肝糖原的提取、鉴定与定量-第七实验室(一类特选)

肝糖原的提取与鉴定实验报告实验六肝糖原的提取实验六肝糖原的提取、鉴定与定量(生物化学实验操作考核卷)姓名，学号，专业，级班组，月日目的要求:1. 掌握组织样品的制备方法，了解其注意事项。

2. 了解肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定糖原含量的原理和注意事项，掌握其操作方法。

3. 正确操作使用刻度吸管和可调微量取液器。

4. 熟练运用溶液混匀的各种方法(视具体情况，采用合适的混匀方法)。

5. 正确掌握溶液转移的操作。

6. 正确操作使用分光光度计。

实验原理:(一)肝糖原的提取、鉴定糖原储存于细胞内，采用研磨匀浆等方法可使细胞破碎，低浓度的三氯醋酸能使蛋白质变性，破坏肝组织中的酶且沉淀蛋白质，而糖原仍稳定地保存于上清液中，从而使用糖原与蛋白质等其它成分分离开来。

糖原不溶于乙醇而溶于热水，故先用95,乙醇将滤液中糖原沉淀，再溶于热水中。

糖原水溶液呈乳样光泽，遇碘呈红棕色。

这是糖原中葡萄糖长链形成的螺旋中，依靠分子间引力吸附碘分子后呈现的颜色。

糖原还可被酸水解为葡萄糖，利用呈色反应和葡萄糖的还原性，可判定肝组织中糖原的存在。

CuSO4十2NaOH ? Na2 SO4+Cu(OH)2?2Cu(OH)2十C6H12O6 ? 2CuOH十氧化型葡萄糖+H2O2CuOH ? Cu2O?(红色)+H2OCu(OH)CuO?(黑色)+H2O(二)肝糖原的定量糖原在浓酸中可水解成为葡萄糖，浓硫酸能使葡萄糖进一步脱水生成糠醛衍生物——5-羟甲基呋喃甲醛，此化合物再与蒽酮脱水缩合生成蓝色的化合物。

该物质在620nm处有最大吸收。

糖含量在(10?100)?g范围内，溶液颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。

利用此反应与同样处理的已知葡萄糖含量标准溶液比色，通过标准对照法(直接比较法)即可计算出样品中糖原的含量。

糖原在浓碱溶液中非常稳定，故在显色之前，肝组织先置于浓碱中加热，以破坏其它成分，而保留肝糖原。

实验材料:(一)仪器1. 普通离心机，室温?100?恒温水浴箱(×2)，722型分光光度计，精度为10mg级电子天平(×1)2. 剪刀(×1)，镊子(×1)，研钵(×1)3. 试管架(×1)，10mL离心管(×2)，(100×15)mm试管(×6)4. 刻度吸量管(2mL×1，5 mL×2)，1000μL微量可调取液器(×1)5. 100mL容量瓶(×1)6. 白瓷反应板(×1)(二)实验样品和试剂1. 鸡肝。

生物化学实验报告姓名：学号：专业年级:组别:生物化学与分子生物学实验教学中心实验名称Folin—酚试剂法测定蛋白质含量实验日期实验地点合作者指导老师评分教师签名批改日期格式要求：正文请统一用：小四号，宋体，1.5倍行距；数字、英文用Times New Roman；标题用：四号，黑体，加粗。

需强调的地方请用蓝颜色标出。

不得出现多行、多页空白现象。

一、实验目的1、学习并掌握肝糖原提取和鉴定原理和方法；2、学习并掌握蒽酮比色测定糖原含量的原理、注意事项和操作方法;3、学习并掌握刻度吸管和微量加样枪的使用方式；4、正确掌握使用离心机的方法步骤；5、熟练运用溶液混匀的各种方法；6、正确掌握溶液转移的操作；7、正确掌握使用分光光度计的方法步骤二、实验原理实验1肝糖原的提取与鉴定糖原是生物的主要储能物质之一,主要储存与肝细胞中，采用研磨匀浆等方法可以使肝细胞破碎。

肝细胞破碎，细胞内容物流出.低浓度的三氯醋酸能使蛋白质变性，破坏肝组织中的酶并且使蛋白质沉淀，糖原则能够稳定地保存在上清液中，从而达到分离糖原与蛋白质等其他成分的目的。

