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AKTA_avant蛋白纯化系统参数AKTAavant25全自动工艺开发蛋白纯化系统1.工作条件1)电力供应：单相220V±10%，50Hz（±1）2)工作温度：4°C-35°C3)相对湿度：20-95%，没有冷凝水4)仪器运行的持久性：仪器可连续正常运行。
5)工作条件及安全性要求符合中国及国际有关标准或规定。
2.设备用途及功能快速纯化多种生物分子，如蛋白质、多糖、肽类、寡核苷酸、核苷酸疫苗及病毒等，适合分离纯化活性物质。
其自动化的配置尤其适合方法优化和工艺开发。
1)简单迅速启动：预编应用工艺，编程模板，自动缓冲液制备。
2)全自动操作：从进样、编程、分离、峰收集、准确结果比较、数据处理以至打印报告皆自动化。
3)标配多种自动化配置：自动选择缓冲液、自动选择样品、自动选择柱位、自动选择收集位置和收集方式，便于方法优化和工艺开发。
4)人工智能：多种缓冲液配方（内置26种配方，可自行添加），一百多根层析柱数据库，多种纯化方案，内置层析专家。
5)整合专业的Design of Experiment实验设计理念，推荐实验方案，进行数据分析，模型建立，为条件优化提供系统的建议。
6)高效率功能：蛋白纯化量微克级以至百毫克级。
3.技术规格I.系统泵及样品泵1.1系统泵1.1.1精确的全自动微量柱塞泵，双泵四泵头，每个泵头都有独立除气阀。
*1.1.2流速：0.001–25ml/min1.1.3压力范围：0–20MPa(200bar，2900psi)*1.1.4流速重复性：条件：0.25–25ml/min,<3MPa,0.8–2cP流速准确度：±1.2%，流速精度：RSD<0.5%1.1.5增量：1ul/min1.1.6粘度：0.35–10cP*1.1.7具备恒压调速功能，自动根据压力调节流速输出，使压力保持稳定。
1.2样品泵1.2.1精确的全自动微量柱塞泵，单泵两泵头，每个泵头都有独立除气阀。
AKTA蛋白纯化系统操作AKTA蛋白纯化系统是当前蛋白纯化工作经常用到的一组设备，自动化程度很高。
AKTA系统依据不同的配置，可以分为AKTA EXPLORER、 AKTA PILOT、AKTA PURIFIER等多种型号的设备。
以下以AKTA EXPLORER为例简单介绍A KTA蛋白纯化系统的一般操作。
1、认识AKTA。
AKTA explorer 是为方法开拓及研究应用而设计的全自动液相色谱系统。
该色谱系统的分离装置有三个主要组件，在底部平台的左侧整齐堆起（Fig 1）。
它们是：FIG 1、AKTA EXPLORER主机• Pump-900 为双通道高效梯度泵系列。
在AKTAexplorer 100，流速范围0.01-100 ml/min，压力高达10 Mpa（泵名为P-901）。
在AKTA explore10，流速范围0.001-10 ml/min，压力高达25 Mpa（泵名为P-903）。
• Monitor UV-900，同时监控190－700 nm 范围内高达3 个波长的多波长紫外-可见（UV-Vis）监测器。
（针对部分AKTA PURIFIER机型，尚有UPC-900监测器可供选择，光源为汞灯光源，一次可以监控一个波长，安装滤光片后，可以在选择的波长范围内进行切换。
）• Monitor pH/C-900，在线电导和pH 监测的组合监测器。
Fig 2、AKTA EXPLORER硬件模式图AKTA EXPLORER系统的主要组成部件可以用模式图表示（Fig 2）。
组成部件，如混合器、柱及不同的阀安装在右边部分。
打开装阀的门可全部看到。
柱被挂在装阀的门的外侧。
分离装置由UNICORN 软件控制。
软件安装于一独立的电脑主机之中，在电脑与色谱系统之间的通信由数据采集装置CU950进行控制。
2、一般操作2.1 开机按位于底部平台前左侧的ON/OFF 按钮，打开色谱系统，然后打开电脑电源。
待仪器自检完毕（CU950上面的3个指示灯完全点亮并不闪烁）。
摘要：用AKTAxpressTM智能蛋白质多维纯化系统进行两步、全自动纯化，从E . C o l i 裂解液中纯化G S T - 标记的hippocalcin (海马钙结合蛋白)。
两步法的第一步是亲和层析捕获，该步主要使用1 ml GSTrap TM 4B柱，第二步是凝胶过滤，该步主要使用HiLoadTM 16/60 SuperdexTM200 pg 柱。
