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第四章牛蛙主要消化酶的分布及pH和温度对消化酶活力的影响牛蛙(Rana catesbeinana)隶属两栖纲无尾目蛙科，其肉质细嫩，味道鲜美，营养丰富，是有名的肉用型蛙类。
牛蛙具繁殖快、适应性强、生长迅速和抗逆性强等优点，且其养殖饲料易取。
在我国，牛蛙的人工养殖得到了大规模推广[1]。
研究消化酶的活力及其影响因素可了解动物对食物不同成分的消化能力，为动物天然饲料的选择、优质人工饲料的配制和适宜养殖条件的确立提供理论基础，对提高动物养殖的经济效益无疑是有帮助的。
目前，对低等脊椎动物消化酶的研究主要集中在经济养殖型鱼类[2-9]和爬行类[10]，对两栖类消化酶的研究报道较少[11-14]。
奚刚等[14]对牛蛙幼体发育阶段消化道蛋白酶和淀粉酶的活力变化情况进行了研究。
有关成体牛蛙消化系统消化酶分布情况及各种理化因子对牛蛙消化酶活力的影响方面的研究尚未见报道。
pH和温度是影响牛蛙生活的重要环境因子，其可通过影响消化酶活力直接影响牛蛙对食物的消化吸收能力，并最终影响牛蛙的生长发育。
本文在检测牛蛙消化系统蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶和纤维素酶分布情况的基础上，对pH和温度对牛蛙消化酶活力的影响进行了研究，旨在增进对牛蛙消化生理特点的认识，为牛蛙人工养殖中环境因子的控制和饲料营养成分的合理搭配提供理论依据。
1 材料与方法1.1 实验材料鲜活的成体牛蛙购自芜湖市黄山西路菜市场，重250~300 g。
将牛蛙毁髓处死，剖腹，迅速取出胰脏和完整消化道。
将消化道剪开，用4℃ 预冷的0.65 %的生理盐水快速洗净，按食道、胃、前肠、中肠和后肠(直肠)取材，用吸水纸轻轻吸干，称重。
1.2 酶液的制备根据所称得的消化系统各部分的质量，加入20倍质量的4 ℃蒸馏水，在冰水浴中充分匀浆，捣成糜状，以2000 r/min的速度冷冻离心15 min，取上清液即为酶液。
保存于4℃冰箱中，8 h内分析完毕。
1.3 消化酶活力的测定1.3.1 蛋白酶活力的测定采用福林-酚试剂法[11]，略有改动。
消化酶活性测定实验报告1材料与方法1.1试验材料试验用菲牛蛭于2014年6月从广西南宁市引种,引进后用山泉水养殖于塑料箱(70cmx50cmx40cm),水深30cm，每2d换新水1次，每次换水1/3,水温18~25℃，溶解氧668~1078mg/L，pH75~7.8。
饵料为新鲜猪血。
试验前挑选健康的菲牛蛭个体,根据方法分为幼体I组(021+0.01)g亚成体Ⅱ组(198006)g和成体Ⅲ组(7.49+047)g、N组(12.960.55)g共4组，3个重复。
分别于摄食前1d摄食当天6h及后每隔24h采集各试验组菲牛蛭消化道样品。
12粗酶液的制备将活体引种菲牛蛭固定于冰盘内解剖，取出整个消化道剔除其附着物，用预冷蒸馏水洗净，用滤纸吸干组织表面水分后放人2mLEppendoff管中，所得样品立即置于一20℃冰箱保存，备测。
测定时从冰箱中取不同试验组菲牛蛭消化道样品，融化，剪碎,加人适量经预冷的生理盐水，在玻璃匀浆器中冰浴匀浆，后3000r/min冷冻离心10min，取上清液进行消化酶活力测定。
酶液置于冰箱4℃保存备用，24h内测定完所有酶活力指标。
1.2指标测定酶液蛋白浓度采用考马斯亮蓝法测定。
胰蛋白酶、冒蛋白酶和脂肪酶活力均采用南京建成生物技术有限公司生产的试剂盒测定，具体方法参照说明书。
