植物生理指标测定方法本文介绍了植物生理指标的测定方法，包括叶片持水率、植物暂时萎蔫率、叶片相对含水量、相对电导率和可溶性糖的测定。
首先介绍叶片持水率的测定方法。
选择植株上部枝条健康完整的定型叶，摘取后混均匀分成三份即时称量鲜重，然后置入40℃恒温烘箱中烘40 min，取出称重，再置入85℃烘箱中恒温烘至恒重。
失水率的大小可以反映叶片持水能力的高低，计算公式为失水率=[（鲜重－40℃烘40 min重）÷（鲜重－85℃烘至恒重）]×100%。
其次介绍植物暂时萎蔫率的测定方法。
观察植株叶片萎蔫下垂、翌日晨不能恢复正常者，即取盆中土壤测定。
将植株连土团倒出，用小刮铲从根的周围取土，剔除杂物后称重，带回室内置于105℃烘箱内烘至恒重。
每种植物每次测试一盆，按公式计算暂时萎蔫率：暂时萎蔫率=[（土壤湿重－土壤干重）÷土壤干重]×100%。
接下来介绍叶片相对含水量的测定方法。
取各植株相同部位叶片，测定叶片的鲜重M1，然后将叶片浸入蒸馏水中使其吸水达到饱和状态，再取出擦干叶片至表面无水分残留，称重得到叶片的饱和鲜重M2，最后将叶片放进烘箱，105℃杀青半小时，再于85℃环境下烘至恒重，得到叶片干重M3.按公式计算叶片相对含水量。
然后介绍相对电导率的测定方法。
取各植株相同部位叶片，用蒸馏水拭净叶片表面和背面，去除叶片中脉，剩下部分剪成大小为5mm×5mm的叶片。
取0.20g各3份放入锥形瓶中并加入30ml蒸馏水，放于真空干燥器中，用真空泵抽气10min，以抽出细胞间隙空气。
缓慢放入空气，水即渗入细胞间隙，叶片变成透明状，细胞内溶质易于渗出。
取出锥形瓶，在室温下保持30min后用电导仪测定电导率L1，然后将加塞锥形瓶转入沸水中，水浴20 mins，取出冷却至室温后测定电导率L2.按公式计算细胞膜相对透性（相对电导率）。
最后介绍可溶性糖的测定方法。
取各植株相同部位叶片，用90%乙醇浸泡2h，过滤后将滤液置于水浴中加热至乙醇挥发完毕，再用蒸馏水补足至定容，最后用显色剂显色后测定吸光度，按公式计算可溶性糖的含量。
制备标准曲线：首先制备1％蔗糖标准液，将蔗糖烘至恒重后称取1.000g，加少量水溶解并加入0.5ml浓硫酸，定容至100ml。
然后将1ml 1％蔗糖标准液加入100ml容量瓶中，定容至刻度，制备100mg/L蔗糖溶液。
取11支试管，分别加入不同浓度的100mg/L蔗糖溶液和水，除空白外，各浓度均重复二次。
加入0.5ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5ml浓硫酸后，在630nm波长下测其光密度，以糖含量为横坐标，光密度为纵坐标，绘制标准曲线。
根据标准曲线求出直线方程。
提取可溶性糖：取新鲜植物叶片0.1~0.3g，共5份，分别放入5支试管中，加入5~10ml蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min（提取2次），提取液过滤入25ml容量瓶中，反复冲洗试管及残渣，定容至刻度。
样品测定：准确吸取样品提取液或水解液2ml于大试管中，2ml样品液中总含糖量应在20-100μg之间。
若超出此值，则应稀释样品液。
按顺序向试管内加入0.5ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5ml浓硫酸，沿管壁缓缓加入浓硫酸后，轻摇试管使液体混匀，放入沸水浴中准确保温1min，取出后自然冷却至室温，以空白作参比，在630nm波长下测其光密度。
根据所测光密度查标准曲线，即可得出每ml样品液中碳水化合物总量。
计算可溶性糖含量：可溶性糖含量（％）=C×V×n /(106×a×W)C为标准方程求得糖量（g），V为提取液量（ml），n为稀释倍数，a为吸取样品液体积（ml），W为组织重量（g）。
脯氨酸的测定：制备2.5%酸性茚三酮显色液，将1.25g茚三酮溶于30ml 冰乙酸和20ml6mol/L磷酸中（3:2混合）搅拌加热（70℃）溶解，贮于冰箱中。
取待测样品2ml加入大试管中，加入2ml 80%乙醇和2ml酸性茚三酮显色液，混匀后放置室温下反应20min，以空白作参比，在520nm波长下测其光密度，根据标准曲线求出脯氨酸含量。
制作脯氨酸标准曲线的步骤如下：首先称取0.025g脯氨酸，溶解后定容至250ml，浓度为100μg/ml。
然后分别取0.5ml，1ml，2ml，3ml，4ml，5ml的溶液放入25ml的容量瓶中，用蒸馏水定容，即得到2μg/ml，4μg/ml，8μg/ml，12μg/ml，16μg/ml，20μg/ml的脯氨酸标准液。
接下来，将试剂加入具塞刻度试管中，混匀后加玻璃球塞，在沸水中加热1小时。
以“0”管为对照在波长520nm下比色，绘制标准曲线，并求出线性回归方程。
在测定样品之前，需要进行脯氨酸提取。
取不同处理的剪碎混匀植物叶片0.2~0.5g，加入适量80%乙醇、少量石英砂，于研钵中研磨成匀浆。
