SCG蛋白纯化系统仪器介绍

AKTAavant25全自动工艺开发蛋白纯化系统1.工作条件1电力供应:单相220V±10%,50 Hz (±12工作温度:4 ℃ - 35 ℃3相对湿度:20 - 95%,没有冷凝水4仪器运行的持久性:仪器可连续正常运行。

5工作条件及安全性要求符合中国及国际有关标准或规定。

2.设备用途及功能快速纯化多种生物分子，如蛋白质、多糖、肽类、寡核甘酸、核甘酸疫苗及病毒等，适合分离纯化活性物质。

其自动化的配置尤其适合方法优化和工艺开发。

1简单迅速启动:预编应用工艺，编程模板,自动缓冲液制备。

2全自动操作:从进样、编程、分离、峰收集、准确结果比较、数据处理以至打印报告皆自动化。

3标配多种自动化配置:自动选择缓冲液、自动选择样品、自动选择柱位、自动选择收集位置和收集方式，便于方法优化和工艺开发。

4人工智能:多种缓冲液配方(内置26种配方，可自行添加,一百多根层析柱数据库,多种纯化方案，内置层析专家。

5整合专业的Design of Experiment实验设计理念，推荐实验方案，进行数据分析，模型建立，为条件优化提供系统的建议。

6高效率功能:蛋白纯化量微克级以至百毫克级。

3.技术规格1.系统泵及样品泵1.1系统泵1.1.1精确的全自动微量柱塞泵,双泵四泵头,每个泵头都有独立除气阀。

*1.1.2 流速:0.001-25ml/min1.1.3 压力范围:0-20 MPa (200bar,2900psi*1.1.4 流速重复性:条件:0.25-25 ml/min, < 3 MPa, 0.8-2 cP流速准确度:±1.2%,流速精度:RSD<0.5%1.1.5增量:1ul/min1.1.6粘度:0.35-10 cP*1.1.7具备恒压调速功能,自动根据压力调节流速输出，使压力保持稳定。

1.2样品泵1.2.1精确的全自动微量柱塞泵，单泵两泵头，每个泵头都有独立除气阀。

1.2.2流速:0.01-25ml/min1.2.3压力范围:0-10Ma (100bar,1450psi*1.2.4 流速重复性:条件:0.25-25 ml/min, < 3 MPa, 0.8-2 cP流速准确度:±2%,流速精度:RSD<0.5%1.2.5 粘度:0.7-10 cP*1.2.6样品泵有压力控制模式，确保压力不变的情况,自动调节流速II.检测器2.1紫外可见检测器2.1.1使用单一氙灯光源，紫外/可见光切换时无需换灯，无需预热。

GST bestarose 4FF说明书默认分类2010-01-18 09:32:34 阅读257 评论0 字号：大中小GST bestarose 4FF是专门用于纯化pGEX系列载体表达的GST标签蛋白，其它谷胱甘肽转移酶以及与谷胱甘肽有亲和作用蛋白的分离介质，操作简单，快速。

GST bestarose 4FF 可直接从预处理的细胞裂解物中纯化GST-tagged蛋白，纯化条件温和，可以保证蛋白的生物活性。

GST bestarose 4FF 具有高流动性，易于放大，GST bestarose 4FF有快速方便的预装柱，Ez-Fast bestarose 4FF 1ml和5ml。

介质性能谷胱甘肽是通过10碳原子的连接臂偶联到4%高度交联的琼脂糖上。

最优的偶联作用使介质具有高GST-tagged蛋白及与谷胱甘肽相互作用蛋白的结合能力。

总的蛋白结合能力约为每毫升填料结合10mg标签蛋白，动态结合能力随着外界因素改变，如不同的目标蛋白，流速等等。

如果需要去除GST部分（天然蛋白分子量为26KD），当蛋白吸附在柱上，或在洗脱后用位点专一的蛋白酶消化，选用前种方法，可减少额外分离目的蛋白与GST步骤，消化后，目的蛋白直接用结合液洗脱即可。