使用两步纯化法可以获得高纯度的SThippocalcin，并显示出GST-hippocalcin目标蛋白质的二聚体和一个大的多聚体。
用AKTAxpress 色谱系统GSTrap 4B 柱和Hiload 16/60 Superdex200 pg 柱进行两步法全自动纯化GST-hippocalcinPerkinElmer微孔板系列产品现货火热促销中，咨询相关情况>> >>J. Lundqvist and A. KarlssonGE Healthcare, Uppsala, Sweden用AKTAxpressTM智能蛋白质多维纯化系统进行两步、全自动纯化，从E . C o l i 裂解液中纯化G S T - 标记的hippocalcin (海马钙结合蛋白)。
两步法的第一步是亲和层析捕获，该步主要使用1 ml GSTrap TM 4B柱，第二步是凝胶过滤，该步主要使用HiLoadTM 16/60 SuperdexTM200 pg 柱。
使用两步纯化法可以获得高纯度的SThippocalcin，并显示出GST-hippocalcin目标蛋白质的二聚体和一个大的多聚体。
导言谷胱甘肽S- 转移酶 (GST) 是继组氨酸之后的第二个应用最多的重组蛋白标记。
GST 基因融合系统利用质粒pGEX在E.coli中进行可诱导、高水平细胞内表达基因或与日本血吸虫 (Schistoma japonicum) GST 融合的基因片段 (1)。
通过用谷胱苷肽琼脂糖的层析柱捕获，然后用还原型谷胱苷肽洗脱可以很方便地纯化出标记蛋白质。
akta蛋白纯化引言蛋白纯化是生物化学研究中非常重要的一步。
在研究蛋白的结构和功能时，通常需要从混合物中分离和纯化目标蛋白。
akta系统作为一种常用的蛋白纯化设备，可以自动化地进行蛋白纯化过程，大大提高实验的效率和准确性。
本文将介绍akta蛋白纯化的基本原理和操作步骤，以及常见的纯化策略。
akta蛋白纯化的基本原理akta蛋白纯化系统通过色谱技术实现蛋白的分离和纯化。
色谱技术是一种基于蛋白在固定相和流动相之间相互作用的分离方法。
akta系统利用液相色谱柱来实现这一过程，可以根据蛋白的种类、大小、电荷、亲疏水性等特性选择不同的柱子和流动相，从而实现高效的分离和纯化。
akta蛋白纯化的操作步骤步骤一：准备工作在进行akta蛋白纯化之前，需要进行一些准备工作。
首先，准备好需要纯化的蛋白样品，可以是细胞裂解液、培养基等。
其次，准备好色谱柱和流动相，根据蛋白的性质选择合适的柱子和流动相。
最后，确保akta系统和相关设备已经连接并正常运行。
步骤二：设定操作参数在进行akta蛋白纯化之前，需要设定一些操作参数。
首先是选择合适的柱子和流动相，根据蛋白的特性选择合适的参数。
其次是设定流速和梯度，根据实验需求进行调整。
最后，设定采集参数，包括采集分数和容器类型等。
步骤三：样品加载和洗脱将准备好的蛋白样品加载到akta系统中的色谱柱中。
在加载前，可以进行一些预处理，如预洗柱子、平衡流动相等。
加载完成后，开始进行洗脱步骤，通过改变流动相的成分或浓度来逐渐洗脱目标蛋白。
通过监测洗脱曲线或使用特定检测方法，可以确定目标蛋白的洗脱时间和分数。
步骤四：分析和收集在洗脱过程中，可以通过吸光度检测或使用其他特定方法对洗脱的分数进行分析，以确定目标蛋白的纯度和浓度。
根据需要，可以选择采集纯化后的目标蛋白，纯化后的蛋白可以被用于进一步的实验研究。
常见的akta蛋白纯化策略akta蛋白纯化系统可以根据不同的需求应用于不同的纯化策略。
以下是一些常见的纯化策略：方法一：亲和层析亲和层析是一种基于蛋白质与配体之间的特异性相互作用进行纯化的方法。
AKATA 制备型液相色谱蛋白分析仪纯化蛋白步骤首先是所有溶液抽滤，超声波(主要是去除溶液中的气泡)；开机(仪器自检)，点开Unicorn ，选default ,ok；clear all (即出现流程图界面)；首先将20%Mannul，点任意选项，出现操作对话框；Pump---flow=1.0 ，execute，(注意：必须先设定流速，使其形成通路；即有流速时再作其他操作)。
此时观察柱压，柱压切记≤0.3Mpa；如果柱压高，则要更长时间洗。
