输血科室内质量控制实施记录表(ABO正反定型与RhD血型鉴定)[1]

B27输血科室内质控IQC嘉兴妇幼保健院输血科IQC检测反应记录表编号:JXFB-QR-027-000 日期:20 年月日至 20 年月日检测项目 ABO正定型检测项目 ABO反定型抗体筛选交叉配血 RhD检测方法试管法微柱法试管法微柱法检测方法试管法微柱法微柱法试管微柱配血配血组合组合检测试剂抗A 抗B 抗A 抗B 抗D 抗D 检测试剂主侧主侧 A1 B O A1 B样品1 样品3 IQC强度样品2 样品4样品1 样品3 星期一样品2 样品4样品1 样品3 星期二样品2 样品4样品1 样品3 星期三样品2 样品4样品1 样品3 星期四样品2 样品4样品1 样品3 星期五样品2 样品4样品1 样品3 星期六样品2 样品4样品1 样品3 星期日样品2 样品4嘉兴妇幼保健院输血科IQC检测记录表编号:JXFB-QR-027-000 日期:20 年月日至 20 年月日试剂试剂批号变更试剂试剂批号变更批号效期试剂厂商批号效期试剂厂商名称选用批号效期名称选用批号效期口口口口口口口口口口口口口口口口口口口口试剂质控星期一星期二星期三星期四星期五星期六星期日口未改变口未改变口未改变口未改变口未改变口未改变口未改变批号变化口改变口改变口改变口改变口改变口改变口改变 ABO标准血清检测结果卡式血型应检测结果用凝聚胺试剂检测结果标准红细胞检测结果质控是否通过是口 ;否口是口 ;否口是口 ;否口是口 ;否口是口 ;否口是口 ;否口是口 ;否口失控原因签名记录日期相关文档：••••••••••更多相关文档请访问：。

1.1原理：• 1号管为AB 型RhD 阴性红细胞，2号管为RhD 阳性红细胞，3号管为AB 型血浆，4号管为O 型血浆，5号管为红细胞稀释液。

• 反应格局表中所列出的凝集强度应用的检测方法为试管法，如采用其它方法需要进行校准凝集强度试验，方法如下：对室内质控品重复检测两次或以上的结果进行对照，确定本实验室此样本管的凝集强度并注明以此为标准。

2.1 实验项目一：正定型、RhD 及反定型2.2 ABO/RhD 血型鉴定试剂卡（江苏力博医药生物技术有限公司）2.3 标本的要求：室内质控品1号管和2号管红细胞、3号管和4号管血浆（江苏力博医药生物技术有限公司） 2.4 操作步骤 2.4.1试管法1） 分别把1号管、2号管红细胞按0.9%生理盐水1:2稀释备用 2） 正定型：取洁净试管6管，每2管分别标记为“抗A ”、“抗B ”、“抗D ”；分别加入相应抗体试剂2滴，再加入已稀释的质控红细胞2滴，混匀，室温孵育15min ，3000rpm 离心1min ，肉眼观察结果。

3） 反定型：取洁净试管6管，每2管分别标记为“Ac ”、“Bc ”、“Oc ”；分别加质控血浆2滴，再加入ABO 血型定型红细胞试剂2滴，混匀，室温孵育15min ，3000rpm 离心1min ，肉眼观察结果。

2.4.2 微柱凝胶卡法4） 取ABO/RhD 血型鉴定试剂卡2张，分别标明1号、2号。

5） 分别把1号管、2号管红细胞按0.9%生理盐水1:10稀释备用3）分别把稀释后1号红细胞、2号红细胞加入对应的1号及2号ABO/RhD血型鉴定试剂卡的1、2、3、6孔各50ul 。

4）向1号、2号卡4孔加入0.8%A 型红细胞50ul ，5孔加入0.8%B 型红细胞； 5） 再向1号卡4孔和5孔加入25ul 3号管血浆；2号卡卡4孔和5孔加入25ul 4号管血浆。

2.5 实验项目二：不规则抗体筛查2.6 广谱抗人球蛋白卡（江苏力博医药生物技术有限公司）2.7标本的要求：室内质控品3号管、4号管（江苏力博医药生物技术有限公司）2.8 操作步骤2.8.1凝聚胺法1)取洁净试管6管，每2管分别标记为“Ⅰ”、“Ⅱ”、“Ⅲ”。

