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..’. 各类抗生素皮试液的配制法1.PC皮试液的配制法（80万/支）（1）80万PC加4ml生理盐水（每1ml含20万单位）（2）取上液0.1加生理盐水至1ml(每ml含2万单位)（3）取上液0.1加生理盐水至1ml(每ml含2000单位)（4）取上液0.25加生理盐水至1ml(每ml含500单位)取上液0.1作皮试即可2.氨苄PC皮试液的配制法（0.5g/支）（1）取0.5g/支的氨苄PC加5ml生理盐水（每1ml含100mg）（2）取上液0.1加生理盐水至1ml(每1ml含10mg）（3）取上液0.1加生理盐水至1ml(每1ml含1mg）取上液0.1作皮试即可3.链霉素皮试液的配制法（1g/支）（1）取1g/支的链霉素加3.5ml生理盐水（每1ml含25万单位）（2）取上液0.1加生理盐水至1ml(每1ml含2.5万单位）（3）取上液0.1加生理盐水至1ml(每1ml含2500单位)（4）取上液0.4加生理盐水至1ml(每ml含1000单位)取上液0.1作皮试即可4.头孢类皮试液的配制法（呋辛.曲松.哌酮.唑啉）(1g/支)以头孢曲松为例（1）取1g/支的曲松加4ml生理盐水（每1ml含250mg）（2）取上液0.2加生理盐水至1ml(每1ml含50mg）（3）取上液0.1加生理盐水至1ml(每1ml含5mg）（4）取上液0.1加生理盐水至1ml(每1ml含500ug）取上液0.1作皮试即可5.庆大霉素皮试液的配制法（8万单位/支）（1）取原液0.1加生理盐水至1ml（4000单位/ml）（2）取上液0.1加生理盐水至1ml(400单位/ml）取上液0.1作皮试即可6.破伤风皮试液的配制法（1）取每支0.6ml的TAT加生理盐水至1ml（2）取上液0.1加生理盐水至1ml取上液0.1作皮试即可7.细胞色素C皮试液的配制法取原液0.1加生理盐水至1ml取上液0.1作皮试即可8. .VB1皮试液的配制法取原液0.1加生理盐水至1ml取上液0.1作皮试即可。
细胞培养用试剂的配制1、胰蛋白酶（trypsin）：0.02 g EDTA-2Na、0.25 g胰蛋白酶，用PBS定容于100 mL容量瓶中。
2、PBS：NaCl 8 g、KCl 0.2 g、Na2HPO4 2.9 g、KH2PO4 0.2 g，用超纯水定容于1000 mL容量瓶中。
3、MTT（5 mg/mL）：噻唑蓝，一般现配现用，过滤后4℃避光保存，MTT变为灰绿色时不可以再用。
MTT不好溶解时，可以多吹打几次，或者磁力搅拌器30min，外包锡箔纸。
MTT 500 mg，用PBS定容于100 mL容量瓶中。
4、双抗：氨苄西林（U）0.5 g、硫酸链霉素（80万单位）1.25 g，用超纯水定容于100 mL容量瓶中。
注：* 有时不需要准确定容；** 细胞用试剂需用0.22 μm微孔滤膜过滤除菌；*** 链霉素终浓度为100 μg/mL，氨苄西林终浓度为50 μg/mL。
（0.5÷100＝0.005 g/mL，溶于100 mL培养基，0.005 g÷100 mL＝0.05 mg/mL，即50 μg/mL）**** 为了充分溶解，4℃过夜，然后再分装于1.5 mL EP管中，-20℃保存。
细胞初代培养1、准备：培养用品消毒放入经紫外照射30min的净化台内。
组织块，培养液易受紫外损伤的物品在培养时再放入操作野中。
2、漂洗、剪切、消化组织：PBS洗组织块3次，组织块剪成3-5mm2块状，剪碎的组织放入三角烧瓶中，加入比组织量多30-50倍的0.25%的胰蛋白酶消化液，置于磁力搅拌器上（常用消化温度37℃，pH7.6-8.0），组织蓬松呈絮状可终止。
也可以采用冷消化法，即加入胰酶4℃过夜或更长。
消化时间依据组织块大小和硬度而定。
3、分离：消化过程中消化液变浑浊，可吸取少量在镜下观察，若组织分散成细胞团或者单个细胞，立即终止，低速离心（500-1000 rpm/ min）5min,去上清，Hanks液漂洗3次，离心去上清，共两次，用筛网滤去为充分消化的组织块，低速离心（500-1000 rpm/ min）5min,去上清，加入一定量的培养液。