柱压基本稳定时，洗泵：pump---pumpwashpurifier----------A1 ON B1 ON execute；这项仪器自动完成；完成后自动恢复为上一步的状态；此时还应该注意柱压。
注意中间有多次平衡状态出现：一种状态进入另一种状态时，一般要平稳几个柱体积；此时可以洗上样环；待平衡时换液：pause，A1---------A液B1---------B液，continue，然后达到平衡态；洗泵：pump---pumpwashpurifier-------A1 ONB1 ON execute；此时A泵走A液，B泵走B液此时可以安装镍柱；待稳定下来准备上样：将流速降下来，flow=0.5 ，先是load (默认)状态下，将蛋白溶液用注射器打入上样环(上样环是2 ml 的，所以一般最多上样2 ml ，否则浪费；)；然后改为inject状态，execute ，待走出2.5 柱体积时重新改为load状态，平衡几个柱体积；如果中间需上样多次，load , execute;pause;加样后，continue;inject , execute; 同样图上显示≥2 ml 时改状态为load;非目的蛋白不会挂在柱子上，此时出现蛋白峰，在峰上时收穿透；平衡后，洗脱。
准备接收纯化出的蛋白，改流速flow=1.0 ，gradient；100%B8 min; execucte;待B%≥20% 时，设定 pump---outletvalve----feed,executefrac-----0.5 ml，execute;首先出现的是杂蛋白的峰，也可以接收。
蛋白纯化AKTA操作说明（二）引言概述：本文档旨在提供关于蛋白纯化AKTA操作的详细说明。
蛋白纯化是生物化学和生物技术中常用的实验技术之一，能够用于从复杂的生物样品中纯化目标蛋白质。
AKTA操作是常用的蛋白纯化系统，本文将介绍该系统的操作步骤和注意事项，帮助用户顺利进行蛋白纯化实验。
正文：一、AKTA操作之仪器准备1. 确保AKTA蛋白纯化系统已经连接好电源，并打开主机电源开关。
2. 检查液氮罐中的液氮是否充足，并确保液位高于所需运行温度。
3. 打开冰盒，准备好所需的离心管、移液器和其他实验器材。
二、AKTA操作之列柱装配1. 按照实验要求选择合适的色谱柱和填料，并正确装配到AKTA系统中。
2. 使用力学手套松开色谱柱底部的螺丝，将填料注入色谱柱中，确保填料均匀。
3. 同时，注意将填料与色谱柱的连接口处用黑色硅胶密封，以免液体泄漏。
三、AKTA操作之流程设置1. 打开AKTA系统的软件界面，并选择“新建方法”。
2. 在方法设置界面中，设定蛋白纯化的各个步骤，如进样、洗脱等流程参数。
3. 根据实验需求，选择合适的梯度洗脱方案，并输入相应的洗脱液体浓度。
四、AKTA操作之样品处理1. 将待纯化的生物样品进行预处理，如离心、过滤等，以去除杂质。
2. 根据纯化需求，可进行某些特定试剂的添加，如酶切剂、亲和标记剂等。
3. 根据方法设置，将样品装入进样器中，并调整进样量和进样流速。
五、AKTA操作之运行实验1. 保存并加载所设置的方法，确保参数设定正确。
2. 启动AKTA系统，开始实验运行，并监控过程中的各项参数指标。
3. 及时记录实验数据，并根据需要进行样品采样、保存等操作。
总结：通过本文所述的蛋白纯化AKTA操作说明，用户可以了解到系统准备、列柱装配、流程设置、样品处理和运行实验等关键步骤。
合理而正确的操作，将帮助用户获得高质量的蛋白纯化结果。
同时，用户还需根据实际操作中的具体情况，进一步优化实验参数，以满足各自的研究需求。
AKTA蛋白纯化层析系统操作规程一、目的：为了确保蛋白纯化层析系统操作的准确性、稳定性和安全性，保证实验结果的可靠性，制定本操作规程。
二、适用范围：本操作规程适用于实验室内的AKTA蛋白纯化层析系统操作。
三、操作流程：1.准备工作：(1)预热：打开系统电源，预热至设定温度（一般为室温）。
(2)洗涤缓冲液：根据实验要求，制备所需的洗涤缓冲液，确保其浓度和pH值符合要求。
(3)净化缓冲液：根据实验要求，制备所需的净化缓冲液，确保其浓度和pH值符合要求。
(4)样品：根据实验要求，制备所需的样品。
2.系统配置：(1)连接仪器：将系统中的各个模块连接好，包括色谱柱、注射器、检测器等。
(2)配置方法参数：根据实验要求，在系统内设置合适的流速、梯度洗脱条件等相关参数。
3.样品处理：(1)样品加载：将样品注入到加载注射器中，通过样品加载阀注入到色谱柱中。