输血科输血相容性检测室内质量控制管理制度Ⅰ目的为了规范室内质控的管理，特制定此制度。

Ⅱ范围本制度适用于输血科工作人员。

Ⅲ制度一、质控品来源商品化质控（生产商或供应提供）。

二、质控品的技术规则定义（一）由生产商或供应商提供的试剂盒应包括抗原阴性、阳性对照品和抗体阴性、阳性对照品，严格按照试剂盒说明书的质控技术要求进行操作。

（二）自制质控品，必须经本实验室鉴定，获得明确的抗原或抗体特异性表达结果。

排除冷凝集、自身抗体、异常蛋白干扰等情况。

三、质控品常规使用前的确认生产商或供应商提供的试剂盒对照品应在有效期内使用，并于每次实验操作前进行检查，发现标本明显的颜色变化、溶血应放弃使用并更换新的质控品。

四、实施质控的频次常规试验应该在每天试验开始前进行，试验中途更换试剂批号后应重做质控试验，特殊试验应在每次试验前进行。

五、质控前准备常规检测前将质控品恢复到室温后使用，所用质控标本类型应与实验项目要求一致，检测操作人员必须具备上岗资质，仪器设备及室内温度、环境均应符合要求。

六、质控品选择基本要求每次质控试验应至少选择1个阳性对照质控品，1个阴性对照质控品。

七、过程控制（一）ABO、Rh（D）血型鉴定。

1.一般选择两个质控标本；2.要求1个标本A型，1个标本B型；3.同时选择两个标本Rh（D）不同型，即一阴一阳。

（二）不规则抗体筛查。

1.IgG抗体组：1个含有不规则抗体的质控标本作为受者；选择两个与受者ABO同型的质控标本作为供者，要求两个供者标本中，一个含有可与受者不规则抗体反应的抗原，另一个不含有可与受者不规则抗体反应的抗原；三个质控标本直抗均为阴性。

2.IgM抗体组：选择3个已知血型分别为A、B、O质控标本，选A或B作为受者，其余两个为供者；3个质控标本直抗均为阴性。

八、试剂控制（一）抗A、抗B血清与反定A、B、O细胞：1.可以采用互相验证的方法进行质量控制，即同时对A、B、O细胞进行正定型；2.也可以采用过程控制使用的质控品，并遵照过程质控的要求进行操作。

For personal use only in study and research; not for commercial use 输血科室内质控项目及方案一、目的：考察检测结果是否准确和稳定。

二、原理：选择已知血浆和红细胞，标定其在不同检测介质（盐水介质、凝聚胺、抗人球蛋白以及微柱凝胶等）中的阳性及阴性检测的结果。

通过每天或每批与检测标本同等的检测以证明其检测过程中影响检测结果的主要因素（试剂、设备、检测程序、人员操作等）是否符合标准操作规程限定的范围，证明检测结果是否有效的衡量标准。

三、试剂组成：1、AB型Rh阴性红细胞。

2、O型Rh阳性红细胞。

3、AB型血浆。

4、O型血浆。

检测项目：ABO正反定型、RhD血型、抗体筛检、交叉配血四、适用范围：试管法、凝聚胺法、抗人球蛋白法、微柱凝集法五、检验方法：1、确认：首次应用室内质控品时，应进行确认凝集强度试验。

方法：重复检测两次或以上进行结果对照，确定本实验室对样品管检测的凝集强度，并以此为标准。

2、用微柱凝胶卡法做ABO正定型、RhD时，将红细胞直接稀释至相应的红细胞悬液浓度，进行分装后冷藏保存。

3、样本3含有弱D抗体，要稀释后才能用于反定型和抗体筛检。

方法：首先对样本做倍比稀释，再与抗筛细胞进行检测，测出与其反应强度在1+的稀释比例，按比例稀释后应用。

稀释后的血浆可分装后冷冻保存。

样本4直接分装后冷冻保存。

六、结果判定：严格按照《医院输血科IQC检测反应记录单》各项内容进行填写，与“室内质控品的组成”绘出的反应格局表格进行对照，一致则表明此次室内质控通过，反之则为不通过。