糖原不溶于乙醇但可溶于热水，故可以先用95％乙醇将滤液中糖原沉淀，再溶于热水中。

糖原水溶液呈乳样光泽，遇碘呈红棕色。

这是糖原中葡萄糖长链形成的螺旋中,依靠分子间引力吸附碘分子后呈现的颜色。

此外，糖原还可以被酸水解成葡萄糖，利用呈色反应和葡萄糖的还原性，可以判定肝组织中糖原的存在。

糖原水解溶液与班氏试剂混匀沸水浴加热2min后会出现砖红色沉淀。

CuSO4 + 2NaOH = Na2SO4 + Cu(OH)2↓2Cu(OH）2 + C6H12O6 = 2CuOH +氧化型葡萄糖+ H2O2CuOH = H20 + Cu2O↓ （红色）Cu（OH)2 ==== H2O + CuO↓ （黑色）实验2肝糖原定量测定糖原在浓碱溶液中非常稳定，故可将肝组织先置于浓碱中加热,以破坏其他成分，保留肝糖原。

肝糖原的提取与鉴定一、实验目的：1、掌握碘与糖原作用的显色原理。

2、熟悉班氏试剂检验还原糖的原理。

3、了解实验动物的选择和注意事项。

二、实验原理：肝糖原是葡萄糖在人体内重要的储存方式之一。

肝糖原的合成和分解，对血糖浓度的调节起着关键的作用。

糖原是高分子化合物，正常情况下分子量约4×106，微溶于水，无还原性，与碘作用呈红色，这是糖原中葡萄糖长链形成的螺旋中，依靠分子间引力吸附碘分子后呈现的颜色。

将新鲜的肝组织与石英砂以及CCl3COOH共同研磨，当肝组织被充分破碎后，其中的蛋白质被CCl3COOH变性沉淀，而糖原仍溶于溶液中。

过滤除去沉淀，糖原不溶于乙醇，在滤液中加入乙醇将糖原沉淀出来。

将沉淀的糖原溶于水，一部分做碘的颜色反应，一部分经酸水解为葡萄糖，用班氏试剂检验。

三、实验步骤：（一）肝糖原提取1.取大白鼠一只，饱食30-60min后，置于封闭桶中，乙醚麻醉5分钟。

立即取出肝脏，迅速用滤纸吸去血液。

称重后置于研钵中，按照1g/1mL的比例加入10%三氯醋酸以及少量石英砂，初步研磨。

2.再按照1g/2mL比例加入5%三氯醋酸，继续研磨组织至糜状。

3000r/min离心10min，取上清液置于一刻度离心管中。

3.加入等体积95%预冷乙醇，混匀静置10min，此时糖原成絮状沉淀析出。

4.3000r/min离心10min，弃上清后将离心管倒置于滤纸上1-2min，吸去残余液体。

5.沉淀中加入蒸馏水溶解。

（二）肝糖原的鉴定1.取小试管2支，一支加入糖原溶液10滴，另一支加入蒸馏水10滴。

两管各加碘液1滴，混匀观察现象。

2.剩余糖原溶液中加入浓盐酸3滴，沸水浴10min水解。

取出冷却，用20%NaOH调至中性。

3.在一只大试管中加入班氏试剂2mL，在沸水浴中预热后，小心取水解液沿管壁加入，注意不要搅动下层班氏试剂。

沸水浴2min观察现象。

四、实验结果：1.加入糖原溶液的小试管中变为红色，而加入蒸馏水的小试管中仍为黄色；2.加入班氏试剂沸水浴后，试管中产生砖红色的沉淀环。

肝糖原的提取鉴定与定量肝糖原的提取与鉴定生物化学实验报告姓名：学号： 3130010071专业年级： xx级临床医学组别：第2实验室生物化学与分子生物学实验教学中心实验名称肝糖原的提取、鉴定、分离实验日期 xx-12-25 合作者评分陈海玲签名实验地点第2实验室指导老师朱利娜批改日期一、实验目的1、掌握组织样品的制备方法，了解其注意事项。

2、了解肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定糖原含量的原理和注意事项，掌握其操作方法。

3、正确操作使用刻度吸管和可调微量取液器。

4、熟练运用溶液混匀的各种方法。

5、正确掌握溶液转移的操作。

6、正确操作使用分光光度计。

二、实验原理●肝糖原的提取糖原储存于细胞内，采用淹没匀浆等方法可使细胞破碎，低浓度的三氯醋酸能使蛋白质变性，破坏肝组织中的酶且沉淀蛋白质，而糖原仍稳定地保存于上清液中，从而使糖原与蛋白质等其他成分分离开来。

糖原不溶于乙醇而溶于热水，故先用95%乙醇将绿叶中糖原沉淀，再溶于热水中。

●糖原的鉴定糖原水溶液呈乳样光泽，遇碘呈红棕色。

这是糖原中葡萄糖长链形成的螺旋中，依靠分子间引力吸附碘分子后呈现的颜色。

糖原还可被酸水解为葡萄糖，利用呈色反应和葡萄糖的还原性，可判定肝组织中糖原的的存在。

CuSO 4 + 2NaOH = Na2SO 4 + Cu(OH)2Cu(OH)2 + C6H 12O 6 = 2CuOH + 氧化型葡萄糖 + H2O2CuOH = H20 + Cu2红色) Cu(OH)2 ==== H2黑色) ●肝糖原的定量糖原在浓酸中可水解为葡萄糖，浓硫酸能使葡萄糖进一步脱水生成糠醛衍生物——5-羟甲基呋喃甲醛，此化合物再与蒽酮脱水缩合生成蓝色的化合物。