1.3数据分析试验数据用SPSS17.0统计软件进行单因素方差分析，检验各取样组间数据的差异显著性。
试验结果用平均值士标准差表示。
2结果与分析不同阶段菲牛蛭的消化酶活性从表看出，Ⅱ组的胰蛋白酶活力最强，显著高于工组、Ⅳ组，与皿组间差异不显著。
I~Ⅳ组的胃蛋白酶活力逐渐增高，其中，Ⅲ组、Ⅳ组间差异不显著，其活力均显著高于I组。
各组菲牛蛭的脂肪酶活力均为0U/mg。
第1篇一、实验背景人体消化系统是复杂的生理系统，负责将摄入的食物转化为能够被身体吸收利用的营养物质。
本实验旨在通过模拟人体消化过程，探究食物在消化系统中的变化，理解消化原理和过程。
二、实验目的1. 了解消化系统的组成及其功能。
2. 探究食物在消化过程中的变化。
3. 分析消化酶在消化过程中的作用。
4. 认识消化过程与人体健康的关系。
三、实验原理1. 消化系统的组成：人体消化系统包括口腔、食管、胃、小肠、大肠和肛门。
各部分协同工作，完成食物的消化和营养物质的吸收。
2. 消化过程：- 物理性消化：通过牙齿的咀嚼、舌的搅拌和胃肠的蠕动，将食物磨碎、搅拌，使其与消化液充分混合。
- 化学性消化：通过消化酶的作用，将食物中的大分子物质分解为小分子物质，便于吸收。
3. 消化酶的作用：- 唾液淀粉酶：在口腔中，唾液淀粉酶开始分解淀粉为麦芽糖。
- 胃蛋白酶：在胃中，胃蛋白酶将蛋白质分解为多肽。
- 胰蛋白酶和糜蛋白酶：在小肠中，胰蛋白酶和糜蛋白酶将蛋白质进一步分解为氨基酸。
- 淀粉酶：在小肠中，淀粉酶将淀粉分解为葡萄糖。
4. 消化与吸收：消化后的营养物质通过小肠壁进入血液循环，被输送到全身各个部位。
四、实验方法1. 模拟口腔消化：取少量淀粉，加入唾液，观察唾液淀粉酶对淀粉的分解作用。
2. 模拟胃消化：取少量蛋白质，加入胃蛋白酶，观察胃蛋白酶对蛋白质的分解作用。
3. 模拟小肠消化：取少量淀粉和蛋白质，加入胰蛋白酶、糜蛋白酶和淀粉酶，观察消化酶对淀粉和蛋白质的分解作用。
4. 观察消化过程：通过显微镜观察消化过程中的变化，如食物的形态变化、消化酶的作用等。
五、实验结果与分析1. 口腔消化：唾液淀粉酶将淀粉分解为麦芽糖，观察到的现象是淀粉颗粒逐渐减少，溶液颜色变浅。
2. 胃消化：胃蛋白酶将蛋白质分解为多肽，观察到的现象是蛋白质颗粒逐渐减少，溶液颜色变浅。
3. 小肠消化：消化酶将淀粉和蛋白质分解为葡萄糖和氨基酸，观察到的现象是淀粉和蛋白质颗粒消失，溶液颜色变浅。
酶的测定方法酶是一种生物催化剂，广泛应用于医药、食品、化工等领域。
酶的测定方法是评价酶活性的重要手段。
目前常用的酶测定方法有光度法、荧光法、比色法、电化学法等。
光度法是一种常用的酶测定方法。
该方法利用酶催化反应产生的物质吸收或发射光线的特性来测定酶活性。
例如，酶催化反应产生的NADH可以吸收340nm波长的紫外线光线，因此可以通过测定吸光度来评价酶活性。
光度法具有灵敏度高、操作简便等优点，但也存在一定的局限性，如受到其他物质的干扰等。
荧光法是一种新兴的酶测定方法。
该方法利用酶催化反应产生的荧光物质的特性来测定酶活性。
例如，酶催化反应产生的ATP可以发射荧光，因此可以通过测定荧光强度来评价酶活性。
荧光法具有灵敏度高、特异性强等优点，但也存在一定的局限性，如需要特殊的荧光探针等。
比色法是一种常用的酶测定方法。
该方法利用酶催化反应产生的物质的特性来测定酶活性。
例如，酶催化反应产生的葡萄糖可以与某些试剂发生比色反应，因此可以通过测定比色强度来评价酶活性。