请查明原因后，方可开展常规工作。

七、注意事项：1、本质控品只能用于输血相容性室内质控研究，不能作为试剂。

2、本质控品虽经检测并已对其进行病毒灭活，操作中仍应按照一般血液标准使用，注意防护措施。

3、本质控品最佳保存条件为2℃-8℃，使用完毕后立即放回冷藏室内。

4、使用本质控品，先在室温平衡10-15min，才可进行相关检测工作，如需混匀，应避免剧烈摇动。

规*输血科各级检验人员室内质控操作程序，确保检验结果准确、可靠。

合用于输血相容性检测项目。

选择已知型别的红细胞和血清，根据其与在用试剂标准血清：抗 A、抗 B、抗 D 、ABO 血型反定型红细胞及 ABO 血型抗原检测卡(微柱凝胶)阳性及阴性检测结果，通过每天或者每批与待检标本相同的试剂和方法进行检测，以监控实验室进行 ABO 、RhD 血型检测过程中应用的试剂、设备及实验流程，并评估实验结果的有效性。

1. 质控品：样本 1 A1 型 RhD (+)红细胞样本 2 B 型 RhD (+)红细胞样本 3 A 血清样本 4 B 血清样本 5 O 型 RhD (+)红细胞样本 6 RhD ( -)红细胞2. 血型鉴定试剂：标准血清：抗 A，抗 B，抗 DABO 血型反定型红细胞： Ac， Bc， OcABO 血型抗原检测卡(微柱凝胶)卡式专用离心机首先将质控品、标准血清及 ABO 血型反定型红细胞从冰箱取出后平衡至室温。

操作步骤按不同检验方法(平板法、试管法、微柱凝胶法)具体如下：1. 平板法：在玻片上(或者纸片上)按表 1 加样各 1 滴(50ul)，混匀(直径约 20mm 大小)， 先后缓慢摇晃玻片， 2 分钟摆布肉眼判读结果，并记录。

2. 试管法：取 13 支(95mm×12mm 或者 75mm×12mm) 试管做好标记， 按表 1 加样各 1 滴(50ul)， 混匀， 离心 (离心速度和时间可以选择转速 1000rpm 时间 1 分钟或者转速3400rpm 时间 15 秒) ， 判定结果，并记录。

3. 柱凝胶法：取 4*待检 ABO 血型抗原检测卡(微柱凝胶)做好标记。

将样本 1 分别加入第 1*卡的 1-3 孔中各 1 滴(50ul)，将样本 2 分别加入第 2*卡的 1-3 孔中各 1 滴(50ul)，将样本 5 分别加 入第 3*卡的 1-3 孔中各 1 滴(50ul)，将样本 6 加入第 4*卡的第 3 孔内。

输血科室内质量控制与室间质量评价管理规程一、室内质量控制管理规程（一）目的：为保证实验数据的准确、可靠。

（二）范围：ABO血型正反定型、Rh血型、红细胞不规则抗体筛查（三）管理要求：1 .室内质控质控方法与测定项目检测方法一致，符合相关要求。

本室质控方法为各试剂间的互相验证。

2 .需在每日实验前进行，只有当质控结果达到实验室设定的接受范围，才能签发当天的化验报告。

3 .当室内质控结果出现失控时，需仔细分析、查明原因，若是真失控，应该在重做的质控结果在控后，对相应的所有失控的患者标本进行重新测定，方可发出报告；若是假失控,病人标本可以按原测定结果报告。

4 .质控品检测的全过程需严格按照操作说明进行，不能任意更改。

5 .质控品必须在有效期内使用。

6 .实验室每月末要对当月的室内质控结果进行分析评价并与质控品必须与患者标本在相同条件下进行检测。

7 .每天质控结果做好原始记录并保存。

二、室间质量评价管理规程（一）目的：利用实验室间的比对来确定实验室的能力，评价各实验室测定结果的正确性，是否保持在临床所能接受的误差范围内，即借助外部力量进行回顾性检查。

（二）范围：卫生部临床检验中心室间质评、大连市输血质控中心室间质评（三）管理要求：1 .开展室间质评项目，每年参加卫生部临床检验中心室间质评（每年3次）、大连市输血质控中心室间质评（每年1次）。

2 .在各室间质评的规定时间完成室间质评分析,3 .在做室间质评检测前，应对整个分析系统（含检测设备、试剂、校准物、质控物）进行必要的维护和检查更换，以保持正常的工作状态。

4 .收到室间质评物后应按规定妥善保存，确保其品质不变。

5 .在检测过程中应与病人标本一起随机检测，独立完成分析报告，不得修改原始检查结果，更不得与其它单位核对，以保证室间评价的真实性。

6 .室间质评分析在规定时间完成后，如实认真填写回报表，上交科主任，由科主任审签后统一寄给省临检中心，原始记录保存在实验室内以备核查和分析。

输血科室内质量控制管理规程一、目的：为控制输血科实验室检测的准确性和精密度，提高常规测定工作批间和批内的一致性,在每批试剂和每日工作前,执行《室内质量控制操作规程》，依据《输血实验室管理程序》4.2.2（9）条款的要求制定本规程。