(2)洗脱：根据实验要求，设置梯度洗脱条件，将混合物中的目标蛋白纯化。
4.系统清洗：(1)注射器清洗：每次实验结束后，将注射器从系统中取出，用纯化缓冲液反复洗涤至无污染为止。
(2)色谱柱清洗：每次实验结束后，将色谱柱从系统中取出，用纯化缓冲液反复洗涤至无污染为止。
5.系统关闭：(1)关闭电源：关闭系统电源，断开电源线连接。
(2)清洗系统：将系统中的各个模块用水冲洗干净，保持干燥。
(3)整理工作台：将使用过的耗材整理归位，清理工作台。
四、操作注意事项：1.操作前应仔细阅读操作手册，了解仪器的基本原理和操作要点。
2.操作时要穿戴实验室个人防护用品，避免吸入或接触有害物质。
3.在操作过程中，要严格按照实验要求进行，避免操作失误。
4.定期检查系统的运行状态，保证系统正常工作。
5.操作完成后，要及时清洗和整理仪器，保持仪器的干净和完好。
五、风险控制与安全措施：1.使用过程中，注意避免溶液飞溅引起的伤害，避免溶剂和化学品的吸入或接触。
2.避免电源短路或其他电气故障引起的意外事故。
蛋白纯化AKTA操作说明（一）引言概述：蛋白纯化是生物技术研究中常用的一种重要技术手段，通过纯化目标蛋白，可以实现对其结构、功能和相互作用的进一步研究。
AKTA是一种常用的蛋白纯化设备，本文将介绍如何进行AKTA操作以获得高纯度的蛋白样品。
本文分为五个大点：设备准备、准备实验材料、样品制备、纯化操作步骤、数据处理和总结。
正文：一、设备准备：1. 查看设备状况：检查AKTA设备的各个组件是否齐全，并确保设备正常工作。
2. 设备消毒：使用适当的消毒剂对AKTA设备进行消毒，确保实验过程的无菌。
二、准备实验材料：1. 缓冲液：根据实验需要选择不同的缓冲液，并准备足够的量。
2. 标记抗体：根据实验需要选择适当的标记抗体，并准备足够的量。
3. 标记亲和树脂：根据实验需要选择适当的标记亲和树脂，并准备足够的量。
4. 标准品：准备适当浓度的标准品作为纯化过程中的参考。
三、样品制备：1. 细胞裂解：采用适当的方法对细胞进行裂解，获得含有目标蛋白的裂解液。
2. 预处理：根据裂解液的性质，进行适当的预处理，如去除杂质、调整pH值等。
3. 样品加载：将预处理后的样品加载到纯化系统中，确保样品的均匀分布。
四、纯化操作步骤：1. 初始化设备：打开AKTA软件，选择纯化方法，并设置相关参数。
2. 样品加载：将样品加载到设备中，并根据实验要求选择适当的柱子和纯化方案。
3. 洗脱：使用缓冲液进行洗脱，去除非目标蛋白和杂质。
4. 目标蛋白回收：使用适当的缓冲液洗脱目标蛋白，并将其收集到已经标记好的收集管中。
5. 清洗设备：使用适当的缓冲液对设备进行清洗，防止交叉污染。
五、数据处理和总结：1. 数据记录：记录纯化过程中的各项数据，如流速、吸光度和洗脱峰。
2. 数据分析：对纯化结果进行分析和比较，评估纯化效果。
3. 总结经验：根据纯化结果总结操作经验，以优化蛋白纯化的流程和效率。
总结：本文介绍了蛋白纯化AKTA操作的基本步骤。
通过设备准备、准备实验材料、样品制备、纯化操作步骤和数据处理，可以获得高纯度的蛋白样品，为后续的蛋白研究提供了可靠的基础。
AKTA蛋白纯化系统操作AKTA蛋白纯化系统是当前蛋白纯化工作经常用到的一组设备，自动化程度很高。
AKTA系统依据不同的配置，可以分为AKTA EXPLORER、 AKTA PILOT、AKTA PURIFIER等多种型号的设备。
以下以AKTA EXPLORER为例简单介绍A KTA蛋白纯化系统的一般操作。
1、认识AKTA。
AKTA explorer 是为方法开拓及研究应用而设计的全自动液相色谱系统。
该色谱系统的分离装置有三个主要组件，在底部平台的左侧整齐堆起（Fig 1）。
它们是：FIG 1、AKTA EXPLORER主机• Pump-900 为双通道高效梯度泵系列。
在AKTAexplorer 100，流速范围0.01-100 ml/min，压力高达10 Mpa（泵名为P-901）。
在AKTA explore10，流速范围0.001-10 ml/min，压力高达25 Mpa（泵名为P-903）。
• Monitor UV-900，同时监控190－700 nm 范围内高达3 个波长的多波长紫外-可见（UV-Vis）监测器。
