乙醇脱氢酶(ADH)检测试剂盒(乙醛比色法)

肉桂醇脱氢酶(CAD)检测试剂盒(肉桂酸比色法)简介：肉桂醇脱氢酶(cinnamyl alcohol dehydrogenase,CAD)是催化香豆醛形成松柏醇的酶。

该酶多存在于高等植物、酵母、菌类可溶性部分物质，属于细胞木质素合成途径中间的关键酶，研究该酶可以探讨多种生物细胞发育过程中木质素沉积的代谢机理，为减少水果石细胞含量提高其品质提供依据。

Leagene 肉桂醇脱氢酶(CAD)检测试剂盒(肉桂酸比色法)检测原理是以肉桂酸、NADP 作为底物，在酶促反应的最适条件下采用每隔一定时间测定产物生成量的方法，于分光光度计检测吸光度，以吸光度变化所需酶量进行计算。

该试剂盒主要用于植物组织的裂解液或匀浆液、血清等样品中内源性的肉桂醇脱氢酶活性，尤其适用于检测水果中肉桂醇脱氢酶活性，25T 可以检测23-24个样本。

该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

组成：自备材料：1、蒸馏水2、研钵或匀浆器3、离心管或试管4、低温离心机5、水浴锅或恒温箱6、比色杯7、分光光度计操作步骤(仅供参考)：1、准备样品：①植物样品：取植物组织或水果中层果肉置于液氮中迅速研磨或匀浆，加入预冷的CAD编号名称TE041925T Storage试剂(A):CAD Lysis buffer 50ml 4℃避光试剂(B):CAD Assay buffer 20ml 4℃避光试剂(C):NADP 2支-20℃使用说明书1份Lysis buffer，离心，留取上清液，冻存，用于肉桂醇脱氢酶的检测。

②血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，冻存，用于肉桂醇脱氢酶的检测。

③细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如有必要用CAD Lysis buffer进行适当匀浆，，离心，取上清液，冻存，用于肉桂醇脱氢酶的检测。

④高活性样品：如果样品中含有较高活性的肉桂醇脱氢酶，可以使用CAD Lysis buffer稀释进行恰当的稀释。

作者简介：问清江男，副研究员。

主要从事发酵技术研究。

E-mail ：mujuan2008@163．com *通讯作者。

女，研究员。

主要从事酶学在医学、食品、农业及环保领域应用研究。

E-mail ：mujuan2007@163．com 收稿日期：2013-03-13；修回日期：2013-05-08乙醇脱氢酶（ADH ）产酶菌株的选育问清江1，慕娟1*，党永1，张烁2，景振龙2，贺聪莹3，颜阳欣2（1．陕西省微生物研究所，陕西西安710043；2．长安大学环境科学与工程学院，陕西西安710064；3．西北大学生命科学院，陕西西安710068）摘要从食醋生产企业的醋醅中采集样品，以乙醇为唯一碳源，用碳酸钙透明圈平板法分离出185株菌株，然后以产酸量和耐乙醇能力为标准，摇瓶发酵选育出20株ADH 产酶菌株;A5-2产酸量为49．85g /L ，耐乙醇能力强，A5-2的菌种形态学和16S rDNA 序列分析初步鉴定为巴斯德醋酸杆菌(Acetobacter pasteurianus );A5-2乙醇脱氢酶酶学性质研究表明:最适作用温度和pH 分别为45ħ和pH 4．0，具有一定的耐热性和良好的耐酸碱性;A5-2乙醇脱氢酶粗酶制备条件为硫酸铵饱和度70% 80%，回收率84%。