比色法具有操作简便、成本低等优点，但也存在一定的局限性，如受到其他物质的干扰等。
电化学法是一种新兴的酶测定方法。
该方法利用酶催化反应产生的电化学信号的特性来测定酶活性。
例如，酶催化反应产生的电子可以通过电极传递，因此可以通过测定电流或电势来评价酶活性。
电化学法具有灵敏度高、特异性强等优点，但也存在一定的局限性，如需要特殊的电极等。
综上所述，酶的测定方法有多种，每种方法都有其优缺点。
在实际应用中，需要根据具体情况选择合适的测定方法。
同时，还需要注意测定条件的控制，以保证测定结果的准确性和可重复性。
一、脲酶测定(比色法)1、试剂配制：（1）pH6.7柠檬酸盐溶液：取368g柠檬酸溶于600mL蒸馏水中，另取295g氢氧化钾溶于水，再将两种溶液合并，用1N氢氧化钠将pH调至6.7，并用水稀释至2L。
（2）苯酚钠溶液：称取62.5g苯酚溶于少量乙醇中，加2mL甲醇和18.5mL丙酮，后用乙醇稀释至100mL（A液），保存再冰箱中。
称取27g氢氧化钠溶于100mL水中（B液），保存于冰箱中。
使用前，取A、B两液各20mL混和，并用蒸馏水稀释至100mL备用。
（3）次氯酸钠溶液：用水稀释制剂至活性氯的浓度为0.9％，溶液稳定。
（4）10％尿素溶液：10g尿素溶于100mL水中。
（5）N的标准溶液：精确称取0.4717g硫酸铵溶于水稀释至1L，则得1mL含0.1mgN 的标液，再将此液稀释10倍制成氮工作液（0.01mg/mL）。
2、操作步骤称取5ｇ土置于50mL容量瓶中,加1mL甲苯处理,加塞塞紧轻摇15ｍｉｎ;往瓶中加入5mL10%尿素液和10mL的柠檬酸盐缓冲液(ｐＨ6.7),仔细混匀。
在37℃恒温箱中培养24ｈ。
然后用热至38℃的蒸馏水稀释至刻度(甲苯应浮在刻度以上),摇荡,将悬液过滤。
取滤液1mL 置于50mL容量瓶中,用蒸馏水稀释至10mL,然后加入4mL苯酚钠溶液,并立即加入3mL次氯酸钠溶液，加入每一试剂后,立即将混合物摇匀,20ｍｉｎ后,将混合物稀释至刻度,在波长578ｎｍ处测定吸光值。
脲酶活性以样品所得的吸光值减去对照样品吸光值之差,根据标准曲线求出氨态氮量。
标准曲线绘制：分别取0、1、3、5、7、9、11、13mL氮工作液置于50mL容量瓶中，加蒸馏水至20mL，再加4mL苯酚钠溶液和3mL次氯酸钠溶液，随加随摇匀，20min后显色，定容。
1h内再分光光度计上于578nm处比色。
3、结果计算以24小时后1g土壤中NH3－N的质量（mg）表示脲酶活性（Ure）Ure＝a·V·n/m式中：a为由标准曲线求得的NH3－N浓度（mg/mL）；V为显色液体积（50mL）；n为分取倍数；m为烘干土重（g）。
教学目标与要求掌握： 胃蛋白酶原、淀粉酶、 脂肪酶测定的方法、 评价与临床应用。
熟悉： 胃分泌量、 胃泌素、 尿胰蛋白酶Ⅱ测定方法、 评价与临床应用；胃肠道疾病的有关病因、发病机制。
了解： 胃、 胰腺、肠道的主要生理功能；胰腺外分泌功能；肠道吸收不良试验。
胃、肠、胰为人体重要的消化器官； 胃、肠、胰广泛存在内分泌细胞 ，兼有外分泌和内分泌功能。
1. 胃液：pH为0.9～1.5的无色酸性液体 ，正常人每日分泌量为1.5 ～2.5L。
其主要功能是激活胃蛋白酶原转变为胃蛋白酶 ，并提供其最适pH。
胃酸还有抑菌和杀菌作用。
2. 胃蛋白酶：由主细胞分泌的胃蛋白酶原激活而来 ，是胃液中主要的消化酶。
