抗体药物分析培训课件

抗体药物纯度分析（CE-SDS、SDS-PAGE、SEC、RP等）抗体药物是一类通过人工合成的抗体来治疗疾病的药物，通过与目标分子特异性结合从而达到治疗的目的。

常见的抗体类药物类型包括单克隆抗体、人工合成的抗体片段、免疫毒素、抗体药物共轭物等。

抗体类药物在治疗多种疾病方面表现出显著的疗效，如癌症、自身免疫性疾病、炎症性疾病、免疫调节及眼科疾病等。

抗体药物研究中，剖析高级结构对于理解其药效活性、稳定性、传递途径和毒性等方面非常重要。

抗体药物纯度是蛋白质结晶以及严谨的结构和功能研究的关键。

不纯净的样品会导致整个实验的结果不准确。

另外，蛋白质纯度是进一步蛋白质研究和生物制药应用的非常重要的特征。

利用毛细管电泳法（CE-SDS）或SDS-PAGE电泳法的抗体药物纯度分析方法简单、成本很低，且在确定样品中蛋白质组分方面灵敏度很高，因而成为蛋白纯度分析常用的技术之一。

SDS-PAGE可根据不同蛋白质分子所带电荷的差异及分子大小的不同所产生的不同迁移率将蛋白质分离。

分子筛HPLC，又称为体积排阻色谱(size exclusion chromatograghy，SEC)，小分子量的化合物进入凝胶孔中，滞留时间长；大分子量的化合物不能进入孔中，会更早的被洗脱下来。

分子筛色谱的优势在于能够处理至少1nmol的目的蛋白，并得到很好的分离效果，分离时间也很短，一般在3个小时以内，同时获得的层析分离峰也更小。

SEC进行蛋白纯化的优点：（1）可进行缓冲液交换和脱盐；（2）可分离其他纯化技术难以分离的相似品种（如蛋白片段和低聚物）；（3）可与多种溶剂相容；（4）不依赖于蛋白质的任何一种特殊形式进行保留和洗脱。

生物制品表征纯度分析（CE-SDS、SDS-PAGE、SEC、RP等）示意图。

百泰派克生物科技（BTP）采用ISO9001认证质量控制体系管理实验室，获国家CNAS实验室认可，为客户提供符合全球药政法规的药物质量研究服务。

抗体偶联药物（ADCs）分析抗体偶联药物（Antibody-Drug Conjugates，ADCs）是一类由单克隆抗体和具有强效细胞毒性的小分子药物通过生物活性连接子偶联而成的新型生物药物。

其药物作用机理为通过单克隆抗体特异导向靶标癌细胞，再由偶联的小分子药物杀死癌细胞。

因此，ADC兼具了单克隆抗体药物高度特异性和靶向性的特点，以及小分子药物清除癌细胞的高效性，能协同发挥抗体药物和化学药物各自的优点，能够降低对生物系统的伤害。

常用的抗体偶联药物的制备是通过两步偶联反应，先将抗体与偶联剂（linker）结合形成中间体（抗体-linker），然后中间体再与小分子药物连接生成抗体偶联药物，如下图所示。

抗体偶联药物ADCs两步反应。

在反应过程中可能会出现以下几个问题：1, 部分抗体和小分子药物不能成功偶联；2, 抗体中存在多个结合位点（Cys, Lys 残基等），结合部位以及结合数量的不同会导致不均一性；3, 由于小分子药物的疏水性更高，与单抗结合数量的不同可能导致ADC药物的疏水性发生变化等问题。

这些未偶联的裸抗和具有细胞毒性的小分子以及偶联药物的不均一性可能会对ADC药物的药效、安全性产生影响。

相比单克隆抗体，ADCs药物的生产工艺更为复杂，因此为了保证ADCs药物的安全性和有效性，需对ADCs药物的质量进行监控。

药物抗体比（drug to antibody ratio，以下简称DAR）是评价ADCs药物的生产工艺和产品质量的重要参数之一。

因此，在ADC申报前对于ADC药物结构、DAR、药效、安全性的全面评估是至关重要的。

百泰派克拥有多种先进色谱质谱分析仪器，结合专业生物信息学分析团队，能快速、准确的为您提供专业系统的抗体偶联药物分析评定服务。

检测平台• MALDI-TOF质谱。

• ESI-TOF质谱。

• UV/VIS光谱。

• UV-MALDI质谱。

• 反相高效液相色谱 (RP-HPLC)。

• 亲水相互作用色谱 (HILIC)。

Nanobody—小型抗体药物研究分析随着生物技术的发展，抗体药物作为一种新型生物大分子药物已经成为医学研究和临床应用领域中备受关注的热点。

抗体药物可以具有较高的特异性、亲和力和生物活性，但同时也存在一些不足之处，如生产成本高、体内稳定性差等问题。

在这样的背景下，一种新型的抗体药物——Nanobody受到了人们的广泛关注。

一、 Nanobody的产生和特点Nanobody是一种由骆驼或者鲨鱼等动物产生的单域抗体，它的结构基本上是抗体分子中的一小部分，仅包含一个悬臂肽（variable domain）和两个固臂肽（constant domains）。

