肝糖原的提取、鉴定与定量实验报告9页

肝糖原的提取与鉴定一、实验目的：1、掌握碘与糖原作用的显色原理。

2、熟悉班氏试剂检验还原糖的原理。

3、了解实验动物的选择和注意事项。

二、实验原理：肝糖原是葡萄糖在人体内重要的储存方式之一。

肝糖原的合成和分解，对血糖浓度的调节起着关键的作用。

糖原是高分子化合物，正常情况下分子量约4×106，微溶于水，无还原性，与碘作用呈红色，这是糖原中葡萄糖长链形成的螺旋中，依靠分子间引力吸附碘分子后呈现的颜色。

将新鲜的肝组织与石英砂以及CCl3COOH共同研磨，当肝组织被充分破碎后，其中的蛋白质被CCl3COOH变性沉淀，而糖原仍溶于溶液中。

过滤除去沉淀，糖原不溶于乙醇，在滤液中加入乙醇将糖原沉淀出来。

将沉淀的糖原溶于水，一部分做碘的颜色反应，一部分经酸水解为葡萄糖，用班氏试剂检验。

三、实验步骤：（一）肝糖原提取1.取大白鼠一只，饱食30-60min后，置于封闭桶中，乙醚麻醉5分钟。

立即取出肝脏，迅速用滤纸吸去血液。

称重后置于研钵中，按照1g/1mL的比例加入10%三氯醋酸以及少量石英砂，初步研磨。

2.再按照1g/2mL比例加入5%三氯醋酸，继续研磨组织至糜状。

3000r/min离心10min，取上清液置于一刻度离心管中。

3.加入等体积95%预冷乙醇，混匀静置10min，此时糖原成絮状沉淀析出。

4.3000r/min离心10min，弃上清后将离心管倒置于滤纸上1-2min，吸去残余液体。

5.沉淀中加入蒸馏水溶解。

（二）肝糖原的鉴定1.取小试管2支，一支加入糖原溶液10滴，另一支加入蒸馏水10滴。

两管各加碘液1滴，混匀观察现象。

2.剩余糖原溶液中加入浓盐酸3滴，沸水浴10min水解。

取出冷却，用20%NaOH调至中性。

3.在一只大试管中加入班氏试剂2mL，在沸水浴中预热后，小心取水解液沿管壁加入，注意不要搅动下层班氏试剂。

沸水浴2min观察现象。

四、实验结果：1.加入糖原溶液的小试管中变为红色，而加入蒸馏水的小试管中仍为黄色；2.加入班氏试剂沸水浴后，试管中产生砖红色的沉淀环。

生物化学实验报告姓名：符含敏学号： 3140090079专业年级： 2014级预防医学组别：第三实验室生物化学与分子生物学实验教学中心实验名称肝糖原的提取、鉴定与定量实验日期2015-1-8 实验地点第三实验室合作者杨锐指导老师朱利娜评分教师签名批改日期格式要求：正文请统一用：小四号，宋体，1.5倍行距；数字、英文用Times New Roman；标题用：四号，黑体，加粗。

需强调的地方请用蓝颜色标出。

不得出现多行、多页空白现象。

一、实验目的：提取鸡肝中的肝糖原进行肝糖原的定性以及定量实验二、实验原理：1.低浓度的三氯醋酸能使蛋白质变性，破坏肝组织中的酶且沉淀蛋白质，使糖原能很好地保存在上清液中，95%的乙醇能将滤液中的糖原沉淀。

