下载文档原格式
硫酸阿托品注射液的含量测定一、实验目的1.掌握酸性染料比色法的基本原理和操作。
2.熟悉注射剂分析的基本操作技术。
3.掌握比色法的基本方法，要求和计算。
二、基本原理在适当pH (5.6)溶液中，有机碱（B）可以与氢离子结合生成阳离子（BH+），酸性染料（HIn）在此pH值下可解离成阴离子（In-），阴离子可与上述阳离子（BH+）定量地结合成有色离子对。
定量的用有机溶剂提取，在420 nm处测定该溶液中有色离子对的吸收度，并与对照品比较，即可计算出有机碱药物的含量。
实验内容1.对照品溶液的制备取在120℃干燥至恒重的硫酸阿托品对照品25 mg，精密称定，置25ml 容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取5 ml，置100 ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得，作为对照品溶液。
每1 ml溶液中含无水硫酸阿托品50 μg。
2. 供试品溶液的制备精密量取硫酸阿托品适量（约相当于硫酸阿托品2.5 mg），至50 ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
3. 硫酸阿托品的含量测定精密量取对照品溶液与供试品溶液各2 ml，分别置预先精密加入氯仿10 ml的分液漏斗中，各加溴甲酚绿溶液2 ml，振摇提取2 min后，静置使分层，分取澄清的氯仿液（以水2 ml同法平行操作所得的氯仿液为空白）于420 nm的波长处分别测定吸收度，并将结果与1.027相乘，即得。
本品含硫酸阿托品应为标示量的90.0%~110.0%。
四、说明1. 溴甲酚绿溶液的制备：取溴甲酚绿50 mg与邻苯二甲酸氢钾1.021 g，加氢氧化钠液（0.2mol/L）5 ml使溶解，再加水稀释至100ml，摇匀，必要时滤过。
2.本实验采用酸性染料比色法测定硫酸阿托品含量，实验中应严格控制水相pH并保证离子对化合物能定量提取进入氯仿层。
3.振摇提取时既要能定量地将离子对化合物提入氯仿层，又要防止乳化和少量水份不混入氯仿层，因此，需小心充分振摇。
硫酸阿托品有关物质液相方法研究摘要：目的建立硫酸阿托品注射液有关物质方法方法采用高效液相色谱法，色谱柱为YMC-C18柱（4.6*10mm，3um），流动相A：水相（3.5g十二烷基硫酸钠+7g磷酸二氢钾溶于1800ml水中，用磷酸调节pH至3.3）-乙腈（180：96）；流动相B：乙腈。
检测波长210nm，流速1.0ml/min，柱温30℃。
结果各杂质峰与主峰能有效分离，杂质A与杂质C的线性较好（R?均为1），回收率分别为98.81%，97.72%。
结论建立的高效液相色谱法快速、准确、专属性强，可用于硫酸阿托品注射液有关物质检查。
关键词：硫酸阿托品；液相色谱；有关物质1.仪器与试剂1.1 仪器Agilent1260，PHS-3C精密PH计，METTLER TOLEDO XS105天平1.2 色谱柱根据EP标准中所定，本实验选用YMC C18（3μm，4.6×10mm）为试验用柱。
1.3 试剂乙腈（Merck色谱纯），磷酸二氢钾（西陇化工股份有限公司），十二烷基硫酸钠（AR，湖南尔康制药股份有限公司），磷酸（无锡市佳妮化工有限公司，批号20130701），水为纯化水经0.45um滤膜抽滤，盐酸（上海三鹰化学试剂有限公司），氢氧化钠（上海三鹰化学试剂有限公司）。