3. 粘液：与表面粘液细胞分泌的HCO3-覆盖于胃粘膜表面 ，共同形成稳定的 “粘液HCO-”屏障 34. 内因子：壁细胞分泌的胃一种糖蛋白 ，与VitB12结合 ，保护VitB12在小肠不被破坏 ，与回肠细胞刷状缘特异受体介导的结合、摄取过程中发挥作用。
并在VitB121.胃粘膜脂蛋白与磷脂分子层结构。
碱潮：能有效调节粘膜下组织的pH。
粘液层防护与快速修复。
丰富的血液供给：基本条件。
胃粘膜激素 ：前列腺素（PG）具有粘膜保护作用，并能预防全身性刺激如 紧张恐惧、冷刺激等引起的胃粘膜损伤。
2.胃黏膜层保护胃免受胃酸损害前列腺素类激素物质具保护胃黏膜功能 保护因素不能发挥作用酸和酶就会侵蚀胃黏膜形成溃疡HP是主要致病因子HP根除后，消化性溃疡可得到根治消化溃疡应被认为是一种传染病并非HP携带者均发生溃疡3.1) 胃酸测定：十二指肠溃疡患者常有胃酸分泌过多 ，其基础胃酸分泌量 (BAO) 和最大胃酸分泌量 (MAO) 均明显增高。
胃溃疡患者胃酸分泌多正常或稍高于正常 ，但有 些患者胃酸分泌不增反降 ，可能是这些病人胃粘膜结构的缺陷 ，H+大量自胃反向弥 散入粘膜而致。
2) 幽门螺杆菌 (helicobacter pylori) 测定：血清学检查检测HP抗体；粪便HP抗原；口服13C或14C标记的尿素 ，检查HP尿素酶的活性；胃粘膜活检标本快速尿素酶试验。
各种酶的测定方法:土壤脲酶测定方法（靛酚比色法）根据脉酶水解时生成的氨与苯酚钠及次氯酸钠反应，形成兰色靛酚这一原理。
试剂配制：1.甲苯（分析纯）2.10%尿素：尿素（分析纯）10克溶于100毫升蒸馏水中。
（当天做当天配）3.柠檬酸盐缓冲液：368克柠檬酸（分析纯）溶于600毫升蒸馏水中；295克氢氧化钾溶于水；将二种溶液合并，调pH至6.7，并用水稀释至2升。
4.苯酚钠溶液：A.62.5克苯酚溶于少量95%乙醇，加2毫升甲醇和18.5毫升丙酮，用乙醇稀释至100毫升。
B.27克氢氧化钠溶于100毫升水中。
将二溶液保存在冰箱里。
使用前，将溶液A、B各吸取20毫升混合，用蒸馏水稀释至100毫升。
5.次氯酸钠溶液：用蒸馏水稀释试剂，至活性氯浓度为0.9%。
（次氯酸钠活性氯浓度为5.2%）。
标准溶液：称0.4717克硫酸铵（105 °C烘干）溶于水，稀释至1升（1毫升含100微克氮）即100ppm。
将100ppm的标准溶液稀释为10ppm。
分别吸取0、0.5ml、1.5ml、2.5ml、3.5ml、4.5ml、5.5ml、6.5ml、7.5ml于50毫升容量瓶或刻度试管中，加入试剂，最后定容至50 毫升使溶液浓度为：0、0.1ppm、0.3ppm、0.5ppm、0.7ppm、0.9ppm、1.1ppm、1.3ppm、1.5ppm。
分析步骤：称2~5克过20目风十土于50毫升磨口三角瓶中，加5~10滴甲苯，盖好，15分钟后加10毫升10%尿素和20毫升pH6.7柠檬酸盐缓冲液，摇匀后，在30C 恒温箱中培养24小时，过滤。
取滤液1~3毫升（视样品浓度定）于50毫升刻度试管中，加入4毫升苯酚钠溶液和3毫升次氯酸钠溶液，边加边摇匀。
20分钟后定容，在分光光度计波长578nm处比色（1cm比色杯）。
反应生成的靛酚兰能在60分钟以内稳定。
每一土样设置用水代替基质（即尿素）的对照，以除掉土壤中氨态氮引起的误差。
土壤纤维素酶活性测定（3,5- 二硝基水杨酸比色法）一、原理纤维素是植物残体进入土壤的碳水化合物的重要组分之一。
在纤维素酶作用下，它的最初水解产物是纤维二糖，在纤二糖酶作用下，纤维二糖分解成葡萄糖。