表1 GST bestarose 4FF性能配体谷胱甘肽与10碳原子连接臂配体浓度 120-320μmol谷胱甘肽/ml填料蛋白结合能力≈ 10mg重组GST-tagged蛋白/ml填料，GST，Mr26000动态结合能力≈11mgGST-tagged蛋白/ml填料，Mr43000平均颗粒大小90μm组成 4%高度交联的琼脂糖最大流速* 450cm/h（15ml/min），XK层析柱，柱高5cm,水溶性缓冲液，室温纯化建议的流速** 上样：＜100cm/h（＜3ml/min ，XK层析柱）洗涤与洗脱：100-300cm/h（3-10ml/min，XK层析柱）化学稳定性所有常用的水溶性缓冲液中稳定，如：1M醋酸盐，pH7.4，6M 盐酸胍，室温，1hpH稳定性 pH3-12贮存温度 +4-30℃贮存液 20%乙醇* 水是室温的。

蛋 白 质 纯 化 仪 使 用 说 明1.认识机器本机器常规流程图：使用机器前所有端口请按如图所示连接，将“A 泵溶液进口线”“B 泵溶液进口线”放进超纯水中。

按如图所示先不要连接柱子。

建议一般使用A 泵进液，如需梯度洗脱时才用B 泵。

***除上样样品（14000 rpm/12000 rpm 离心30min ）外，所有在此机器上要用的溶液必须要经过0.22 μm 滤膜过滤。

***样品泵A 泵B 泵 多波长检测器 pH 计 混合池 层析柱 切换阀进样环 溶液由A/B 泵进入仪器 进样阀层析柱切换阀多波长检测处 自动收集器 废 液 出 口A 泵溶液进口线B 泵溶液进口线 整合电导检测2.开机打开计算机、蛋白质纯化仪（电源在右侧下角）、自动收集器（电源在后面右侧）。

此时蛋白质纯化仪上部分指示灯会亮，有黄色的、有蓝色的，开机较慢，请稍等，当蛋白质纯化仪上所有指示灯不亮时，才可进行操作。

3.启动电脑“ChromLab”软件双击电脑“ChromLab”应用程序，进入如下界面：4.洗泵单击“Manual Run”进入：我们主要看右下方这块（图中所示模块均可双击设置参数）：双击“样品泵”模块出现如图所示对话框：双击“层析柱切换阀”模块如下图所示：此步骤主要是洗泵工作，请确保层析柱不在程序中，点击“Bypass ” 点击此处可让可更改溶液的流动方向。

点击1-5可设置连接不同的层析柱端口 设置流速 设置压力，小于选择的柱子承受最大压力。

在下面“控制流速以防止超压”前面打对勾，以保护柱子。

不特殊设置，默认A 泵工作此处可控制机器的运行与停止。

双击“样品泵”模块出现如下图所示：选择“System Pump Waste”模式后，轻按仪器上“A泵”的“Purge”按钮，稍等片刻，即将进行A泵的洗泵工作，此时流速将会达到最大10 mL/min。

如果想洗B泵（凝胶过滤时不需要），轻按仪器上“B 泵”的“Purge”按钮即可。

蛋白层析纯化系统FPLC：快速蛋白液相色谱（Fast protein liquid chromatography）一、操作流程：（一）开始层析实验前的准备注意：紫外灯：如果只是平衡层析柱，关闭紫外灯。