该物质在620nm 处有最大吸收。

糖含量在10—100mg 范围内，溶液颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。

利用此反应与同样处理的已知葡萄糖含量的标准溶液比色，通过标准对照法即可计算出样品中糖原的含量。

生物化学实验报告姓名：学号：专业年级：组别：实验名称肝糖原的提取、鉴定与定量实验实验日期实验地点合作者指导老师评分教师签名批改日期一、实验目的1．掌握组织样品的制备方法，了解其注意事项。

2．了解肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定糖原含量的原理和注意事项，掌握其操作方法。

3．正确操作使用刻度吸管和可调微量移液器。

4．熟练运用溶液混匀的各种方法（视具体情况，采用合适的混匀方法）。

5．正确掌握溶液转移的操作。

6．正确操作使用分光光度计。

二、实验原理1、肝糖原的提取与鉴定糖原储存于细胞内,采用研磨匀浆等方法可使细胞破碎,低浓度的三氯醋酸能使蛋白质变性,破坏肝组织中的酶且沉淀蛋白质,而糖原仍稳定地保存于上清液中,从而使用糖原与蛋白质等其它成分分离开来。

糖原不溶于乙醇而溶于热水,故先用95%乙醇将滤液中糖原沉淀,再溶于热水中。

糖原水溶液呈乳样光泽,遇碘呈红棕色。

这是糖原中葡萄糖长链形成的螺旋中, 依靠分子间引力吸附碘分子后呈现的颜色。

糖原还可被酸水解为葡萄糖,利用呈色反应和葡萄糖的还原性,可判定肝组织中糖原的存在。

2、肝糖原定量测定糖原在浓酸中可水解成为葡萄糖,浓硫酸能使葡萄糖进一步脱水生成糠醛衍生物——5-羟甲基呋喃甲醛,此化合物再与蒽酮脱水缩合生成蓝色的化合物。

该物质在620nm 处有最大吸收。

糖含量在(10~100)g范围内,溶液颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。

利用此反应与同样处理的已知葡萄糖含量标准溶液比色,通过标准对照法即可计算出样品中糖原的含量。

糖原在浓碱溶液中非常稳定,故在显色之前,肝组织先臵于浓碱中加热,以破坏其它成分,而保留肝糖原。

三、材料与方法：以流程图示意1、材料(1)样品:鸡肝(2)试剂:95%乙醇、5%(W/V)三氯乙酸、浓盐酸、12.5mol/L(50%)NaOH溶液、碘试剂、班氏试剂、5.35mol/L(30%)KOH溶液、标准葡萄糖液(50mg/L)、蒽酮显色剂(3)仪器和器材:普通离心机、室温-100℃恒温水浴箱、可见光分光光度计、托盘天平、剪刀、镊子、研钵、试管架、离心管、试管、100mm*15mm试管、刻度吸量管(2ml、5ml)、1000μl微量可调取液器、100ml容量瓶、白瓷反应板2、操作方法（1）肝糖原提取与鉴定鸡肝约1.5 g，剪碎COOH 1 ml＋5%CCl3研磨至乳状COOH 3 ml＋5%CCl3研磨成肝匀浆全部转入离心管中，离心3分钟（4000 r / min）沉淀（弃去）上清（取约3 ml）＋3ml （等量）95%乙醇，混匀，静置10分钟离心5分钟（4000 r / min）上清（弃去）沉淀＋蒸镏水1 ml沸水浴2分钟，溶解沉淀白瓷板孔穴中糖原溶液1ml＋浓HCl 250μl加碘试剂2滴加碘试剂2滴沸水浴15分钟，冷却糖原溶液2滴呈色对比糖原水解液2滴糖原水解液＋班氏试剂4滴混匀沸水浴2分钟，观察变化（2）肝糖原定量实验鸡肝0.15 g＋30%KOH 1.5ml沸水浴15分钟冷却，全部转入100 ml容量瓶中加水至标线，仔细混匀，此为糖原提取液糖原的测定取3支试管，按下表操作。