抗生素溶剂存储浓度一般使用浓度保存条件Kana（卡那霉素）水10mg/ml50ug/ml-20℃Amp（氨苄霉素）水50mg/ml50ug/ml-20℃Strp（链霉素）水10mg/ml50ug/ml-20℃Hyp（潮霉素）水50mg/ml-20℃Ca（头孢霉素）水50mg/ml-20℃Cm（氯霉素）乙醇34mg/ml50ug/ml-20℃
Rif（利福平）二甲基亚砜
（DMSO）
50mg/ml50ug/ml-20℃
以水为溶剂的抗生素贮存液应通过0.22um水膜滤器过滤除菌。
以有机溶剂为溶剂的抗生素贮存液应通过0.22有机膜滤器过滤除菌。
以乙醇为溶剂的抗生素溶液无须除菌处理，所有抗生素容易均应保存于不透光的容器中。
乙酰丁香酮（AS）的配置：200mM/L=39.24mgAS+1ml二甲基亚砜（DMSO）使用有机滤器过滤除菌；
使用浓度200ug/ml：2ul的200mM/L的配置好的AS
异丙基-b-D-硫代半乳糖苷（IPTG）的配置：用水配置成50mg/ml，后使用水膜滤器过滤除菌；
使用浓度：0.1mM/L-1mM/L
MES溶液：1mol/L，精确称量2.1320gMES，加入95ml的ddH2O，使用5M KOH 调节PH至5.3后，定容至100ml，超净台内过滤除菌，-20℃冻存。
资料范本本资料为word版本，可以直接编辑和打印，感谢您的下载细菌培养常用培养基和抗生素的配制方法地点：__________________时间：__________________说明：本资料适用于约定双方经过谈判，协商而共同承认，共同遵守的责任与义务，仅供参考，文档可直接下载或修改，不需要的部分可直接删除，使用时请详细阅读内容细菌培养常用培养基和抗生素的配制方法一、常用培养基1、LB培养基将下列组分溶解在0.9L水中：蛋白胨10g酵母提取物5g氯化钠10g如果需要用1NNaOH（～1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。
注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。
2、SOB培养基将下列组分溶解在0.9L水中：蛋白胨20g酵母提取物5g氯化钠0.5g1mol/L氯化钾2.5ml用水补足体积到1L。
分成100ml的小份，高压灭菌。
培养基冷却到室温后，再在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁。
3、SOC培养基成分、方法同SOB培养基的配制，只是在培养基冷却到室温后，除了在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁外，再加2ml灭菌的1mol/L葡萄糖（18g葡萄糖溶于足够水中，再用水补足到100ml，用0.22um的滤膜过滤除菌）。
4、TB培养基将下列组分溶解在0.9L水中：蛋白胨12g酵母提取物24g甘油4ml各组分溶解后高压灭菌。
冷却到60℃，再加100ml灭菌的170mmol/LKH2PO4/0.72mol/LK2HPO4的溶液（2.31g的KH2PO4和12.54gK2HPO4溶在足量的水中，使终体积为100ml。
高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌）。
5、2×YT培养基将下列组分溶解在0.9L水中：蛋白胨16g酵母提取物10g氯化钠4ml如果需要用1NNaOH（～1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。
注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。
配置氨苄抗生素的方法有
配置氨苄抗生素的方法有以下几种：
1. 注射剂配置：首先将氨苄抗生素粉末倒入注射用溶剂中，然后摇晃溶液使其充分溶解。
2. 静脉滴注配置：将氨苄抗生素粉末倒入静脉滴注用溶剂中，然后轻轻摇晃瓶子使其充分溶解。
3. 口服制剂配置：将氨苄抗生素片剂或颗粒剂加入适量的饮料中，然后用搅拌棒充分搅拌溶解。
注意事项：
1. 在配置氨苄抗生素时，应严格按照医生或药师的指示进行，遵循规定的药物剂量和稀释浓度。
2. 配制好的氨苄抗生素溶液应及时使用，不得长时间或长期储存。
3. 配制过程中需要注意无菌操作，以防止细菌污染。
