厌氧培养的规范化操作

一、操作室厌氧环境形成1.按使用要求放置好必要的配件和器具，并向操作室内放入二个无毒塑料袋。

2.通电源开照明灯，开控温仪，调节所需温度及安全温度。

3.操作室内放入1000g钯粒（封闭）和500g干燥剂,并放入美兰指示剂（封闭）。

4.关紧取样室内外门，并抽真空校验。

5.操作室内第一次置换（氮气置换）：（1）先用橡皮管插入操作室内进气口，另一头插入塑料袋。

（2）接通氮气进气路，打开氮气控制阀，使二只塑料袋充足氮气，然后扎紧袋口。

（3）把乳胶手套套在观察板法兰圈上并扎紧。

（4）把塑料袋内氮气渐渐地放于操作室内，至全部放出。

6.操作室第二次置换（氮气置换）重复一次充氮过程，并注意随时用脚踏开关开闭排气。

7.操作室第三次置换（混合气体置换）：（混合气体配比为：N2:H2:CO2=85%:10%:5%）（1）调换气路打开混合气道通阀门进气，充气时要随时脚踏开关开闭排气。

（2）混合气充满塑料袋后，关掉混合气直通阀（三通阀），使混合气经过流量计输入操作并调整流量计，流量为每分钟10毫升左右。

（3）把塑料袋内混合气渐渐排于操作室内。

（4）通过三次换气后，操作室内气体含氧量已处于极微量状态。

8.操作室内打开钯粒除氧剂，接通除氧催化器电源进行催化除氧，一小时后打开美兰指示剂（美兰安瓶）观察其变色情况，不变色为操作室内达到厌氧环境。

9.开紫外线灭菌灯，室内进行灭菌处理。

灭菌时间自定。

二、菌种的置入和培养1.检查取样室内门并关紧。

2.打开取样室外门，将菌种放入取样室后即关上外门。

3.取样室充氮置换三次过程：先抽真空度500毫米汞柱（66Kpa）以上停,然后人工打开氮气阀门进气,使指针回复零位后进行下次操作。

4.如选定真空度较低就需要增加置换的次数。

5.取样室内外门开启，关紧要抽低真空度100毫米汞柱（13Kpa）检验及帮助操作。

6.厌氧培养箱需要长期连续使用的条件：（1）每天在操作室内打开美兰指示剂观察，正常情况下使用。

实验室厌氧培养箱安全操作及保养规程厌氧培养箱是生物实验室中常见的设备之一，主要用于厌氧菌的培养及研究。

为了正常使用和延长设备的使用寿命，以下是实验室厌氧培养箱的安全操作及保养规程。

安全操作规程1. 操作前的准备在使用厌氧培养箱之前，需要进行以下准备工作：•确认所需培养物种是否为厌氧菌，准备好培养基。

•检查设备本身的状态是否良好，健康检查员可以检查试验箱各项设施是否完备。

•检查设备周围是否存在易燃易爆物品。

•初次使用时，需要对设备进行漂洗，以去除尘埃和残留气味。

2. 操作中的注意事项•在开启设备前，需要先穿戴好实验室标准的防护装备，包括防护眼镜、手套、防护服等。

•在进行培养箱的开关、温度调整、操作孔等调整时，需注意谨慎，避免操作不当造成设备损坏或人身伤害。

•箱子必须保持密闭状态。

开箱门时，必须关闭悬挂于箱门位置的气密阀门（或称为快门或夹板）。

•没有室外放生管的不许加门，尤其不能实验时放门，也不要猛的关上门框。

•将相关的试验器具放入箱内时，必须保持清洁，并进行灭菌处理。

•一旦设备出现故障或异常，需立即停止使用并进行检修或更换。

3. 操作后的清洁和消毒在使用完厌氧培养箱后，需要进行以下清洁和消毒工作：•在通电操作之后，要半小时内将箱子内的所有设备清洗干净，并进行消毒处理。

•废物必须被清理干净，卫生条件必须维持好。

保养规程1. 日常保养•每天使用设备前，需检查电气线路、温湿度控制系统、气密系统和检查孔等设备并进行维护。