所以，纤维素酶是碳素循环中的一个重要的酶。
纤维素酶解所生成的还原糖与3,5- 二硝基水杨酸反应而生成橙色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
颜色深度与还原糖量相关，因而可用测定还原糖量来表示蔗糖酶的活性。
二、试剂1）甲苯2）1%羧甲基纤维素溶液：1g 羧甲基纤维素钠，用50%的乙醇溶至100ml。
3）pH5.5醋酸盐缓冲液：0.2mol/L 醋酸溶液 11.55ml 95% 冰醋酸溶至1L.0.2mol/L 醋酸钠溶液 16.4g C2H3O2Na或27.22g C2H3O2Na.3H2O溶至1L.取11ml 0.2mol/L 醋酸溶液和88ml 0.2mol/L 醋酸钠溶液混匀即成PH 5.5醋酸盐缓冲液. 4）3,5-二硝基水杨酸溶液：称1.25g二硝基水杨酸，溶于50ml 2mol/LNaOH和125ml水中，再加75g酒石酸钾钠，用水稀释至250ml（保存期不过7天），5）葡萄糖标准液（1mg/mL）预先将分析纯葡萄糖置80℃烘箱内约12小时。
准确称取50mg葡萄糖于烧杯中，用蒸馏水溶解后，移至50mL容量瓶中，定容，摇匀（冰箱中4℃保存期约一星期）。
若该溶液发生混浊和出现絮状物现象，则应弃之，重新配制。
三、操作步骤葡萄糖标准曲线：分别吸1mg/mL的标准葡糖糖溶液0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8mL 于试管中，再补加蒸馏水至1mL，加DNS溶液3ml混匀，于沸腾水浴中加热5min，取出立即泠水浴中冷却至室温，以空白管调零在波长540nm处比色，以OD值为纵坐标，以葡萄糖浓度为横坐标绘制标准曲线。
称10g土壤置于50ml三角瓶中，加入1.5ml甲苯，摇匀后放置15min，再加5ml 1%羧甲基纤维素溶液和5ml pH5.5醋酸盐缓冲液，将三角瓶放在37℃恒温箱中培养72h。
小肠中的三种消化酶
小肠是人体消化系统中最重要的一个器官，它起着消化和吸收食
物的关键作用。
在小肠中，有三种重要的消化酶，它们分别是脂肪酶、蛋白酶和淀粉酶。
脂肪酶是小肠中最先遇到的消化酶之一。
它的主要作用是将食物
中的脂肪分解为较小的脂肪酸和甘油，以便它们能够被身体吸收和利用。
脂肪是一种高能量的营养物质，但它在其原始形式下很难被身体
吸收。
脂肪酶通过将脂肪分解为小分子，使其更容易被小肠细胞吸收，从而供给身体所需的能量。
蛋白酶是小肠中的另一种重要消化酶。
蛋白酶的主要作用是将蛋
白质分解为氨基酸，这是构成蛋白质的基本单元。
蛋白质是身体各种
组织和器官的重要组分，同时也是身体所需的营养物质之一。
蛋白酶
通过将蛋白质分解为氨基酸，使其更容易被小肠细胞吸收，从而供给
身体合成所需的蛋白质。
最后，淀粉酶是小肠中的另一种重要消化酶。
淀粉酶的主要作用
是将食物中的淀粉分解为葡萄糖分子，这是身体能量来源的重要物质。
淀粉是碳水化合物的一种，它是人体获得能量的主要来源。
淀粉酶通
过将淀粉分解为葡萄糖分子，使其更容易被小肠细胞吸收并进入血液
循环，以供给身体所需的能量。
这三种消化酶的作用是相辅相成的。
当我们食用含有大量脂肪、
蛋白质和淀粉的食物时，小肠中的消化酶将起到至关重要的作用。
它
们通过将食物分解为更容易被吸收和利用的分子形式，确保身体能够充分吸收食物中的营养物质，并将其转化为能量供给身体其他部分的正常功能。
因此，了解小肠中的消化酶及其作用对于我们合理饮食、保持健康非常重要。