2.糖原溶液遇碘呈红棕色，糖原水解成的葡萄糖与班氏试剂水浴加热可变黑色。

3.糖原在浓酸中可水解为葡萄糖，浓硫酸可使葡萄糖进一步脱水生成糠醛衍生物，它再与蒽酮试剂脱水缩合生成蓝色的化合物。

4.糖含量在10-100μg，溶液颜色深浅与可溶性糖含量成正比。

三．实验材料：1.鸡肝乙醇 5%三氯醋酸 50%NaOH 12mol/LHCl 碘试剂班氏试剂普通离心机室温至100℃恒温箱可见光分光光度计天平剪刀镊子研钵试管架10ml离心管刻度吸量管白瓷反应板2. 30%KOH 标准葡萄糖溶液 90%浓硫酸蒽酮显色剂四．实验步骤：1.肝糖原的提取与鉴定：鸡肝约1.5 g，剪碎＋5%CClCOOH 1 ml3研磨至乳状＋5%CClCOOH 3 ml3研磨成肝匀浆3分钟（4000 r / min）3 ml）＋3ml 95%乙醇，混匀，静置10分钟5分钟（4000 r / min）＋蒸镏水1 ml沸水浴2分钟，溶解沉淀糖原溶液1ml＋浓HCl 5滴加碘试剂沸水浴糖原溶液2滴滴呈色对比＋班氏试剂4滴沸水浴2分钟，观察变化2.肝糖原的定量测定：鸡肝0.15 g＋30%KOH 1.5ml （用吸量管)沸水浴15分钟冷却，全部转入100 ml容量瓶中加水至标线，仔细混匀，此为糖原提取液取3支试管，按下表操作:试剂（ml）空白管标准管样品管标准葡萄糖溶液— 1.0 —糖原提取液—— 1.00.2%蒽酮溶液2.5 2.5 2.5（用吸量管）混匀，沸水浴10分钟，冷却c。

生物化学实验报告
姓名：
学号：
专业年级： 2015级护理本科
组别：第四实验室
生物化学与分子生物学实验教学中心
实验名称肝糖原的提取、鉴定与定量
实验日期2016-12-20 实验地点第四实验室
合作者指导老师
评分教师签名批改日期
一、实验目的
1、了解肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定糖原含量的原理和注意事项，掌握其操作方法。

2、了解离心管和分光光度计使用的原理并掌握操作步骤。

3、熟悉吸量管、可调式微量移液器的操作步骤。

4、熟悉溶液的转移操作；熟练运用溶液混匀的各种方法（视具体情况，采用合适的混匀方法）。

5、了解呈色反应。

二、实验原理
(一) 肝糖原的提取与鉴定
1.糖原的分离
采用研磨匀浆使细胞破碎，用低浓度的三氯醋酸使蛋白质变性，破坏肝组织中的酶从而使其沉淀，而糖原仍稳定保持在上清液中，从而使糖原与蛋白质等其他成分分离开。

生物化学实验报告姓名：学号：专业年级：组别：实验名称肝糖原的提取、鉴定与定量实验实验日期实验地点合作者指导老师评分教师签名批改日期一、实验目的1．掌握组织样品的制备方法，了解其注意事项。

2．了解肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定糖原含量的原理和注意事项，掌握其操作方法。

3．正确操作使用刻度吸管和可调微量移液器。

4．熟练运用溶液混匀的各种方法（视具体情况，采用合适的混匀方法）。

5．正确掌握溶液转移的操作。

6．正确操作使用分光光度计。

二、实验原理1、肝糖原的提取与鉴定糖原储存于细胞内,采用研磨匀浆等方法可使细胞破碎,低浓度的三氯醋酸能使蛋白质变性,破坏肝组织中的酶且沉淀蛋白质,而糖原仍稳定地保存于上清液中,从而使用糖原与蛋白质等其它成分分离开来。

