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培养细胞所需的几种主要液体的配制方法：1．DMEM维持培养基DMEM基础培养基95ml 95ml胎牛血清5ml谷氨酰胺液2ml含有DMEM基础培养基95ml，胎牛血清5ml，谷氨酰胺液2ml。
混合均匀，密封后与4摄氏度保存。
2．D-hank’sD-hank’s干粉g(1袋)NaHCO3超纯水1000ml取D-hank’s干粉加入超纯水500ml搅拌均匀，加入的NaHCO3搅拌至完全溶解，倒入1000ml容量瓶中，用1mol/l的HCL或者NaOH 溶液调整溶液的PH值为7.2,最后经过∮0.22微升的滤膜过滤除菌,分装后4摄氏度保存.3. DMEM完全培养基85ml,DMEM基础培养液85ml,, l-谷氨酰胺溶液, 2ml1000u/ml双抗液1ml胎牛血清15ml取DMEM基础培养基85ml, 胎牛血清15ml,l -谷氨酰胺溶液2ml,混合均匀,密封于4摄氏度保存.4. DMEM细胞基础培养基DMEM干粉(1袋)Na2HCO3超纯水1000 ml取DMEM干粉1袋()倒入烧杯中,取800ml 超纯水溶解培养基干粉,搅拌均匀,然后向溶液中加入的Na2HCO3,搅拌至完全溶解后倾入1000 ml容量瓶中,再用1mol/l 的HCL 或者1mol/l的NaOH溶液调整溶液的PH值为7.2,混合均匀后,定容,∮0.22微升的滤膜过滤除菌,分装4摄氏度保存.5. l-谷氨酰胺溶液l-谷氨酰胺DMEM基础培养基100ml称取l-谷氨酰胺干粉g于烧杯中,加80 ml超纯水于烧杯中搅拌溶解,用100ml容量瓶定容,∮0.22微升的滤膜过滤除菌,分装于小瓶中于-20摄氏度保存.使用添加量是1ml/50ml,使用浓度是2mmol/l.青霉素(注射用) 80万单位(1瓶)链霉素(注射用) 0.8 g％生理盐水80ml取注射用青霉素100万单位及注射用链霉素于80ml DMEM培养基中,搅拌混合均匀,用∮0.22微升的滤膜过滤除菌,分装于小瓶中-20℃％的胰酶溶液胰蛋白酶干粉 0.25 gDMEM基础培养基100ml称取胰蛋白酶干粉0.25 g于烧杯中,加入80ml DMEM基础培养基溶液,进行搅拌溶解,100 ml容量瓶定容,∮0.22微升的滤膜过滤除菌,分装于小瓶中于-20℃条件下保存.8.mg/ml的内皮细胞生长添加物溶液(ECGS)ECGS干粉 15 g(1支)无菌超净水 6 ml取内皮细胞生长添加物15 g(1支),加入6 ml无菌超纯水完全溶解后,分装于-20℃条件下保存.在培养基中添加剂量为1ml/50ml,即培养基浓度为50微克/ ml.9.PBS 液KCLNaclNa2HPO4.12H2OKH2PO4分别取KCL, Nacl, Na2HPO4.12H2O, KH2PO4于烧杯中,加入适量的超纯水搅拌至所有药物完全溶解,然后倾入1000ml容量瓶中,最后定容并调节PH为7.20,分装于4℃保存,。
DME高糖配方/F12培养基说明书产品代号： MD207-050 一．【组成成分】成分 mg/L 成分 mg/L 成分 mg/L 无水氯化钙 116.6 L- 亮氨酸 59.05 亚油酸 0.042 五水硫酸铜 0.0013 L- 赖氨酸盐酸盐91.25 硫辛酸 0.105 九水硝酸铁 0.05 L- 蛋氨酸 17.24 酚红 8.1 七水硫酸亚铁0.417 L- 苯丙氨酸 35.48 1,4- 丁二胺二盐酸盐 0.081 氯化钾 311.8 L- 丝氨酸26.25 丙酮酸钠 55氯化镁 28.64 L- 苏氨酸 53.45 维生素 H 0.0035 无水硫酸镁 48.84 L- 丙氨酸4.45 D- 泛酸钙 2.24 氯化钠 6999.5 L- 天门冬酰胺 7.5 氯化胆碱 8.98 无水磷酸二氢钠 54.35 L- 天门冬氨酸 6.65 叶酸 2.65 磷酸氢二钠 71.02 L- 半胱氨酸盐酸盐 17.56 i- 肌醇 12.6 七水硫酸锌 0.432 L- 谷氨酸 7.35 烟酰胺 2.02L-精氨酸盐酸盐147.5 L-脯氨酸17.25盐酸吡哆醛2L-胱氨酸盐酸盐31.29 L-色氨酸9.02 盐酸吡哆醇0.031L-谷氨酰胺365 L-酪氨酸38.4核黄素0.219甘氨酸 18.75 L- 缬氨酸 52.85 盐酸硫胺 2.17L-组氨酸盐酸盐31.48 D-葡萄糖3151胸苷0.365L-异亮氨酸54.47次黄嘌呤2维生素B12 0.68产品指标】外观粉红色固体粉末溶解性完全溶解，溶液澄明。