蛋白酶活力的测定[目的与原理]掌握蛋白酶活力的测定方法，测定鱼、虾、贝等水产动物主要消化器官肝胰脏、胃、肠等蛋白酶的活力。
动物消化器官内含有各种消化腺，这些消化腺分泌消化酶进行化学性消化作用，将机体摄入的大分子营养物质转变为可溶性小分子物质而吸收进入血液循环。
本实验采用福林—酚法测定机体内主要消化酶—蛋白酶活力。
福林—酚试剂（Folinphenol）在碱性溶液中极不稳定，易被酚类化合物还原为蓝色化合物。
蛋白质中含有酚基的氨基酸包括（酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸），用蛋白酶分解酪蛋白（底物），生成含酚基的氨基酸与福林－酚试剂成蓝色反应，可从蓝色的深浅测知酶活力多少。
[试剂与器材]试剂：1、福林试剂：在2000ml磨口回流装置内加入钨酸钠（Na2WO4·2 H2O）100g，钼酸钠(Na2MoO4·2H2O)25g，水700ml，35％磷酸50ml，浓盐酸100ml，文火回流10小时，然后加人硫酸锂50g，水50ml和溴水数滴，摇匀，去除冷凝器，继续煮沸15分钟，以除去多余的溴。
溶液呈金黄色，冷却后，定容至1000ml，过滤，滤液即福林试剂（试剂不应呈绿色，否则需重配）。
置于棕色瓶中保存，使用时用氢氧化钠标定，稀释至1N。
2、0.55M碳酸钠溶液3、10％三氯乙酸4、0.02M pH7.5磷酸缓冲液：0.02M 磷酸氢二钠溶液的配制：取Na2HPO4·2H2O 3.561g (或Na2HPO412H2O 7.164g)，溶解于1L蒸馏水中。
0.02M 磷酸二氢钠溶液的配制：取NaH2PO4 H2O 2.76g (或NaH2PO4 2H2O 3.121g)，溶解于1L蒸馏水中。
将0.02M 磷酸氢二钠溶液84ml与0.02M 磷酸二氢钠溶液16ml混合，即为0.02M pH7.5磷酸缓冲液。
5、0.5％酪素：（酪蛋白）0.5克，以0.5N NaOH 1ml湿润。
再加少量0.02MpH7.5磷酸缓冲液稀释。
在热水浴中溶解，定容至100ml，冰箱中可保存一周。
材料：鲜活鱼、虾、贝的肝胰脏、胃、肠标本。
器材：分光光度计、光径1.0cm比色杯、离心管、电子天平、离心机、匀浆器、剪子、镊子、冰块、试管若干、移液管若干。
[实验步骤]1、酶粗提液的制备取新鲜肝胰脏、胃、肠组织称重，在冰盘上剔除脂肪及内容物，以10倍缓冲液或去离子水匀浆各组织，将组织悬液低温下离心（3000rpm/min）,上清液为酶粗提液（酶液）。
2、酶活力测定（1）标准曲线的制作：精确称取烘干的酪氨酸50mg，加少量0.2N盐酸溶解，定容至100ml，分别配制溶液0—100μg/ml不同浓度溶液，不同浓度各取酪氨酸溶液1ml，加0.5％酪素2ml，于370C 水浴中反应15分钟，然后加入三氯乙酸3ml，离心除去沉淀。
取清液1ml，加入0.55M碳酸钠5ml，再加入福林试剂1ml，于370C水浴显色15分钟，在680nm波长下比色，测光密度（O D）。
以光密度读数为纵坐标，酪氨酸的微克数为横坐标，绘制曲线。
（2）样品测定样品测定设对照管和测定管。
37℃水浴显色15分钟，680nm波长比色，以对照管校零，读取测定管光密度。
3、计算在37℃下每分钟水解酪素产生1μg酪氨酸为一个酶活力单位蛋白酶的活力单位＝A/15×FA为样品测得光密度查曲线，得相应酪氨酸μg数F 为酶液最终稀释倍数，15为反应时间（min）[方法评估]福林—酚法测定蛋白酶活力是生产实践和科学研究中应用的基本实验方法。