二、适用范围：适用于输血科对血型血清学实验室检测的全过程质控。

三、职责：由输血科工作人员负责实施。

四、管理程序：（一）实验室室内质量控制的定义：就是监测过程，以评价检验结果是否可靠，以及排除质量环节中所有导致不满的原因。

广义上室内质控适用于得出检验结果所有步骤的活动，从收集标本开始，直至报告测定结果，是保证高质量操作的必要措施。

（二）仪器设备的质控：每日进行仪器的监测和维护，贮血冰箱、化浆机等，为每月一次。

（三）血标本的质控：要求每一份血标本有唯一性标识，对血标本的交接、贮存、处理、销毁等有记录，可追溯性。

（四）试剂的质量控制：选用质量可靠、通过质量评价的试剂盒。

（五）每一批次的试剂要进行全面的质量控制，包括外观、批号、有效期以及试验的结果是否符合标准；（六）对每日连续使用的试剂，工作前应检查试剂的外观，做试验，保证试剂的有效性；非连续使用的试剂，每次使用前都要进行适量控制，并填写《常用试剂质控记录》。

（七）每天室内质控标本需与病人标本同时测定，只有当质控结果达到实验室设定的接受范围，才能签发当天的化验报告。

（八）当室内质控结果出现失控时，需仔细分析、查明原因，若是真失控，应该在重做的质控结果在控后，对相应的所有失控的患者标本进行重新测定，方可发出报告；若是假失控，病人标本可以按原测定结果报告。

（九）更换质控品应在前一批号未使用完之前，以保证新、旧批号同时使用一段时间，不得使用过期的质控品。

（十）质控品1.单克隆抗-A/B、RH试剂和反定型试剂红细胞：市血液中心提供的红细胞制品的血辫。

此血辫的血型是经过市血液中心3次以上的复查，因此认定它为质控品。

或购置专门的质控品。

2.抗人球蛋白检测卡（不规则抗体用、交叉配血试验用）：非同型的血液之间进行交叉配血试验。

赣州市人民医院输血科第 1 页共9 页赣州市人民医院输血科第 2 页共9 页红细胞ABO血型（正反定型）、RhD鉴定标准化操作规程一、目的为保证血液及血液成分的红细胞ABO血型与RhD血型在临床上同型输注，确保临床输血安全、有效，根据《临床输血技术规范》第十五条特制定本标准化操作规程。

二、方法采用微柱凝胶凝集试验检测红细胞ABO血型（正反定型）与RhD 血型。

三、原理将人红细胞血型抗原与相应的抗体发生的凝集反应在微柱检测系统中进行。

微柱检测系统的上端为反应室，将葡萄聚糖凝胶作为凝集反应的介质装入检测卡微柱凝集检测管中，卡片上从左向右顺序第一支至第三支微管凝胶中均分别充以抗A、抗B、抗D单克隆抗体IgM 试剂，检测人红细胞ABO、RhD抗原。

第四支至第六支微管中只有凝胶，第四支微管作阴性对照管，第五支和第六支微管作为ABO血型反定型管。

微柱凝集检测管中的凝胶的间隙起分子筛作用。

凝集反应阳性的红细胞凝决留在微柱凝集检测管的上面或中间，反应阴性未凝集的红细胞将通过凝胶的间隙，沉积在微柱凝集检测管的底部。

四、适用范围SOPREG007.01 第2 页共9赣州市人民医院输血科第 3 页共9 页适用于输血前患者红细胞ABO血型（正反定型）确认与RhD血型复查。

五、仪器设备普通离心机；血型血清学多用离心机；37℃免疫微柱孵育器；六、试剂1、试剂名称：ABO、RhD血型试剂卡（单克隆抗体）；试剂生产厂家：长春博迅生物技术有限责任公司；批准文号：国药准字S2*******；包装规格：聚丙烯卡12检测人份/盒；贮藏条件；18-25℃避光保存；有效期：自检定合格之日起12个月；试剂单克隆抗体效价：抗A效价≥128；抗B效价≥128；抗D效价≥32；特异性试验合格。