关键词乙醇脱氢酶;醋酸杆菌;选育;酶学性质中图分类号Q935文献标识码A文章编号1005－7021(2013)05－0054－06doi :10．3969/j．issn．1005－7021．2013．05．010Breeding of Alcohol Dehydrogenase Producing StrainsWEN Qing-jiang 1，MU Juan 1，DANG Yong 1，ZHANG Shuo 2，JING Zhen-long 2，HE Cong-ying 3，YAN Yang-xin 2（1．Shaanxi Inst．of Microbiol．，Xi'an 710043；2．Coll．Environ．Sci．＆Engin．，Changan Uni．，Xi'an 710064；3．Coll．of Life Sci．，NW Uni．，Xi'an 710068）Abstract 185alcohol dehydrogenase （ADH ）producing strains were isolated from samples collected from vinegar fermented grains in vinegar production enterprise by selective medium using ethanol as the sole carbon source ，and calcium carbonate transparent circle on plate．20high ADH producing strains were bred under shaking-flask fermenta-tion ，in which acid output and ethanol tolerance were used as standards．The acid output of A5-2achieved 49．85g /L and its capacity of ethanol tolerance was strong．A5-2was initially identified as Acetobacter pasteurianus based on its morphological characterization and 16S rDNA sequence．Study on enzyme characteristics showed that the optimal reac-tion conditions of A5-2ADH were at 45ħand pH 4．0，and it had heat tolerance and fine tolerance against acid-base．The preparation condition of crude ADH were saturated concentration of ammonium sulfate was at 70% 80%and the ADH activity recovery was at 84%．Keywordsalcohol dehydrogenase （ADH ）；Acetobacter ；breeding ；enzymological characteristics乙醇脱氢酶（Alcohol Dehydrogenase ，ADH ）广泛存在于人和哺乳动物的肝脏、植物组织及微生物细胞中，是生物体内重要的氧化还原催化剂之一，其为具有广泛专一性的含锌金属酶，以NAD +为辅酶，能够催化乙醇氧化为乙醛，乙醛经乙醛脱氢酶（Aldehyde dehydrogenase ，ALDH ）继续氧化生成乙酸，进入三羧酸循环最终生成二氧化碳和水，是人和动物体内重要的代谢酶。

探讨血液中乙醇检测方法作者：莫乃梅来源：《健康科学》2018年第11期关键词：血液；乙醇；化学法；酶法；气相色谱法；气相色谱- 质谱法；近红外光谱法乙醇（分子式C2H6O）俗称酒精，是酒的主要成分，乙醇进入空胃后，可于30min～90min内在胃及肠道内被完全吸收入血，15min～90min内，血液中酒精浓度值（bloodalcoholconcentration，BAC）可达到峰值。

其代谢主要是在肝脏内被氧化分解，少部分以原形经呼吸道、尿、汗直接排出体外。

急性乙醇中毒多是暴饮、酗酒所致，也有少数把毒物投入酒中而造成中毒，需检查酒精。

乙醇的毒性主要是能严重地抑制中枢神经系统，首先是大脑功能，继而皮层下中枢和小脑活动受累，最后因延脑血管运动中枢和呼吸中枢麻痹而死亡。

随着科学的发展，血液中乙醇含量的检测方法层出不穷，大体上有化学法、酶法，气相色谱法、气相色谱-质谱法和近红外光谱法等，现就这些方法在血液中乙醇含量检测方面作一综述。

1、化学法化学法分为定性方法和定量方法。

定性方法主要是碘仿反应法，它的原理是乙醇与碘及氢氧化钾反应，首先生成次碘酸钾（KIO），然后由乙醇氧化的乙醛再与之作用，生成三碘乙醛，最后与过量的氢氧化钾反应生成黄色的碘仿沉淀。

碘仿反应法灵敏度为1：1000，但其反应并非为乙醇特异反应，乙醛、丙酮甲基酮及能被次碘酸盐氧化为乙醛或甲基酮的醇均能产生同样反应。

另外化学定性的方法还可以通过苯酰氯反应和Vitali反应来检测检样有没有乙醇。

定量方法主要有威得马克（Widmark）氏法和重铬酸钾法，威得马克（Widmark）氏法是利用Widmark乙醇定量瓶，将血液加热60℃使乙醇挥发，挥发出来的乙醇被重铬酸钾-硫酸混合液吸收，并使乙醇氧化成乙酸，用硫代硫酸钠滴定由于剩余重铬酸钾将碘化钾氧化所游离出来的碘，从而计算出乙醇含量。