UPC-900面板旋钮逆时针旋转，进入Lamp（on），点击OK，通过旋钮选择ON或OFF。

一般在上样前15min打开紫外灯。

1、检测系统管路中是否有气泡。

若有小气泡，可以使用pump wash，以大流速冲走气泡；若有大气泡，需要用注射器手动排气。

2、打开FPLC的电源，系统立即进行自检3、打开电脑电源4、双击unicon 5.11图标，进入系统窗口。

ÄKTA层析软件有四个窗口：UNICORN Main Menu、Method Editor、System Control、Evaluation。

如使用程序运行，在Method Editor窗口里编方法设置各种参数；如使用手工运行，在System Control窗口里设置各种参数。

（1）清洗及管路准备：System Control设置参数Pump→Pump Wash 选择要冲洗的泵（Pump A和Pump B）→Execute，冲洗完成后系统自动停止，之后可进行报警压力的设置：Alarms＆Mon→Alarm_Pressure→HighAlarm，设置最高报警压力（柱压力加0.2MPa）→Execute（2）安装层析柱设置较小的流速Pump→Flow 0.5mL/min。

将层析柱接入系统：样品阀1号为的连接管有液体滴出时，将层析柱上端堵头去掉，把连接管插入，注意不要拧紧；打开下端堵头，与UV检测器上的接头连接，再把上端接头拧紧。

（拆层析柱时，先把连接UV检测器端的接头拧开，堵上堵头，在把上方连接去掉。

）（3）在Method Edit窗口中进行方法编辑（也可参照下一部分进行手动运行）进入Method Edit窗口，点击“新建方法”。

New Method→Use中选择Method Editor→OK→Prameters：Base（用于确定各个命令的开始点），可选择Time、Volume和CV（柱体积），现在按体积Volume来确定命令开始点→Insert Alarm＆Mon→Alarm_Pressure→HighAlarm（柱压力加0.2MPa）→InsertPump→Flow：1 mL/min→Insert以上设置的命令都是在0 mL的breakpoint时进行的，之后在Breakpoint中输入需要插入新命令的点（可以是时间、体积或柱体积，这里以体积为例）：5 mL，以及需要执行的命令：Flowpath→Injection Valve：Inject→Insert，以此类推，将需要执行的命令插入到相应段点中。

第26卷 第10期2019年10月仪器仪表用户INSTRUMENTATIONVol.262019 No.10液相色谱系统梯度延迟体积测算方法李泓文，聂大林（苏州赛谱仪器有限公司，江苏 苏州 215200）摘 要：本文讨论了一种可应用于大部分液相色谱系统延迟体积的测算方法。

本次测算的对象是北京卫星制造厂在科技部重大专项《高精度超高压液相泵的开发与应用》（项目编号：2016YFF0101000）项目中研制的高精度超高压液相泵（UHPLC-BSC-02型），以及SCG 蛋白纯化系统中的色谱泵。

该方法配合赛谱仪器UV 检测器使用，是一种方便可靠的测算方法，测算对象灵活，应用范围广且具有良好的重复性。

根据实际情况，可以用于大多数液相系统的延迟体积、泵死体积、样品泵加载体积、柱外死体积等测量。

关键词：液相色谱；梯度延迟体积；高精度超高压液相泵中图分类号：TH38 文献标志码：ADetermination of Gradient Delay Volume in LiquidChromatography SystemsLi Hongwen ，Nie Dalin（Suzhou Sepure Instrument Co., LTD., Jiangsu, Suzhou, 215200, China）Abstract：In this paper, a method for measuring the delay volume of most liquid chromatography systems is discussed. The ob-ject of this measurement is the high precision ultra-high pressure chromatography pump (UHPLC-BSC-02)developed by Beijing satellite manufacturing co. LTD, and a chromatography pump in SCG system. This method is a convenient and reliable measure-ment method, which need to be used in combination with UV detector of Sepure Instrument co. LTD. It has flexible measurement objects, wide application range and good repeatability. According to the actual situation, it can be used to measure gradient delay volume, pump dead volume, sample pump loading volume, and dead volume outside column in most liquid chromatography sys-tems.Key words：liquid chromatography；gradient delay volume；UHPLC pump收稿日期：2019-08-08作者简介：李泓文（1988-），男，江苏扬州人，本科，工程师，从事仪器研发工作。