•在设备运行期间，需定期检查箱内情况，以确保设备正常运行。

•使用过程中不可将物品挡住气密门，以免影响设备通风。

•定期进行设备清洁、维修、消毒等工作。

•每周对排气管进行灭菌处理。

2. 长期保养•长时间停用设备时，需将设备内外清洁干净，并进行消毒处理。

•长期不运行，应当关闭电源，切断电气线路，确保设备安全。

•定期清洗设备内部附着物，同样也要注意清洗设备周围地面的卫生。

•定期更换气密阀门、氧气检测仪等易损件，以保证设备正常运行。

型厌氧培养系统使用操作SOP操作对象：型厌氧培养系统操作目的：了解型厌氧细菌的培养条件，进行型厌氧细菌的培养器材和试剂：1.型厌氧培养系统（包括培养箱、培养瓶、培养培养皿等）2.培养基（含有适宜细菌生长的碳源、氮源等）步骤：1.准备工作(1)检查型厌氧培养系统的清洁程度，并进行必要的清洗消毒。

(2)准备培养基，根据需要选择合适的培养基。

(3)将培养基分装到培养瓶或培养皿中，并进行高温高压灭菌处理。

2.细菌接种(1)将需要培养的型厌氧细菌转移到已经准备好的培养基中。

(2)需要注意的是，在型厌氧条件下进行细菌接种，避免接触到氧气。

3.装置培养箱(1)将培养皿或培养瓶等放置到型厌氧培养箱中。

(2)确保培养箱的温度、湿度等参数符合细菌生长的要求。

根据具体需要，通常将培养箱设置为恒温、恒湿状态。

4.培养细菌(1)关闭型厌氧培养箱的门，并设置好相应的气体进出口和压力调节装置。

(2)将培养箱的压力控制在需要的水平，以保证培养过程中的正常气体交换。

(3)根据具体需要，设定培养箱的温度和湿度，通常在37°C和60-70%湿度的条件下进行型厌氧细菌的培养。

5.培养时间和后续处理(1)根据实验设计或需求，培养一定的时间。

一般来说，培养时间的长度与型厌氧细菌的生长速度有关，通常在12-48小时之间。

(2)培养结束后，根据实验需求，可以对培养的型厌氧细菌进行进一步的处理，如取样、分离纯化等。

注意事项：1.型厌氧细菌的培养需在无氧环境下进行，保持培养箱内的氧气含量尽量低。

2.关闭培养箱门时，要确保气体进出口通畅，避免压力过高或过低。

3.培养箱内的温湿度要经常检查，以确保符合细菌生长的要求。

4.培养结束后，要及时清洗消毒培养系统，避免细菌污染。

5.操作过程中要遵守无菌操作规范，确保实验结果的准确性。

厌氧菌培养标本处理标准操作程序1 检验目的检测是否为厌氧菌感染。

2 原始样本要求各类标本。

3 采样容器厌氧菌运送培养拭子、血培养瓶。

4 试剂革兰染液、厌氧发生袋。

5 检验程序5.1 标本采集标本应从正常无菌部位或通过严格无菌技术采集，血液、无菌体液及通过外科无菌手术抽出的脓液等，与常规方法相同。

肺部分泌物可经气管在环甲膜平面以下抽取，或用纤维支气管镜，将取样刷剪下，可放入运送培养基或床边接种。

已破溃脓肿，用无菌拭子擦去表面脓液，取深部分泌物。

5.2 标本运送和处理a) 血、脑脊液和腹水标本可注入厌氧血培养瓶，在血培养仪中直接进行培养。

b) 如临床有要求，也可床边接种。

不能床边接种的标本，用运送培养基送检。

c) 标本送达实验室后，立即接种相应培养基，放入厌氧袋内进行培养，同时应放入氧消耗剂和厌氧指示卡，迅速密封培养。

5.3. 阳性处理若怀疑有厌氧菌生长，将接种于厌氧袋内的血琼脂平板上的菌落或生长于硫乙醇酸钠肉汤管底的菌或厌氧瓶内的菌涂片后革兰染色，初步分成革兰阴性球菌、革兰阴性杆菌、革兰阳性球菌和革兰阳性杆菌。