重铬酸钾法的原理是醇和重铬酸钾作用，使黄红色的六价铬变为绿色的三价铬，与标准比色定量。

乙醇脱氢酶法测定血浆中乙醇西北国防医学杂志(MedJNDFNC)2005Oct.;26(5)345乙醇脱氢酶法测定血浆中乙醇伏建峰,史清海,路西春,高华,丁艳萍(兰州军区乌鲁木齐总医院,新疆乌鲁木齐830000)论着?摘要:目的:建立一种快速测定血浆中乙醇浓度的新方法.方法:选用三(羟甲基)氨基甲烷一盐酸(Tris—HCL)作为缓冲体系,在碱性条件下,乙醇脱氢酶(ADH)催化乙醇转化成乙醛,同时生成还原型辅酶I(NADH).在340Bill波长处检测吸光度的变化,对照标准计算乙醇的浓度.结果:ADH最适用量为753KU/L,辅酶I(NAD)最适浓度为60.0mmol/L,检测过程仅需90s,线性范围可达0～68.60mmol/L,变异系数(CV)为2.31%～3.25%,回收率为98.4%～101%,与美国DADE试剂盒比较具有良好的相关,^y:0.985,Y=0.987x+0.024.结论:本法测定血浆中乙醇无需除蛋白,具有快速,简便等优点,可用于自动生化分析仪及手工操作,适于临床常规运用.关键词:实验室诊断;乙醇;乙醇脱氢酶;检测;临床应用中图分类号:R446.1文献标识码:A文章编号:1o07—8622(2005)05—0345—03 Determinationofalcoholinplasmabyalcoholdehydrogenasemethod FUJian—feng,SHIQing—hai,LUXi—chun,eta1.(UrumchiGeneralHospitalofLanzhouCommand,PLA,830000,China)Abstract:0bjective:Toestablishanewmethodforrapidmeasuringalcohol(ALC)inplasma. Methods:(hydroxymethy1)aminomethane—hydrochloride(Tris—HCL)burwasusedinthisstudy.Intheconditionofalkalescence,alcoholdehydrogenase(ADH)catalyzedtheoxidationofALCtoacetaldehyd e,withthesimultaneous productionofdeoxidizednicotinamideadeninedinucleotide(NADH).Thevarianceofabsor bancewasdeterminedbyafilterof340nm.TheconcentrationofALCwascalculatedaccordingtothestandard.Resul ts:ThemostadaptquantityofADHwas753KU/L.andthebestconcentrationoftheNADwas60.0mmoL/L.Itco stonly90Sinthewholereaction.Therangeoflinearitywasfromzeroto68.60mmo1/L.Thecoemcientofva riationfCVindifferentconcentrationswasfrom2.31%to3.25%.Therecoveryraterangedfrom98.4%to10 1%.ComparedwithDADE(America)reagentsmethod,theregressionequationwasobtained.Conclusion: ThisADHmethodfor measuringtheconcentrationofALCinplasmaisrapidandsimplewithoutremovingprotein.I tcouldbeusedboth automaticallyandmanuallyandsuitableforclinicalapplication.Keywords:Laboratorydiagnosis;Alcohol;Alcoholdehydrogenase;Testing;Clinicalappli cation饮酒过量可引起以神经精神症状为主的疾病,称为酒精中毒(alcoholpoisoning)或乙醇中毒(etha.nolpoisoning)….一次饮用大量酒类饮料会对中枢神经系统产生先兴奋后抑制作用,重度中毒可使呼吸,心跳抑制而死亡.鉴于酒精中毒的后果严重,所以迅速测定血浆中乙醇浓度,对早期诊断和处理急性酒精中毒具有非常重要的f临床价值.