SCG层析⼯作站操作⼿册V3.7SCG层析⼯作站操作⼿册苏州赛谱仪器有限公司版权@2013苏州赛谱仪器有限公司版权所有。

声明本公司保留改变规格及价格的权利。

本操作⼿册提供的信息取代以往出版的所有资料。

对本操作⼿册可能包含的错误，或因操作⼿册所提供的信息及演绎的功能，以及因使⽤操作⼿册⽽导致的任何偶然或继发的损失概不负责。

未经事先书⾯许可不得影印复制或改编本操作⼿册的任何部分。

⽬录第⼀章SCG简介 (6)1.1关于SCG (6)1.1.1简介 (6)1.1.2操作环境 (6)1.1.3Windows功能 (6)1.2⼯作流程 (6)1.3帮助功能 (7)1.4关于本⼿册 (7)1.4.1基础知识 (7)第⼆章SCG概念 (8)2.1概念定义 (8)第三章SCG登录管理 (9)3.1启动和登录SCG层析系统 (9)3.1.1⽤户名与密码 (9)3.1.2启动SCG层析⼯作站 (9)3.1.3登录SCG层析⼯作站 (9)3.1.4修改密码 (10)3.2⽤户管理 (11)3.2.1部门定义 (12)3.2.3⽤户定义 (12)3.2.3⾓⾊定义 (14)第四章⽅法运⾏ (15)4.1⽅法编辑 (15)4.1.1⽅法命令 (15)4.1.2功能模块 (16)4.2查看⽅法 (23)4.2.1⽅法列表右键功能 (24) 4.3运⾏⽅法 (24)4.3.3仪器配置 (24)4.3.2仪器连接 (25)4.3.3⽅法运⾏ (25)4.3.3 Scouting⽅法 (28) 4.3.4⽅法序列 (29)4.3.5⽂件签名 (30)第五章仪器控制 (32)5.1仪器控制窗⼝布局 (32) 5.2仪器控制属性 (33)5.3曲线图 (34)5.4运⾏数据 (35)5.4流路图 (36)5.5操作记录 (36)5.6⼯具栏和状态栏 (37) 5.6.1⼯具栏 (37)5.6.2状态栏 (37)第六章⼿动控制 (39)6.1输液泵 (39)6.1.1流速 (39)6.1.2梯度 (40)6.1.3泵冲洗 (40)6.1.4系统冲洗 (41)6.1.5样品环进样 (41)6.1.6输液泵进样 (42)6.1.7进样停⽌ (43)6.2 流路 (43)6.2.1泵A⼊⼝ (43)6.2.2泵B⼊⼝ (44)6.2.3进样阀 (44)6.2.4柱位阀 (44)6.2.5收集阀切换 (45)6.2.6 组分收集器阀切换 (45) 6.2.7组分收集器归位 (45) 6.2.8 InjectMark (46)6.3监测 (46)6.3.1波长 (46)6.3.2⾃动清零 (47)6.3.3灯 (47)6.3.5 压⼒ (48)6.4组分收集器 (48)6.4.2信号收集 (49)6.4.3循环收集 (50)6.4.4电导收集 (50)6.4.5阶段信号收集 (51)6.4.6阶段时间收集 (51)6.4.7停⽌收集 (52)6.4.4收集中移动位置 (52) 6.4.5最⼩峰宽 (53)6.5其它 (53)6.5.1计划停⽌ (53)6.5.2计划暂停 (53)6.5.3标记 (54)6.5.4记录数据_开始 (54) 6.5.5柱体积 (55)第七章系统管理 (56)7.1层析柱库 (56)7.1.1层析柱参数类型 (56) 7.1.2层析柱记录 (59)7.2仪器控制（模拟） (59) 7.3参数设置 (60)7.4 样品信息维护 (61)第⼋章数据分析 (62)8.1积分 (62)8.2对⽐曲线 (63)8.3标准曲线 (64)8.4运⾏结果 (65)8.4.1仪器信息 (66)8.4.2⽅法信息 (67)8.4.3积分信息 (67)8.4.4⾊谱图操作信息 (68)8.4.5运⾏⽅法Log信息 (68)8.4.6结果处理Log信息 (69)8.5计算 (70)8.5.1加 (70)8.5.2减 (71)8.5.3除 (72)8.5.4斜率 (72)8.5.5平滑 (73)8.5.6平移 (74)8.6⼯具栏 (75)8.7右键功能 (76)8.7.1属性 (77)8.8打印报表 (78)8.8.1创建⾃定义报表 (78)8.8.2编辑报表 (79)8.8.3⼯具栏图标 (79)联系我们 (82)第⼀章SCG简介1.1关于SCG1.1.1简介SCG层析⼯作站是集数据采集和分析于⼀体的软件。