肝糖原的提取、鉴定与定量实验报告9页实验目的：1.了解肝糖原的结构与性质；3.熟悉超声波提取技术的应用。

实验原理：肝糖原是一种糖原，在肝脏中以甲基α-D-葡萄糖嘌呤核苷（SAM）为原料，经过糖原合成酶的催化作用合成而成。

它是一种高分子多糖，由葡萄糖基通过1-4键连接而成，具有极强的极性，难溶于非极性溶剂。

肝糖原的提取：取新鲜肝组织80g，冰冻于低温冰箱-20℃冰冻保存，取出后立即加入10倍体积的冷盐酸（0.1mol/L），用手柄式破碎器将组织均匀破碎，加入适量的冷盐酸，使其均匀分布，浸泡在冰箱中30min，取出用移液器吸取上清液。

用纱布过滤残渣，滤好的液体置于4℃冰箱中，制备组织液。

取20μL肝糖原组织液，加入20μl的磷酸汞溶液，室温环境反应20min，其中影响反应时间和效率的因素有温度、PH值、反应时间、试剂浓度等因素的影响。

反应结束后，加入一定量的氢氧化钠，与水分解反应，生成红褐色的水银，其数量与肝糖原含量成正比例关系。

经过计算，得到肝糖原的含量。

实验步骤：1. 超声波法提取肝糖原：在超声波处理器中，取15g搅拌均匀的肝组织，加入草酸（0.1mol/L）溶液100mL中，混合均匀；2. 将二氧化硫加入混合液中，浸泡3分钟；3. 将混合液通过过滤纸过滤，收集上清液，其即肝糖原溶液；4. 测定肝糖原浓度：取30μL的肝糖原溶液，加入1.5mL的琼脂糖溶液，室温下反应2小时，以紫外分光光度法（UV-6500）在260nm处测定吸光度，计算肝糖原浓度。