糖原不溶于乙醇而溶于热水,故先用95%乙醇将滤液中糖原沉淀,再溶于热水中。

糖原水溶液呈乳样光泽,遇碘呈红棕色。

这是糖原中葡萄糖长链形成的螺旋中, 依靠分子间引力吸附碘分子后呈现的颜色。

糖原还可被酸水解为葡萄糖,利用呈色反应和葡萄糖的还原性,可判定肝组织中糖原的存在。

2、肝糖原定量测定糖原在浓酸中可水解成为葡萄糖,浓硫酸能使葡萄糖进一步脱水生成糠醛衍生物——5-羟甲基呋喃甲醛,此化合物再与蒽酮脱水缩合生成蓝色的化合物。

该物质在620nm 处有最大吸收。

糖含量在(10~100)g范围内,溶液颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。

利用此反应与同样处理的已知葡萄糖含量标准溶液比色,通过标准对照法即可计算出样品中糖原的含量。

糖原在浓碱溶液中非常稳定,故在显色之前,肝组织先臵于浓碱中加热,以破坏其它成分,而保留肝糖原。

三、材料与方法：以流程图示意1、材料(1)样品:鸡肝(2)试剂:95%乙醇、5%(W/V)三氯乙酸、浓盐酸、12.5mol/L(50%)NaOH溶液、碘试剂、班氏试剂、5.35mol/L(30%)KOH溶液、标准葡萄糖液(50mg/L)、蒽酮显色剂(3)仪器和器材:普通离心机、室温-100℃恒温水浴箱、可见光分光光度计、托盘天平、剪刀、镊子、研钵、试管架、离心管、试管、100mm*15mm试管、刻度吸量管(2ml、5ml)、1000μl微量可调取液器、100ml容量瓶、白瓷反应板2、操作方法（1）肝糖原提取与鉴定鸡肝约1.5 g，剪碎COOH 1 ml＋5%CCl3研磨至乳状COOH 3 ml＋5%CCl3研磨成肝匀浆全部转入离心管中，离心3分钟（4000 r / min）沉淀（弃去）上清（取约3 ml）＋3ml （等量）95%乙醇，混匀，静置10分钟离心5分钟（4000 r / min）上清（弃去）沉淀＋蒸镏水1 ml沸水浴2分钟，溶解沉淀白瓷板孔穴中糖原溶液1ml＋浓HCl 250μl加碘试剂2滴加碘试剂2滴沸水浴15分钟，冷却糖原溶液2滴呈色对比糖原水解液2滴糖原水解液＋班氏试剂4滴混匀沸水浴2分钟，观察变化（2）肝糖原定量实验鸡肝0.15 g＋30%KOH 1.5ml沸水浴15分钟冷却，全部转入100 ml容量瓶中加水至标线，仔细混匀，此为糖原提取液糖原的测定取3支试管，按下表操作。

肝糖原的提取实验报告肝糖原的提取实验报告引言：肝糖原是一种重要的能量储存物质，它在肝脏中储存，并在需要时释放出葡萄糖供给身体其他组织使用。

本实验旨在探究肝糖原的提取方法，并进一步了解其在人体生理中的重要性。

材料与方法：我们选取了新鲜的猪肝作为实验材料。

首先，将猪肝切成小块，并用冷盐水彻底清洗，以去除表面的杂质。

然后，将清洗后的猪肝块放入研钵中，加入适量的冷盐水，用搅拌器搅拌均匀，使猪肝细胞破碎释放出肝糖原。

接下来，将搅拌后的混合液过滤，去除固体残渣，得到含有肝糖原的溶液。

结果与讨论：通过实验，我们成功地提取到了含有肝糖原的溶液。

肝糖原是一种多聚体的葡萄糖分子，其分子量较大，可溶于水。

在搅拌的过程中，猪肝细胞被破碎，使肝糖原释放到溶液中。

通过过滤，我们去除了猪肝的固体残渣，获得了纯净的肝糖原溶液。

肝糖原在人体中具有重要的生理功能。

它是肝脏中的主要能量储存物质，可在需要时迅速释放出葡萄糖，维持血糖水平的稳定。

肝糖原的提取与研究对于了解人体能量代谢、调节血糖平衡等方面具有重要意义。

此外，肝糖原还参与了人体其他重要生理过程。

研究发现，肝糖原在肝脏细胞中的含量与一些代谢性疾病的发生有关。

例如，糖尿病患者的肝糖原合成和降解过程受到了异常的调节，导致血糖的异常升高。

因此，通过研究肝糖原的提取和代谢机制，有助于深入理解糖尿病等疾病的发生机制，并为治疗提供新的思路。

此外，肝糖原的提取方法也具有一定的局限性。

在实验过程中，我们选择了猪肝作为材料，但猪肝与人体肝脏在结构和功能上存在差异。

因此，我们需要进一步研究不同动物肝脏中肝糖原的提取方法，以更好地模拟人体情况。

结论：通过本次实验，我们成功地提取到了含有肝糖原的溶液，并初步了解了肝糖原的重要性及其在人体生理中的作用。

肝糖原作为一种重要的能量储存物质，在维持血糖平衡、调节代谢等方面起着关键作用。

进一步深入研究肝糖原的提取方法和代谢机制，有助于我们更好地理解人体生理过程，并为相关疾病的治疗提供新的思路。

一、实验目的1. 学习肝糖原的提取方法。

2. 掌握肝糖原的鉴定技术。

3. 了解肝糖原在生物体内的重要作用。

二、实验原理肝糖原是动物体内的一种重要储能物质，主要储存于肝脏中。

当血糖水平下降时，肝糖原可以被分解为葡萄糖，以维持血糖的稳定。

本实验通过提取肝糖原，并对其进行鉴定，来了解肝糖原在生物体内的代谢过程。

三、实验材料与仪器材料：1. 小鼠肝脏2. 三氯醋酸3. 乙醇4. 碘液5. 水浴锅6. 移液器7. 离心机8. 显微镜仪器：1. 电子天平2. 研钵3. 研钵杵4. 烧杯5. 烧瓶6. 漏斗7. 滤纸四、实验步骤1. 肝糖原提取- 称取新鲜小鼠肝脏约0.5g，用剪刀剪碎，置于研钵中。