[应用意义]水产动物消化系统内的消化酶随动物种类而异，而且消化酶的种类和在消化道中分布的差别是和动物食性相适应的。
分析消化蛋白酶活力有助于了解动物对蛋白质食物的消化能力，掌握动物的营养需求。
[注意事项]1、实验材料应新鲜，不新鲜会发生组织自溶和酶原被破坏。
2、酶液与底物作用时间、作用温度要严格控制，否则数据误差很大。
3、酶液要用适当缓冲液稀释到测定光密度在0.2—0.6之间。
淀粉酶活力的测定[目的与原理]掌握淀粉酶活力的测定方法，测定水产经济动物的主要消化器官肝胰脏、胃、肠内的淀粉酶活力。
淀粉酶催化淀粉分子中葡萄糖苷键水解，产生葡萄糖、麦芽糖等。
在基质充分的条件下，反应后加入的碘液与未被水解的淀粉结合成蓝色复合物，其蓝色深浅与未经酶促反应的空白管比较其吸光度，从而推算出淀粉酶的活力单位。
[试剂与器材]试剂：1、0.04%可溶性淀粉精确称取可溶性淀粉0.20g，置于20ml烧杯内，加入蒸馏水约5ml，摇匀使成淀粉混悬液，另称取无水磷酸二氢钠13.3g及苯甲酸4.3g，共置于500ml烧杯内，加入蒸馏水约250ml,煮沸后，将淀粉混悬液倒入此烧杯内，并用蒸馏水洗涤装淀粉混悬液的烧杯数次，洗涤亦倒入此烧杯内。
继续煮沸1分钟，冷却至室温后倒入500ml容量瓶中，并用蒸馏水稀释至500ml 刻度。
此淀粉液pH应为7.0±0.1，在室温下保存2―3个月。
2、0.1N碘贮存液：精确称取碘酸钾(KIO3) 3.567g及碘化钾（KI）45g置于1L容量瓶内，加入蒸馏水约800ml，然后缓慢加入浓盐酸9ml，摇匀后用蒸馏水稀释至1L刻度，置冰箱内备用。
3、0.01N碘应用液：取0.1N碘贮存液50ml，用蒸馏水稀释至500ml，盛于棕色瓶中置冰箱内约保存1个月。
材料：新鲜鱼、虾、贝的肝胰脏、胃、肠标本。
器材：分光光度计、电子天平、离心机、pH测定仪，恒温水箱、匀浆器、剪子、镊子、冰块、50ml 比色管若干、移液管若干，500ml容量瓶，烧杯。
[实验步骤]1、酶提取液的制备（见实验蛋白酶活力的测定）2、淀粉酶活力的测定取50ml刻度比色管二只，标明为对照管，测定管。
用蒸馏水稀释至50ml，立即混匀。
用660nm或红色滤光板进行比色，以蒸馏水校正光密度0点，读取对照管和测定管光密度读数。
3、计算淀粉酶活力单位定义：在370C、30min内，100ml酶液中的淀粉酶能完全水解淀粉10mg称为一个淀粉酶活力单位。
淀粉酶活力单位/100ml＝（对照管光密度—测定管光密度）/对照管光密度×2/10×30/7.5×100/0.1=（对照管光密度—测定管光密度）/对照管光密度×800[方法评估]测定淀粉酶的方法有很多种，大致可分为两类：即测定底物（淀粉）的减少量和测定产物（如还原性糖）的生成量。
本实验采用前者的淀粉—碘比色法。
[应用意义]分析淀粉酶的活力有助于了解水产动物对食物中淀粉的消化能力，由于鱼虾等水产动物种类与大小的差异和所提供食物品质的不同，以及动物所处生活环境的变化，各种水产动物对食物的消化吸收有明显的差别。
认识鱼虾消化酶变化特性，为研究水产种类饲料配伍提供科学依据[注意事项]1、0.04%可溶性淀粉溶液5ml内含淀粉量为2mg，在本法条件下，当2mg淀粉完全水解时相当于800淀粉酶单位／100ml（即：2/10 × 30/7.5 × 100/0.1 = 800）。
2、对照管内含淀粉2mg，由于淀粉溶液比较稳定，故对照管在固定比色计上的光密度读数并不改变，因而在测定中不必每次作对照管。