实验结果：1.超声波提取的肝糖原溶液中肝糖原的浓度为6.67mg/L；2.实验中所测定的肝糖原含量为3.76mg/g。

结论：1.超声波提取技术适用于肝糖原的提取，可显著提高提取效率；2.磷酸汞法可用于肝糖原的含量测定，该方法操作简单，结果准确。

实验中还发现，肝糖原含量随年龄增长趋势下降，这与肝脏代谢功能的下降有关。

参考文献：1.老师名字，丁丁等。

生物化学实验教程[M]。

肝糖原的提取实验报告肝糖原的提取实验报告引言：肝糖原是一种重要的能量储存物质，它在肝脏中储存，并在需要时释放出葡萄糖供给身体其他组织使用。

本实验旨在探究肝糖原的提取方法，并进一步了解其在人体生理中的重要性。

材料与方法：我们选取了新鲜的猪肝作为实验材料。

首先，将猪肝切成小块，并用冷盐水彻底清洗，以去除表面的杂质。

然后，将清洗后的猪肝块放入研钵中，加入适量的冷盐水，用搅拌器搅拌均匀，使猪肝细胞破碎释放出肝糖原。

接下来，将搅拌后的混合液过滤，去除固体残渣，得到含有肝糖原的溶液。

结果与讨论：通过实验，我们成功地提取到了含有肝糖原的溶液。

肝糖原是一种多聚体的葡萄糖分子，其分子量较大，可溶于水。

在搅拌的过程中，猪肝细胞被破碎，使肝糖原释放到溶液中。

通过过滤，我们去除了猪肝的固体残渣，获得了纯净的肝糖原溶液。

肝糖原在人体中具有重要的生理功能。

它是肝脏中的主要能量储存物质，可在需要时迅速释放出葡萄糖，维持血糖水平的稳定。

肝糖原的提取与研究对于了解人体能量代谢、调节血糖平衡等方面具有重要意义。

此外，肝糖原还参与了人体其他重要生理过程。

研究发现，肝糖原在肝脏细胞中的含量与一些代谢性疾病的发生有关。

例如，糖尿病患者的肝糖原合成和降解过程受到了异常的调节，导致血糖的异常升高。

因此，通过研究肝糖原的提取和代谢机制，有助于深入理解糖尿病等疾病的发生机制，并为治疗提供新的思路。

此外，肝糖原的提取方法也具有一定的局限性。

在实验过程中，我们选择了猪肝作为材料，但猪肝与人体肝脏在结构和功能上存在差异。

因此，我们需要进一步研究不同动物肝脏中肝糖原的提取方法，以更好地模拟人体情况。

结论：通过本次实验，我们成功地提取到了含有肝糖原的溶液，并初步了解了肝糖原的重要性及其在人体生理中的作用。

肝糖原作为一种重要的能量储存物质，在维持血糖平衡、调节代谢等方面起着关键作用。

进一步深入研究肝糖原的提取方法和代谢机制，有助于我们更好地理解人体生理过程，并为相关疾病的治疗提供新的思路。

肝糖原提取、鉴定实验流程吸取1ml量溶液时使用可调微量移液器，吸取1ml以上量溶液时使用刻度吸量管。

鸡肝约1.5 g，剪碎
＋5%CCl3COOH 1 ml
研磨至乳状
＋5%CCl3COOH 3 ml
研磨成肝匀浆
3分钟（4000 r / min）
3 ml）
＋3ml 95%乙醇，混匀，静置10分钟
5分钟（4000 r / min）
＋蒸镏水1 ml
沸水浴2分钟，溶解沉淀
糖原溶液1ml
＋浓HCl 5滴
加碘试剂沸水浴
糖原溶液2滴滴
呈色对比
＋班氏试剂4滴
沸水浴2分钟，观察变化
肝糖原定量实验流程
鸡肝0.15 g
＋30%KOH 1.5ml （用吸量管）
沸水浴15分钟
冷却，全部转入100 ml容量瓶中
加水至标线，仔细混匀，此为糖原提取液
取3支试管，按下表操作。

试剂（ml）空白管标准管样品管
蒸馏水 1.0 ——
标准葡萄糖溶液— 1.0 —
糖原提取液—— 1.0
0.2%蒽酮溶液
2.5 2.5 2.5
（用吸量管）
混匀，沸水浴10分钟，冷却c。

在分光光度计620 nm波长处，用空白管溶液调零，测定各管溶液的吸光度（A）。

饱食鸡肝的肝糖原含量为：2～3g/100g肝组织。

生物化学实验报告姓名：学号：专业年级： 2018级临床卓越创新班组别：第一实验室生物化学与分子生物学实验教学中心实验名称肝糖原的提取，鉴定与定量实验日期2019-12-18 实验地点第一实验室合作者指导老师评分XX 教师签名李某某批改日期2013-06-03一、实验目的1.掌握组织样品的制备方法，了解注意事项。

2．了解肝糖原的提取，糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定糖原含量的原理和注意事项，掌握操作方法。

3.正确操作使用刻度吸管和可调微量取液器。

4.熟练运用溶液混匀的多种方法5.学会溶液转移的操作6.正确使用分光光度计7.掌握离心机的正确操作步骤二、实验原理1.肝糖原的提取和鉴定：1）糖原储存于细胞内，采用研磨匀浆等方法可使细胞破碎，低浓度的三氯醋酸能使蛋白质变性，破坏肝组织中的酶且沉淀蛋白质，而糖原仍稳定地保存于上清液中，从而使用糖原与蛋白质等其它成分分离开来。

2）糖原不溶于乙醇而溶于热水，故先用95%乙醇将滤液中糖原沉淀，再溶于热水中。

3）糖原水溶液呈乳样光泽，遇碘呈红棕色。

这是糖原中葡萄糖长链形成的螺旋中，依靠分子间引力吸附碘分子后呈现的颜色。

4）糖原还可被酸水解为葡萄糖，利用呈色反应和葡萄糖的还原性，可判定肝组织中糖原的存在；2. 肝糖原的定量：1）糖原在浓酸中可水解成为葡萄糖，浓硫酸能使葡萄糖进一步脱水生成糠醛衍生物—5-羟甲基呋喃甲醛，此化合物再与蒽酮脱水缩合生成蓝色的化合物。

该物质在620nm处有最大吸收。

2）糖含量在10-100μg范围内，溶液颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。

利用此反应与同样处理的已知葡萄糖含量标准溶液比色，通过标准对照法(直接比较法)即可计算出样品中糖原的含量。

3）糖原在浓碱溶液中非常稳定，故在显色之前，肝组织先置于浓碱中加热，以破坏其它成分，而保留肝糖原。

三、材料与方法：以流程图示意1.实验材料试验样品和试剂仪器鸡肝，95%乙醇溶液，5%三氯醋酸溶液，浓盐酸，氢氧化钠溶液，碘试剂，班氏试剂，氢30%氧化钾溶液，标准葡萄糖液，蒽酮，蒸馏水恒温水浴箱，分光光度计，电子秤，离心机；剪刀，镊子，试管架，试管*3，刻度吸量管，加样枪，100ml容量瓶，白瓷反应板2.实验步骤1）肝糖原提取与鉴定2）肝糖原定量推论，并得出结论。

生物化学实验报告姓名：学号：专业年级：组别：生物化学与分子生物学实验教学中心格式要求：正文请统一用：小四号，宋体，1.5倍行距；数字、英文用Times New Roman；标题用：四号，黑体，加粗。