2.方法与结果2.1方法确定2.1.1色谱柱选择根据EP硫酸阿托品原料项下标准，以十八烷基硅烷键合硅胶（4.6mm）作为填充剂。
2.1.2流动相配制流动相A：水相（3.5g十二烷基硫酸钠+7g磷酸二氢钾溶于1800ml水中，用磷酸调节pH至3.3）-乙腈（180：96）；流动相B：乙腈时间流动相A 流动相B0-2 95 52-20 95→705→302.1.3波长以及进样量选择根据EP硫酸阿托品标准中方法，选用210nm作为检测波长，进样量为10ul。
2.1.4对照溶液（系统适用性）配制取本品适量，加流动相A溶解并稀释制成每1ml中约含硫酸阿托品0.24mg的溶液，作为供试品溶液；称取约2.5mg阿托品有关物质B对照品，置于10ml容量瓶中，用供试液溶解并稀释至刻度，移取5ml此溶液，置于25ml容量瓶中，用流动相A稀释至刻度，即得。
硫酸阿托品Liusuan Atuopin Atropine SulfateH O OH2H2SO4 H2O(C17H23NO3)2`H2SO4`H2O 694.84本品为（±）α-（羟甲基）苯乙酸8-甲基-8- 氮杂双环[3.2.1]-3-辛酯硫酸盐一水合物。
按干燥品计算，含(C17H23NO3)2·H2SO4不得少于98.5％。
【性状】本品为无色结晶或白色结晶性粉末；无臭。
本品在水中极易溶解，在乙醇中易溶。
熔点取本品，在120℃干燥3小时后，立即依法测定（附录ⅥC），熔点不得低于189℃，熔融时同时分解。
【鉴别】(1)本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集487图）一致。
原理：从红外吸收光谱中可以获得硫酸阿托品吸收光谱的形状，吸收峰波数的位置、吸收相对强度等信息，这些信息均可以用于鉴别。
若供试品德光谱图与对照光谱图一致，通常可判定两化合物为同一物质。
(2)本品显托烷生物碱类的鉴别反应（附录Ⅲ）。
原理：托烷类生物碱的酯键易水解生成莨菪酸。
莨菪酸与发烟硝酸共热得黄色的莨菪酸三硝基衍生物，冷后，加醇制氢氧化钾溶液或固体氢氧化钾作用转变成醌型产物，呈深紫色。
(3)本品的水溶液显硫酸盐的鉴别反应（附录Ⅲ）。
原理：①取供试品溶液，滴加氯化钡试液，即生成BaSO4的白色沉淀；分离，沉淀在盐酸或硝酸中均不溶解。
②取供试品溶液，滴加醋酸铅试液，即生成PbSO4的白色沉淀；分离，沉淀在醋酸铵试液或氢氧化钠试液中溶解。
③取供试品溶液，加盐酸，不生成白色沉淀（与硫代硫酸盐区别）。
【检查】酸度取本品0.5g，加水10ml溶解后，加甲基红指示液1 滴，如显红色，加氢氧化钠滴定液(0.02mol/L) 0.15ml ，应变为黄色。
原理：阿托品为弱碱性物质，与硫酸（强酸）成盐，即为强酸弱碱盐，故水溶液显酸性，所以加入甲基红后显红色；滴加氢氧化钠滴定液，中和掉了硫酸，使得阿托品游离出来，此时溶液显碱性，所以甲基红变为黄色。
一、实验目的1. 了解硫酸阿托品的性质和用途；2. 掌握硫酸阿托品在实验中的用量和配制方法；3. 通过实验，验证硫酸阿托品在不同条件下的药效。
二、实验原理硫酸阿托品是一种抗胆碱药，主要作用是阻断乙酰胆碱受体，使副交感神经功能减弱，从而产生扩瞳、调节麻痹、抑制腺体分泌等作用。