（针对部分AKTA PURIFIER机型，尚有UPC-900监测器可供选择，光源为汞灯光源，一次可以监控一个波长，安装滤光片后，可以在选择的波长范围内进行切换。
）• Monitor pH/C-900，在线电导和pH 监测的组合监测器。
Fig 2、AKTA EXPLORER硬件模式图AKTA EXPLORER系统的主要组成部件可以用模式图表示（Fig 2）。
组成部件，如混合器、柱及不同的阀安装在右边部分。
打开装阀的门可全部看到。
柱被挂在装阀的门的外侧。
分离装置由UNICORN 软件控制。
软件安装于一独立的电脑主机之中，在电脑与色谱系统之间的通信由数据采集装置CU950进行控制。
2、一般操作2.1 开机按位于底部平台前左侧的ON/OFF 按钮，打开色谱系统，然后打开电脑电源。
待仪器自检完毕（CU950上面的3个指示灯完全点亮并不闪烁）。
AKTAavant25全自动工艺开发蛋白纯化系统1.工作条件1)电力供应：单相220V±10%，50Hz（±1）2)工作温度：4°C-35°C3)相对湿度：20-95%，没有冷凝水4)仪器运行的持久性：仪器可连续正常运行。
5)工作条件及安全性要求符合中国及国际有关标准或规定。
2.设备用途及功能快速纯化多种生物分子，如蛋白质、多糖、肽类、寡核苷酸、核苷酸疫苗及病毒等，适合分离纯化活性物质。
其自动化的配置尤其适合方法优化和工艺开发。
1)简单迅速启动：预编应用工艺，编程模板，自动缓冲液制备。
2)全自动操作：从进样、编程、分离、峰收集、准确结果比较、数据处理以至打印报告皆自动化。
3)标配多种自动化配置：自动选择缓冲液、自动选择样品、自动选择柱位、自动选择收集位置和收集方式，便于方法优化和工艺开发。
4)人工智能：多种缓冲液配方（内置26种配方，可自行添加），一百多根层析柱数据库，多种纯化方案，内置层析专家。
5)整合专业的Design of Experiment实验设计理念，推荐实验方案，进行数据分析，模型建立，为条件优化提供系统的建议。
6)高效率功能：蛋白纯化量微克级以至百毫克级。
3.技术规格I.系统泵及样品泵1.1系统泵1.1.1精确的全自动微量柱塞泵，双泵四泵头，每个泵头都有独立除气阀。
*1.1.2流速：0.001–25ml/min1.1.3压力范围：0–20MPa(200bar，2900psi)*1.1.4流速重复性：条件：0.25–25ml/min,<3MPa,0.8–2cP流速准确度：±1.2%，流速精度：RSD<0.5%1.1.5增量：1ul/min1.1.6粘度：0.35–10cP*1.1.7具备恒压调速功能，自动根据压力调节流速输出，使压力保持稳定。
1.2样品泵1.2.1精确的全自动微量柱塞泵，单泵两泵头，每个泵头都有独立除气阀。
A K蛋白纯化系统操作精选文档TTMS system office room 【TTMS16H-TTMS2A-TTMS8Q8-AKTA蛋白纯化系统操作AKTA蛋白纯化系统是当前蛋白纯化工作经常用到的一组设备，自动化程度很高。
AKTA系统依据不同的配置，可以分为AKTA EXPLORER、AKTA PILOT、AKTA PURIFIER等多种型号的设备。
以下以AKTA EXPLORER为例简单介绍AKTA蛋白纯化系统的一般操作。
1、认识AKTA。
AKTA explorer 是为方法开拓及研究应用而设计的全自动液相色谱系统。
该色谱系统的分离装置有三个主要组件，在底部平台的左侧整齐堆起（Fig 1）。
它们是：FIG 1、AKTA EXPLORER主机Pump-900 为双通道高效梯度泵系列。
在AKTAexplorer 100，流速范围0.01-100 ml/min，压力高达10 Mpa（泵名为P-901）。
在AKTA explore10，流速范围0.001-10 ml/min，压力高达25 Mpa（泵名为P-903）。
Monitor UV-900，同时监控190－700 nm 范围内高达3 个波长的多波长紫外-可见（UV-Vis）监测器。
（针对部分AKTA PURIFIER机型，尚有UPC-900监测器可供选择，光源为汞灯光源，一次可以监控一个波长，安装滤光片后，可以在选择的波长范围内进行切换。
）Monitor pH/C-900，在线电导和pH 监测的组合监测器。
Fig 2、AKTA EXPLORER硬件模式图AKTA EXPLORER系统的主要组成部件可以用模式图表示（Fig 2）。
