔兴;毕英佐;曹永长【期刊名称】《中国兽医科技》【年(卷),期】2005(35)7【摘要】采用RTPCR方法扩增了12株鸡传染性支气管炎病毒中国分离株的全长S1基因,并进行了序列分析。
通过与GenBank中登录的其他IBV参考毒株S1基因序列比较,进行了系统进化分析。
结果表明,12株分离毒株属于同一个进化群的2个不同进化亚群。
其中11株分离株与国内一些分离株亲缘关系最近,属于同一进化亚群,而广西分离株GX041则与欧洲毒株4/91亲缘关系较近,属于另一亚群。
这些结果说明,中国各地的流行毒株变异较大,实际免疫中要根据流行毒株的特性选择合适的疫苗株来进行。
【总页数】5页(P515-519)【关键词】传染性支气管炎病毒;S1基因;RT—PCR;序列分析【作者】陈峰;周庆丰;廖秋生;吴孔兴;毕英佐;曹永长【作者单位】华南农业大学动物科学学院;广东温氏食品集团有限公司【正文语种】中文【中图分类】S855.3;Q523.8【相关文献】1.鸡传染性支气管炎病毒分离株与疫苗株抗原相关性和S1基因序列分析 [J], 任海松;张秀美;崔言顺;许传田;杨少华;李建亮;胡北侠2.30株鸡传染性支气管炎病毒标准株与分离株S1基因的克隆及序列分析 [J], 谢志勤;谢芝勋;吕华刚3.2株鸡传染性支气管炎病毒的分离鉴定与S1、M和N基因序列分析 [J], 何家辉;封柯宇;李鸿鑫;宋才良;张钰坤;谢青梅4.2株鸡传染性支气管炎病毒的分离鉴定与S1、M和N基因序列分析 [J], 何家辉;封柯宇;李鸿鑫;宋才良;张钰坤;谢青梅5.鸡传染性支气管炎病毒合肥分离株S1基因序列及致病性分析 [J], 胡晓苗;盛豪;郑忠毅;卞希一;张丹俊;周继勇;廖敏;潘孝成因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
传染性支气管炎病毒分离株基因组序列测定及分子特征研究的开题报告题目：传染性支气管炎病毒分离株基因组序列测定及分子特征研究研究背景和意义：传染性支气管炎（Infectious Bronchitis，IB）是一种病原体为传染性支气管炎病毒（Infectious Bronchitis Virus，IBV）的禽类呼吸道疾病，常引起鸡的发病率和死亡率增加。
目前，全球范围内的禽类养殖业受到传染性支气管炎的威胁，因此，对该病毒的分子特征和病毒毒株的鉴定具有重要意义。
传染性支气管炎病毒是一种RNA病毒，其基因组长度为27-32kb，包含6个结构蛋白和多个非结构蛋白。
近年来，随着核酸测序技术的发展，基于病毒基因组序列的分子特征研究已成为了病毒学和传染病学研究的重要手段。
因此，对IBV分离株的基因组序列测定和分子特征研究，不仅可以提高对该病毒的了解，还可以为该病毒防控和疫苗研发提供实验依据。
研究内容：本课题拟通过以下研究内容，对IBV分离株进行基因组序列测定和分子特征研究：1. 分离纯化IBV病毒样本；2. 总RNA的提取和纯化；3. 利用RT-PCR技术扩增IBV基因组序列；4. 基因组序列测定和分析；5. 基于测序数据进行分子特征分析。
研究方法：1. 病毒分离和纯化：使用细胞培养或黄鼠狼卵黄囊膜（Embryonated Chicken Egg，ECE）接种IBV病毒，通过等电点电泳等技术进行纯化；2. 总RNA提取和纯化：使用RNA纯化试剂盒提取病毒样本总RNA；3. RT-PCR扩增IBV基因组：利用基于普通PCR的RT-PCR方法扩增IBV基因组序列；4. 基因组序列测定和分析：利用高通量测序对扩增的基因组序列进行测序，进行序列拼接、比对和分析；5. 分子特征分析：基于IBV基因组序列进行分子特征分析，包括基因结构和功能预测、系统发育分析、多晶体结构预测等。
研究预期结果：本研究成功测定了传染性支气管炎病毒分离株的完整基因组序列，并得到该株病毒的基因组结构和分子特征数据。