5.4 耐氧试验厌氧环境培养 48 小时后，将可疑菌接种于两个血平板，分别放入有氧、无氧环境中培养 48 小时，如都能生长为兼性厌氧菌；如有氧环境不生长，而在无氧环境生长则为专性厌氧菌。

5.5 初步分群5.5.1 菌落形态对菌落的大小、形态、颜色、有无斑点、透明与否、是否为黏液样菌落进行分类。

5.5.2 色素产黑素拟杆菌-不解糖拟杆菌群孵育 2～10 天可产生黄褐色至黑色色素；龋齿放线菌在室温孵育 3～4 天后产生粉红色菌落；内氏放线菌延长孵育时间可产生黄褐色色素。

5.5.3 溶血产气荚膜梭菌在血平板上形成双溶血环，许多梭杆菌在空气中暴露30min 后菌落周围变绿色。

5.5.4 荧光产黑素拟杆菌、不解糖拟杆菌或韦荣球菌发生红色荧光，梭杆菌常发生黄绿色荧光，艰难梭菌发生绿色荧光。

5.5.5 触酶厌氧革兰阴性杆菌中大部分脆弱拟杆菌、多形拟杆菌、吉氏拟杆菌和腐败拟杆菌触酶阳性；梭菌属、双歧杆菌属、乳杆菌属和消化链球菌属触酶阳性；消化球菌属中某些菌株和丙酸杆菌触酶阳性，真杆菌亦可能为阳性。

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厌氧培养盒操作方法
厌氧培养是一种微生物培养的方法，可以在无氧或低氧条件下培养厌氧生物。