将匀浆液全部转移至10ml刻度试管中，用80%乙醇洗研钵，将洗液移入相应的刻度试管中，最后用80%乙醇定容至刻度，混匀，80℃水浴中提取20min。
除去干扰的氨基酸：向提取液中加入约0.2g人造沸石和0.1g活性碳，强烈震荡5min，过滤，滤液备用。
脯氨酸含量的测定方法为：吸取上清液2ml，加2ml冰乙酸和2ml茚三酮，于沸水浴中加热1小时。
以空白管为对照，在波长520nm下比色测定。
通过标准曲线查出测定液中脯氨酸浓度，再按下式计算样品中脯氨酸含量的百分数：脯氨酸（质量分数）=C×Vt/W×Vs×106，其中C为提取液中脯氨酸含量（μg），由标准曲线求得；Vt为提取液总体积（ml）；Vs 为测定时所吸取提取液的体积（ml）；W为样品重量（g）。
最后是POD的测定，此处缺失明确的信息，无法进行处理。
首先，将20mmol/L KH2PO4溶液制备好，即将1.36g加水定容至500ml的容量瓶中。
接下来，制备0.1mol/L磷酸缓冲液（PH6.0），将87.7ml 0.2mol/L NaH2PO4（15.6gNaH2PO4·2H2O溶于500ml水中）加入12.3ml 0.2mol/LNa2HPO4（35.8g Na2HPO4·12H2O溶于500ml水中）中。
然后，制备反应混合液，即将50ml 100mmol/L磷酸缓冲液（PH6.0）加入28ul愈创木酚中，用磁力搅拌器加热搅拌至愈创木酚溶解，冷却后加入30％过氧化氢19ul，混合保存于冰箱中。
接下来是粗酶液的提取。
取1g小麦叶片材料，加入5mL 20mmol/L KH2PO4，于研钵中研磨成匀浆，以4000r/min离心15分钟，收集上清液保存在冷处，所得残渣再用5mLKH2PO4溶液提取一次，全并两次上清液。
酶活性的测定方法如下：取2只比色皿，一只中加入反应混合液3mL，1mL KH2PO4作为校零对照，另一只中加入反应混合液3mL，上述酶液1mL（如酶活性过高可适当稀释），立即开启秒表，于分光光度计470nm波长下测量OD值，每隔1min读数一次。
以每分钟OD变化值表示酶活性大小，以△OD470/min.mg蛋白质（或鲜重g）表示。
也可以用每min内A470变化0.01为1个过氧化物酶活性单位(u)表示。
过氧化物酶活性[u/(g.min)]的计算公式为：ΔA470为反应时间内吸光度的变化，W为植物鲜重g，VT为提取酶液总体积，mL，Vs 为测定时取用酶液体积，mL，t为反应时间，XXX。
最后是SOD的测定方法。
首先制备0.05mol/L磷酸缓冲液（pH7.8）。
然后，称取1.9399g Met用磷酸缓冲液定容至100ml制备130mmol/L甲硫氨酸溶液，取0.g NBT用磷酸缓冲液定容至100ml制备750μmol/L氮蓝四唑溶液，取0.g EDTA-Na2用磷酸缓冲液定容至100ml制备100μmol/L EDTA-Na2溶液，取0.g核黄素用磷酸缓冲液定容至1000ml避光保存制备20μmol/L核黄素溶液（当天配制）。
测定时，将样品加入甲硫氨酸溶液中，加入氮蓝四唑溶液和核黄素溶液，反应一段时间后测量吸光度。
根据吸光度的变化计算SOD的活性。
酶液提取方法：将0.5g去除叶脉的植物叶片加入1ml磷酸缓冲液，冰浴下研磨成浆后转移到5ml离心管中，加缓冲液使终体积为5ml。
在rpm下离心10分钟，上清液即为SOD粗提液。
显色反应步骤：取4支透明度好的试管，其中2支为测定管，另外2支为对照管。
按照表1的要求加入各溶液后混匀，将1支对照管置于暗处，其他各管置于4000lx日光灯下反应20min。
要求各管受光情况一致，反应室的温度高时反应时间可以缩短，温度低时反应时间可适当延长（温度范围30~37℃）。
表1各溶液加入量和终浓度：试剂（酶）、0.05mol/L磷酸缓冲液、130mmol/L Met溶液、750μXXX溶液、100μXXX-Na2液、20μmol/L核黄素、酶液、蒸馏水、总体积、用量(ml)、1.5、0.3、0.3、0.3、0.3、0.05、0.25、3.0、终浓度（比色时）、13mmol、75μmol、10μmol、2.0μmol、对照管加缓冲液代替酶液。
SOD活性测定和计算：反应结束后，以不照光的对照管作为空白，在560nm下分别测定其他各管的光密度值。
SOD活性单位以抑制NBT光化还原的50%为一个酶活性单位表示。
按下式计算SOD活性：SOD总活性=（AE-Ack）×V×1/a×W，单位为酶单位/g鲜重。
丙二醛的提取和计算：将0.2-0.5g剪碎的试材加入2ml磷酸缓冲液和少量石英砂，研磨至匀浆后再加适量磷酸缓冲液进一步研磨，匀浆转移到5ml离心管中，在6000rpm离心15min，上清液为样品提取液。
取上清液1.5ml加入2.5ml0.5%TBA溶液，混匀物于沸水浴上反应20min，迅速冷却后再离心。
取上清液测定532nm、600nm和450nm波长下的光密度，最后计算含量。