组成部件，如混合器、柱及不同的阀安装在右边部分。
打开装阀的门可全部看到。
柱被挂在装阀的门的外侧。
分离装置由UNICORN 软件控制。
软件安装于一独立的电脑主机之中，在电脑与色谱系统之间的通信由数据采集装置CU950进行控制。
AKTA蛋白纯化系统操作1.设定纯化方法：首先，根据目标蛋白质的特性和要求，选择合适的纯化方法。
一般而言，常用的纯化方法包括亲和层析、凝胶层析和离子交换层析等。
在AKTA蛋白纯化系统上，可以预设不同的纯化方法并保存为方案。
2.准备蛋白样品：准备待纯化的蛋白样品。
在纯化前，需要将样品进行预处理，例如，去除杂质、去盐、浓缩等。
此外，一些特殊的样品也需要添加辅助试剂，如DTT、EDTA等。
3.配置层析柱：根据之前设定的纯化方法，选择合适的柱子。
AKTA系统支持多种柱径和材质的柱子，可以根据需要更换。
4.连接管路：将柱子与系统的蛋白吸附和洗脱缓冲液的管路相连接，确保连接处无泄漏。
5.调整流速：设置蛋白吸附和洗脱缓冲液的流速。
一般而言，根据柱子的大小和纯化方法的要求，设置合适的流速可以提高纯化效果。
6.均衡柱子：在进行纯化前，需要将柱子进行均衡操作。
均衡柱子可以提高吸附剂（如亲和树脂）和蛋白样品之间的接触效果，提高纯化效率。
7.加样和洗脱：将经过均衡的柱子连接到AKTA系统，将样品通过自动加样器加入。
在加样后，可以通过设定的方法进行洗脱和冲洗，以去除非目标蛋白质和杂质。
8.收集纯化的目标蛋白：通过设置最终洗脱步骤，将目标蛋白质从纯化方法中洗脱出来。
同时，系统可以将纯化的目标蛋白自动收集到相应的管子或容器中。
9.检测纯化后的蛋白质：对纯化后的蛋白质进行检测，如SDS-、Western blot等方法，以验证纯化效果。
10.清洗设备：在纯化完成后，要对设备进行清洗。
根据实验室的规范和设备说明书，进行相应的操作，以确保设备的使用寿命和实验结果的准确性。
总之，AKTA蛋白纯化系统是一种功能强大、操作灵活的蛋白质纯化设备。
通过合理的设定纯化方法、处理样品和操作设备，可以高效地纯化目标蛋白质，并得到高质量的纯化产物。
A K T A蛋白纯化系统操作AKTA蛋白纯化系统操作AKTA蛋白纯化系统是当前蛋白纯化工作经常用到的一组设备，自动化程度很高。
AKTA系统依据不同的配置，可以分为AKTA EXPLORER、AKTA PILOT、AKTA PURIFIER等多种型号的设备。
以下以AKTA EXPLORER为例简单介绍AKTA蛋白纯化系统的一般操作。
1、认识AKTA。
AKTA explorer 是为方法开拓及研究应用而设计的全自动液相色谱系统。
该色谱系统的分离装置有三个主要组件，在底部平台的左侧整齐堆起（Fig 1）。
它们是：FIG 1、AKTA EXPLORER主机• Pump-900 为双通道高效梯度泵系列。
在AKTAexplorer 100，流速范围0.01-100 ml/min，压力高达10 Mpa（泵名为P-901）。
在AKTA explore10，流速范围0.001-10 ml/min，压力高达25 Mpa（泵名为P-903）。
• Monitor UV-900，同时监控190－700 nm 范围内高达3 个波长的多波长紫外-可见（UV-Vis）监测器。
（针对部分AKTA PURIFIER机型，尚有UPC-900监测器可供选择，光源为汞灯光源，一次可以监控一个波长，安装滤光片后，可以在选择的波长范围内进行切换。
）• Monitor pH/C-900，在线电导和pH 监测的组合监测器。
Fig 2、AKTA EXPLORER硬件模式图AKTA EXPLORER系统的主要组成部件可以用模式图表示（Fig 2）。
组成部件，如混合器、柱及不同的阀安装在右边部分。
打开装阀的门可全部看到。
柱被挂在装阀的门的外侧。
分离装置由UNICORN 软件控制。
软件安装于一独立的电脑主机之中，在电脑与色谱系统之间的通信由数据采集装置CU950进行控制。
2、一般操作2.1 开机按位于底部平台前左侧的ON/OFF 按钮，打开色谱系统，然后打开电脑电源。