需强调的地方请用蓝颜色标出。

不得出现多行、多页空白现象。

一、实验目的1、掌握组织样品的制备方法，了解其注意事项。

2、了解肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定糖原含量的原理和注意事项，掌握其操作方法。

3、正确操作使用刻度吸管和可调微量取液器。

4、熟练运用溶液混匀的各种方法。

5、正确掌握溶液转移的操作。

6、正确操作使用分光光度计。

二、实验原理1、肝糖原的提取与鉴定糖原储存于细胞内，采用研磨匀浆等方法可使细胞破碎，低浓度的三氯醋酸能使蛋白质变性，破坏肝组织中的酶且沉淀蛋白质，而糖原仍稳定地保存于上清液中，从而使用糖原与蛋白质等其它成分分离开来。

糖原不溶于乙醇而溶于热水，故先用95％乙醇将滤液中糖原沉淀，再溶于热水中。

糖原水溶液呈乳样光泽，遇碘呈红棕色。

这是糖原中葡萄糖长链形成的螺旋中，依靠分子间引力吸附碘分子后呈现的颜色。

糖原还可被酸水解为葡萄糖，利用呈色反应和葡萄糖的还原性，可判定肝组织中糖原的存在。

CuSO4十2NaOH = Na2SO4+Cu(OH)2↓2Cu(OH)2十C6H12O6 = 2CuOH十氧化型葡萄糖+H2O2CuOH = Cu2O↓(红色)+H2OCu(OH)2= CuO↓(黑色)+H2O2、肝糖原定量测定糖原在浓酸中可水解成为葡萄糖，浓硫酸能使葡萄糖进一步脱水生成糠醛衍生物——5-羟甲基呋喃甲醛，此化合物再与蒽酮脱水缩合生成蓝色的化合物。

该物质在620nm 处有最大吸收。

糖含量在(10~100)g范围内，溶液颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。

利用此反应与同样处理的已知葡萄糖含量标准溶液比色，通过标准对照法（直接比较法）即可计算出样品中糖原的含量。

糖原在浓碱溶液中非常稳定，故在显色之前，肝组织先臵于浓碱中加热，以破坏其它成分，而保留肝糖原。

生物化学实验报告姓名：学号：专业年级：组别：生物化学与分子生物学实验教学中心格式要求：正文请统一用：小四号，宋体，1.5倍行距；数字、英文用Times New Roman；标题用：四号，黑体，加粗。

需强调的地方请用蓝颜色标出。

不得出现多行、多页空白现象。

一、实验目的1、掌握组织样品的制备方法，了解其注意事项。

2、了解肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定糖原含量的原理和注意事项，掌握其操作方法。

3、正确操作使用刻度吸管和可调微量取液器。

4、熟练运用溶液混匀的各种方法。

5、正确掌握溶液转移的操作。

6、正确操作使用分光光度计。

二、实验原理1、肝糖原的提取与鉴定糖原储存于细胞，采用研磨匀浆等方法可使细胞破碎，低浓度的三氯醋酸能使蛋白质变性，破坏肝组织中的酶且沉淀蛋白质，而糖原仍稳定地保存于上清液中，从而使用糖原与蛋白质等其它成分分离开来。

糖原不溶于乙醇而溶于热水，故先用95％乙醇将滤液中糖原沉淀，再溶于热水中。

糖原水溶液呈乳样光泽，遇碘呈红棕色。

这是糖原中葡萄糖长链形成的螺旋中，依靠分子间引力吸附碘分子后呈现的颜色。

糖原还可被酸水解为葡萄糖，利用呈色反应和葡萄糖的还原性，可判定肝组织中糖原的存在。

CuSO4十2NaOH = Na2SO4+Cu(OH)2↓2Cu(OH)2十C6H12O6= 2CuOH十氧化型葡萄糖+H2O2CuOH = Cu2O↓(红色)+H2OCu(OH)2= CuO↓(黑色)+H2O2、肝糖原定量测定糖原在浓酸中可水解成为葡萄糖，浓硫酸能使葡萄糖进一步脱水生成糠醛衍生物——5-羟甲基呋喃甲醛，此化合物再与蒽酮脱水缩合生成蓝色的化合物。

该物质在620nm 处有最大吸收。

糖含量在(10~100)g围，溶液颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。

利用此反应与同样处理的已知葡萄糖含量标准溶液比色，通过标准对照法（直接比较法）即可计算出样品中糖原的含量。

糖原在浓碱溶液中非常稳定，故在显色之前，肝组织先臵于浓碱中加热，以破坏其它成分，而保留肝糖原。

生物化学实验报告姓名：学号：专业年级：组别：生物化学与分子生物学实验教学中心格式要求：正文请统一用：小四号，宋体，1.5倍行距；数字、英文用Times New Roman；标题用：四号，黑体，加粗。