作者报道一种新的酶终点法测定血浆中乙醇浓度,无需除蛋白,收稿日期:2005—06—23作者简介:伏建峰(1967一),男,副主任技师,Tel:0991—4992736, Email:****************整个检测过程仅需90S,可用于自动生化分析仪及手工操作,适于临床常规运用.1原理选用三(羟甲基)氨基甲烷一盐酸(s—HCL)作为缓冲体系,在碱性条件下,乙醇脱氢酶(ADH)催化乙醇转化成乙醛,同时生成还原型辅酶I(NADH).在340nm波长处检测吸光度的变化,对照标准计算乙醇的浓度.2材料与方法2.1试剂:ADH,辅酶I(NAD)为Sigma产品,三(羟甲基)氨基甲烷(Tris)为国产分析纯.试剂I:346西北国防医学杂志(MedJNDFNC)2005Oct.;26(5)ADH16.8mg溶于10ml重蒸水.试剂II:NAD238.8mg溶于6ml重蒸水.试剂III:Tris10.70g溶于1O0ml重蒸水,检{贝0前与0.1mol/LHCL按5:1(V/V)混合.2.2标准液:分别加入100,200,300和400Ixl无水乙醇到50ml蒸馏水中,制备出的标准液浓度分别为17.15,34.30,51.45和68.60mmol/L,储存于具塞容器中备用.2.3混合血浆制备:采集40位健康体检者肘部静脉血各2ml,NaF抗凝,离心后制备混合血浆.2.4标准血浆:分别加入20,40,60,80l无水乙醇到10ml混合血浆中,混匀.制备出的标准血浆浓度分别为17.15,34.30,51.45和68.60mmol/L,以1m1分装,一20~C储存备用.2.5仪器:XL型生化分析仪(美国杜邦).2.6自动分析参数:反应类型:终点法;反应温度:37~C;波长:340nm(主)/380nm(次);样品3l,试剂I25l,试剂II130Ixl,试剂III340Ixl;反应时间:90s.3实验与结果3.1ADH用量的选择:取ADH(单位:KU/L)活性分别为:27,54,108,215,323,430,538,645,753,860,968的酶工作液分别测定高浓度(51.45retool/ L)的乙醇标准液,图1结果表明,ADH用量在753 KU/L以上最适.3.2NAD浓度选择:在pH10.5,ADH为753KU/L条件下,观察NAD浓度(mmol/L)为10,20,30,40,5O,6O,7O,8O,9O时对反应进程的影响,NAD最适浓度为60.0retool/L.3.3缓冲体系的选择:配制pH9～11的各种缓冲液:甘氨酸一NaOH,KH2PO4一K2HPO4,Na2CO3一NaHCO和Tris—Hcl等,在相同条件下,观察其对反应进程的影响,riffs—Hcl较为适宜.3.4缓冲液浓度及pH的选择:分别配制pH为:8.0,8.5,9.0,9.5,10.0,10.5,11.0的Tris—Hcl溶液,结果显示pHlO.5时较为适宜,同时确定Tris浓度为882.9mmoL/L.3.5反应动力学曲线:选择低,中,高(17.15,34.30,68.6mmol/L)三个不同浓度标准血浆,用本法在XL上观察反应进程,图2结果表明,不同浓度的样品60s内吸光度上升最快,70～80s曲线平缓, 90s后吸光度基本一致,因此选择90s为反应终点时间图2ADH法检测三个不同乙醇浓度标准血浆反应进程曲线3.6线性范围:取浓度为0,17.15,34.30,51.45,68.60mmol/L的标准血浆用本法测定,乙醇在0～68.60rnmol/L范围内线性良好.3.7精密度试验:选择低,中,高(17.15,34.30,51.45mmol/L)三个不同浓度标准血浆,用本法重复测定20次,批内变异系数分别为3.25%,2.31%和2.40%.3.8回收试验::在已知乙醇浓度为20,0rnmol/L的标本内分别加入低,中,高三种浓度(17,15,34.30,51.45rnmol/L)的乙醇标准液,回收率分别为1O0%,101%及98.4%.3.9干扰试验:将同体积蒸馏水和同体积不同浓度的干扰物,分别加入到等体积的混合血浆中,前者为对照样品,其余为含不同浓度干扰物质的检测样品,每个样品重复测定5次,取均值.检测样品与对照样品比较,偏差<±5%,说明该浓度物质对检测无显着干扰.测定结果显示,本法至少能去除30mmol/L的乙醛.