本实验通过观察硫酸阿托品在不同条件下的药效，验证其药理作用。
三、实验仪器与试剂1. 仪器：电子天平、移液管、滴定管、烧杯、试管、试管架、酒精灯、加热器、温度计等；2. 试剂：硫酸阿托品、氢氧化钠溶液、酚酞指示剂、蒸馏水等。
四、实验步骤1. 硫酸阿托品标准溶液的配制：a. 称取一定量的硫酸阿托品，准确至0.0001g；b. 将称取的硫酸阿托品溶解于少量蒸馏水中，转移至100ml容量瓶中；c. 用蒸馏水定容至刻度，摇匀；d. 配制浓度为1mg/ml的硫酸阿托品标准溶液。
2. 硫酸阿托品药效实验：a. 将实验分为三组，每组设置5个试管；b. 分别向三个试管中加入1ml的硫酸阿托品标准溶液，另两个试管作为对照组，加入1ml蒸馏水；c. 向每个试管中加入2ml的氢氧化钠溶液，观察并记录溶液颜色变化；d. 向每个试管中加入1滴酚酞指示剂，观察并记录溶液颜色变化；e. 分别对三个试管进行加热，观察并记录溶液颜色变化；f. 记录实验数据。
五、实验数据及结果1. 硫酸阿托品标准溶液的配制：1mg/ml；2. 硫酸阿托品药效实验数据：| 组别 | 加入硫酸阿托品 | 加入氢氧化钠溶液 | 加入酚酞指示剂 | 加热 || ---- | -------------- | ----------------- | ---------------- | ---- || 1 | + | + | + | + || 2 | + | + | + | + || 3 | + | + | + | + || 4 | - | + | + | + || 5 | - | + | + | + |结果：加入硫酸阿托品的三个试管溶液颜色变化明显，对照组溶液颜色变化不明显。
科研计划书题目：硫酸阿托品对家兔瞳孔、胃肠道、腺体、胆囊以及心脏的作用研究一统计设计1.明确研究目的和研究假说目的：探究硫酸阿托品对胃肠道的影响，探讨硫酸阿托品对家兔瞳孔的扩散作用，探究硫酸阿托品解除迷走神经对心脏的抑制，探究硫酸阿托品是如何解除胃肠道痉挛的。
研究假说：硫酸阿托品是抗胆碱药物用于胃肠道、胆绞痛，散瞳检查验光，角膜炎，有机磷农药中毒等的治疗2.确定研究对象与观察数量、样本含量和抽样的办法研究对象：家兔样本含量：6只抽样办法：随机抽样3.观察指标体重，尿量，瞳孔的大小，饮食量，排便量以及家兔的状态（心率、活动能力、身体状态）4.需要收集哪些原始的资料，又采用什么办法所以的相关资料都需要收集并纪录下来，可以用过尺子测量称重心电图器肉眼观察以及精密仪器测量后得到。
5.如何对资料作进一步的整理和分析通过家兔的瞳孔大小尿量排便量体重心率等作出表格，以注射不同含量的阿托品为变量，再对体重相差不多的家兔状态以及上述情况进行分析整理，观察各组内各指标的情况计算并统计指标。
6.如何控制误差？研究员分成至少3组分别对18只家兔进行研究实验，参与实验的研究人员都经过统一的培训;各个指标在每个样本中进行重复测量3次;所有分组的药品要规格统一一致。
7.预期会得到什么结果：阿托品是一种抗胆碱药物是M受体阻断剂，它可与乙酰胆碱竞争副交感神经节后纤维突触后膜的乙酰胆碱M-受体，抑制了家兔腺体分泌：导致家兔瞳孔扩大、调节睫状肌痉挛、解除肠胃和支气管等平滑肌痉挛。
8.研究进度研究进度：2020.9 -2020-9 查阅文献资料、整理提出问题2020.9 -2020-9 开展实验2020.9 -2020-9 整理实验数据，开始论文写作2020.9 -2020-9 完成论文二、收集资料阿托品是经典的M胆碱受体阻断药，具有散瞳、解痉、抑制腺体分泌等作用，对心血管系统亦有一定影响。