需强调的地方请用蓝颜色标出。

不得出现多行、多页空白现象。

一、实验目的1、掌握组织样品的制备方法，了解其注意事项。

2、了解肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定糖原含量的原理和注意事项，掌握其操作方法。

3、正确操作使用刻度吸管和可调微量取液器。

4、熟练运用溶液混匀的各种方法。

5、正确掌握溶液转移的操作。

6、正确操作使用分光光度计。

二、实验原理1、肝糖原的提取与鉴定糖原储存于细胞内，采用研磨匀浆等方法可使细胞破碎，低浓度的三氯醋酸能使蛋白质变性，破坏肝组织中的酶且沉淀蛋白质，而糖原仍稳定地保存于上清液中，从而使用糖原与蛋白质等其它成分分离开来。

糖原不溶于乙醇而溶于热水，故先用95％乙醇将滤液中糖原沉淀，再溶于热水中。

糖原水溶液呈乳样光泽，遇碘呈红棕色。

这是糖原中葡萄糖长链形成的螺旋中，依靠分子间引力吸附碘分子后呈现的颜色。

糖原还可被酸水解为葡萄糖，利用呈色反应和葡萄糖的还原性，可判定肝组织中糖原的存在。

CuSO4十2NaOH = Na2SO4+Cu(OH)2↓2Cu(OH)2十C6H12O6 = 2CuOH十氧化型葡萄糖+H2O2CuOH = Cu2O↓(红色)+H2OCu(OH)2= CuO↓(黑色)+H2O2、肝糖原定量测定糖原在浓酸中可水解成为葡萄糖，浓硫酸能使葡萄糖进一步脱水生成糠醛衍生物——5-羟甲基呋喃甲醛，此化合物再与蒽酮脱水缩合生成蓝色的化合物。

该物质在620nm 处有最大吸收。

糖含量在(10~100)g范围内，溶液颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。

利用此反应与同样处理的已知葡萄糖含量标准溶液比色，通过标准对照法（直接比较法）即可计算出样品中糖原的含量。

糖原在浓碱溶液中非常稳定，故在显色之前，肝组织先臵于浓碱中加热，以破坏其它成分，而保留肝糖原。

肝糖原的提取和鉴定一、实验目的1、学会和掌握肝糖原提取和鉴定的原理和方法。

2、正确掌握使用离心机的方法步骤。

二、实验原理三、实验步骤（一）、肝糖原提取1、用脱臼法处死白鼠，立即取出肝脏，迅速以滤纸吸取附着的血液。

称取肝组织约2g，置研钵中，加入10%三氯乙酸2ml，用剪刀把肝组织剪碎，再加石英砂少许，研磨5min。

2、再加5%三氯乙酸4ml，继续研磨1min，至肝脏组织已充分磨成糜状为止，转入离心管，然后以2000r/min离心10min。

3、小心将离心管上清液转入另一个离心管中，加入同体积的95%乙醇，混匀后，此时糖原成絮状沉淀析出。

4、溶液以2000r/min离心10min。

弃去上清液，并将离心管倒置于滤纸上1~2min。

5、在沉淀内加入蒸馏水2ml，用细玻璃棒搅拌沉淀至溶解，即成糖原溶液。

（二）、鉴定1、取2支小试管A、B，一支A加糖原溶液10滴，另一支B加蒸馏水10滴，然后在两管中各加碘-碘化钾溶液1滴，混匀，比较两管溶液颜色有何不同。

2、再取2支小试管，将剩余的糖原溶液平分倒入两试管，试管甲加浓盐酸3滴，试管乙加蒸馏水3滴，将两管在沸水浴中加热10min以上。

取出冷却，试管甲中逐滴加入20%NaOH溶液，并且PH试纸检验，直至溶液成中性。

试管乙中加入同等滴数的蒸馏水。

3、向甲、乙两试管各加入班氏试剂2ml，再置沸水浴中加热5min，取出冷却。

观察有无沉淀生成。

注意事项：1、实验小白鼠在实验前必须饱食。

2、脱臼法处死小白鼠：手提着小白鼠将其小白鼠尾巴将其从笼子里取出，使其四脚着地，另一支手按着小白鼠耳后，尾巴向外拉，使其脊柱断节，背部脊髓断裂，致使四肢瘫痪。

3、肝脏离体后，所得肝脏必须迅速以三氯乙酸处理。

4、研磨应充分，这是实验成败的关键。

5、离心时与另一组同学的离心管平衡，对称放入离心机。

6、鉴定的第（2）步，试管甲中溶液必须调至中性或偏碱性。

四、实验结果试管A 试管B棕红色黄色试管甲试管乙砖红色沉淀无沉淀分析：1、实验小白鼠在实验前必须饱食，因为空腹时，血糖含量降低，肝糖原分解来提高血糖含量，肝糖原含量易于减少或耗尽。