AKTA卵白纯化系统把持之马矢奏春创作AKTA卵白纯化系统是以后卵白纯化工作经经常使用到的一组设备,自动化水平很高.AKTA系统依据分歧的配置,可以分为AKTA EXPLORER、AKTA PILOT、AKTA PURIFIER等多种型号的设备.以下以AKTA EXPLORER为例简单介绍AKTA卵白纯化系统的一般把持.1、认识AKTA.AKTA explorer 是为方法开拓及研究应用而设计的全自动液相色谱系统.该色谱系统的分离装置有三个主要组件,在底部平台的左侧整齐堆起（Fig 1）.它们是：FIG 1、AKTA EXPLORER主机• Pump-900 为双通道高效梯度泵系列.在AKTAexplorer 100,流速范围0.01-100 ml/min,压力高达10 Mpa（泵名为P-901）.在AKTA explore10,流速范围0.001-10 ml/min,压力高达25 Mpa （泵名为P-903）.• Monitor UV-900,同时监控190－700 nm 范围内高达 3 个波长的多波长紫外-可见（UV-Vis）监测器.（针对部份AKTA PURIFIER机型,尚有UPC-900监测器可供选择,光源为汞灯光源,一次可以监控一个波长,装置滤光片后,可以在选择的波长范围内进行切换.）• Monitor pH/C-900,在线电导和pH 监测的组合监测器.Fig 2、AKTA EXPLORER硬件模式图AKTA EXPLORER系统的主要组成部件可以用模式图暗示（Fig 2）.组成部件,如混合器、柱及分歧的阀装置在右边部份.翻开装阀的门可全部看到.柱被挂在装阀的门的外侧.分离装置由UNICORN 软件控制.软件装置于一自力的电脑主机之中,在电脑与色谱系统之间的通信由数据收集装置CU950进行控制.2、一般把持2.1 开机按位于底部平台前左侧的ON/OFF 按钮,翻开色谱系统,然后翻开电脑电源.待仪器自检完毕（CU950上面的3个指示灯完全点亮其实不闪烁）.双击桌面上UNICORN图标,进入把持界面.UNICORN的把持界面分为四个窗口（Fig 3）Fig 3、Unicorn的把持界面2.2准备工作溶液和样品所有的工作溶液和样品必需经过0.45µm的滤膜过滤,样品也可高速离心后取上清备用.当缓冲液中含有有机溶剂（如乙腈、甲醇）,需在使用前用低频超声脱气10min.2.3清洗及管道准备首先将A泵的进液管道（A1）放入缓冲液或平衡液中,将B 泵的进液管道(B1)放入高盐溶液中,在system control窗口点击工具栏内的manual,选择pump→pump wash explorer,选中A1,B1管道为ON, execute.泵清洗将自动结束.(Fig 4)Fig 4、AKTA Explorer的泵清洗把持在manual里选择pump→flow rate,输入一定的低流速（Fig 5）,insert；选择Alarm&mon→alarm p ressure,设置high alarm（输入填料或层析柱的耐受压力,以较低者为设置值,具体可在填料说明书或层析柱说明书中查到）,insert,execute（Fig 6）.待InjectionValve的1号位管道流出水后接入柱子的柱头,稍微拧紧后将柱下真个堵头卸失落接入管道连上紫外流动池.Fig 5、AKTA Explorer的流速设定把持Fig 6、AKTA Explorer的限压设定把持2.5开始纯化：1）在柱子平衡好之后（电导,pH的数值和变动趋势稳定）即开始上样了.此时应将紫外调零（Fig 7）,选择Alarm&mon→autozero,exectue.Fig 7、AKTA Explorer的紫外调零把持2）具体上样方式：AKTA系统的上样方式比力灵活,可以根据具体样品的条件进行上样,包括用样品环上样、用系统泵上样、用样品泵上样等,这里以用系统泵上样为例简单介绍上样过程.点击pause,将A1放入样品中,点击countine,待样品上完后,再将A1放入到平衡液中继续清洗柱子.3）洗脱：上样后用缓冲液尽量将穿透峰洗回基线.在manual里选择pump→gradient,依照自己的工艺选择targetB （100％）和length（10CV）（Fig 8）.Fig 8、AKTA Explorer的洗脱条件设定把持4）设定收集：选择Frac→fractionation_900,输入每管收集体积,exectue（Fig 9）.结束固定体积收集选择Frac→fractionation_stop_900,exectue（Fig 10）.Fig 9、AKTA Explorer的组分收集设定把持Fig 10、AKTA Explorer的组分收集停止设定把持5）清洗泵及卸下层析柱：将A1和B1入口放入纯水中,启动pump wash purifier功能冲刷A泵和B泵及整个管路.