4. 使用前应仔细阅读药物说明书，了解该药物的适应症、剂量和使用方法，如有疑问应及时向医生或药师咨询。
溶液配制
2,4-D溶液（1mg/ml）: 0.1g粉末溶于少量1M NaOH中，加热溶解，ddH2O定容至100mL，保存在棕色瓶中。
1mg/ml）: 0.05g粉末溶于少量1M NaOH中，ddH2O定容至50mL，保存在棕色瓶中。
Carb羧苄（50mg/ml）: 1 g羧苄青霉素二钠盐溶于ddH2O，定容至20 ml，过滤灭菌，分装成小份于-20℃贮存。
Amp氨苄(100mg/ml）：1 g氨苄青霉素钠盐溶于ddH2O，定容至10ml，过滤灭菌，分装成小份于-20℃贮存。
Kan卡那(100mg/mL)：5 g Kan溶于ddH2O，定容至50 ml，过滤灭菌，分装成小份于-20℃贮存。
Rif（35mg/mL)：1 g Rif先溶于少量NaOH溶液，再用ddH2O定容至28.5 ml，过滤灭菌，分装成小份于-20℃贮存。
Cefo头孢(100mg/mL)：5 g Cefo溶于ddH2O定容至50 ml，过滤灭菌，分装成小份于-20℃贮存。
Timetin替卡西林二钠/克拉维酸钾（200mg/mL）: 5g粉末溶于25 mL ddH2O，过滤灭菌，-20℃保存。
Basta草铵膦（10mg/mL）：100 mg粉末溶于10 mL ddH2O，过滤灭菌，-20℃保存。
As乙酰他丁香酮（100 mM）：196.2 mg粉末溶于5 mL DMSO，用ddH2O定容至10 mL，过滤灭菌，-20℃保存。
抗生素的配制1. 氨苄青霉素Amp（100mg/mL）取1g氨苄青霉素溶于100mL的ddH2O中溶解，分装于2mL离心管中，-20度保存。
用时每100mL加75μL，终浓度为50μg/mL。
2. 硫酸链霉素（400mg/mL）氨基糖苷类抗生素，氨苄青霉素主要用于抑制革兰氏阴性细菌的生长。
取4g硫酸链霉素溶于100mL的ddH2O中溶解，分装于2mL离心管中，-20度保存。
用时每100mL加75μL，终浓度为200μg/mL。
3. 乳酸（50%）大多数细菌不耐酸，而真菌偏好酸性。
将50mL的乳酸溶液与50mL的ddH2O混匀，分装于2mL离心管中，-20度保存。
用时每100mL加75μL，终浓度为0.35%。
4. 卡纳霉素Kanamycin是一种氨基糖酐类，从卡那霉素链霉菌(Streptomyceskanamyceticus)中分离得到。
能结合细菌核糖体的30S亚基上的16S rRNA，干扰formyl-methionyl-tRNA 与30SrRNA的连接，阻断细菌蛋白质的合成。
取1g卡纳霉素溶于100mL的ddH2O中溶解，分装于2mL离心管中，-20度保存。
用时每100mL加75μL，终浓度为50μg/mL。
1. 青霉素：β-内酰胺类抗生素,主要是抑制细菌的细胞壁生成,使之产生缺陷,细菌破裂死亡.2. 红霉素: 大环内酯类抗生素,阻碍细菌蛋白质的合成,起到抑制细菌繁殖的作用,但是不能杀菌.3. 四环素: 四环素类抗生素,抑制细菌DNA复制,阻碍蛋白质合成.起到抑制细菌生长作用,但大剂量也可杀菌.4. 链霉素: 氨基甙类抗生素,阻碍细菌蛋白质合成.杀菌作用.毒素和抗毒素是相对概念,某些物质进入体内会抑制我们正常的生理运转环境和途径,比如有机磷农药可以使神经肌肉接头的信号传递出现障碍.从而产生一系列的症状.而抗毒素用通俗的话来说就是解毒药.能逆转或者阻止毒素对正常生理的破坏.外毒素（exotoxin）: 细菌在生长过程中由细胞内分泌到细胞外的毒性物质。
四.常用抗生素氨苄青霉素（ampicillin）（100mg/ml）溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
羧苄青霉素（carbenicillin）（50mg/ml）溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
甲氧西林（methicillin）（100mg/ml）溶解1g甲氧西林钠于足量的水中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以37.5ug/ml 终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。