2、试剂名称：人ABO血型反定型用红细胞试剂盒；试剂生产厂家：上海血液生物医药有限公司；批准文号：国药准字S2*******；包装规格：A1、B、O试剂各1支，10ml /支；贮藏条件；2-8℃保存，不能冰冻；有效期：自检定合格之日起2个月；试剂性能：外观、溶血率%、特异性、抗原性均符合检定规程要求。

血库室内质控流程输血科（血库）输血前检测项目有 1.ABO正反定型2.RhD血型3. 交叉配血4. 乙肝炎表面抗原5. 乙型肝炎表面抗体6. 乙型肝炎e抗原7.乙型肝炎e 抗体8. 乙型肝炎核心抗体9.丙型肝炎抗体10.梅毒检测11.HIV抗体。

免疫、HIV质控品每年根据科室的需要计划向广东省临床检验中心征订或向相应的供应商购买。

一、乙肝两对半及丙肝使用广东省临检中心提供的弱阳性控品：取出质控品，放置室温平衡15分钟,摇匀后按未知血清标本进行测定，每次工作时和检测常规样品一样测定，将测定的质控结果分别登记免疫质控登记本上。

二、HIV使用广东省临检中心提供的弱阳性控品或市疾病预防控制中心提供的弱阳性控品，取出质控品，放置室温平衡15分钟,摇匀后按未知血清标本进行测定，每次工作时和检测常规样品一样测定，将测定的质控结果分别登记HIV质控登记本上或录入到计算机的质控记录表内。

三.乙肝两对半及丙肝采用目测法阴性（-）阳性（+）判断结果，失控的判断：弱阳性结果应为弱阳性，不能做成阴性四、HIV失控的判断采用Westgard多规则控制方法：1. 12S：1个质控结果超过均值±2s，仅用作“警告”规则，并启动由其他规则来检验质控数据。

2.13S：1个质控结果超过均值±3s，就判断失控，该规则主要对随机误差敏感。

3.10X：10个连续的质控结果落在均值的一侧，表示存在系统误差。

五、失控处理在进行室内质控时若发现失控，应按照如下方法进行处理：1、填写失控报告单，上报质控负责人。

2、简单、迅速回顾整个操作过程，分析、查找最可能发生误差的因素。

3、如未发现明显差错可按以下步骤进一步查找原因：（1）立即重测同一质控品，如重测结果仍不在允许范围则可以进行下一步操作。

（2）新开一瓶质控品重测失控项目，如果结果仍不在允许范围则进行下一步。

（3）进行仪器维护重测失控项目。

六、失控复查结果分析1、如果查出是质控品的问题，可发报告，但要查出原因并纠正。

输血相容性检测自制室内质控品管理程序1 目的为规范输血相容性检测自制室内质控品制备流程，使自制室内质控品满足室内质量控制的相关质量要求，确保输血相容性检测结果的准确性，特制定本管理程序。

2 适用范围适用于ABO及RhD血型、不规则抗体筛查、交叉配血等输血相容性检测室内质控品的制备、性能评价、使用及保存全过程。

3 职责3.1 实验室质控品管理人员根据实际检测需要、考虑质控品需求量和保存周期以月为周期制备相应数量的室内质控品。

3.2 实验室质控品管理人员负责每批次室内质控品的性能评价，将符合质量要求的质控品在《输血科血型血清学质控品在库状态登记表》登记。

3.3 实验室负责人负责每批次室内质控品投入使用前的审批工作。

4 工作程序4.1 单独ABO及RhD血型鉴定试验室内质控品的配伍原则为满足A 抗原、B抗原、抗-A、抗-B阴阳性对照的基本要求，一般情况下可以选择以下四种质控品组合方式。