- 加入少量三氯醋酸，研磨至肝组织完全破碎。

- 将研磨物转移至烧杯中，加入适量的水，用玻璃棒搅拌。

- 将混合物过滤，收集滤液。

- 将滤液置于水浴锅中加热，使蛋白质变性沉淀。

- 取上清液，加入适量的乙醇，静置过夜。

- 次日，用滤纸过滤，收集滤液，即为肝糖原粗制品。

2. 肝糖原鉴定- 将肝糖原粗制品溶解于适量的水中，配制成一定浓度的溶液。

- 取少量溶液，加入碘液，观察颜色变化。

- 将肝糖原溶液滴在载玻片上，用显微镜观察其形态。

五、实验结果与分析1. 肝糖原提取- 通过研磨、过滤、加热和沉淀等步骤，成功提取了肝糖原。

2. 肝糖原鉴定- 碘液与肝糖原反应，溶液呈现蓝色，证明肝糖原存在。

- 显微镜下观察，肝糖原呈颗粒状，大小不一。

六、实验讨论1. 本实验成功提取了肝糖原，并对其进行了鉴定，证明了肝糖原在生物体内的重要作用。

2. 在肝糖原提取过程中，三氯醋酸起到了破坏肝组织中的酶和蛋白质的作用，使肝糖原得以保留。

3. 碘液与肝糖原反应，是肝糖原鉴定的常用方法，操作简单，结果明显。

七、实验总结本实验通过肝糖原的提取与鉴定，使我们了解了肝糖原在生物体内的代谢过程和重要作用。

在实验过程中，我们学会了肝糖原的提取方法，掌握了肝糖原的鉴定技术。

生物化学实验报告姓名：范嘉俊学号： **********专业年级： 2014级中西医临床五年制组别：第四实验室生物化学与分子生物学实验教学中心1.实验原理（1）肝糖原提取与鉴定①提取：1.糖原储存于细胞内，采用研磨匀浆等方法可使细胞破碎，释放出糖原。

2. 5%三氯醋酸溶液能使用糖原与蛋白质分离，糖原保存于上清液，而蛋白质沉淀。

3.糖原不溶于乙醇而溶于热水，故先用95％乙醇将滤液中糖原沉淀，再溶于热水中。

②鉴定：糖原水溶液呈乳样光泽，遇碘呈红棕色。

糖原还可被酸水解为葡萄糖。

利用呈色反应和葡萄糖的还原性，可判定肝组织中糖原的存在。

（2）肝糖原定量测定糖原在浓酸中可水解成为葡萄糖，浓硫酸能使葡萄糖进一步脱水生成糖醛衍生物—5-羟甲基呋喃甲醛，此化合物再与蒽酮脱水缩合生成蓝色的化合物。

该物质在620nm 处有最大吸收。

糖含量在(10~100)mg范围内，溶液颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。

利用此反应与同样处理的已知葡萄糖含量标准溶液比色，通过标准对照法（直接比较法）即可计算出样品中糖原的含量。

糖原在浓碱溶液中非常稳定，故在显色之前，肝组织先置于浓碱中加热，以破坏其它成分，而保留肝糖原。

（1）实验样品：鸡肝。

（2）主要试剂：肝糖原的提取与鉴定：95%乙醇，0.31mol/L(5%)三氯醋酸溶液，0.15mol/LNaCl溶液，浓盐酸，NaOH溶液，碘试剂。

肝糖原定量测定：30%KOH溶液，0.5mg/ml的葡萄糖溶液，蒸馏水，蒽酮显色剂。

（3）主要仪器与器材：可见光分光光度计，恒温水浴箱，试管架，三支支试管，加样枪，加样枪架，普通离心机，研钵，刻度吸量管，白瓷反应器，100ml容量瓶。

3.实验步骤（1）实验流程①肝糖原的提取与鉴定注意事项：①在提取肝糖原中，向上清液中加入乙醇后，要充分混匀（可以用玻璃棒搅拌）。

②糖原中葡萄糖螺旋链吸附碘产生的颜色与葡萄糖残基的多少有关。

肝糖原分支中葡萄糖残基在20个以下，吸附碘后呈现红棕色。

一、实验目的1. 掌握肝脏糖原提取的基本原理和方法。

2. 学会使用蒽酮比色法测定肝脏糖原的含量。

3. 了解糖原在生物体内的作用及其代谢过程。

二、实验原理肝脏糖原是动物体内重要的储能物质，主要储存于肝脏细胞中。

当机体需要能量时，糖原可以迅速被分解为葡萄糖，供细胞利用。

本实验通过提取肝脏组织中的糖原，并利用蒽酮比色法测定其含量，以了解肝脏糖原的储备情况。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 新鲜小鼠肝脏- 无水乙醇- 三氯醋酸- 蒽酮试剂- 水浴锅- 离心机- 移液器- 分光光度计2. 实验试剂：- 0.5%蒽酮试剂- 1%葡萄糖标准溶液- 0.1mol/L NaOH溶液四、实验步骤1. 提取肝脏糖原：- 将新鲜小鼠肝脏用生理盐水洗净，剪碎。