此外,胆红素<500ixmol/L,血红蛋白<5g/L,甘油三脂<10.0mmol/L时,测定结果未见明显干扰.3.1O对比试验:选取40份不同乙醇含量的血浆分别用本法与美国DADE试剂盒对比测定,结果经回归分析::0.985,Y:0.987x+0.024.3.1l临床应用:健康体检且无饮酒习惯者40例,清晨空腹采血,用本法测定血浆乙醇含量,结果0西北国防医学杂志(MedJNDFNC)2005Oct.;26(5)347 mmoL/L36例,0.5～1.5mmoL/IA例;交通管理部门送检疑有酒后驾车者27例,血浆乙醇浓度在l0.8—39.0mmol/L,平均为21.4mmol/L,其中24人最终承认饮过酒;酒后反应迟钝并呕吐者8例,血浆乙醇浓度为20.5～39.7mmol/L;酒后昏迷者3例,血浆乙醇浓度分别为55.2,59.1和62.8mmol/L.4讨论ADH法检测乙醇最早由Hadjiioanno提出并沿用至今,传统方法需除蛋白,且反应时间较长(约300s),由于乙醇极易挥发,很难确保其检测的准确性.本法选择Tris—HCL作为缓冲体系,加之选用高活力的ADH,促使样品中有限的乙醇快速转化成乙醛,整个检测过程仅需90s且不用除蛋白,经方法学评价,各项指标均较为满意:线性范围可达0～68.60mmol/L,变异系数(CV)为2.31%～3.25%,回收率为98.4%～101%,与美国DADE试剂盒比较具有良好的相关.ADH工作环境为碱性,甘氨酸一NaOH,KH2PO4一K2HPO4,Na2CO3一NaHCO3和Tris—Hcl 等缓冲体系均可选用.在我们的实验中,甘氨酸一NaOH,KH2PO一K2HPO缓冲体系不甚理想;Na2CO3一NaHCO3和Tris—Hcl缓冲体系较为理想, 由于Na2CO,一NaHCO,缓冲液容易结晶,不利于存储,作者选择Tris—Hcl作为缓冲体系,该缓冲体系含有两性离子,有利于发挥酶的活力.不同文献报道的ADH的最适pH值也有很大差别,范围大致为8.8～10.9L2"J,可能由试验条件及ADH的来源不同所致,作者所选用ADH来自酵母,在本试验条件下,ADH的最适pH值为l0.5.乙醛是乙醇的氧化产物,其产量增多可抑制ADH的活性,试验中当乙醛浓度达30.0mmol/L时,仍未见其对ADH有明显的抑制作用,推测可能是s—Hcl和乙醛结合生成一种复合物,且此反应不可逆,使乙醛迅速被移走,反应得以快速进行.酶法自动分析已经普及,血中乙醇的酶学测定法分为两种:乙醇氧化酶法和ADH法.乙醇氧化酶法的试剂组成简单,缺点是特异性差,甲醇对测定干扰很大,可出现假阳性.ADH法相对特异,受甲醇或异丙醇的干扰极小,此外ADH较乙醇氧化酶更易得到且成本较低,因此ADH法更适宜常规操作,易于推广应用.参考文献:[1]BishopML,Duben—EngelkirkJL,FodyEP.Clinical chemistry[M].FourthEdition,PhiladelphiaUSA:Lippin. cottWilliamsWilkins,2000.508—610.[2]胡建强,刘凤兰.血清乙醇脱氢酶活性测定及其临床应用[J].天津医科大学学报,2001,7(1):110—111.[3]陈金来,刘毅,郭妹,等.酶法血清乙醇测定试剂盒的初步评价及临床意义[J].天津医科大学学报,2002,8 (4):506—508.[4]1wamotoR,KubotaH,HosokiT,eta/.Completeaminoacid sequenceandcharacterizationofthereactionmechanismofa glucosamine—inducednovelalcoholdehydrogenasefrom Agrobacteriumradiobacter(tumefaciens)[J].ArchBio. chemBiophys,2002,398(2):203—212.[5]张红霞,邓振华,谢娜,等.酒后驾车血液呼气中乙醇检测方法评价[J].刑事技术,2003,5:36—39.《西北国防医学杂志》征订启事<西北国防医学杂志=》为兰州军区联勤部卫生部主办的国,内外公开发行的综合性医药卫生学术性期刊,是"中国科技论文统计源"期刊,已被<中国科学引文数据库》等国内重要数据库收录,也被美国化学文摘(CA)和俄罗斯文摘杂志(JA)收录,刊出省部级以上各类基金资助论文及获奖论文占有较高比例,多次在军内外期刊质量评比中获奖.本刊刊登军内外医务工作者有关基础医学,临床医学,军事医学,文献综述,讲座,护理,卫生科技管理等方面的学术文章.主要栏目有:述评,论着,临床研究,高原医学,经验交流,护理,综述,讲座,卫生行政等.我们希望本刊能对广大医务工作者有所裨益,并热切欢迎对我刊给予扶持和指导.<西北国防医学杂志》(前身为<兰后卫生=》),1979年创刊,2002年改为双月刊,大16开本,80页,逢双月末出版,每期定价10.0o元.<西北国防医学杂志>国内邮发代号54—101,欢迎在当地邮局订阅,也可直接向编辑部订阅,全年70.0o元(含邮费).编辑部地址:兰州市小西湖西街98号;邮政编码:730050联系电话:(0931)8975420;E—mail:************。