pH值①加 NaHCO3 6.60- 7.20②不力卩 NaHCO3 5.50-6.10水分（% 屿.0渗透压（ mOsm/kgH2O①加 NaHCO3 27*302②不加 NaHCO3 23*263细菌内毒素（EU/ml）<10微生物检查（CFU/g <000细胞生长试验细胞形态与标准细胞形态相似细胞数量加10%小牛血清培养4天，细胞密度从104细胞/ml增加到105细胞 /ml 。
DMEM培养基的配置1 实验目的➢配制DMEM培养基2 实验原理2.1 DMEM培养基的用途➢➢DMEM and Click’s media have an osmolarity that is more compatible with mouse serum than RPMI; in fact, RPMI was specifically designed for the culture of human cells.2.2 本实验室在培养小鼠来源细胞时选用DMEM培养基的理由➢2.3 培养基中各种组分的作用及添加依据2.3.1 Hepes（羟乙基哌碃乙硫磺酸）：25mM /L (/L)，不加碳酸氢钠时pH为，加碳酸氢钠时pH为。
单独配制时，配制为100X即/ml。
➢配制 /L (/mL) Hepes：12g的Hepes定容到20ml PBS中，过滤除菌，分装为1ml/管，－20°C保存。
Cell Biology建议为4°C保存。
➢HEPES 是一种非离子缓冲液,在pH 7.2 - 7.4 范围内具有较好的缓冲能力,但是非常昂贵,在高浓度时对一些细胞可能有毒.HEPES缓冲液可与低水平的碳酸钠(/L)共用,以抵消因额外加入HEPES引起的渗透压增加(不懂，何为抵消？邹强).在这种培养条件下,细胞培养瓶的盖子应拧紧,以防止培养液中所需的少量碳酸盐散入空气中. 来自网络。
2.3.2 缓冲系统: 来自网络。
➢大多数细胞所需pH 在7.2 - 7.4.但是,细胞培养最适pH值随培养的细胞种类不同而不同.成纤维细胞喜欢较高pH (7.4 - 7.7), 而传代转化细胞系则需要偏酸pH (7.0 - 7.4).➢由于多数培养液靠碳酸氢钠(NaHCO3)与CO2体系进行缓冲,因此,气相中的CO2浓度应与培养液中碳酸氢钠浓度相平衡.如果气相或培养箱空气中CO2浓度设定在5%,培养液中NaHCO3的加入量为/L;如果CO2浓度维持在10%,培养液中NaHCO3的加入量为/L.➢细胞培养瓶盖不应拧得太紧,以保证气体交换.➢大多数培养液中含有酚红作为pH指示剂,酸性培养液呈橙黄色,碱性培养液呈深红色.➢碳酸氢钠：CO2浓度为5%时，培养液中碳酸氢钠浓度为/L；CO2浓度为10%时，培养液中碳酸氢钠浓度为/L（科学出版社.细胞实验指南P6）。
1640和DMEM的配制方法RPMI 1640细胞培养液的配制1)配制培养基最好使用新制备的三蒸水。
一般在试验前当天或前一天制备为好。
调节p H值的酸碱溶液也应该使用这种水配制。
2) 制备培养基的器皿清洗要绝对干净，烤干后备用（滤器、滤膜、量筒、移液管及盛放培养基的小瓶等存放和转移培养基液体的器具都应进行灭菌）。
3)溶解培养基：将干粉培养基溶于总量1/3的水中，再用水洗包装袋内面两次，倒入培养液中。
振荡或超声助溶，一般不要加热助溶。
4) 补加试剂：根据包装袋说明和试验需要加入NaHCO3（2.0g）、谷氨酰胺、丙酮酸钠、HEPES等其他试剂。
5) 加抗生素：一般抗生素终浓度为――青霉素100U/ml，链霉素100U/ml。
市售青霉素为80万U／瓶，可溶于4ml体积，每一升培养液中加0.5ml即可。
市售链霉素为100万U ／瓶，可溶于5ml体积，每一升培养液中也加0.5ml即可。
无链霉素的情况下，用庆大霉素代替，终浓度调为50～200U/ml。
6) 调pH值：加水到900ml（在需要加10％小牛血清的情况下），然后用5％NaHCO3调节pH到7.2。
7) 过滤除菌：宜采用0.45um和0.22um滤膜各一张，上层为0.45um，下层为0.22um，以保证过滤效果。
注意滤膜正面（光面）朝上。
过滤后分装于小瓶中（100或200ml）。
8) 加小牛血清：根据培养基配制的量将小牛血清分装，冷冻保存（－20℃）。
临用前将加入小牛血清(10%~20%)。
【注意事项】每次配液时，需要的其他辅助性液体（Hanks，胰蛋白酶消化液，PBS，抗生素溶液等）也可以同时配制，分别过滤。
市售小牛血清使用前都应该灭活（56℃，30min），以消除补体活性。