卡那霉素（kanamycin）（10mg/ml）溶解100mg卡那霉素于足量的水中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
氯霉素（chloramphenicol）（25mg/ml）溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以12.5ug/ml～25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
链霉素（streptomycin）（50mg/ml）溶解0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
萘啶酮酸（nalidixic acid）（5mg/ml）溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以15ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
四环素（tetracyyline）（10mg/ml）溶解100mg四环素盐酸盐于足量的水中，或者将无碱的四环素溶于无水乙醇，定容至10ml。
分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光，于-20℃贮存。
常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
细菌培养常用培养基和抗生素的配制方法一、常用培养基1、LB培养基将下列组分溶解在0.9L水中：蛋白胨10g酵母提取物5g氯化钠10g如果需要用1NNaOH（～1ml）调整pH至7。
0，再补足水至1L。
注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L，上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。
2、SOB培养基将下列组分溶解在0。
9L水中：蛋白胨20g酵母提取物5g氯化钠0.5g1mol/L氯化钾2.5ml用水补足体积到1L。
分成100ml的小份,高压灭菌。
培养基冷却到室温后，再在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁。
3、SOC培养基成分、方法同SOB培养基的配制，只是在培养基冷却到室温后，除了在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁外，再加2ml灭菌的1mol/L葡萄糖（18g葡萄糖溶于足够水中，再用水补足到100ml,用0.22um的滤膜过滤除菌）。
4、TB培养基将下列组分溶解在0。
9L水中：蛋白胨12g酵母提取物24g甘油4ml各组分溶解后高压灭菌。
冷却到60℃,再加100ml灭菌的170mmol/LKH2PO4/0。
72mol/LK2HPO4的溶液（2.31g的KH2PO4和12.54gK2HPO4溶在足量的水中，使终体积为100ml。
高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌)。
5、2×YT培养基将下列组分溶解在0。
9L水中:蛋白胨16g酵母提取物10g氯化钠4ml如果需要用1NNaOH（～1ml）调整pH至7。
0，再补足水至1L。
注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L，上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。
6、YPD培养基将下列组分溶解在0.9L水中:蛋白胨20g酵母提取物10g葡萄糖20g用水补足体积为1L后，高压灭菌。
建议在高压灭菌之前,对色氨酸营养缺陷型每升培养基添加1。
6g色氨酸，因为YPD培养基是色氨酸限制型培养基。
为了配制平板，需要在高压灭菌前加入20g琼脂粉.二、常用抗生素氨苄青霉素（ampicillin）（100mg/ml）溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中,最后定容至10ml.分装成小份于—20℃贮存。