Nanobody结构相对于传统的完整的抗体来说更为简单，其分子量大大降低，只有15kDa左右，同时具有高度的亲和力和特异性，具有较强的治疗潜力。

Nanobody除了结构简单外，还可以抵抗高温、酸碱性等环境影响，具有很好的稳定性，使其在生产和使用中具有很大的优势。

二、 Nanobody的制备方法1. 马铃薯病毒系统采用马铃薯病毒系统可以轻松构建表达Nanobody的植物体系，并且能够在较短时间内进行大规模生产。

该方法生产的Nanobody相对纯度较高，不含有毒性物质，因此更加安全可靠。

2. 细胞外囊泡技术该技术是将人工合成的mRNA与人工合成的脂质体乳化合并后形成细胞外囊泡，再利用此囊泡转染到目标细胞中，达到表达Nanobody的目的。

该方法生产的Nanobody可以免受感染病毒等外源性污染，同时还具有很高的稳定性和纯度，可大规模生产。

三、 Nanobody在临床应用中的研究进展1. 作为肿瘤诊断剂近年来，Nanobody作为一种新的肿瘤诊断剂已经开始受到广泛应用，其亲和力强、特异性高等特点可以帮助医生们快速而准确地诊断肿瘤，同时还可以在一定程度上预测药物治疗的效果和癌细胞的转移风险等。

2. 用于病毒感染治疗Nanobody可以通过与病毒基质蛋白的结合来抑制病毒的复制、传播和入侵等活动，从而预防和治疗病毒感染症。

《抗体药物分析》抗体药物分析是一种对抗体药物进行分析和评估的技术和方法。

抗体药物是一种新型的生物制剂，广泛应用于医学和生物技术领域。

抗体药物具有较好的靶向性和特异性，能够有效识别和结合特定的抗原分子，从而发挥药理活性。

抗体药物的分析和评估是保证其质量和安全性的重要环节。

抗体药物的分析需考虑以下几个方面：1.抗体药物的结构分析：抗体药物由上、下两个重链及上、下两个轻链构成，其结构特点包括氨基酸序列、二次结构、立体结构等。

结构分析可以通过质谱技术、核磁共振技术等方法进行。

2.抗体药物的纯化和富集：抗体药物通常是在表达系统中进行大量制备的，其中可能会有其他蛋白质和杂质的存在。

因此，需要进行纯化和富集步骤，以去除杂质，提高抗体药物的纯度。

3.抗体药物的定量分析：抗体药物的定量分析可通过生物学活性测定、蛋白质含量测定等方法进行。

生物学活性测定包括细胞毒性测定、中和活性测定等，可以评估抗体药物的生物活性。

4.抗体药物的稳定性分析：抗体药物在贮存和运输过程中可能会受到温度、光照、PH值等因素的影响，导致其稳定性降低。

稳定性分析可以通过紫外光谱、荧光光谱等方法进行，以评估抗体药物在不同条件下的稳定性。

5.抗体药物的免疫原性分析：抗体药物在体内可能会引起免疫反应，产生抗药物抗体，从而影响疗效。

免疫原性分析通过免疫学检测方法，如ELISA、免疫组化等，评估抗体药物的免疫原性。

6.抗体药物的药代动力学和药效学分析：抗体药物在体内的药代动力学参数包括吸收、分布、代谢、排泄等，药效学分析则包括药物对靶标的亲和力、半衰期、药物-药物相互作用等。

7.抗体药物的质量控制：抗体药物的质量控制是确保其质量和安全性的重要环节。

质量控制包括生产过程的监控、关键步骤的验证、批记录和相关文件的管理等。

此外，还需要对批生产药物进行质量检验和稳定性测试，确保其符合标准要求。

总之，抗体药物分析是对抗体药物进行全面评估和质量控制的关键环节。

通过对抗体药物的结构、纯化和富集、定量分析、稳定性分析、免疫原性分析、药代动力学和药效学分析等多方面的研究，可以为抗体药物在疾病治疗和生物技术领域的应用提供有力支撑。