临床医药文献杂志Journal of Clinical Medical 2019 年第 6 卷第 18 期2019 Vol.6 No.18198关于乙醇在人体中代谢速率及治疗措施田炜1，胡江涛2（1.信阳市公安局刑事科学技术研究所，河南信阳 464000；2.河南圣德司法鉴定中心，河南信阳 464000）【摘要】酒精也称乙醇，乙醇是各类酒类饮料中的主要成分，过量摄入乙醇会人体造成严重的损害。

乙醇在人的身体中的代谢，可以帮助人体将乙醇排出体外或帮助酒精分解，加强对乙醇的研究，了解乙醇在人体中的代谢过程，分析乙醇对人体的损害，有利于制定合理的、科学的应对治疗措施，从而减轻乙醇对人体的损害。

【关键词】乙醇；代谢；损害；措施【中图分类号】R33 【文献标识码】A 【文章编号】ISSN.2095-8242.2019.18.198.01乙醇是一种具有挥发性的液体，无色并具有透明的特点，乙醇是酒类饮料的主要成分，存在的比例也具有特殊性，以任何比例存在与酒类饮品中。

乙醇对人体具有一定的损害，乙醇在进入人体后，可以在短短5 min的时间内，出现在血液中，并且还可以在30～60 min，让人体内血液循环的浓度达到最高。

乙醇首先通过口腔，食道等器官，然后再经胃、肠器官，最后通过生物膜进入到人体的血液循环中。

1 乙醇在人体中的代谢过程乙醇在人体中的代谢是一个较为复杂的过程，也是酶的分解过程。

人体对乙醇的排出能力较弱，只有少量（2%～10%）的乙醇可以通过汗液、尿液、呼吸道直接被人体所排除体外，但是大部分的乙醇需要经过人体的肝脏，留在肝脏中经过酶进行分解。

人体的肝脏中含有大量的乙醇脱氢酶（ADH），在乙醇脱氢酶的催化作用下，可以将人体肝脏中的乙醇转化为乙醛。

整个转化过程具有一定的特殊性，需要较强的催化能力才能完成，乙醇脱氢酶的催化分解对乙醇在人体代谢起到了重要的作用。

其中乙醇转化为乙醛的过程为：2CH3CH2OH+O2→2CH3CHO+2H2O 乙醇乙醛。

线粒体乙醛脱氢酶（ALDH2）活性检测试剂盒说明书微量法货号：BC5515 规格：100T/96S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称 规格 保存条件 提取液 液体110 mL×1瓶 2-8℃保存 试剂一 液体15 mL×1瓶 2-8℃保存 试剂二 粉剂×2支 -20℃保存 试剂三 液体0.5 mL×1支 2-8℃保存 试剂四 液体1 mL×1支 2-8℃保存 试剂五液体2.8 mL×1瓶2-8℃保存溶液的配制：1、 试剂二：临用前取一支试剂二加入1.5mL 蒸馏水溶解，用不完的试剂-20℃分装保存4周，避免反复冻融；2、 试剂五：沸点低，在使用时保持低温以保证正确的吸取量。

用后及时封口。

3、 工作液：临用前根据样本数量按照试剂一：试剂二：试剂三：试剂四：试剂五=110µL ：20µL ：4µL ：6µL ：20µL （160µL ，1T ）的比例配制工作液，现用现配。