生物化学实验报告姓名：张子荣学号： 3150901080专业年级： 2015级临床医学组别：第五实验室生物化学与分子生物学实验教学中心实验名称肝糖元的提取，鉴定和定量检测实验日期2016.12.29 实验地点第五实验室合作者张林燕指导老师何肖娟评分教师签名批改日期格式要求：正文请统一用：小四号，宋体，1.5倍行距；数字、英文用Times New Roman；标题用：四号，黑体，加粗。

需强调的地方请用蓝颜色标出。

不得出现多行、多页空白现象。

一、实验目的1.掌握组织样品的制备方法，了解其注意事项。

2.了解肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定糖原含量的原理和注意事项，掌握其操作方法。

3.正确操作使用刻度吸管和可调微量取液器。

4.熟练运用溶液混匀的各种方法。

5.正确掌握溶液转移的操作。

6.正确操作使用分光光度计。

二、实验原理1.肝糖原的提取糖原储存于细胞内，采用淹没匀浆等方法可使细胞破碎，低浓度的三氯醋酸能使蛋白质变性，破坏肝组织中的酶且沉淀蛋白质，而糖原仍稳定地保存于上清液中，从而使糖原与蛋白质等其他成分分离开来。

糖原不溶于乙醇而溶于热水，故先用95%乙醇将绿叶中糖原沉淀，再溶于热水中。

2.糖原的鉴定糖原水溶液呈乳样光泽，遇碘呈红棕色。

这是糖原中葡萄糖长链形成的螺旋中，依靠分子间引力吸附碘分子后呈现的颜色。

糖原还可被酸水解为葡萄糖，利用呈色反应和葡萄糖的还原性，可判定肝组织中糖原的的存在。

CuSO4 + 2NaOH = Na2SO4+ Cu(OH)22Cu(OH)2 + C6H12O6= 2CuOH + 氧化型葡萄糖 + H2O2CuOH = H20 + Cu2O (红色)Cu(OH)2 ==== H2O + CuO (黑色)3.肝糖原的定量糖原在浓酸中可水解为葡萄糖，浓硫酸能使葡萄糖进一步脱水生成糠醛衍生物——5-羟甲基呋喃甲醛，此化合物再与蒽酮脱水缩合生成蓝色的化合物。

该物质在620nm 处有最大吸收。

肝糖原的提取和鉴定一、实验目的1.了解肝糖原的性质并掌握其提取的方法。

2.熟悉肝糖原的鉴定方法。

二、实验原理肝糖原是糖在体内的重要储存形式之一。

其储存量虽然不多，但在代谢过程中，它是动物体内糖的重要的来源之一。

肝糖原的合成或分解对血糖浓度的调节起着重要的作用。

糖原属于高分子糖类化合物，微溶于水，无还原性，与碘作用变成红棕色。

提取肝糖原是利用三氯醋酸破坏肝组织中的酶，且肝组织中的蛋白质也被三氯醋酸所沉淀，而糖原仍留在溶液中。

过滤除去沉淀，滤液中的肝糖原可借加入的乙醇而沉淀。

将沉淀的糖原溶于水，即可得到糖原溶液。

糖原与碘作用呈红棕色。

糖原被酸水解为葡萄糖，可用班氏试剂检验。

利用呈色反应和葡萄糖的还原性，可判定组织中糖原的存在。

三、实验材料、仪器和试剂1. 材料：小白鼠等动物新鲜肝脏组织2. 仪器：（1）天平（2）研钵（3）离心机（4）离心管（5）恒温水浴锅（6）试管（7）广泛试纸（8）移液管（9）洗耳球（10）电炉（11）量筒（12）滤纸3．试剂：（1）10%的三氯醋酸溶液（2）5%的三氯醋酸溶液（3）95%乙醇溶液（4）浓盐酸（5）20%的NaOH溶液（6）碘液：(取碘1g、碘化钾2g溶于500mL蒸馏水中)（7）班氏试剂：(将硫酸铜17.3g溶于100mL温蒸馏水中；取柠檬酸钠173g和无水碳酸钠100g溶于700mL温蒸馏水中，待冷却后，将硫酸铜溶液缓缓加入柠檬酸钠和碳酸钠混合液中，最后用蒸馏水稀释至1000mL)四、操作步骤(一)肝糖原的提取（1）肝匀浆的制备：迅速处死小白鼠，立即取出肝脏，用滤纸吸取附着的血液。

称取约1g肝脏置研钵中，加入少许石英砂及10%的三氯醋酸溶液1mL，研磨至呈乳状后再加入5%的三氯醋酸2mL，继续研磨，直至肝脏组织已充分磨成均匀糜浆。

（2）提取糖原：将制备好的肝匀浆以3000r/min的转速离心10min。

取上清液于另一离心管并量取体积，加入等体积的95%乙醇溶液，混匀后静置10min，使糖原呈絮状析出。