- 将肝脏组织放入研钵中，加入适量的无水乙醇和三氯醋酸，研磨匀浆。

- 将匀浆液过滤，收集滤液，于离心机中以3000r/min离心10分钟。

- 取上清液即为糖原提取液。

2. 糖原含量测定：- 将1ml糖原提取液与4ml 0.5%蒽酮试剂混合，置于沸水浴中加热10分钟。

- 取出混合液，冷却至室温。

- 使用分光光度计在波长620nm处测定吸光度。

- 以1%葡萄糖标准溶液为对照，绘制标准曲线。

3. 结果计算：- 根据标准曲线，计算样品中糖原的含量。

五、实验结果与分析1. 糖原提取：- 通过研磨匀浆和离心，成功提取了小鼠肝脏中的糖原。

2. 糖原含量测定：- 通过蒽酮比色法，成功测定了小鼠肝脏糖原的含量。

3. 结果分析：- 肝脏糖原含量与小鼠的生理状态、饮食等因素有关。

本实验中，小鼠肝脏糖原含量在正常范围内。

六、实验结论1. 成功提取了小鼠肝脏中的糖原。

2. 成功测定了小鼠肝脏糖原的含量。

3. 了解肝脏糖原在生物体内的作用及其代谢过程。

七、实验讨论1. 实验过程中，研磨匀浆和离心是关键步骤，直接影响糖原的提取效果。

2. 蒽酮比色法是一种常用的糖原测定方法，具有操作简便、灵敏度高等优点。

生物化学实验报告姓名：学号：专业年级：组别：生物化学与分子生物学实验教学中心格式要求：正文请统一用：小四号，宋体，1.5倍行距；数字、英文用Times New Roman；标题用：四号，黑体，加粗。

需强调的地方请用蓝颜色标出。

不得出现多行、多页空白现象。

一、实验目的1、掌握组织样品的制备方法，了解其注意事项。

2、了解肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定糖原含量的原理和注意事项，掌握其操作方法。

3、正确操作使用刻度吸管和可调微量取液器。

4、熟练运用溶液混匀的各种方法。

5、正确掌握溶液转移的操作。

6、正确操作使用分光光度计。

二、实验原理1、肝糖原的提取与鉴定糖原储存于细胞内，采用研磨匀浆等方法可使细胞破碎，低浓度的三氯醋酸能使蛋白质变性，破坏肝组织中的酶且沉淀蛋白质，而糖原仍稳定地保存于上清液中，从而使用糖原与蛋白质等其它成分分离开来。

糖原不溶于乙醇而溶于热水，故先用95％乙醇将滤液中糖原沉淀，再溶于热水中。

糖原水溶液呈乳样光泽，遇碘呈红棕色。

这是糖原中葡萄糖长链形成的螺旋中，依靠分子间引力吸附碘分子后呈现的颜色。

糖原还可被酸水解为葡萄糖，利用呈色反应和葡萄糖的还原性，可判定肝组织中糖原的存在。

CuSO4十2NaOH = Na2SO4+Cu(OH)2↓2Cu(OH)2十C6H12O6 = 2CuOH十氧化型葡萄糖+H2O2CuOH = Cu2O↓(红色)+H2OCu(OH)2= CuO↓(黑色)+H2O2、肝糖原定量测定糖原在浓酸中可水解成为葡萄糖，浓硫酸能使葡萄糖进一步脱水生成糠醛衍生物——5-羟甲基呋喃甲醛，此化合物再与蒽酮脱水缩合生成蓝色的化合物。

该物质在620nm 处有最大吸收。

糖含量在(10~100)g范围内，溶液颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。

利用此反应与同样处理的已知葡萄糖含量标准溶液比色，通过标准对照法（直接比较法）即可计算出样品中糖原的含量。

糖原在浓碱溶液中非常稳定，故在显色之前，肝组织先臵于浓碱中加热，以破坏其它成分，而保留肝糖原。