ＡＢＣＤＥＦ圈１．各分离毒株接种鸡胚后病变Ｆｉｇ．１ＰａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓｏｆｌＢＶｉｓｏｌａｔｅｓｔｏＳＰＦｃｈｉｃｋｅｎｅｍｂｒｙｏＡ为１９日龄正常鸡胚对照，Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ分别为ＢＪＱ、ＢＪＳ、ＢＪＹ、ＳＤＷ和ＨＢＮ毒株接种后的１９日龄鸡胚病变３．１ＲＴ—ＰＣＲ扩增结果利用上游引物Ｆｌ和下游引物Ｒｌ，以各分离毒株反转录所得的ｅＤＮＡ为摸板，ＰＣＲ扩增ＩＢＶＳ１基因。
ＰＣＲ产物经０．８％琼脂糖凝胶电泳检测，结果显示，ＢＪＱ、ＢＪＳ、ＢＪＹ、ＳＤＷ和ＨＢＮ各毒株均扩增出一条约１．７５ｋｂ的片段（见图２），与预期的结果相符。
ｌ２３４５Ｍ图２．ＰＣＲ产街的凝胶电溶分析ｏｆＳｌｇｅｎｅｏｆｌＢＶｉｓｏｌａｔｅｓＦｉｇ．２ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｏｆＰＣＲ艟２００ｂＤＤＮＡｌａｄｄｅｒ（４０００ｂｐ，２２００ｈｐ，２０００ｈｐ，１８００ｂｐ，１６００ｂｐ，１４００ｂｐ，１２００ｂｐ，１０００ｂｐ，８００ｂｐ，６００ｂｐ。
４００ｂｐ，２００ｈｐ）从ｌ至５依次为ＢＪＱ、ＢＪＳ、ＢＪＹ、ＳＤＷ和ＨＢＮ各分离毒株的ＰＣＲ产物３．２重组质毅ＰＧＭ－ＩＢＶＳｌ的构建将回收各分离株的ＰＣＲ产物和ＰＧＭ－ＴＥａｓｙ载体以适当的比例连接过夜。
而后转化到感受态细胞ＤＨ５ｎ中。
经筛选得到的重组质粒ＰＧＭ。
ＳＩ。
重组质粒的构建路线见附图１。
３．３Ｓ１基因的阳性克隆的ＰＥＲ产物和酶切鉴定将各分离毒株的ＲＴ—ＰＣＲ产物分别与克隆载体ｐＧＭ—ＴＥａｓｙ载体连接．转化感受态细胞ＤＨ５ａ１０中国农业大学硕士学位论文第一部分传染性支气管炎病毒ｓｌ基因的克隆及序列分析中，挑取白色菌落，增菌培养后，小量提取质粒。
用核酸内切酶ＥｃｏＲＩ对质粒进行酶切，切出人小分别约为１．７ｋｂ与目的基因大小相同的片段和３．Ｏｋｂ与ｐＧＭ＿ＴＥａｓｙ载体同样大小的条带（见图２），证实连接成功。
Ｍｌ２３４５圈３．各毒掾阳性克隆的酶切鉴定Ｆｉｇ．３ＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｐｌａｓｍｉｄｂｙＥｃｏＲｌｄｉｇｅｓｔｉｏｎＭ：ＤＧＬ４０００Ｍａｒｋｅｒ（４０００ｂｐ，３０００ｂｐ，２５００ｂｐ，２０００ｂｐ。
肾型鸡传染性支气管炎病毒J株S1基因克隆和序列分析陆国权【期刊名称】《浙江大学学报（农业与生命科学版）》【年(卷),期】2000(026)004【摘要】采用特异引物对来自浙江地区的肾病型鸡传染性支气管炎病毒(IBV)J株进行RT-PCR,将扩增得到的S1基因cDNA克隆入pBluescript SK质粒载体中,经克隆、鉴定后测序.结果显示,IBV-J株S1基因全长为1731 nt,编码一条576个氨基酸组成的多肽,其核苷酸与已报道的IBV-M41、H120、Beaudette、Beijing、D41、Gray、4/91毒株的同源性为82.73% ～ 78.42%,有大量的点突变并且伴有基因插入和基因缺失;经S1蛋白分子进化系统分析,提示J株与其它各毒株的亲缘关系较远,为一新的IBV变异株.【总页数】5页(P369-373)【作者】陆国权【作者单位】浙江大学,农业与生物技术学院农学系,浙江,杭州310029【正文语种】中文【中图分类】S858.31;S855.3;S851.3【相关文献】1.鸡传染性支气管炎病毒地方-分离株S1基因克隆和基因型鉴定 [J], 祁贤;叶向阳;张婉华;朱永军;步志高;刘思国2.肾型IBV山东分离株S1高变区(HVR)的基因克隆与序列分析 [J], 朱岩丽;李明义;赵雪丽3.嗜肾型鸡传染性支气管炎病毒W93疫苗株S1基因的克隆与序列测定 [J], 王文成;赵宝华;尹广东;李尚波;卫广森;许崇波4.鸡肾型传支病毒黑龙江省分离株Mk株、K株和Mg株S1基因的克隆与序列分析 [J], 宋佰芬;曹宏伟;马金柱;崔玉东;朱战波5.肾型鸡传染性支气管炎病毒X株S1基因序列的测定及同源性分析 [J], 赵宝华;李尚波;王文成;尹广东;卫广森;许崇波因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