蛋白纯化层析柱2011-06-15 15:19:14 易生物仪器浏览次数：1164 网友评论0 条关键词：蛋白离子交换分离分子物质树脂从个人学术性实验室到大型的医药制造企业，小型或者大规模的蛋白纯化通常都需要几种类型的液相色谱仪。

这些相关的大部分技术已应用了多年，但是新型柱料的发展为这些利用蛋白物理和化学特性进行分离的，经过时间考验的方法注入了新的力量。

其中最值得提到的就是凝胶过滤层析技术（gel filtration，GF），离子交换层析技术（ion exchange，IEX），羟基磷灰石层析（hydroxyapatite，HAP）和疏水作用层析（hydrophobic interaction，HI)，以及亲和层析和高效液相色谱方法（high-performance liquid chromatography，HPLC）。

对于一个初接触蛋白纯化的新手而言，从哪儿下手也许是令人头疼的一件事，但是幸运的是目前这些流程都已经逐步系统化了。

GE Healthcare（原Amersham Biosciences）的技术顾问Andrew Mitchell解释道，通常利用液相色谱技术进行蛋白纯化有三步：捕获——从细胞其它成份，比如DNA和RNA中分离需要的蛋白；区分——从与目的蛋白具有相近的大小，或者相似的物理/化学特征的污染物中分离蛋白；修饰——使分离得到的样品处于可使用状态。

这每一个纯化的步骤都有特定的色谱层析技术和最佳的beads大小。

第一步捕获步骤，也就是从细胞裂解物粗成份中分离蛋白，这需要一个具有高容量和高流量（flow rate）的填料。

bead大小比较大，范围比较宽（比较于bead大小平均值）的“fast flow”填料比较理想，这种填料也有利于防止目标蛋白被水解——因为速度比较快。

第二步则对分辨率要求更高，需要更好的从混合物中分离需要的成份。

通常bead的大小与分辨率成反比，因此在这一部中比较小的bead比较合适。

GST融合蛋白纯化磁珠规格：5mL/2×50mL保存：2-8℃，保质期2年产品内容：GST融合蛋白纯化磁珠是专为高效、快速纯化谷胱甘肽巯基转移酶（GST）融合蛋白而设计的一种新型功能化材料，可通过磁性分离方式直接从生物样品中一步纯化出高纯度的目标蛋白，极大地简化纯化工艺和提高纯化效率，适合科研和工业领域便捷地进行GST融合蛋白的纯化。