厌氧培养盒是用来创建无氧环境的装置。

下面是厌氧培养盒的操作方法：
1. 准备培养基：选择适合目标微生物生长的培养基，并按照说明书的指导配制。

2. 准备厌氧培养盒：确保培养盒是干净且无菌的。

关闭所有通风孔。

3. 装填培养基：将配制好的培养基注入培养盒中，通常注入量为容器体积的一半。

4. 添加无菌指示剂：将培养盒内的无菌指示剂加入培养基中，以便观察培养盒内是否已经形成无氧环境。

指示剂的颜色会显示氧气的存在与否。

5. 拒氧剂处理：根据需要，可以向培养盒中加入一些拒氧剂，如抗氧化剂、还原剂等，以帮助维持无氧环境。

6. 密封培养盒：盖上培养盒的盖子，并用胶带或其他密封物将盖子与底部固定在一起，确保无氧环境不会受到外界氧气的污染。

7. 培养：将培养盒放入恒温培养箱或其他适当的培养设备中，并设置合适的温度和时间，以促进微生物的生长。

8. 观察和分析：根据需要，可以定期观察培养盒内的微生物生长情况，并进行相关分析和实验。

注意事项：
- 在进行厌氧培养之前，必须确保所有操作和材料都是无菌的，以避免外源性的氧气污染。

- 在打开培养盒之前，应先将其放置在氧气含量低的环境中，以避免无氧环境受到污染。

- 厌氧培养需要一定的技术和经验，以确保微生物在无氧环境下的正常生长。

所以最好在专门的实验室或设施中进行这种培养。

厌氧菌的培养方法厌氧菌是一类不能在氧气存在下生长和繁殖的微生物。

这些微生物在许多领域都具有重要的应用价值，包括环境保护、生物能源生产等。

因此，为了研究和应用这些厌氧菌，科学家们发展了多种厌氧菌的培养方法。

本文将详细介绍常用的三种厌氧菌的培养方法。

一、利用情境气氛培养厌氧菌情境气氛培养是培养厌氧菌的一种常用方法，其原理是通过调节培养基的气氛来控制氧气浓度。

在培养厌氧菌时，一般会采用以下方法之一来制备情境气氛。

1.预氧化法：将培养容器密封，置于28-37°C的恒温灭菌箱中。

然后通过注入一定比例的高纯度二氧化碳-氧气混合气体，使容器内的气氛变为厌氧情境。

这种方法适用于厌氧菌培养基中氧气浓度较低的情况。

2.双液低压法：将培养基分成两个相隔的容器，分别加入不同的培养液。

然后将两个容器封口并贴膜，用胶带封好。

经过一段时间后，在密封的容器内会形成低压情境。

这种方法适用于厌氧菌培养基中氧气浓度较高的情况。

通过以上两种情境气氛培养方法，可以模拟出适合厌氧菌生长的条件。

二、利用厌氧培养器培养厌氧菌厌氧培养器是一种专门用于培养厌氧菌的装置，其原理是通过封闭式容器和气氛控制系统，实现在厌氧情境下的培养。

常用的厌氧培养器有以下两种类型：1.商用厌氧培养器：通常有专门的培养室和压力控制系统，可以产生适合厌氧菌生长的气氛。

在这种培养器中，可以根据菌株的特性进行相应的操作和调节。

2.自制厌氧培养器：由于商用的厌氧培养器设备较为昂贵，对于一些实验室来说并不实际。

因此，一些实验室会开发自己的厌氧培养器。

自制培养器的原理和商用培养器类似，只是在设计和制作上有所差异。

利用厌氧培养器进行培养时，需要注意以下几点：1.气氛控制：厌氧培养器应能够调节培养基的气氛，包括氮气、二氧化碳等气体的供应和排除。

2.温度调节：厌氧培养器应能够保持恒定的培养温度，一般为28-37°C。

3.培养基搅拌：适当的培养基搅拌可以增加氧气的溶解度，并促进菌体的生长和分散。

厌氧菌培养操作规程第一部分 标本采集和运送有厌氧菌感染指征时，需进行微生物学诊断。

而标本的采集和运送是否合格，对厌氧菌检验结果影响很大。

要求标本绝对不能被正常菌群所污染。

采集时尽量避免接触空气。

临床在进行厌氧菌培养前还应与实验室联系，做好接种培养的准备，进行床边接种或采用输送培养基。

一、标本采集标本应从正常无菌部位或通过严格无菌技术采集，血液、胸腔液、腹腔液、心包液、关节液、胆汁、脑脊液及通过外科无菌手术抽出的脓液等，与常规方法相同。

用特殊技术或方法采取的标本，采集部位与方法如下：1、肺部 肺部分泌物可经气管在环甲膜平面以下抽取，或用纤维支气管镜。

带有保护取样刷不被正常菌群污染的套管。

将取样刷剪下。

可放入运送培养基或床边直接接种。

2、胸腔 直接胸腔穿刺。

3、尿道 耻骨联合上方经皮肤穿刺膀胱抽尿。

4、脓肿 封闭性脓肿用无菌空针抽取。

如已破溃，用无菌棉拭子擦去表面脓液。

取深部分泌物。

5、女性生殖道 消毒阴道从后穹隆穿刺，取脓液。

若取子宫分泌物则用无菌导管抽取，导管外套以一个保护膜套管，插入子宫后才戳穿保护膜套管，在子宫内取标本。

6、窦道或深部伤口 用空针连着导管，尽可能深入抽取。

伤口底部、边缘和窦道壁上刮下来的组织也是很好的标本，更能反映感染的细菌。

若标本量太少，可适当加少量无菌盐水，冲洗后再吸出。

7、血液标本 毛囊和皮脂腺深部的丙酸杆菌易造成污染。

用碘酊消毒后必须等一定时间，不要立即抽血。

其它注意事项：必须通过用于厌氧菌正常栖居地才能取到的标本，如痰、支气管镜采样（无特殊保护套）、咽拭子、排出的尿及阴道拭子不能做厌氧菌培养，粪便标本厌氧菌培养．只能做难辨梭菌及肉毒杆菌的培养。