动物血清个体差异大，故而每一批血清都进行严格检测，同时进行无菌试验。
优质血清应该为淡黄色，透明，无溶血，无沉淀，灭活后颜色稍深。
生化检测总蛋白含量3.5~4.5g/100ml，球蛋白不高于2 g／100ml。
1把干粉加入三蒸水中，缓慢搅拌，并将袋中微量粉末冲下。
2加NaHCO3 2.0g/L 1640培养液（或3.7g/L DMEM培养液）。
3稀释至1L，搅拌4小时以上，至粉末完全溶解。
4用1N HCl或1N NaOH将pH调低于正常pH0.2-0.3。
(在正常情况下，培养液pH介于7.2-7.4间，呈桃红色。
）5每升培养液加青霉素0.0583g，链霉素0.1000g，搅拌令之溶解。
6抽滤灭菌。
7分装时，加入10%小牛血清，4o C保存。
* MEM培养液临抽滤时加入L—谷氨酰胺0.2g/L。
* DMEM培养液分装时加入1%的非必需氨基酸。
消化液(0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA)1称取胰蛋白酶粉末0.25g，先用少许灭菌过的pH 7.2的PBS液调成糊状，然后再补足100ml。
2置室温搅拌4小时或冰箱内过夜，过滤灭菌。
3称0.02g EDTA，溶于100ml PBS 中，搅拌至溶，高压灭菌。
4将EDTA 和胰蛋白酶按1：1的比例混合，4o C保存。
PBS液1 准确称取以下各成分：KCl 0.2 gKH2PO4 0.2 gNaCl 8.0 gNa2HPO4·12H2O 2.08 g2 依次溶解在三蒸水中，待前一种完全溶解后，再溶解下一种成分，最后补足 1000ml水。
3 分装瓶中，高压灭菌，4o C保存。
D-Hank,s液1 准确称取以下各成分：KCl 0.4gKH2PO4 0.06gNaCl 8.0gNaHCO3 0.35gNa2HPO4·12H2O 0.08g酚红 0.01g2 以上成分依次溶解于三蒸水中，并不时搅动(注意应待前一种试剂完全溶解后再溶解下一种成分)。
3 将配好的溶液移入容量瓶中，补足水充分混匀。
4 分装瓶中，高压蒸气灭菌，4o C保存。
1 准确称取以下各成分：CaCl2 (无水) 0.14gKCl 0.4gKH2PO4 0.06gMgCl2·6HO 0.10gMgSO4·7HO 0.10gNaCl 8.0gNaHCO3 0.35gNa2HPO4·12HO 0.12gD葡萄糖 1.0g酚红 0.01g2 将CaCl2 先溶解在100ml三蒸水中。
DMEM是一种含各种氨基酸和葡萄糖的培养基，DMEM细胞培养基是在MEM培养基的基础上研制的。
与MEM比较增加了各种成分用量，同时又分为高糖型（低于4500g/L）和低糖型(低于1000g/L)。
高糖型有利于细胞停泊于一个位置生长，适于生长较快、附着较困难肿瘤细胞等。
这种培养基的特点：（1）氨基酸含量为依格尔培养基的2倍，且含有非必需氨基酸，如甘氨酸等；（2）维生素含量为依格尔培养基的4倍；（3）含有糖酵解途径中的重要物质——丙酮酸；（4）含有微量的铁离子。
该类培养基广泛应用于疫苗生产和各种初代病毒宿主细胞的细胞培养及单一细胞培养;如A9、3T6、BALB/3T3、COS-1、COS-3、COS-7、L6、WEHI-3b等细胞系的培养。
DMEM细胞培养基（二）配制方法及注意事项配制方法（1）在一个尽可能接近总体积的容器中加入比预期培养基总体积少5％的双蒸水。
（2）在室温（20℃到30℃）的水中加入干粉培养基，轻轻搅拌，不要加热。
（3）水洗包装袋的内部，转移全部的痕量干粉到容器内。
（4）加NaHCO3到培养基中。
（5）用双蒸水稀释到想要的体积，搅拌溶解。
注意不要过分搅拌。
（6）通过缓慢搅拌加入1N NaOH 或1N HCL调节pH值，由于pH值在过滤时会上升0.1到0.3，因而调节pH值使它比最终想要的pH值低0.2到0.3。
培养基在过滤前要保持密封。
配制培养基要注意以下问题：●认真阅读说明书。
说明书都注明干粉不包含的成分，常见的有NaHCO3、谷氨酰胺、丙酮酸钠、HEPES等。
这些成分有些是必须添加的，如NaHCO3、谷氨酰胺，有些根据实验需要决定。
●配制是要保证充分溶解，NaHCO3、谷氨酰胺等物质都要等培养基完全溶解之后才能添加。
●配制所用的水应是三蒸水，离子浓度很低。
●所用器皿应严格消毒。
●配制好的培养基应马上过滤，无菌保存于4度。
●液体培养基主要是为了科研工作的方便而设计的培养基，它是一种灭菌后保证无菌的溶液，必要时可制成无内毒素等的溶液，可节省科研人员的工作量。