在临床上，阿托品可于胆囊手术前给药以预防胆心反射，稳定心率及血压[1-2]。
陈向丹，徐军，丁阳，等.兽用硫酸阿托品注射液含量测定方法的优化［J ］.中南农业科技，2024，45（1）：40-42．硫酸阿托品（Atropine sulfate ）是抗胆碱药，主要用于有机磷酸酯类药物中毒、麻醉前给药和拮抗胆碱神经兴奋症状。
其注射液含量常用测定方法是溴甲酚绿酸性染料比色法［1］，该方法萃取过程中三氯甲烷易发生乳化，分层效果较差，三氯甲烷层易出现浑浊现象，且水层易黏附在分液漏斗底部，随三氯甲烷一同放出造成比色皿污染，影响吸收度测定结果。
溴甲酚绿酸性染料比色法专属性不强，操作繁琐，重现性和精密度对于经验不丰富的新检测人员来说均不易达标；原标准采用的提取后的紫外分光光度法，提取过程中使用的三氯甲烷为易致毒试剂，采购与使用管理严格，且毒性较大，对人员及环境存在一定的安全隐患［2］。
为了更好地控制产品质量的同时最大限度保护检验人员及环境，本研究建立了以反相高效液相色谱法测定硫酸阿托品溶液中硫酸阿托品含量的方法［3-10］，为该药的质量控制提供新方法。
1材料与方法1.1仪器与试剂安捷伦1260Ⅱ型高效液相色谱仪；Agilent Po⁃roshell 120Ec-C18色谱柱，4.6mm×150mm （i.d.），粒径4μm ；资生堂MG Ⅱ型C18色谱柱，4.6mm×150mm （i.d.），粒径3μm ；Waters SymmetryShieldRP18色谱柱，4.6mm×250mm （i.d.），粒径5μm ；Met⁃tler AE240型电子天平；PHS-3C 型酸度计（上海精密科学仪器有限公司）；MILIPORE 超纯水处理器等。
硫酸阿托品对照品［①含量98.3%（坛墨质检科技股份有限公司，批号2471910）；②含量98.3%（广州佳途科技股份有限公司，批号0702-RB-0001）］；甲醇、乙腈，均为色谱纯（美国TEDIA 公司）；水为二次纯化水。
1 第一部分制药工艺学实验实验一溶液型液体药剂的制备一、目的和要求 1掌握溶液型液体药剂的基本制备方法。
2掌握制备液体药剂常用称量器具的正确使用方法。
二基本概念和实验原理溶液型液体药剂是药物以分子或离子状态质子小于1nm分散在分散媒溶剂中的真溶液供内服或外用。
溶液型药剂外观均匀、澄明。
常用溶媒为水、乙醇、丙二醇、甘油及脂肪油等。
属于溶液型液体药剂的有溶液剂、芳香水剂、甘油剂、醑剂和糖浆剂等。
溶液剂的制备方法有溶解法、稀释法和化学反应法。
一般制备过程为称量→溶解→混合→过滤→加溶媒至全量→检查→包装→标签。
三、实验内容复方碘溶液卢戈氏溶液 1处方碘 1g 碘化钾2g 蒸馏水加至30ml 2制法取碘化钾置容器内加适量蒸馏水搅拌使溶解加入碘搅拌溶解后加蒸馏水至全量即得。
3用途调节甲状腺机能用于缺碘引起的疾病如甲状腺肿、甲亢等的辅助治疗。
每次0.1-0.5ml饭前用水稀释5-10倍后服用一日3次。
四、实验指导一预习要求 1熟悉溶液型液体药剂的常用溶媒及特点。
2了解增加药物溶解度的方法。
2 3熟悉液体药剂常用的防腐剂及其性质。
4参考实验讲义及操作要点写出实验步骤。