与传统的柱层析纯化方式相比，采用磁珠纯化GST融合蛋白，无需对粗蛋白样品进行多次长时间的高速离心及滤膜过滤、无需控制流速、更不需要昂贵的层析设备。

样品与磁珠的特异性结合、洗涤及目标蛋白洗脱变得非常简单、快速、易操作。

对于熟练的操作者而言，在1h内就能获得高纯度的目的蛋白，且能轻松实现高通量和大规模样品的平行处理，为研究者节省了时间和成本。

产品特性：产品名称GST融合蛋白纯化磁珠磁珠粒径30μm~150μmGSH配基含量20~30μmol/mL（100%磁珠）GST融合蛋白结合可达10mg/mL（100%磁珠）量悬液浓度10%（v/v）磁珠悬液保存液20%（v/v）乙醇化学稳定性常温可耐受70%乙醇、6M盐酸胍、0.1M氢氧化钠、0.1M醋酸1h注意：1、磁珠蛋白结合量与目标蛋白特性有关，此处仅做参考值2、1mL磁珠悬液中包含100µL磁珠适用范围：适用于谷胱甘肽巯基转移酶（GST）融合蛋白、谷胱甘肽转移酶以及与谷胱甘肽有亲和作用的其它蛋白的分离纯化。

操作步骤：目标蛋白与磁珠的结合性能将直接影响目标蛋白的纯化效率，各种缓冲液配制也将在一定程度上影响目标蛋白的回收率和纯度。

因此，在较大规模蛋白纯化之前，用户应该自行设计实验，筛选出适合目标蛋白的缓冲液。

以下提供一个较强结合力的GST标签蛋白的纯化流程，供供参考。

1、缓冲液的准备Buffer A：140mM NaCl，2.7mM KCl，10mM Na2HPO4，1.8mM KH2PO4，pH7.4Buffer B：50mM Tris-HCl，10mM还原型谷胱甘肽，pH8.0（0.1M Tris溶液50mL，0.307g还原型谷胱甘肽，然后用0.1M盐酸调pH到8.0，加去离子水至100mL。

SCG蛋白纯化系统仪器介绍SCG蛋白纯化系统是一种用于分离和纯化蛋白质的仪器。

它采用了多种高效的纯化技术，能够快速、准确地从混合物中分离出目标蛋白质，并去除杂质和干扰物，从而得到高纯度的蛋白质样品。

下面将详细介绍SCG蛋白纯化系统的原理、功能和使用方法。

SCG蛋白纯化系统的原理主要是利用蛋白质的化学和物理性质的差异进行分离。

它包括多个步骤：样品制备、蛋白质捕获、洗脱和纯化。

首先，将待测样品进行预处理，如细胞破碎、溶解等，以得到蛋白质混合物。

然后，通过蛋白质与特定亲和基质之间的特异性相互作用，将目标蛋白质从混合物中选择性地捕获到亲和基质上。

接下来，通过洗涤去除杂质和干扰物，最后通过洗脱步骤将目标蛋白质从亲和基质上解离下来。

这样就得到了高纯度的目标蛋白质样品，可以用于后续实验和应用。

SCG蛋白纯化系统具有多种功能，适用于不同类型的样品和目标蛋白质。

首先，它提供了多种亲和基质的选择，包括亲和柱、亲和浮游悬浮液等。

这样可以根据目标蛋白质的特性选择最适合的亲和基质。

其次，它支持多种纯化方法，如钼石蓝染色、融合蛋白纯化、离子交换纯化等。

这样可以根据不同样品和需求选择最合适的纯化方法。

此外，它还提供了高效的洗脱和浓缩功能，可以更好地去除杂质和干扰物，得到更纯净的目标蛋白质样品。

SCG蛋白纯化系统的使用方法相对简单，以下为一般操作流程。

首先，准备样品，并根据目标蛋白质的特性选择合适的亲和基质。

接下来，将样品加载到亲和基质上，使目标蛋白质与亲和基质发生特异性相互作用。

然后，进行洗涤步骤，以去除非特异性结合的杂质和干扰物。

最后，通过适当的条件改变，如pH值、离子浓度等，使目标蛋白质与亲和基质解离，从而得到纯净的目标蛋白质。

整个操作过程需要根据不同的系统和样品进行优化。

总之，SCG蛋白纯化系统是一种高效、灵活的仪器，可用于从复杂混合物中纯化蛋白质。

它具有多种亲和基质和纯化方法的选择，适用于不同类型的样品和目标蛋白质。