在无条件床边采样时，尽快将空针中的气体排尽，用消毒空针抽取厌氧培养标本，将针头插入无菌像皮塞。

必须用棉拭子采集的标本．可立即做床旁接种或插入运送培养基中送细菌室培养二、标本运送1、标本送入厌氧运送装置后，应尽快送到实验室，最迟不超过6小时。

厌氧培养箱的使用说明一、安全操作要点：1.在使用过程中，务必佩戴实验手套和护目镜，确保实验安全。

2.应在通风良好的实验室中进行操作，以确保无氧箱内外温度和湿度的稳定。

二、仪器准备：1.检查无氧培养箱的电源和电源线是否正常，确认无氧箱可以正常工作。

2.准备好培养箱内所需的培养基、培养物和培养器具。

3.先通过灭菌处理，确保所用的培养物、培养基和培养器具是无菌的。

三、操作步骤：1.打开无氧培养箱的盖子，将培养物、培养基和培养器具放入合适的位置。

注意避免过度拥挤，以确保空气的流通。

2.关闭无氧培养箱的盖子，并确保盖子完全密封，防止氧气进入。

3.打开无氧培养箱的气阀，将其连接到一个高纯度的气源上。

通过控制气阀，可以调整无氧箱内的气氛组成。

4.打开无氧培养箱的温度控制开关，并将温度设定为所需的温度。

5.打开无氧培养箱的湿度控制开关，并将湿度设定为所需的湿度。

6.打开无氧培养箱的压力控制开关，并将压力设定为所需的压力。

确保无氧箱内保持正常的压力。

7.打开无氧培养箱的计时器，设置所需的培养时间。

四、注意事项：1.在进行培养之前，务必清洁无氧培养箱内部，并确保无氧箱内没有任何可能影响实验结果的异物。

2.监控无氧培养箱内的温度、湿度和压力，并根据需要进行调整。

3.如果发现无氧培养箱内有漏气情况，应立即停止使用，并检查气源连接是否正常，如有问题应及时修理。

4.在使用过程中，应定期检查无氧箱的温度计、湿度计和压力计的准确性，并进行校准。

5.使用后应及时清理无氧培养箱，并妥善保养，以延长其使用寿命。

6.使用前，应仔细阅读无氧培养箱的操作说明书，并按照要求进行操作。

通过以上的使用说明，您可以更加安全和有效地使用厌氧培养箱。

但需要注意的是，不同型号的厌氧培养箱可能存在一些细微的差异，请在使用前仔细阅读相应的操作说明书，以避免操作不当导致的问题。

DG250厌氧培养箱操作说明
1.检查设备
在操作之前，首先要检查设备是否处于正常状态。

检查电源线、厌氧槽、传感器、显示屏等设备是否有异常现象。

2.准备工作
将培养物和培养所需的培养基准备好。

根据实验需求，选择适当的培养基。

将培养基瓶或培养皿放入培养箱中。

3.打开培养箱
按下电源开关，打开培养箱。

在显示屏上，可以看到温度、湿度和厌氧状态的参数。

4.调节培养环境
通过面板上的按钮或旋钮，输入需要的培养温度和湿度。

厌氧状态可通过调节控制面板上的指示灯来实现。

通常情况下，将指示灯调至"ON"，即可进入厌氧状态。

5.放入培养物
将准备好的培养物放入培养箱中。

注意要在厌氧槽中放置试管密封装置，以确保保持厌氧状态。

6.定期观察
在培养过程中，定期观察培养物的生长情况。

可以打开培养箱的观察窗口，通过眼镜或显微镜来观察。

7.维护设备
每次使用完毕后，应进行设备的清洁和维护。

关闭电源开关，断开电源线。

用湿布擦拭仪器表面，避免水进入仪器内部。

注意不要使用酒精或其他有腐蚀性的溶剂。

8.事故处理
总之，DG250厌氧培养箱的操作相对较简单，但在使用过程中需要注意一些细节，如保持温度和湿度的稳定性，避免污染等。

正确的操作和维护可以确保培养箱的正常运行，并获得准确的实验结果。