然后再将A1和B1入口放入20％乙醇中,同样把持将乙醇冲满整个管路保管.再给柱子一个慢流速,设置系统呵护压力,然后先拆柱子的下端,正在滴水的时候将堵头拧上,再拆柱子的上端,最后拧上上真个堵头.整个过程中应防止气泡进入.6）关闭电源：从软件控制系统的第一个窗口unicorn manager点击退出,其他窗口不能独自关闭.然后关闭AKTA主机电源,关闭电脑电源.3、法式设定把持在method editor窗口点击工具栏内的method wizard,弹出窗口界面如Fig 11所示,可以分别在main selection、column以及column position三个下拉菜单中选择所要用到的层析方法、所用到的层析柱的参数以及所装置的层析柱在柱位选择阀的位置,选好之后,点击next按钮进入下一步波长和溶液进口的设定（Fig 12）,在此可以设定检测的波长,针对AKTA EXPLORER可以一次选择三个波长共同进行监控,并在此设定A泵和B泵的溶液进口,设定好之后,点击next,呈现如Fig 13所示窗口,可以在此设定对层析柱进行平衡的条件.Fig 11 Fig 12Fig 13 Fig 14完成之后,点击next呈现Fig 14的窗口,在此可以设定上样的条件,可选择的条件包括上样的方式,如上样环上样以及样品泵上样,对上样的体积也要进行设定.如果利用系统泵上样,在此无法进行设置,不外可以利用A泵和B泵的两个进口在后面的步伐中进行设置.在上步设置完成之后,点击NEXT呈现如Fig 15所示窗口,这里是针对流穿组分收集所进行一些设置,针对装置的分歧的收集器,具体内容可能有些不同,这里显示的界面是在装置了Frac-950收集器之后所呈现的界面,设置完成点击NEXT呈现如Fig 16所示的窗口,设置目标组分收集的一些参数,点击NEXT,呈现如Fig 17所示的窗口,针对具体的洗脱条件可以进行设置.当全部设置完成之后,点击finish,弹出Fig 18所示的窗口,可以再一次对所进行的设置进行进一步的修改,完成之后点击按钮,完成法式存盘把持.至此完成洗脱法式的设定工作,在应用自动洗脱法式时,可在SYSTEM CONTROL窗口点击文件菜单栏中的FILE→Run,在弹出的对话框中选择目标洗脱法式所在的位置并执行,之后会依次弹出一些对话框,主要是再次确认法式的设置条件,并选择洗脱结果文件的保管位置,全部设置完之后,洗脱将自动进行,结果将自动的保管在设定的文件夹中.Fig 15 Fig 16Fig 17 Fig 184、结果的浏览与简单处置在纯化完成后,Unicorn软件会自动的依照预先的设置保管结果文件,如果没有指定,那么结果文件会保管于一个文件名以manual N开头的文件中,N为系统依次生成的一个1-10之间的数字.对结果的浏览应在evaluation窗口（Fig 19）中进行,翻开文件及对文件进行普通编纂的菜单如Fig 20所示.Fig 19 Evaluation窗口Fig 20 纯化结果普通编纂菜单这里已经选择了一个纯化文件,翻开后,在结果浏览窗口点击鼠标右键,选择properties,可以弹出如Fig 21所示的把持菜单,可以分别对结果进行编纂,如改变曲线的颜色,设定横轴或纵轴的显示区间,进行文本文件的编纂等等.Fig 214、AKTA卵白纯化系统的日常维护4.1 每天,当实验完成系统使用结束后,应尽可能防止保管于缓冲液中过夜,尤以高盐浓度洗脱缓冲液为甚！假如,不能防止,则紧记第二天尽早用 System Wash Method完成以蒸馏水将系统完全清洗,再予以保管或再更新使用其它缓冲液,再次投入使用进行实验把持.用蒸馏水将余下的缓冲液完全冲刷出系统,这步伐至关重要.此举不单可以防止缓冲液对系统造成腐蚀机会,甚或因使用高盐浓度缓冲液保管过久造成盐结晶等的梗塞,对系统构成不需要的损害和损耗.4.2每周更换润洗缓冲液（20%乙醇）.若发现储液瓶液体增多,就说明泵内部有漏液,需要更换泵密封圈.若发现液体减少,需要检查润洗管接头,如果没有漏液,则泵膜或密封圈需要更换.4.3一定要坚持实验环境的清洁,以免灰尘造或泄漏的液体等造成仪器光学及电子元件的损坏.4.4 在长时间不应用系统进行试验的时候,应将系统管路布满20%的乙醇,并关闭紫外检测器,清洗PH探头,并保管于适当的缓冲液中.。