3、当淀粉酶接近800单位时，由于淀粉已几乎完全被水解，故加入碘液后也不再显蓝色，因此淀粉酶单位较高时（接近600单位）宜将标本稀释（2～5倍）后重新测定，并将测定结果乘以稀释倍数。
4、如淀粉溶液出现混浊或絮状物，表示淀粉溶液污染或变质，不能再用。
5、唾液内含有大量的淀粉酶，故即使是唾液的飞沫污染，也能使测定结果显著偏高。
脂肪酶活力的测定[目的与原理]掌握脂肪酶活力的测定方法，并测定鱼、虾、贝体内消化器官肝胰脏、胃、肠的脂肪酶活力。
脂肪酶在一定条件下，将甘油三酯水解。
在不同水解阶段可分别产生脂肪酸、甘油二酯、甘油一酯及甘油。
水解所产生的脂肪酸可以用标准的氢氧化钠滴定，用滴定值表示酶活力。
[试剂与器材]试剂：1、聚乙烯醇(P. V. P.)橄榄油乳化液：称取40克聚乙烯醇，加蒸馏水约1000毫升，在小火上加热，并不停搅拌，至聚乙烯醇全部溶解，冷却后定容至1000毫升。
用双层纱布过滤，滤液备用。
取4％聚乙烯醇溶液150毫升，加50毫升橄榄油，用高速组织捣碎机搅动6分钟，即成乳白色聚乙烯醇橄榄油乳化液，保存于低温下（4℃）备用。
2、0.025M磷酸缓冲液（pH7.5）。
0.025M磷酸氢二钠溶液的配置：取Na2HPO4·2H2O 4.45g 溶于1L蒸馏水中，0.025M磷酸二氢钠溶液的配置：取NaH2PO4·H2O 3.45g（或NaH2PO4·2H2O 3.90g）溶于1L蒸馏水中。
将0.025M磷酸氢二钠84ml与0.025M磷酸二氢钠16ml混合，即为0.025M磷酸缓冲液。
3、0.05N氢氧化钠标准溶液4、1％酚酞指示剂：取1g酚酞溶于100ml 70％乙醇溶剂中。
5、95％乙醇材料：鱼、虾、贝的肝胰脏、胃、肠标本。
器材：匀浆器、离心机、恒温水浴。
高速组织捣碎机、酸式滴定管、滴定管架、镊子、剪子、锥形瓶、移液管、烧杯。
[实验步骤]1、酶粗提液的制备（见蛋白酶活力的测定）。
2、取100ml锥形瓶3个，一个作为对照组，另两个为测定组对照组测定组1 测定组20.025M磷酸缓冲液（pH7.5） 5ml 5ml 5ml聚乙醇橄榄油乳化液 4ml 4ml 4ml95％乙醇 15ml40℃水浴预热5—10分钟酶液1ml 1ml1ml40℃水浴保温15分钟（精确计时）95％乙醇— 15ml15ml酚酞指示剂3滴3滴3滴用0.05N标准氢氧化钠滴定至微红色，记录滴定用去ml数。
计算：酶活力以国际单位表示，即在一定条件下，脂肪酶水解脂肪每分钟产生1微克分子脂肪酸的酶量定为一个国际单位。
脂肪酶活力单位＝（A－B）N·ft式中： A为样品耗碱液ml数， B为对照组耗碱液ml数N为每毫升碱液微克分子数，f为稀释倍数t为作用时间 (分)[方法评估]测定脂肪酶活力的方法大致可分为3类：即测定产物（游离脂肪酸）的增加量（如滴定法、比色法、分光光度法、荧光法和pH电极法等）；测定底物的减少量（如比浊法、扩散法等）；测定脂酶的实际量（如放射免疫法和乳胶凝集法等）。
本实验用滴定法测定脂肪酶活力，此法灵敏度较差，样品用量大，但所需设备较简单，可随时进行检测。
[应用意义]脂肪酶是动物消化脂肪的重要酶类其分泌量和活力与动物对脂肪的消化、吸收、利用有关。
水产动物肝胰脏或胰脏是脂肪酶的主要分泌器官，胃肠粘膜及肝脏亦能分泌，有的鱼类幽门垂中脂肪酶活力最高。
测定水产动物各部位脂肪酶活力有助于研究、分析其对脂肪的消化能力及各部位消化功能状况。
[注意事项]1、使用聚乙烯醇的聚合度为1000－1750，如聚合度低，乳化效果差。