产品说明：线粒体乙醛脱氢酶（aldehyde dehydrogenase 2，ALDH2）属于乙醛脱氢酶蛋白家族，存在于很多组织，特别是肝脏组织内含量较高。

该酶主要参与乙醇代谢过程的第二步，在线粒体内将乙醛氧化成羧酸，然后进入三羧酸循环，被彻底分解，解除乙醛对生物体的毒害作用。

另外，ALDH2也可作为酯酶参与硝酸甘油的代谢途径，是硝酸甘油重要的生物活性剂。

ALDH2催化乙醛和NAD +转化为乙酸和NADH ，利用NADH 在340nm 处吸光值的变化即可计算得到ALDH2的活性。

Acetaldehyde + NAD + Acetic Acid + H + +NADH (340nm)注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

酒精代谢相关酶基因检测项目简介一个人的酒量85%是先天决定，而不是后天训练的，机体摄入的酒精90%以上在肝脏内主要靠乙醇脱氢酶（ADH）和乙醛脱氢酶（ALDH）进行代谢。

对酒精代谢相关酶基因检测：可以发现ADH1B和ALDH2基因的多态性，评估人体内乙醇脱氢酶和乙醛脱氢酶的活性高低，从而评价个体对酒精的耐受性。

检测结果的临床意义1、检测基因型为ADH1B*2/*2（有活性），ALDH2*1/*1（有活性），那么酒精在体内就可迅速变成乙酸而代谢排出，也就是真正的“酒篓子”。

2、检测基因型为ADH1B*1/*1（无活性）或ADH1B*1/*2（活性降低），ALDH2*2/*2（无活性）或ALDH2*1/*2（活性降低），那么乙醇主要靠肝脏里的P450慢慢氧化，易伤肝，经常会突然烂醉如泥。

3、检测基因型为ADH1B*2/*2（有活性）；ALDH2*2/*2（无活性）或ALDH2*1/*2（活性降低），此类人群能迅速将乙醇转化成乙醛，乙醛使心率加快，外周血管扩张，心排血量增加，面部潮红，而乙醛只能依靠肝脏里的P450慢慢代谢为乙酸。

基因型与酒精耐受性关系1、基因型为ADH1B*1/*1：乙醇转化为乙醛的速度慢，容易导致酗酒。

2、个体对酒精的耐受性主要受ALDH2基因型的影响：基因型为ALDH2*1/*1：对酒精耐受性高基因型为ALDH2*1/*2：对酒精有一定的耐受性基因型为ALDH2*2/*2：对酒精敏感，没有耐受性标本采集要求1、EDTA抗凝全血3-5ml，2～8℃保存，当天送检。

2、送样时，请写清楚送检单位、姓名、性别、年龄、联系方式、科室等基本信息。

3、注意事项：该项目血液标本不得使用肝素抗凝，避免标本凝固。

临床项目收费标准。

小鼠小鼠乙醇脱氢酶乙醇脱氢酶(ADH)酶联免疫酶联免疫分析分析分析试剂试剂盒使用说明书盒使用说明书盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。

检测范围检测范围：： 96T0.5 U/L -30U/L使用目的使用目的：：本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中乙醇脱氢酶(ADH)含量。

实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠乙醇脱氢酶(ADH)水平。

用纯化的小鼠乙醇脱氢酶(ADH)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入乙醇脱氢酶(ADH)，再与HRP 标记的乙醇脱氢酶(ADH)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。

TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的乙醇脱氢酶(ADH)呈正相关。

用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中小鼠乙醇脱氢酶(ADH)浓度。

试剂盒组成 1 30倍浓缩洗涤液 20ml ×1瓶 7 终止液6ml ×1瓶 2 酶标试剂 6ml ×1瓶 8 标准品（48U/L ） 0.5ml ×1瓶 3 酶标包被板 12孔×8条 9 标准品稀释液 1.5ml ×1瓶 4 样品稀释液 6ml ×1瓶 10 说明书 1份 5 显色剂A 液 6ml ×1瓶 11 封板膜 2张 6显色剂B 液6ml ×1/瓶12密封袋1个标本标本要求要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。

若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP ）活性。

操作步骤1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

24U/L 5号标准品 150µl 的原倍标准品加入150µl 标准品稀释液 12U/L 4号标准品 150µl 的5号标准品加入150µl 标准品稀释液 6U/L 3号标准品 150µl 的4号标准品加入150µl 标准品稀释液 3U/L 2号标准品 150µl 的3号标准品加入150µl 标准品稀释液 1.5U/L1号标准品150µl 的2号标准品加入150µl 标准品稀释液2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。