二操作要点和注意事项 1溶液型液体药剂的制备通则 1液体药物通常以容量计量常用ml或L表示。
固体药物用称量以g或kg表示。
以液滴记数的药物要用标准滴管标准滴管在20时1ml蒸馏水应为20滴其重量误差应在0.90-1.10g之间。
2药物称量时一般按处方顺序进行。
有时亦需要变更例如麻醉药应最后称取并进行核对和登记用具。
量取液体药物后应用少量蒸馏水荡洗量具洗液合并于容器中以避免药物的损失。
3处方组分的加入次序一般先加入复溶媒、助悬剂和稳定剂等附加剂。
难溶性药物应先加入易溶药物、液体药物及挥发性药物后加入。
酊剂特别是含油脂性药物者加到水溶液中时速度要慢且应边加边搅。
4为了加速溶解可将药物研细取处方溶媒的1/2-3/4量来溶解必要时可搅拌或加热。
药物分析鉴别方法总结一、葡萄糖注射液1、用斐林试剂（0.1 g/ml的氢氧化钠和0.05 g/ml的硫酸铜试剂）反应生成砖红色沉淀加热的条件下原理：具有醛基，醛基遇斐林试剂有砖红色沉淀生成。
2、班氏试剂：在试管中加入葡萄糖注射液0.1mL，加入班氏糖定性试剂1mL，混合均匀后，将试管放入盛有开水的烧杯中，加热煮沸1min~2min，若试管中溶液在加热后产生了砖红色沉淀，说注射液中含有葡萄糖。
3、可用溴水来鉴别葡萄糖，葡萄糖能被溴水氧化成葡萄糖酸，使溴水褪色。
原理：葡萄糖的醛基具有还原性，溴水能将其氧化，使溴水褪色。
结果：三小时后，溴水褪色。
4、分光光度法：利用分光光度计测量容易的吸光度，与标准溶液吸光度比较。
5、银镜反应：葡萄糖分子中的醛基，有还原性，能与银氨溶液反应：被氧化成葡萄糖酸。
6、比旋度测定法：原理：葡萄糖分子结构中有5个不对称碳原子，具有旋光性，为右旋体。
比旋度是旋光性物。
7、红外光谱：测量样品溶液的红外光谱，与标准溶液的红外光谱图比较。
8.薄层色谱法9.高效液相色谱法二、阿司匹林肠溶片1、三氯化铁法：本品水溶液加热放冷后，与三氯化铁溶液反应，呈紫堇色。
原理：受热分解产生水杨酸和乙酸，水杨酸的酚羟基与三氯化铁，呈紫堇色。
2、水解反应：阿司匹林与碳酸钠溶液加热水解，得水杨酸钠及醋酸钠，加过量稀硫酸酸化后，则生成白色水杨酸沉淀，并产生醋酸的臭气。
3、红外光谱法4、薄层色谱5、高效液相色谱法：在含量测定项下记录的色谱中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。
6.紫外光谱法7.核磁共振法三、维生素E软胶囊1.氧化还原法：原理：维生素E侧链上的叔碳原子易自动氧化，生成相应的羟基化合物，本品的乙醇溶液与硝酸供热，则生成生育酚，溶液显橙红色。
2、维生素E具有较强的还原性，与三氯化铁作用，被氧化成生育酚，后者与2,2'-联吡啶作用生成血红色的络合物。
3、薄层色谱法，结果供试品溶液色谱中在与对照品溶液色谱相应位置上显深蓝色的斑点，空白对照无干扰。
实验六 硫酸阿托品注射液的含量测定一、实验目的1、掌握酸性染料比色法的基本原理和操作方法。
2、掌握注射液含量测定的步骤和计算方法。
3、了解管制药品的实验注意事项二、实验原理在适当的介质中，生物碱类药物（B ）可与氢离子结合成阳离子（BH+），一些酸性染料如溴甲酚绿等可解离成阴离子（In-），上述阳离子与阴离子定量结合成的有机络合物（BH+In-），即为离子对。
用有机溶剂提取离子对，在一定波长处测定其吸收度，即可计算出生物碱药物的含量。