4.1.1 A型RhD阳性与B型RhD阴性全血质控品。

4.1.2 B型RhD阳性与A型RhD阴性全血质控品。

4.1.3 O型RhD阳性与AB型RhD阴性全血质控品。

4.1.4 AB型RhD阳性与O型RhD阴性全血质控品。

4.2 单独不规则抗体筛查试验室内质控品的配伍原则只需选择一个含有IgG不规则抗体和一个不含有不规则抗体的全血或单独血清质控品。

4.3 ABO及RhD血型鉴定与不规则抗体筛查联合试验室内质控品的配伍原则4.3.1 可以按单独试验选择质控品分别选择对应的质控品。

4.3.2 选择两个质控品同时满足ABO及RhD血型鉴定与不规则抗体筛查联合试验的质控要求。

4.4 交叉配血试验室内质控品的配伍原则4.4.1 IgG抗体质控品选择配伍原则4.4.1.1选择1个含有不规则抗体的质控品作为受者。

4.4.1.2选择2个与受者ABO同型的质控品作为供者，要求两个供者标本中，一个含有已知可与受者不规则抗体反应的抗原，另一个不含有可与受者不规则抗体反应的抗原。

版本/修订号: 1/0程序文件生效日期: 2013-07-30 第1页共3页输血相容性检测室内质量控制管理程序1目的建立输血相容性检测室内质控管理程序，规范室内质控操作流程，以便能够发现实验室常用试剂、耗材的质量问题及反应体系的稳定性问题，及时采取纠正和补救措施，提供本实验室检测结果一致性的证据，确保输血相容性检测结果达到预期的质量标准。

2适用范围适用于输血相容性检测实验室室内质量控制管理。

3职责3.1各检测岗位人员负责所检测项目的室内质量控制过程。

3.2实验室负责人、质量监督员负责监督执行。

4工作程序4.1质控品来源商品化质控品、第三方实验室提供或实验室自制质控品。

4.2技术要求4.2.1由生产商或供应商提供的试剂盒应包括抗原阴性、阳性对照品和抗体阴性、阳性对照品，严格按照试剂盒说明书的质控技术要求进行操作。

4.2.2自制质控品，必须经本实验室鉴定，获得明确的抗原或抗体特异性表达结果。

排除冷凝集、自身抗体、异常蛋白干扰等情况。

4.3质控品常规使用前的确认4.3.1生产商或供应商提供的试剂盒对照品应在有效期内使用，并于每次实验操作前进行检查，发现标本明显的颜色变化、溶血应放弃使用并更换新的质控品。

4.3.2自制质控品：4.3.2.1抗凝全血标本：未经其他处理，参照红细胞保存期，使用前同样检查外观，排除溶血、细菌污染等情况。

4.3.2.2红细胞溶液：经盐水或其他缓冲液处理，一般当天使用。

版本/修订号: 1/0程序文件生效日期: 2013-07-30 第1页共3页在颜色变化、细菌污染等。

4.4实施质控的频次：常规实验应该在每天实验开始前进行，实验中途更换试剂批号后应重做质控实验，特殊实验应在每次实验前进行。

4.5常规检测前将质控品于室温放置30分钟后使用，所用质控标本类型应与实验项目要求相一致，检测操作人员必须具备上岗资质，仪器设备及室内温度、环境均应相对固定。

4.6质控品选择基本要求：每次质控试验应至少选择一个阳性对照质控品，一个阴性对照质控品。

ABO血型鉴定正反定型试验方法
一、试剂和材料：
（一）单克隆抗A、抗B试剂（由试剂厂家提供）
（二）显微镜、载玻片
（三）A型、B型红细胞（本实验室制备的5%混悬液）
（四）EDTA抗凝的待测红细胞全血
（五）竹签
二、方法（玻片法）：
（一）正定型：
1.在一块干净的玻片上，间隔一定距离做好标记，分别滴一滴抗A和抗B试剂；
2.在每滴试剂中加一滴待测红细胞全血；
3.用竹签混匀试剂和红细胞，并使混合物直径＞15mm；
4.轻摇玻片，两分钟内观察结果，必要时可以在低倍镜下观察；
5.判读、解释并记录反应结果。

（二）反定型：
1.在玻片上间隔一定距离标明Ac和Bc字样。

分别滴加5%的A型红细胞悬液、B型红细胞悬液各一滴；
2.在玻片每滴红细胞悬液上滴加待测血清各一滴；
3.混匀（同正定型）；
4.轻摇玻片，两分钟内观察结果，必要时可以在低倍镜下观察；
5.判读、解释并记录反应结果。

6.结合正反定型反应结果、判定血型，见表1
表1 ABO血型正反定型试验结果判定
三、附注：
（一）表中“O”表示无凝集，“+”表示凝集，一般都是3-4个+的强凝集反应；
（二）2分钟后红细胞仍呈均匀混悬状态是阴性反应；
（三）若得到弱的或可凝集反应结果，该标本应用试管法重新试验；
（四）由于新生儿在出生4~6个月内，血浆中的ABO抗体活动太弱，并且含有来自母亲的抗体，故新生儿血型只能由检测红细胞抗原的正定型来测定其ABO血型；
（五）做正定型时，还可加一抗A、B血清（O型人血清），以检测ABO弱抗原；做反定型时可以加试一O型红细胞，借以证实是否有不规则抗体的存在。