三、实验结果对照品吸光度：0.594 供试品吸光度：0.532标示量% =每ml 含量/标示量*100%=A 供*C 对*稀释倍数/A 对 * (1/标示量) * 1.027*100%=0.532*50*10/0.594 * (1/500) *1.027*100% =91.9%>90.0%[实验结果]符合药典规定四、注意事项1、硫酸阿托品系管制药品，实验需要多少取用多少。
实验完毕，空瓶和剩余硫酸阿托品一律交于带教老师，绝对禁止带出实验室。
2、硫酸阿托品在pH3.6时，与溴甲酚绿定量结合成有色络合物（离子对），可被氯仿定量提取，并在420nm 处呈最大吸收。
3、本实验所有溶液和试剂都应准确吸取，应遵循平行原则。
4、振摇要充分。
放置氯仿层澄明后才能分取。
分取氯仿层时，最初分得的液体1~2ml 应弃去，测定用的氯仿液必须澄清且不应掺有水珠。
5、实所用分液漏斗必须事先检漏，使用前应洗涤、干燥，活塞处应涂好凡士林。
五、问题与讨论1、酸性染料比色法测定生物碱类药物的基本原理是什么？影响测定的主要因素有哪些？ 在适当的介质中，生物碱类药物（B ）可与氢离子结合成阳离子（BH+），一些酸性染料如溴甲酚绿等可解离成阴离子（In-），上述阳离子与阴离子定量结合成的有机络合物空白对照组（水组）颜色很淡的微黄色几乎看不清。
供试组颜色深于空白对照组，但浅于对照组。
对照组颜色最深（BH+In-），即为离子对。
一、实验目的1. 了解阿托品对家兔肠平滑肌的生理作用。
2. 掌握实验操作技能，提高实验实践能力。
3. 通过实验，加深对消化系统生理功能的理解。
二、实验原理阿托品是一种M受体阻断剂，可以阻断乙酰胆碱与M受体的结合，从而抑制乙酰胆碱对平滑肌的兴奋作用。
在本实验中，通过观察阿托品对家兔肠平滑肌收缩性的影响，探讨其对消化系统生理功能的调节作用。
三、实验材料与仪器1. 实验动物：家兔（体重2-3kg）1只2. 实验仪器：手术显微镜、手术器械、生物信号采集系统、电子刺激器、生理盐水、阿托品、10%葡萄糖溶液、0.1%肾上腺素、0.1%氯化钙溶液、1%乳酸溶液、1%氯化钠溶液、0.1%硫酸铜溶液等。
四、实验步骤1. 家兔麻醉：用10%水合氯醛（3-5ml/kg体重）腹腔注射麻醉家兔，待麻醉成功后，固定家兔，剪开腹部皮肤，暴露小肠。
2. 肠平滑肌标本制备：取一段小肠，剪去两端，用生理盐水冲洗干净，然后用镊子轻轻夹住肠管，用手术刀在肠管中间切开，取出肠平滑肌标本。
3. 标本固定：将肠平滑肌标本置于生理盐水中，用镊子轻轻搅拌，使标本充分展开。
4. 实验分组：将肠平滑肌标本分为三组，每组10个标本。
- 第一组：生理盐水组，用于对照。
- 第二组：阿托品组，加入0.1mg/ml阿托品。
- 第三组：肾上腺素组，加入0.1mg/ml肾上腺素。
5. 实验操作：- 将各组标本分别置于生物信号采集系统上，连接好电极，调整好刺激参数。
- 对生理盐水组和阿托品组标本进行刺激，观察肠平滑肌的收缩情况。
- 对肾上腺素组标本进行刺激，观察肠平滑肌的收缩情况。
6. 数据记录：记录各组标本在刺激下的收缩幅度、频率和持续时间。
五、实验结果与分析1. 生理盐水组：肠平滑肌在刺激下呈现明显的收缩反应，收缩幅度较大，频率较高，持续时间较长。
2. 阿托品组：肠平滑肌在刺激下的收缩幅度、频率和持续时间均明显低于生理盐水组，说明阿托品可以抑制肠平滑肌的收缩。
